ENZIMELE

OBIECTIVELE:

Natura chimic i rolul biologic al enzimelor. Dovezile

naturii proteice a enzimelor. Diferena dintre aciunea
enzimelor i catalizatorilor nebiologici.
Structura enzimelor. Proenzimele (zimogenii). Noiune
despre centrul activ i centrul alosteric al enzimelor.
Izoenzimele i rolul lor.
Cofactorii enzimelor. Coenzimele i ionii metalici.
Funciile de coenzime a vitaminelor i microelementelor.
Natura chimic (structura) vitaminelor B1, B2, B6, PP i
rolul lor ca coenzime.
Mecanismul de aciune al enzimelor. Centrul activ al
enzimelor i rolul lui n formarea i transformarea
complecilor intermediari dintre enzim i substrat.
Rolul modificrilor conformaionale reciproce ale
moleculei enzimei i substratului la favorizarea catalizei
(reaciei).
Nomenclatura (denumirea) i clasificarea enzimelor.
Caracteristica general a claselor i subclaselor
principale de enzime. Numrul de cod al enzimei.

ENZIM de la grec.Eu
ZYMOS- n drojdie

Enzime catalizatori biologici de

natur proteic, ce mresc viteza
reaciilor chimice
E- acioneaz strict ntr-o anumit
consecutivitate i cu o anumit
specificitate

Enzimologietiina,
ce se ocup
cu studierea enzimelor

Enzimodiagnostica
- este determinarea

Enzimoterapia

- este utilizarea enzimelor,

activittii enzimelor,
care se pot modifica n
diferite patologii cu
scop de diagnoz.

extrase i purificate sau

sintetizate n laborator,
n tratamentul
diferitor patologii.

Natura chimic a E

1.
2.
3.
4.
5.
6.

E- sunt proteine i posed toate proprietile fizicochimice specifice acestor molecule (solubilitate,
proprieti osmotice, sarcin electric net,
denaturare termic)
Dovezile experimentale:
Sunt alctuite din AA
Prezint macromolecule
n ap formeaz sol. coloidale cu propriet. sale
specifice
Prezint electrolii amfolii
Se supun denaturrii
Au fost sintetizate n condiii de laborator din AA
(ribonucleaza, lizozima)

Asemnrile E cu
catalizatorii neorganici
1.

2.

3.
4.

catalizeaz numai reaciile posibile

din punct de vedere energetic
nu modific echilibrul reaciilor
reversibile
nu modific direcia reaciei
nu se consum n procesul
reaciilor.

Deosebirile E de
catalizatorii neorganici
1.

2.
3.

4.
5.
6.

Viteza catalizei enzimatice este cu mult mai mare

dect a celei nebiologice (1 mg de Fe n componena
catalazei poate nlocui o ton de Fe metalic).
Enzima posed specificitate nalt.
Enzimele catalizeaz reaciile chimice n condiii
blnde (presiunea obinuit, temperatura 37C, pH
aproape neutru).
E catalizeaz reaciile fr formarea produselor
intermediare randamentul este de 100%
Activitatea E, de aici i reaciile enzimatice se
regleaz.
Viteza reaciilor este direct proporional cu
cantitatea enzimei.

Structura enzimelor

Masa molecular a E e de mii de ori mai

mare dect masa molecular a
substratului (S)
S - substana asupra creia acioneaz E
E acioneaz nu cu toat molecula dar cu
un anumit sector denumit centrul activ
(CA)
CA - locul care asigur interaciunea E cu
S i transformarea ulterioar a acestuia.

Particularitile CA
1.
2.
3.

4.

5.
6.

Este o combinare unical n spaiu i n timp a

anumitor resturi de AA
E o structur tridimensional (AA aflai n
locuri diferite)
Are form de adncitur sau cavitate,
cptuit cu AA hidrofobi, unde nu-i acces de
ap (ex. cnd apa este un reagent al reaciei)
Ocup o parte relativ mic din volumul E i
majoritatea resturilor de AA n molecula E nu
contacteaz cu S
S relativ slab se leag cu E
CA este alctuit din 2 sectoare:
Sectorul de contact (de legare)
Sectorul catalitic

Centrul alosteric

Unele E posed i un alt centru (sau alte

centre) dect cel activ centru alosteric (allo
stereos alt loc)
C alos - are o poziie spaial pentru fixarea
metabolitului reglator, numit efector sau
modulator
Modulatorii se fixeaz necovalent i pot fi:
activatori sau inhibitori
E cu centrul alos se numesc E alosterice sau
reglatoare
La fixarea modulatorului, E alos i modific
conformaia. Modulatorii accelereaz sau
inhib utilizarea S de enzima respectiv.

Enzime alosterice

1.

2.

Moleculele enzimelor alosterice sunt mai mari, mai

complexe i sunt oligomere pare
Au cinetica lor viteza reaciilor n dependen de
c% S are form sigmoidal, dar nu hiperbolic,
cauzat de urmrile interaciunii ntre protomerii
ce leag S n mod cooperativ
Sunt 2 tipuri de E alosterice
Homotrope - modulatorul i S constituie aceeai
substan Acumularea S activeaz v reaciei
catalizate de aceast E (ex: alcoolul activeaz
alcoolDH, E ce l scindeaz)
Heterotrope - modulatorul se deosebete dup
structur de S.

Cofactorii enzimelor
Deosebim:
1.
E simple alctuite numai din AA
2.
E conjugate - snt formate din:
a. partea proteic - apoenzim
b. partea neproteic - cofactor.
Cofactori molecule (sau ioni) mici, mai stabili
la aciune dect apoenzimele

Cofactorul strns legat n structura E

grupare prostetic

Cofactorul slab legat, uor disociabil

coenzim

n calitate de cofactori apar frecvent cationii

unor metale i, foarte rar, unii anioni

Rolul Co
stabilizeaz conformaia activ a
moleculei
2. Prezint veriga de legtur ntre S
i CA prin leg. coordinative
3. Co pot ndeplini actul de cataliz
Ex. transportul electronilor
1.

Clasificarea Co

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

Co vitaminice
Tiaminice
Flavinice
Nicotinamidice
Piridoxinice
Folice
Cobamidice
Biotinice
lipoice

Co nevitaminice
(nucleotidice; metaloporfirinice,peptidice)

Coenzimele tiaminice

1.

2.

3.

Derivaii vitaminei B1
TMP, TDP (TPP), TTP
Rolul:
Decarboxilarea
oxidativ a
piruvatului
Decarboxilarea
oxidativ a
cetoglutaratului
Reacii de
transcetolare

Coenzimele flavinice

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Derivai ai vitaminei B2
FMN i FAD
Rolul:
Particip n reaciile de
oxido-reducere:
Dezaminarea AA
(aminoacidoxidaza)
Degradarea aldehidelor
(aldehidDH)
Degradarea purinelor
(xantinoxidaza)
Ciclul Krebs
(succinatDH)
Oxidarea AG
DOP (dihidrolipoilDH)

Coenzimele
nicotinamidice

Sunt derivai ai vitaminei

PP niacina, niacinamida,
B5
se include n structura a
2 Co- NAD i NADP
Rolul
Particip n reaciile de
oxido-reducere
(dehidrogenarea S
transferul unui hibrid ion
(H+ i 2 e). Alt proton
rmne n soluie H+

Coenzimele
nicotinamidice

Coenzimele piridoxinice

1.
2.
3.

Derivai a vitaminei
B6
Co piridoxalfosfat
i piridoxaminfosfat
Rolul:
Transaminarea AA
Decarboxilarea AA
Transsulfurarea

Ionii de metale cofactori

ai E

1.
2.
3.
4.

E care n calitate de cofactori conin metale

metaloenzime
Metalele sunt fixate de apoenzim prin
legturi electrostatice la care particip
resturile de AA acizi (Asp, Glu) sau bazici
(Arg, Lyz, His)
Exemple:
citocromii, catalaza (Fe)
Citocromoxidaza (Cu)
Amilaza salivar (Cl)
alcoolDH (Zn)

1.
2.
3.
4.

Metalele ce intr n componena

metaloenzimelor ndeplinesc
urmtoarele funcii:
Stabilizeaz structura E
Particip la legarea S
Particip nemijlocit la cataliz
Fixarea cofactorului la apoE (ex: Zn
leag NAD la alcoolDH)

Co pantotenice (B3)- HSCoA

biosinteza AG
2. biosinteza Col
3. sinteza corpilor cetonici
4. Oxidarea AG
5. Ciclul Krebs
6. Sinteza aminolevulinatului
7. DOP
8. DO a alfa cetoglutaratului
Transferul grupelor acil
1.

Co biotinice vitamina H

Gluconeogenez (I cale
piruvatdecarboxilaza)
Sinteza AG (formarea lui malonil
CoA)
Transformarea propionil-CoA n
succinil CoA (oxidarea AG cu numr
impar)
Intervine n catabolismul Leu

Co cobamidice B12
-ciancobalamina

1.
2.

Vitamin antipernicioas pentru om i

factor de cretere pentru microorganisme
n ficat sunt 3 compui cobalaminici:
meti-; hidroxo- i deoxiadenozilcobalamin
Rolul:
Co pentru unele transmetilaze
(homocistein metionin)
Co pentru anumite mutaze (izomeraze)metilmalonil Co A---- succinil CoA

Co folice sau pteridinice

Bc-acidul folic
Forma activ- acidul tetrahidrofolic
Rol: transferul gruprilor cu un C:
metil (CH3), metilen(-CH2), formil
(COH), formimino (CH=NH)

Mecanismul de aciune al enzimelor.

1.

Procesul catalizei enzimatice poate fi

divizat convenional n trei stadii:
Difuzia S spre E i legarea cu CA al E formarea complexului ES. Prima etap de
scurt durat depinde de concentraia
substratului i de viteza lui de difuzie spre
centrul activ al enzimei.

Mecanismul de aciune
al E
2.

3.

Transformarea complexului primar ES n unul sau

cteva complexe activate, indicate n ecuaie prin
ES* i ES**. Aceast etap este cea mai lent i
depinde de energia de activare a reaciei chimice
respective. La aceast etap are loc dereglarea
legturilor S, ruperea lor sau formarea noilor
legturi n urma interaciunii grupelor catalitice
ale enzimei.
Desprirea produselor reaciei de CA al E i
difuzia lor n mediul ambiant (complexul EP
disociaz n E i P).

Ipoteza lact-cheie (Fischer) i

coincidena forat (Kochland)

Modelul clasic (Emil Fischer) consider

c potrivirea substratului cu centrul
activ al enzimei este analog cu
potrivirea lact-cheie. Acest model
presupune o rigiditate a structurii
enzimei n zona centrului activ.
modelul Kochland, numit centrul activ
indus, presupune o flexibilitate a CA.
n enzima liber CA este preformat
ntr-o configuraie spaial uor diferit
de cea necesar fixrii S.
S induce o modificare conformaional
a CA, care favorizeaz fixarea lui

Conceptul clasic "lact- elaborat n 1890 de ctrecheie

Emil Fier
- consider c potrivirea substratului cu centrul activ al

enzimei este analog cu potrivirea lact-cheie. Acest

model presupune o rigiditate a CA.
la prima etap a formrii acestui complex n rezultat se modif
structura S cptnd starea de tranziie dup care se transform
n P
E+S-- ES- E+P

Conceptul coencidenei inductive

coincidena forat (Kochland)

Mecanismul de aciune
al E

1.

2.

3.

4.

La nivel molecular aciunea E poate fi lmurit prin

urmtoarele efecte:
Efectul de orientare a substratelor (CA al E
fixeaz S i le orienteaz ntr-un mod convenabil
pentru aciunea gr. catalitice)
Efectul de deformare a S (dup unirea n CA
molecula S se ntinde, se deformeaz favoriznd
scindarea ei)
Cataliza acido-bazic (n procesul fixrii S n CA
asupra lui acioneaz grupele electrofile ale
sectorului catalitic, are loc redistribuirea densitii
electronice n S i ruperea legturilor din S
Cataliza covalent formarea legturilor covalente
ntre CA i S, complexul ES e foarte instabil, uor
disociaz elibernd P reaciei

Mecanismul de aciune
al E

Pentru decurgerea unei reacii este necesar ca

molecula de S i E s contacteze ntre ele, pentru
aceasta e necesar de contientizarea unei noiuni
ca:
Energia de activare este energia necesar
tuturor moleculelor unui mol de substan, care
la o anumit t pot s ating starea de tranziie
corespunztoare apixului barierii energetice
(KJ/mol; kcal/mol)
E - micoreaz energia de activare ale reaciilor
chimice.
Cu ct mai mult scade energie de activare, cu att
mai eficient acioneaz catalizatorul, i cu att
mai mult se accelereaz reacia.

Enzymes
Lower a
Reactions
Activation
Energy

Clasificarea actual a
enzimelor.

Toate enzimele se mpart n ase clase, clasele n

subclase, subclasele n subsubclase, iar aici E i are
numrul su de ordin. Clasele, subclasele, subsubclasele i enzimele individuale se noteaz prin
cifre desprite de puncte. Ex: LDH - 1.1.1.27
Clasa reprezint tipul de reacie, catalizat de enzime
Subclasa precizeaz aciunea E, deoarece indic
natura gruprii chimice a S, atacat de E
Subsubclasa precizeaz natura legturii S atacat
sau natura acceptorului care particip la reacii
Denumirea E denumirea S +tipul reaciei
catalizate +aza

Clasificarea actual a
enzimelor
1.
2.
3.
4.

5.
6.

Oxidoreductaze, catalizeaz reaciii de oxidoreducere;

Transferaze, catalizeaz transferuri grupe lor
funcionale de la un S la altul (metil, amino, acil,) ;
Hidrolaze catalizeaz scindri de legturi covalente
cu adiionarea apei ;
Liaze, catalizeaz ruperea leg. C-C, C-S i C-N; fr
adiionarea apei, adiia la legturi duble i reaciile
inverse.
Izomeraze, catalizeaz toate tipurile de transformri
n cadrul uneia i aceleai molecul ;
Ligaze (sintetaze), catalizeaz formarea de legturi
ntre carbon i O, S, N, cuplate cu hidroliza legturilor
macroergice (utilizarea ATP).

Clasificarea enzimelor.
- catalizeaz reaciii de oxidoreducere;
-catalizeaz transferuri
grupelor funcionale de la un S
la altul (metil, amino, acil,);
-catalizeaz scindri de
legturi covalente cu
adiionarea apei ;
-catalizeaz ruperea leg. C-C,
C-S i C-N; fr adiionarea
apei, adiia la legturi duble
i reaciile inverse.

-catalizeaz toate tipurile de

transformri n cadrul uneia
i aceleai molecul ;
- catalizeaz formarea de legturi
ntre carbon i O, S, N, cuplate cu
hidroliza legturilor macroergice
(utilizarea ATP).

Izoenzimele

1.
2.
3.
4.
5.

forme moleculare multiple ale E (la aceeai specie, n acelai

esut, n aceeai celul), ce catalizeaz aceeai reacie
chimic, dar se deosebesc prin structur, proprieti fizice,
chimice i cinetice
Diferite forme de izoenzime se pot gsi fie mpreun; fie n
esuturi diferite (fosfotaza acid n prostat i hematii); sau
chiar n diferite pri ale aceleiai celule (MDH
mitocondrial i citoplasmatic)
Sunt E cu structur cuaternar, alctuite din cel puin 2
protomeri diferii
Ex. LDH (lactat piruvat)
Prezint un tetramer, alctuit din 2 tipuri de subuniti (H
inim; M- muchi) n diferite raporturi; codificate de gene
diferite.
HHHH inim; HHHM;HHMM; HMMM; MMMM muchi
Izoenzimele difer ntre ele prin:
V max de cataliz,
prin sensibilitatea fa de modulatorii alosterici,
prin sarcina electric (ce permite separarea lor prin
electroforez);
pH-optim de aciune;
termolabilitate, au afinitate diferit fa de S.


1.

2.

1.
2.
3.
4.
5.

Rolul:
Rol nsemnat n controlul metabolic
( faciliteaza adaptarea
metabolismului in diferite esuturi.)
Ex: in miocard predomina HHHH
aceasta izoenzima este inhibata de
ctre piruvat deaceea orienteaz
oxidarea piruvatului pe cale aeroba.
Pe cind fracia M4 este activat de
catre piruvat i orienteaz
transformarea piruvatului pe cale
anaerob spre lactat.
Variaia diferitor forme de izoenzime
are o semnificaie diagnostic
deosebit n unele stri patologice.
Exemple de izoenzime:
creatinkinaza (2 tipuri de monomeri:
M-Muscle i B brain
MDH
Aldolaza
Fosfataza alcalin
Fosfataza acid

Proprietile generale
ale enzimelor

Obiectivele:
1.

Proprietile generale ale E (termolabilitatea, specificitatea),

aciunea pH-ului asupra activitii enzimatice.
2. Activarea i inhibarea enzimelor:
a) mecanismele de activare (proteoliza parial, activarea
alosteric, autostructurarea cuaternar, fosforilarea i
defosforilarea, reactivarea).
b) mecanismele de inhibiie (specific i nespecific,
reversibil i ireversibil, alosteric i competitiv).
3. Organizarea enzimelor n celul (ansamblurile enzimatice,
compartimentalizarea). Reglarea activitii enzimatice n
celul importana principiului de retroinhibitie.
4. Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i
esuturilor. Enzimele organospecifice. Modificarea
activitii enzimatice n diferite afeciuni
(enzimodiagnosticul).
5. Metodele de obinere i purificare ale enzimelor.
Cromatografia de afinitate.
6. Utilizarea enzimelor n practica medical. ntrebuinarea
enzimelor imobilizate n medicin.
7. Unitile de activitate ale enzimelor.
8. Metodele de determinare a activitii enzimelor.

Factorii care influieniaz

activitatea E

Temperatura
PH
Concentraia S
Concentraia E
electroliii

Termolabilitatea (t)

E sunt termolabile
t optim a majoritii E se afl
n limitele 20 - 40 C
odat cu creterea t cu 10C
(dac lum punctul de plecare
0 ) - V reaciei enzimatice
sporete de 1,5 ori, atingnd
max la t 40C.
Majorarea de mai departe
duce la micorarea activitii
enzimatice ceea ce
mrturisete despre
denaturarea proteinei. La
100C toate E organismului
sunt inactive. Unele E a
microorganismelor termofile
sunt active la t de 80C
La t joase E se inactiveaz
(excepii: catalaza: activitate
max la t=0 C)

Termolabilitatea (t)

Creterea
vitezei
reaciei odat cu creterea
t este nterpretat prin
prisma "energiei de
activare". Pentru fiecare E
se poate stabili o t optim
la care V atinge valoarea
max, mai departe V scade
din cauza denaturrii.

Aciunea pH asupra activitii

enzimatice

1.
2.
3.
4.

Fiecare E are un pH
optim propriu la care i
manifest activitatea
maximal.
Majoritatea E celulare au
pH-ul optim- 7,4
(excepii: hidrolazele
acide lizozomale pH= 5;
MAO din membrana
mitocondrial externa
pH= 10).
La E digestive pH-lui
optim este cel al sediului
lor de aciune:
Pepsina pH 1,5 2,
Amilaza pancreatic pH 6,4-7,2,
Tripsina - pH 7,8-8,0
Arginaza- pH 9,5-10 etc.

1.
2.
3.

Dependena activitii E de
variaia pH-ului este deseori
descris de o curb n forma
de clopot.
In CA al E se afl grupri
ionizabile, acide sau bazice.
Acestea interacioneaz
direct cu ionii H+ si OH-,
rezultatul fiind creterea
sau scderea gradului lor de
disociere
Deci mrind sau micornd
pH-ul mediului, se poate
regla activitatea catalitic a
E.
pH optim e dependent de:
gradul de ionizare a
grupelor funcionale,
afinitii E fa de S,
stabilitii E.

[E]

n condiii standard 2 mol de E ntr-o

anumit perioad de timp vor
transforma de 2 ori mai multe
molecule de S dect 1 mol de E
(relaie direct proporional).

[ S]

Grafic se reprezint sub

form de o curb de tip
hiperbolic.
n perioada iniial a
reaciei V crete pe
msur ce crete [S]. La
un moment dat cnd CA
al E se ocup de S V nu
mai crete. Ea rmne
constant i corespunde
V max a reaciei.
n cazul E alosterice
curba reprezint un
aspect sigmoid

Analiza curbei hiperbolice arat c ea

reprezint 3 zone:
a. V de reacie crete proporional cu c% S
b. Creterea este mai ncet
c. V de reacie nu mai crete
Aceast curb este numit curba lui
Michaelis-Menten i se exprim prin ecuaia:
[S]
unde: V-Vreaciei
la un moment dat

V=Vmax x _________
lui Michaelis Menten

Km +[S]

Vmax- viteza max

Km-constanta
[S] C%

molar a S
Km- este acea concentraie de S pentru care v de reacie este
jumtate din Vmax. Km reflect afinitatea E pentru S i anume
cu ct Km este mai mic cu att afinitatea este mai mare i
invers.

Specificitatea

este capacitatea unei E de a selecta

dintr-un numr de compui S
particular.
este o proprietate a E, care instituie
eficien i ordine n metabolism,
prevenind desfurarea lui haotic.
este condiionata de
complimentaritatea conformaional
i electrostatic ntre CA al E i S.

Specificitatea
- este capacitatea unei enzime de a selecta

dintr-un numr mare de S unul particular,

-

-este condiionat de complimentaritatea

conformaional i electrostatic ntre CA al E i S.

S1

S4
S2

Deci fiecare E catalizeaz un anumit tip

de reactii sau transformarea unui
anumit S.

Specificitatea:

Specificitatea de reacie:

Ecatalizeaz un anumit tip de reacie ce st

la baza clasificrii enzimelor: o hidroliza,
o reacie redox, formarea unei legturi,
etc.
Specificitate

de substrat:
stereochimic, absolut i
relativ :
Specificitate
stereochimic - E catalizeaz

transformarea numai a unuia din

stereoizomerii posibili. Ex: Amilaza
scindeaz legturile 1-4 glucozidice din
amidon sau glicogen i nu influenteaz
asupra legturilor din celuloza.

specificitate de S absolut -

specificitate de S relativ

E acioneaz nu asupra unor grupe din mol S ci

asupra anumitor legturi a anumitei grupe de S
(proteazele: chimotripsina - legatura peptidica,
formata de COOH a Phe, Tyr, Trp; tripsina - de
COOH a Lyz si Arg).
E catalizeaz transformarea grupei de substane
asemntoare (alcoolDH)
E catalizeaz transformarea substanelor care
aparin diferitor grupe de compui organici (cit.
P450)

E catalizeaz
transformarea doar a unui S (anhidraza carbonica,
ureaza).

Mecanismele de activare a E
Sunt: 1. nespecifice: temperatura , iradierea
2. specifice
Se activeaz la:
1.
majorarea concentraiei S cnd este insuficient
2.
majorarea cantitii E
3.
introducerea coenzimelor cnd sunt insuficiente
4.
Introducerea ionilor metalelor Fe, Cu
Se cunosc urmtoarele tipuri de reglare a
activitii enzimatice:
1.
proteoliza limitata
2.
Reglare covalent fosforilare/ defosforilare
3.
Autostructurarea cuaternar
4.
Alosteric
5.
Reactivare

Proteoliz limitat
Unele enzime (proteine) se sintetizeaz n forma
neactiv de precursor proenzime (zimogeni)
Exemplu:
1) enzimele digestiei: pepsinogenul, himotripsinogenul,
tripsinogenul, proelastaza, procarboxipeptidaza scindeaza proteinele in stomac i duoden.
2) coagularea singelui e determinat de cascada de
reacii cu activitate proteolitic;
3) hormonii proteici (insulina);
4) proteinele fibrilare (colagenul).
Mecanismele de activare a proenzimelor este
proteoliza limitata.
Proteoliza limitata - este scindarea ( nlturarea) unui
sector al catenei n rezultat enzima se restructureaz i
se formeaz CA.
H+
Pepsinogen ------pepsin
-42AA

Importanla biologic a
prezenei formelor
neactive .
1. Protejaz de proteoliz proteinele
celulelor productoare de E.
2. Este o forma de rezerv a E, care
rapid pot fi activate i interven n
reacie.

Reglarea covalent
(fosforilare-defosforilare)
Activitatea unor E se
modific prin fosforilare.
Reaciile de fosforilare sunt
catalizate de kinaze
specifice.
E-OH + ATP -------- E-O-P
+ADP
Defosforilarea are loc sub
aciunea fosfotazei specifice
E-OP +H2O------- E-OH
+H3PO4

unele enzime snt active n

forma fosforilat, iar altele
n forma defosforilat.
Ex.: glicogen fosforilaza
activ n forma fosforilat;
glicogen sintaza este
activ n forma defosforilat

Autostructurarea
cuaternar

Este caracteristic E ce posed structur

cuaternar
Fiecare protomer n parte nu posed
activitate enzimatic
La asamblarea lor se modific
conformaia fiecrui protomer i
corespunztor se modific i conformaia
CA, devenind astfel favorabil pentru
fixarea i transformarea S

CA

EE

s
AlloM


1.
2.

1.
2.
3.
4.

Inhibiia activitii
enzimelor
Deosebim:

inhibiie nespecific (T, pH, agenii denaturrii )

inhibiie specific
Inhibiia poate fi reversibil i ireversibil.
La inhibiiia ireversibil inhibitorul covalent se
fixeaz de enzim sau se leag att de puternic nct
disociaia are loc foarte incet.
Exemple: cianurile se fixeaz cu Fe 3+ din
citocromoxidaz ---se ntrerupe LR; ionii metalelor
grele (mercur, plumb) inhib gruparea SH a multor
E
La o inhibiiie reversibil - inhibitori se fixeaza
slab, necovalent de E
Deosebim:
Inhibiie competitiv
Inhibiie necompetitiv
Inhibiie prin exces de S
Inhibiie alosteric

Inhibitorul

se aseamn dup structur cu S i se fixeaz n CA al E,

mpedicnd fixarea i transformarea S.
Nu e posibil fixarea simultan a S i a I. E va fixa pe acel competitor care se a
concentraie mai mare.
inhibiia enzimei (SDH)cu malonat. SDH oxideaza succinatul in fumarat)
Malonatul inhiba aceasta E datorita asemanarii cu S.
Particularitatea principal a acestui tip de inhibiie este c poate fi nlturat c
adugarea n exes a S(succinat).

Inhibiia competitiv

I se aseamn dup
structur cu S. Apare o
competiie dintre I i S
pentru CA. Nu e posibil
simultan fixarea S i a I. E
va fixa pe acel competitor
care se afl intr-o
concentraie mai mare.
E+I ---- EI
Inhibiia competitiv
diminueaz v catalizei,
micornd cota moleculelor
de E fixatoare a S.
Exemplu: inhibiia SDH cu
malonat (SDH -oxideaza
succinatul in fumarat).
Malonatul inhib aceasta E
datorit asemnrii cu S.

Inhibiia necompetitiv

inhibitorul nu se aseamn ca structura cu S

I i S se leag simultan cu E dar locusurile sint
diferite
E+S+I--------- ESI

Acest tip de inhibiie nu se nltur prin

exces de substrat.

Activitatea I const n micorarea numrului

turnover al E, dar nu i numrul de molecule de S.
Cei mai de vaza inhibitori de acest tip n celulele vii
sint produsele intermediare ale metabolismului,
care reversibil se fixeaza cu locusuri specifice pe
suprafata unor enzime reglatoare i modific
activitatea lor.
I poate fi nlturat de substane care l leag
numite reactivatori

I i S se leag simultan cu E n locusuri diferite

Mrirea concentraiei de S nu micoreaza inhibiia.

Cei

mai de vaz inhibitori de acest tip n celulele vii sint produsele

intermediare
ale metabolismului, care reversibil se fixeaz la unele E reglatoare i
modific activitatea lor.

Inhibiia noncompetetiv I se

leag la complexul ES, inhib activitatea E

E+S----ES +I-----ESI

inhibiia prin modificarea

covalent a moleculei enzimei - prin

fosforilare pe baza ATP-ului. Unele enzime

fosforilate pierd activitatea de exemplu
enzima glicogensintetaza
Inhibiia prin exces de S n CA se
fixeaz simultan surplus de S ce nu
poate fi transformat. Este o inhibiie
reversibil nlturarea S.
Retroinhibiie -

Inhibiie

alosteric - inhibitorul (efectorul) se leag n centrul

alosteric al enzimei, modificnd conformaia moleculei (structura teria
ce are ca consecin deformarea centrului activ.

E
S CA
CA E

M
Allos

Retroinhibiie

Sistemele polienzimatice
Tipurile de organizare a
sistemelor polienzimatice
Fiecare celul a organismului conine setul su
specific de E. Unele se gsesc n toate celulele,
altele sunt prezente doar n anumite celule sau
anumite compartimente celulare. Funcia
fiecrei E, nu este izolat, ci strins legat de
funcia altor enzime. Astiel din E aparte se
formeaza sisteme polienzimatice sau conveiere.

Funcia sistemelor polienzimatice depinde de

particularitile de organizare a lor in celule.
Se cunosc urmatoarele tipuri de organizare a
sistemelor polienzimatice:
1.
- funcional,
2.
- structural-funcional
3.
- mixt.

Organizarea funcional

enzimele sunt asociate n sistemul

polienzimatic cu ajutorul metaboliilor,
care difuzeaz de la o enzim la alta.
produsul reaciei primei enzime
servete drept substrat pentru enzima
urmtoare etc.
Ex.: glicoliza. Toate enzimele
participante la glicoliza sunt n stare
solubil, legtura se face doar prin
intermediarii metabolici.
E1
E2
E3
E4
A---------------- B------------- C---------- D---------- P

Organizarea structuralfuncional

E sunt fixate prin legturi slabe, ntr-o ordine corespunztoare

ntrrii lor n aciune, pe o protein central, care poate fi chiar
una din enzime.
Proteina central dispune de un bra care fixeaz S i l duce la
E1, care l transform n P1;
P1devine n acest caz S2 , braul l preia i l duce la E2, care l
transform n P2.
La nivelul fiecrei E braul ndeplinete rol similar asigurnd
formarea produsului unic al tuturor enzimelor complexului.
Avantajul este c braul duce de fiecare dat S la E corespunztoare,
potrivindu-l cu mare exactitate pe CA, ceea ce asigur n ansamblu o
vitez mai mare dect cea corespunztoare aciunii enzimelor
neasociate.
Ex.- complexul polienzimatic piruvatdehidrogenazic, constituit
din 3 E i 5 Co sau sintetaza acizilor grai constituit din apte
enzime legate structural, care n ansamblu ndeplinesc funcia de
sinteza a acizilor grasi.
Afar de complexele multienzimatice e posibila i o alt varianta de
organizare structural-funcional. Astfel E se pot aranja n lan,
fixndu-se de membrana biologic. Ex.enzimele lanului respirator
mitocondrial, care particip la transferul de electroni i protoni i la
generarea de energie.

Tipul mixt de organizare

reprezint o mbinare a ambelor tipuri de

organizare, adic o parte din sistemul
polienzimatic are organizare structurala,
iar cealalta parte - organizare funcional.
Ex.- ciclul Krebs, unde o parte din enzime
sunt asociate n complex structural
(complexul 2-oxoglutaratdehidrogenazic),
ar alt parte se leag funcional prin
metaboliii de legtur.

Unitile de activitate
ale enzimelor

Unitatea Internaional (U.I.)

cantitatea de E care catalizeaz
transformarea 1mol de S ntr-un
minut n condiii standard
Katal (kat) cantitatea de E care
asigur transformarea unui mol de S
ntr-o secund n condiii standard
(1U.I.=16,67 nkat)

Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i

esuturilor. Enzimele organospecifice. Modificarea
activitii enzimatice n diferite afeciuni
(enzimodiagnosticul).

Enzimele indicatorii sunt localizate

intracelular:
n citoplasm (lactatdehidrogenaza,
aldolaza),
n mitocondrii glutamatdehidrogenaza),
n lizosomi (-glucoronidaza, fosfataza
alcalin).
Acestea enzime n norm n plasm se
gsesc n concentraii foarte mici. La
afeciunile celulare activitatea acestor
enzime n plasm este brusc mrit.

Terapia cu enzime

Enzimele sunt ageni terapeutici unici ce produc efecte

importante i specifice.
Motivele care au limitat folosirea larg a enzimelor ca
medicaie e natura protC:IC6:legat de natura proteic:
- distribuie redus n organism dependena de dimensiuni,
sarcina i de fenomenele de glicozilare (prin glicozilare
proteinele sunt recunoscute de receptori i fixate n anumite
locuri
- posibilitate mic de dirijare extrahepatic, ficatul avnd
tendin de a cptta i reine proteinele strine;
- inactivarea lor sub aciunea proteazelor digestive n cazul
administrarii orale, iar proteazele tisulare le scurteaza de
asemeni actiunea;
- potentialul lor antigenic, anticorpii formati pot genera
reacii de hipersensibilizare adesea grave i pot inactiva
enzima.

Tehnici propuse pentru

optimizarea proprietilor
terapeutice ale enzimelor.
- prin N-acilare a fost crescut semiviata asparaginazei, folosit n leucemie
- S-au incercat de asemeni metode de obinere a enzimelor imobilizate.
De ex. prin reticularea enzimei, ce conduce la agregate insolubile, prin
adsorbie pe polimeri sintetici ori prin ataare covalent, sau prin
incorporare ntr-un gel in cursul polimerizarii.

Aceste preparate catiga rezistena la enzimele proteolitice i sunt mai

putin imunoactive dar pot fi alterate proprietaisile farmacocinetice.
Asemenea avantaje au dovedit conjugatii cu polietilenglicol (PEG) ai
arginazei, ai glutaminasparaginazei sau ribonucleaza supusa reticularii,
enzime cu efect antitumoral. Un succes n terapia defectelor genetice a
fost imobilizarea enzimelor din ciclul ureogenetic pe un suport de fibrina.

S-au propus noi forme farmaceutice prin incapsularea enzimelor in

lipozomi microsfere cu membrana bistratificata lipido proteica, in
hematii umane, in fantome eritrocitare sau in alti transportori celulari.
Noile forme obinute prezint un potenial de ntire tisular. De ex. in
cazul unor boli genetice cauzate de deficitul unor enzime lizozomale se
impune o terape de substitutie, enzima trebuind tintita direct in lizozomi.

Tipurile de organizare a
sistemelor polienzimatice:
Organizarea funcional - enzimele sunt asociate n sisteme polienzimatice, care
ndeplinesc o anumit funcie. Produsul reaciei prirmei enzime a lanului servete
drept substrat pentru enzima urmtoare etc.
Ex.de organizare funcional - enzimele glicolizei, unde toate E participante se
gsesc n stare solubil; Fiecare reac ie este catalizat de enzime aparte. Drept
verig de legtura aici servesc metaboliii.
Organizarea structural-funcional consta n faptul ca enzimele formeaz sisteme
structurale cu o anumit funcie.
Ex.- complexul polienzimatic piruvatdehidrogenazic, constituit din cteva enzime,
care particip la oxidarea acidului piruvic, sau sintetaza acizilor grai constituit din
apte enzime legate structural, care n ansamblu ndeplinesc funcia de sinteza a
acizilor grasi.

Afar de complexele multienzimatice e posibila i o alt varianta de organizare

structural-funcional. Astfel enzimele se pot aranja n lan, fixindu-se de membrana
biologic. Ex.enzimele lanului respirator mitocondrial, care particip la transferul de
electroni i protoni i la generarea de energie.
Tipul mixt de organizare a sistemelor polienzimatice reprezint o mbinare a ambelor
tipuri de organizare, adic o parte din sistemul polienzimatic are organizare
structurala, iar cealalt parte - organizare funcional.

Ex.- ciclul Krebs, unde o parte din enzime sunt asociate n complex structural
(complexul 2-oxoglutaratdehidrogenazic), ar alt parte se leag funcional prin
metaboliii de legtur.

Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i

esuturilor. Enzimele organospecifice. Modificarea
activitii enzimatice n diferite afeciuni
(enzimodiagnosticul).

Enzimele indicatorii sunt localizate

intracelular: n citoplasm
(lactatdehidrogenaza, aldolaza), n mitocondrii
glutamatdehidrogenaza), n lizosomi (glucoronidaza, fosfataza alcalin). Acestea
enzime n norm n plasm se gsesc n
concentraii foarte mici. La afeciunile celulare
activitatea acestor enzime n plasm este brusc
mrit.

Unitile de activitate
ale enzimelor.

Unitatea Internaional (U.I.)

cantitatea de E care catalizeaz
transformarea 1mol de S ntr-un
minut n condiii standard
Katal (kat) cantitatea de E care
asigur transformarea unui mol de S
ntr-o secund n condiii standard
(1U.I.=16,67 nkat)

Terapia cu enzime

Enzimele sunt ageni terapeutici unici ce produc efecte

importante i specifice.
Motivele care au limitat folosirea larg a enzimelor ca
medicaie sunt legate de natura proteic:
- distribuie redus n organism dependena de dimensiuni,
sarcina i de fenomenele de glicozilare (prin glicozilare
proteinele sunt recunoscute de receptori i fixate n anumite
locuri
- posibilitate mic de dirijare extrahepatic, ficatul avnd
tendin de a cptta i reine proteinele strine;
- inactivarea lor sub aciunea proteazelor digestive n cazul
administrarii orale, iar proteazele tisulare le scurteaza de
asemeni actiunea;
- potentialul lor antigenic, anticorpii formati pot genera
reacii de hipersensibilizare adesea grave i pot inactiva
enzima.

Tehnici propuse pentru

optimizarea proprietilor
terapeutice ale enzimelor.
- prin N-acilare a fost crescut semiviata asparaginazei, folosit n leucemie
- S-au incercat de asemeni metode de obinere a enzimelor imobilizate.
De ex. prin reticularea enzimei, ce conduce la agregate insolubile, prin
adsorbie pe polimeri sintetici ori prin ataare covalent, sau prin
incorporare ntr-un gel in cursul polimerizarii.

Aceste preparate catiga rezistena la enzimele proteolitice i sunt mai

putin imunoactive dar pot fi alterate proprietaisile farmacocinetice.
Asemenea avantaje au dovedit conjugatii cu polietilenglicol (PEG) ai
arginazei, ai glutaminasparaginazei sau ribonucleaza supusa reticularii,
enzime cu efect antitumoral. Un succes n terapia defectelor genetice a
fost imobilizarea enzimelor din ciclul ureogenetic pe un suport de fibrina.

S-au propus noi forme farmaceutice prin incapsularea enzimelor in

lipozomi microsfere cu membrana bistratificata lipido proteica, in
hematii umane, in fantome eritrocitare sau in alti transportori celulari.
Noile forme obinute prezint un potenial de ntire tisular. De ex. in
cazul unor boli genetice cauzate de deficitul unor enzime lizozomale se
impune o terape de substitutie, enzima trebuind tintita direct in lizozomi.

Metodele de determinare
activitii enzimelor.

Metodele de determinare
a activitii enzimelor.