METABOLISMUL

NUCLEOPROTEINELOR

Nucleoproteinele = heteroproteine
Proteine conjugate

PARTEA PROTEIC
PROTEINE DE TIP PROTAMINE, HISTONE
CU CARACTER BAZIC
CONINUT RIDICAT N AMINOACIZI CU
CARACTER BAZIC:
LIZIN
ARGININ
HISTIDIN

PARTEA NEPROTEIC
PARTEA PROSTETIC: ACIZII NUCLEICI
PRODUI DE POLICONDENSARE A
MONONUCLEOTIDELOR
DOU TIPURI DE ACIZI NUCLEICI N
FUNCIE NUMAI DE PENTOZ
ADN
DEOXIRIBOZ
(DNA)
ADN = POLIDEOXIRIBONUCLEOTIDE
ARN
RIBOZ
(RNA)
ARN = POLIRIBONUCLEOTIDE
2

6
1

7
5

N
8
9

NH2

Purina
NH2

N
H

N
H

BAZE AZOTATE PURINICE

MAJORE I MINORE

Adenina
(6- amino purina)

H3C

N
H

2-metil-adenina

O
N

HN
H2 N

N
H

Guanina
(6- amino, 2-hidroxi purina)

H3C
H2 N

N1
N

N
H

1-metil-guanina
3

NH2

4
3

N
O

N
H

Pirimidina

BAZE AZOTATE PIRIMIDINICE

MAJORE I MINORE
CH3

HN
O

Citozina
(2-oxi-4-amino-pirimidina)

NH2
3

CH3

N1
H

5-metil-citozina

N
H

Timina
(5-metil-2,4-dioxipirimidina)

HN
NH2

N
H

Uracilul
(2,4-dioxipirimidina)

CH2 OH

N3
H

5-hidroximetil-citozina

 Bazele purinice i pirimidinice libere au o serie de proprieti fizice i

chimice asemntoare:
- solubilitatea lor n ap este redus
- absorb n UV
- prezint fenomenul de tautomerie lactim-lactam

OH

N
HO

HN
N

Forma lactim

N
H

La pH fiziologic, aprox.
99% din baze azotate se
gsesc n forma ceto i
1% n forma enol

Forma lactam

Baz azotat + Pentoz = Nucleozide

2' - Deoxiribonucleozide (ADN)

Ribonucleozide (ARN)
NH2

NH2
N

HO

legtur
- N - glicozidic

5'

HO H2C

5'

HO H2C
O

O
4'

1'

3'

OH

4'

1'
3'
2'

2'

2 - deoxi adenozina (dA)

2 - deoxi guanozina (dG)
2 - deoxi citidina (dC)
2 - deoxi timidina (dT)

OH

OH

citidina
uridina
adenozina
guanozina

Esterii fosforici ai nucleozidelor = Nucleotide

Deoxiribonucleotide (ADN)

Ribonucleotide (ARN)
NH2

NH2
N

O
P

HO

CH2
4'

OH
1'

3'

OH

CH2
O

O
OH

5'

5'

HO

HO

2'

4'

3'

OH

2'

1'

OH

Deoxicitidin-5'-fosfat (acid deoxicitidilic, dCMP)

Adenozin-5'-fosfat (acid adenilic, AMP)

Deoxiadenozin-5'-fosfat (acid deoxiadenilic, dAMP)

Deoxiguanozin-5'-fosfat (acid deoxiguanilic, dGMP)
Deoxitimidin-5'-fosfat (acid timidilic, dTMP)

Guanozin-5'-fosfat (acid guanilic, GMP)

Citidin-5'-fosfat (acid citidilic, CMP)
Uridin-5'-fosfat (acid uridilic, UMP)
7

Funciile metabolice ale nucleotidelor i nucleozidelor

1. Reprezint unitile de baz din structura acizilor nucleici (ADN i ARN)
2. Sunt implicate n metabolismul energetic: ATP reprezint principala form
n care energia este stocat n celule, fiind de asemenea i donor de grupri
fosfat pentru sinteza altor compui biologic activi
3. Sunt mediatori fiziologici ai unor procese biologice importante:
Exemple: adenozina regleaz dilatarea coronarian
ADP are rol n coagularea sngelui
Nucleotidele ciclice AMPc i GMPc sunt mediatori ai mesajelor extracelulare
Coenzimele NAD+, FAD, FMN, HSCoA cuprind n structura lor un nucleotid
4. Sunt transportori ai unor intermediari activi cu rol n diferite procese
metabolice:
Exemple: UDP-glucoza, GDP-manoza, GDP-fructoza, UDP-galactoza, CDP-colina
UDP-glucoza
activatori ai
glicogenului
CDP-colina
unor precursori metabolici ai
fosfatidilcolinei
8

Digestia i absorbia nucleoproteinelor

Alimente
Enzime proteolitice

Proteine

ARN

ADN
Nucleaze pancreatice
Monodeoxiribonucleotide
Pi

Monoribonucleotide

Fosfataze intestinale

Deoxiribonucleotide

Pi
Ribonucleotide

Nucleozidaze
(intestin)

Deoxiriboz

Purine
Pirimidine

Riboz

Catabolismul nucleotidelor purinice

Dezaminare
oxidativ

NH2

NH3

N
O

CH2

N
N

N
CH2

CH2

IMP
(acid inozinic)

GMP
(acid guanilic) HO OH

Fosfomonoesteraza

HO

Riboza-1-fosfat
N

HO

N
CH2

Guanozina
(nucleozid)

Purin nucleozid
difosforilaza

N
H

Hipoxantina

Pi

H2 N

Xantin oxidaza

H2O2

NH3
N

N
Nucleozid
difosforilaza

OH

OH

HO

HN

HO

OH

Pi

H2 N

Pi

O2 + H2O

OH

5'-nucleotidaza
(fosfomonoesteraza)

CH2

Inozina
HO

Hidroliz

HN

N
N

OH

Adenilat
dezaminaza

Riboza-1-fosfat

Pi

HN

AMP
(acid adenilic) HO OH

H2 N

Hidroliz

N
H

HN
Dezaminare
oxidativ

Xantina

Guanina

O2 + H2O

Xantin oxidaza

OH

N
H

N
H

H2O2
OH
O

ALLOPURINOL
inhibitor de xantin oxidaz

N
N

N
H

H
N

HN

Acid uric
O

O
N
H

N 10
H

CATABOLISMUL NUCLEOTIDELOR PURINICE

COMENTARII
n cadrul metabolismului intermediar, acizii nucleici sunt degradai pn la
mononucleotidele corespunztoare, sub aciunea unor enzime intracelulare:
ribonucleazelor (RN-aze)
deoxiribonucleazelor (DN-aze)
Nucleotidele purinice (AMP, GMP) sunt transformate n continuare pn la
eliberarea acidului fosforic, a pentozei i a bazei purinice
Nucleul purinic este oxidat de ctre oxidaze specifice
PRODUSUL FINAL DE CATABOLISM AL NUCLEOTIDELOR PURINICE

ESTE ACIDUL URIC

NU SE DESCHIDE CICLUL PURINIC
11

Xantin oxidaza (EC: 1.17.3.2)

Complex enzimatic citoplasmatic
Metalflavoprotein
FAD, Mo6+, Fe neheminic [2Fe-2S]
n cursul reaciei: Mo6+

Mo4+

Se formeaz radical superoxid (O2.-) foarte toxic (pro-oxidant)

Superoxid-dismutaza (SOD)
Catalaza (CAT)
12

Metabolismul acidului uric

ACIDUL URIC se sintetizeaz n FICAT
din catabolismul nucleotidelor purinice (AMP, GMP) exogene
provine
din catabolismul AMP i GMP din sinteza endogen de novo
Catabolism:

O
H
N

HN
O

URICAZA

N
H

Acid uric

COOH

NH2

C
H

N
H

Acid alantoic

N
H

H
Alantoina

CO2

NH2
N
H

O
NH2

O
N
H

H2O

1/2 O2

NH2
2O

NH2

Uree

COOH
CHO

Acid glioxilic
13

O
H
N

HN
O

URICAZA

N
H

Acid uric

NH2
O

C
H

N
H

N
H

H
Alantoina

NH2
C

CO2
COOH

N
H

O
NH2

O
N
H

H2O

1/2 O2

NH2
2O

Acid alantoic

NH2

Uree

COOH
CHO

Acid glioxilic

Omul nu exprim gena pentru uricaz

om, primate i psri

uricotelice

celelalte mamifere, reptile i molute

alantoinotelice

peti i amfibieni

ureotelice

organismele inferioare

amoniotelice
14

Acidul uric
este un compus cu solubilitate redus
n plasm i n lichidele interstiiale se gsete sub form de sare monosodic
O

n plasm: 2 5 mg%, sub form de urat de Na(K)

HN

din plasm se elimin la nivel renal prin filtrare glomerular

i reabsorbie tubular (0,7 g% n urin)

H
N

creterea concentraiei de acid uric n plasm = hiperuricemie

O-Na+
N
H

N
H

Urat de sodiu

suprasaturare plasmatic ( > 7 mg%) =>

=> cristalizeaz i se depune la nivelul articulaiilor
i la nivel renal sub form de TOFI
cristalele sunt fagocitate de leucocite => INFLAMAIE => DURERE

15

Guta
PRIMAR supraproducia de
acid uric, rezultat mai ales prin
biosinteza de novo a
nucleotidelor purinice
(posibile cauze genetice)

Frecvena la femei 0,1%

Frecvena la brbai 1-3%

SECUNDAR n afeciuni
corelate un turnover crescut al
acizilor nucleici (anemie
hemolitic, leucemii acute) sau
la pacieni care au tumori
canceroase i fac radio- sau
chimioterapie

Tratament:
-Regim alimentar special
-Inhibitori ai reabsorbiei tubulare a acidului uric prin administrarea de
uricozurice => stimularea excreiei urinare SALICILAII (ASPIRINA)
-Inhibitori ai sintezei acidului uric (inhibitori ai xantin oxidazei) ALLOPURINOL
- Stimularea catabolismului acidului uric prin administrarea enzimei URICAZA,
care l catabolizeaz
16

Strategii terapeutice n hiperuricemie

Allopurinol
Febuxostat
Uricase
Pegloticase
Rasburicase
Aspirin
Probenecid,
Sulfinpyrazone,
Benzbromarone

17

Catabolismul nucleotidelor pirimidinice (1)

NH2

CH

CH

N
H
Citozina

NH3
H2 O
HN

CH

CH

Dezaminare
O

N
H
Uracil

NADPH + H+

Reducere

C CH3

HN
O

CH
N
H
Timina
NADPH + H+

Reducere

NADP+

NADP+

O
CH2

HN

CH2
N
H
Dihidrouracil

HN
O

H CH
3
C
CH2

N
H
Dihidrotimina
CH3

H2N C N CH2 CH2 COOH

H
O
Acid-ureidopropionic

H2N C N CH2 CH COOH

H
O
Acid -ureidoizobutiric
18

Catabolismul nucleotidelor pirimidinice (2)

CH3

H2N C N CH2 CH2 COOH

H
O
Acid-ureidopropionic
CO2

H2N C N CH2 CH COOH

H
O
Acid -ureidoizobutiric
NH3

NH3

H2N CH2 CH2 COOH

-alanina

CH2 COOH

H2N CH2 CH

CH

COOH

H
Semialdehida metilmalonic
CO2

UREE
CH3 COOH
Acid acetic

COOH

CH3

O
C

H
Semialdehida malonic
CO2

CH3
Acid -aminoizobutiric

NH3

CO2

H3C

CH2 COOH
Acid propionic
19

Catabolismul nucleotidelor pirimidinice

Comentarii
Din hidroliza intracelular a acizilor nucleici, sub aciunea nucleazelor, sunt eliberate
nucleotidele pirimidinice: UMP, CMP, TMP
Acestea sunt transformate n continuare, n componentele lor structurale:
- acid fosforic
- pentoze
- baze azotate pirimidinice
CITOZINA:
- este dezaminat, cu formare de uracil
URACILUL:
- este redus sub aciunea NADPH2, la dihidrouracil
- are loc deschiderea ciclului pirimidinic (deosebire de purine)
- se produc reacii de dezaminare i decarboxilare
- produii finali sunt acidul acetic i ureea
TIMINA
- este redus, sub aciunea NADPH2, la dihidrotimin
- are loc deschiderea ciclului pirimidinic (deosebire de purine)
- se produc reacii de dezaminare i decarboxilare
20
- produii finali sunt acidul propionic i ureea

O
HO

H2
C

OH

-5-fosforibozil-1-pirofosfat
(PRPP)

OH

OH OH

HOOC

OH

riboza-fosfat
ATP + acid aspartic

Glutamina
O
HO

Acid glutamic + pirofosfat

H2
C

OH

OH OH

CH2
HOOC

C
H

ATP + glicina

Mg2+

H2
C

OH

HN

OH OH

N
H

H 2C

CH2

H 2N

HN

CH
O

NH

H 2N

riboza-fosfat
N10-Formiltetrahidrofolat
Tetrahidrofolat

O
H2N

H
C

-N-formil-glicinamidin
ribonucleotid (FGAM)

N
H

ATP

HC

HO

N
CH
N

5-aminoimidazol
ribonucleotid (AIR)

riboza-fosfat

P
OH

N
H2
C
H
H

7
6

N
8
9

N
N10-CHO-FH4

N10-CHO-FH4

riboza-fosfat

C4

Glicin

Aspartat

Glutamin

H2O

CO2

CH

ADP+Pi

5-Formamid imidazol-4carboxamid ribonucleotid

(FAICAR)

C4

HN

K+

5-aminoimidazol-4carboxamid
ribonucleotid
(AICAR)

CH

riboza-fosfat
Mg2+

C4

K+

-N-formil-glicinamid
ribonucleotid (FGAR)

Acid glutamic + pirofosfat

HC

Glutamina + ATP + H2O

H
N

Acid fumaric

H 2N

riboza-fosfat

H 2C

CH
N

NH

Mg2+

riboza-fosfat

Tetrahidrofolat

C4

NH2

O
Glicinamid ribonucleotid
(GAR)

CH

H 2N

N10-formiltetrahidrofolat
H
N

5-aminoimidazol-4-Nsuccinocarboxamid
ribonucleotid
(AISCAR)

ADP+Pi

Biosinteza de novo
a nucleotidelor purinice

ADP+Pi

COOH

-5-fosforibozilamina
(PRA)

HO

Mg2+

NH2

4-carboxiaminoimidazol
ribonucleotid
(4-carboxi-AIR)

CH

H 2N

OH

CO2

C4

N
CH

Proveniena atomilor de carbon i azot din

structura nucleului purinic

Acid inozinic (IMP)

O
H
H

OH OH

21

5'

H2C

AMP
O
1'

4'

3'

OH

2'

H2C

ATP

OH

OH

O
PRPP
sintetaza

OH

5 - Fosforiboz

OH

5 - Fosforibozil -1- pirofosfat (PRPP)

glutamin
amidotransferaza
glutamat
PPi

H2C

NH2
O

Biosinteza de novo
a nucleotidelor purinice

OH

5 - Fosforibozilamina (PRA)
OH

10 etape
6 ATP

HN

1.

Glutamina
Glicina
Acid aspartic
Tetrahidrofolat

N
8
9

N
P

H2C

OH

AMP

sau

Acid inozinic
(IMP)
OH

GMP

22

Interconversia nucleotidelor purinice

HOOC

CH

CH2

COOH

NH
HOOC

CH

CH2

COOH

Fumarat
N

AMP

NH2
Acid aspartic

HN
N

Acid
inozinic
(IMP)

Riboz - 5 - P

adenil-succinat
sintetaza

adenilosuccinat
liaza

GDP + Pi

Acid
adenilsuccinic

GTP

N
Riboz - 5 - P

sau
H2O

Glutamin

IMP- dehidrogenaza

NAD+
NADH + H+

Glutamat
N

HN
O

XMP - glutamin
amidotransferaza

GMP
N

N
H

ATP
AMP + PPi

Riboz - 5 - P
Acid xantilic

23

Ribozo-5-fosfat

Reglarea biosintezei
nucleotidelor purinice

Ribozo-5-fosfat pirofosfokinaza
(PRPP sintetaza)

Fosforibozil pirofosfat (PRPP)

AMP

Glutamin-PRPP
amidotransferaza

GMP
IMP

5-fosforibozilamina

Acid inozinic (IMP)

Adenilsuccinat
sintetaza

IMP
dehidrogenaza
GMP

AMP

Acid xantilic (XMP)

Acid adenilsuccinic

Adenilsuccinat
liaza
AMP

XMP-glutamin
amidotransferaza
GMP

Este de tip feed-back, la mai

multe nivele:
1.Produii finali de metabolism,
AMP, GMP, IMP sunt efectori (-)
asupra primei enzime:
PRPP amidotransferaza
(enzim reglatoare a procesului
de biosintez)
2.AMP i GMP i inhib propria
formare blocnd transformrile
acidului inozinic (inhibiie
alosteric)
3.De fapt, concentraia celular
de 5-P- riboz determin viteza
reaciilor de biosintez
24

Biosinteza de novo a nucleotidelor purinice

- COMENTARII Sinteza are loc la nivel hepatic, n citosol, de unde produii finali sunt
transferai la esuturile extrahepatice

Se sintetizeaz direct nucleotidul purinic IMP acidul inozinic (i nu baze

azotate libere), pornind de la ribozo-5-fosfatul generat pe calea pentozofosfailor, i activat sub form de PRPP

Sunt necesare 10 etape metabolice succesive n cursul crora se vor

consuma 6 molecule de ATP
PRPP este un compus cheie, ce va servi i la sinteza pirimidinelor
(ATP cedeaz 2 grupri fosfat 5-P-ribozei !!)

Ca donori de C i N, pentru constituirea nucleului purinic, celula utilizeaz

diferii aminoacizi glicocol, aspartat, glutamin, dar i CO2, precum i

formiatul provenit de la acidul N10 formil tetrahidrofolic

25

OH

H2N C

Carbamoil fosfat O

+
Acid aspartic
HOOC

CH2

Orotat fasforibozil
transferaza

P-Pi
O

CH

Pi

NH2
C

HO

OH
CH2

H2
C

Biosinteza de novo a
nucleotidelor pirimidinice

CH
C

COOH

H
H

Glutamin

OH OH

C
N H COOH
H

+H2O
Dihidroorotaza

HN

COOH
O

HO

5-fosforibozil
1-pirofosfat (PRPP)

NH2

Aspartat
transcarbamoilaza

Acid N-carbamoil
aspartic

OH

-H2O

Orotidilat
decarboxilaza

Acid L-dihidroorotic
O

6
2

C
N H COOH
H

H+

NADH +
Dihidroorotat
dehidrogenaza

HN
Acid orotic
O

O
O
HO

C
N
H

P
OH

CH
C

HN

NAD+

CO2

CH2

H2
C
H
H

CO2

O
HN

Orotodil-5-fosfat
(acid orotidilic)

Aspartat

N
1

CH
CH

Proveniena atomilor de carbon i azot din

structura nucleului pirimidinic

O
H
H

OH OH
COOH

Uridin-5-fosfat
(acid uridilic, UMP)

26

O
3

H2N

PO3H2

Carbamoil fosfat

Biosinteza de novo a
nucleotidelor pirimidinice

HOOC

NH2

CH2

CH

COOH

Acid aspartic

aspartat
transcarbamoilaza (ATC-aza)

Pi

O
HO
C

CH2

H2N 3

C
2

HC

Acid N-carbamoil aspartic

COOH

N
H
O

6 etape

HN

+ PRPP

HN
N
H

COOH

Interconversia nucleotidelor pirimidinice

Riboz - 5 - P

Acid orotic

UMP (acid uridilic)

nucleozid difosfat kinaza
UMP + ATP
UDP + ADP

metilare (N5 - N10 - CH2 - FH4)

timidilat sintetaza
d TMP

UDP + ATP

UTP + ADP

fosforilare

UTP
glutamin
ATP

citidilat
sintetaza

CTP

27

Interconversia nucleotidelor pirimidinice

UMP (acid uridilic)
nucleozid difosfat kinaza
UMP + ATP
UDP + ADP

metilare (N5 - N10 - CH2 - FH4)

timidilat sintetaza
dTMP

UDP + ATP

UTP + ADP

fosforilare

UTP
glutamin
ATP

citidilat
sintetaza

CTP

Acidul uridilic se poate transforma n acid citidilic, dar numai dup prealabila
sa fosforilare la UTP
UTP poate fi aminat n poziia 4 a ciclului pirimidinic, cu formarea acidului
citidin-trifosforic (CTP)
Reacia de aminare se realizeaz n prezena amoniacului liber (la
microorganisme) i a glutaminei la organismele superioare
Reacia necesit participarea unei molecule de ATP
Pentru formarea acidului timidilic (TMP) este necesar transformarea
prealabil a acidului uridilic (UMP) n deoxiurudilic (dUMP)
28
Metilarea dUMP are loc sub aciunea unei timidilat-sintetaze

Reglarea biosintezei nucleotidelor pirimidinice

Carbamoil fosfat

+
Acid aspartic

Enzima reglatoare : ATC-aza

ATC-aza este o enzim alosteric

Aspartat
transcarbamoilaza (ATC-aza) format dintr-o subunitate
Acid N-carbamoil-aspartic

catalitic i una reglatoare

CTP se poate fixa pe subunitatea

reglatoare interfernd astfel
UMP

fixarea aspartatului pe subunitatea

catalitic i reducnd viteza

UTP

procesului de biosintez

CTP
29

Reglarea biosintezei nucleotidelor pirimidinice

Carbamoil fosfat

+
Acid aspartic

Aspartat
transcarbamoilaza (ATC-aza)
Acid N-carbamoil-aspartic

Inhibiia dihidroorotat
dehidrogenazei este
utilizat n terapia
poliartritei reumatoide
(Leflunomid)

O
HN
Acid orotic
O

UMP

C
N
H

CH
C

Utilizat ca medicament
Susine funcia hepatic
COOH

UTP

CTP
30

Biosinteza de novo a nucleotidelor pirimidinice

- COMENTARII Inelul pirimidinic este sintetizat tot din precursori simpli: aminoacizi i CO2
Se pornete de la carbamoil fosfat i acid aspartic i se ajunge n final la acid uridilic
(UMP) primul nucleotid pirimidinic funcional !!
PRPP este de asemenea, precursor al restului 5-P-ribozil din nucleotidele pirimidinice,
DAR legtura -N-glicozidic de la N1 se realizeaz dup constituirea nucleului
pirimidinic (nu nainte !!)
Inelul pirimidinic este sintetizat sub form de acid orotic (acesta reprezint produsul
direct al biosintezei bazelor pirimidinice)
Fondul de uniti active N10-metilen FH4, furnizeaz gruparea CH3 din timin. Timina
este specific pentru ADN, i se sintetizeaz sub form de dTMP (deoxiribotimidin
monofosfat), prin metilarea UMP
UMP poate fi transformat n CTP numai dup fosforilare la UTP !!!
Aspartat transcarbamoilaza (ATC-aza) este enzima reglatoare a sistemului
31

Biosinteza deoxiribonucleotidelor din ribonucleotide

O

HO P

OH

OH

H2
C 5'

A, G, C sau U

HO

4'

OH

1'

3'

H2
C

A,
G, CC,sau
TU
A, G,

OH

2'

OH OH

OH

Ribonucleotid
difosfat

2'

Deoxiribonucleotid
difosfat

-H2O
Ribonucleotid
reductaza

Tioredoxina
SH

Tioredoxina
S

SH

Tioredoxin
reductaza
FAD

NADPH + H+

FADH2

NADP+

32

Concluzii generale

Cile de biosintez i de catabolism a nucleotidelor purinice i pirimidinice au fost

elucidate cu ajutorul compuilor precursori radiomarcai (aminoacizi)

La sinteza de novo a nucleotidelor purinice i pirimidinice pentru fondul

metabolic celular NU contribuie acizii nucleici exogeni, din alimentaie, DECI

nucleotidele constitutive ale acizilor nucleici NU sunt de natura exogen ci de origine
endogen

IMP (acidul inozinic) i UMP (acidul uridilic) reprezint compui intermediari n

biosinteza nucleotidelor purinice i pirimidinice cu rol de rscruce metabolic

Biosinteza nucleotidelor purinice este un proces puternic endergonic (se consum

8 molecule de ATP )

Enzimele implicate n cile de biosintez ale nucleotidelor reprezint o int

terapeutic pentru o gam larg de ageni antivirali i antitumorali

Acidul uric i ureea (NH3 i CO2 rezultai din catabolismul pirimidinelor) sunt

produii finali ai degradrii nucleotidelor purinice i pirimidinice

33