EXPRESIA GENIC A DPYD, TYMS, TYMP, TK1 i TK2

- MARKERI DE RASPUNS LA PACIENII CU CANCER

COLORECTAL AVANSAT N CURSUL
CHIMIORADIOTERAPIEI BAZAT PE
FLUOROPIRIMIDIN

Student: Ioana Bojescu

Anul: V, Seria E, Grupa 49

1.

Introducere

Cancerul colorectal este pe locul III n lume ca morbiditate i mortalitate datorit

incidenei n continu cretere. n ciuda progreselor substaniale n ceea ce privete
capacitile de diagnostic i tratament, prognosticul rmne rezervat. Aproximativ
3540% din pacienii care prezint forme avansate, cu invazie local ( LARC locally
advanced rectal cancer) vor prezenta metastaze la distan i vor deceda din cauza
patologiei. Una din cauzele principale de deces este reprezentat de rezistena la
terapie. n LARC, rezultatele clinice pot fi mbuntite prin radioterapie
neoadjuvant
sau
prin
chimioradioterapie
(
CCRT

concurrent
chemoradiotherapy) . CCRT efectuat preoperator , tehnic ntrodus n ultimul
deceniu, ajut la conservarea sfincterului , scade riscul de recuren i poate
determina involuie tumoral. Datorit acestor avantaje CCRT a devenit gold
standardul n tratamentul LARC. Dei rata de success este intre 10-25%, mai mult
de o treime din pacieni fie nu rspund la tratament, fie prezint doar progrese
nesemnificative. Riscul de recuren sau de apariie a metastazelor rmne de
aproximativ 15-20% pentru LARC ce beneficiaz de CCRT preoperator.
Raspunsul tumoral la terapiile adjuvante nu este uniform. n cazul pacienilor care
nu rspund la tratamentul neoadjuvant, expunerea la radiaii care determin
alterarea AND-ului, administrarea medicamentelor care prezint numeroase efecte
adverse putea fi evitat, acetia putnd beneficia de tratament chirurgical precoce.
Cu alte cuvinte, identificarea unor biomarkeri care ar
anticipa raspunsul la
tratament al LARC ar avea o deosebit importan clinic.
Unele studii au ncercat s determine corelaia dintre expresia anumitor gene i
raspunsul la tramentul chimioterapic, radioterapic i la CCRT. Spre exemplu a fost
analizat implicarea timidin fosforilazei
( TYMP) i dihidropirimidin
dehidrogenazei n recurena i metastazarea cancerului colorectal (CRC colorectal
cancer) dup terapia postoperatorie cu 5-florouracil ( 5-FU). Supraexpresia genei
care codific TYMS se asociaz cu rezistena la tratamentul cu 5-FU , scade rata de
supravieuire i intervalul liber.
Acesta este primul studiu care ii propune s stabileasc raportul dintre diferii
biomarkeri genetici i rspunsul clinic la pacienii cu LARC tratai cu CCRT.

2. MATERIALE I METOD
2.1. Criterii de includere n studiu
n intervalul de timp noiembrie 2006- iunie 2011, au fost selectai 60 de pacieni cu
LARC ( T3/T4 sau orice stadiu clinic pozitiv N) localizat la 10 cm de marginea anal
i care au primit CCRT preoperatorie pe baz de 5-FU. nainte de includerea n
studiu s-a realizat anamneza, examenul clinic obiectiv, colonoscopie, biopsie

tumoral, CT abdominal i pelvin, ecografie endorectal i RMN pelvin la toi

pacienii inclui . Testele de laborator realizate au inclus hemoleucograma, probe
hepatice, ionograma seric, albumina, creatinina i CEA. Pacienii selectai au vrste
cuprinse ntre 18 i 85 de ani i prezentau funcii hematologice, hepatice i renale
adecvate.
2.2 Tratament
Pacienii au beneficiat de chimioterapie pe baz de fluoropirimidin. Din cei 60 de
participani la studiu, 24 au primit 5- FU (350 mg/m 2 IV bolus) i leucovorin (20
mg/m2 IV bolus) i radioterapie n zilele 1-5 i 21-25. Ceilali 34 au primit

capecitabine (850 mg/m2) de 2 ori pe zi, 5 zile pe sptmn, n zilele n care

beneficiau de radioterapie.
Prima doz zilnic de capecitabine a fost administrat cu 2 ore nainte de
radioterapie, iar a doua la 8- 10 ore. Radioterapia ( RT) a fost planificat
utiliznd dozimetria i doze de 1.8 Gy au fost utilizate pentru a acoperi
volumul stabilit. RT pelvin a constat n doze de 45 Gy n 25 de fraciuni pe o
perioad de 5 sptmni. Volumul clinic intit era reprezentat de tumora
primar, mezorect, spaiul presacrat i ganglionii limfatici perirectali,
presacrai , iliaci interni i/sau externi. Pacienii au fost evaluai clinic
sptmnal pe parcursul CCRT pentru a determina fenomenele de toxicitate
acut . Teste biochimice au fost efectuate cu ocazia fiecrui examen clinic iar
toxicitatea a fost monitorizat utiliznd criteriile National Cancer Institute
Common Toxicity , versiunea 3.0 (http://ctep.cancer.gov/reporting/ctc.html;
Decembrie 2012).
Dup terminarea CCRT , toi pacienii au beneficiat de tratament chirurgical
cu excizie mezorectal i rezecie plurivisceral la pacienii T4. Toate
interveniile chirurgicale au fost efectuate de aceli chirurg specialist (J.-Y.
Wang). Conservarea sfincterului anal s-a realizat de fiecare dat cand a fost
posibil cu anastomoz primar colo-rectal sau colostomie temporar.
2.3. Extracia de ARN i sinteza de ADNc
ARN-ul a fost izolat din esutul tumoral al fiecrui pacient utiliznd GeneCling
Enzymatic Gene Chip Detection Kit (Medico-Gene Biotechnology Co., Ltd., LA,
USA). ARN-ul purificat a fost evideniat prin msurarea absorbiei la 260 nm
utiliznd spectrofotometrul ND -1000 (NanoDrop Technologies, Wilmington,
DE, USA) . Determinarea cantitativ a fost realizat utiliznd Bioanalyzer
2100 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA).

ADNc a fost sintetizat pe baza ARN-ului purificat folosind GeneCling

Enzymatic Gene Chip Detection Kit. Reverstranscripia a fost realizat utilind
un amestec alctuit din 3 g/mL oligo (dT) 18-mer primer, 1 g/mL random
6-mer primer, 100 mmol/L deoxiribonucleotid trifosfat, 200 uniti de MMLV
reverstranscriptaz, i 25 uniti de inhibitor de ribonucleaz. Probele au fost
incubate la 42C pentru 2 ore, nclzite la 95C pentru 5 minute i stocate la
-80C pn la analiza acestora.
2.4. Pregtirea pentru hibridizarea AND-ului

DPYD TYMS TYMP TK1

TK2

Blank Negative
-actin

Image

Response
DPYD TYMS TYMP TK1

TK2

Blank Negative
-actin

DPYD TYMS TYMP TK1

TK2

Blank Negative
-actin
Nonresponse

a
b
Reprezentare schematic a expresiei enzimatice i a patternurilor de expresie
genic la pacienii responsivi i non-responsivi. a) reprezentarea schematic a
expresiei enzimatice incluznd 5 gene int, o gen housekeeping (-actin), o gen
negative de control ( Negative) i un control blank ( Blank). Cele 5 gene int (DPYD,
TYMS, TYMP, TK1 i TK2). B) Aspectul biomarkerilor vizai la pacienii responsivi i
non-responsivi.

Tabelul 1. Secvena de nucleotide codificat de cele 5 gene int (DPYD, TYMS,

TYMP, TK1 i TK2)

2.5 Realizarea curbei ROC ( ROC - Receiver-Operating Characteristic

Curves)
Figura 2. Analiza a 9 gene i regresia tumoral n 60 de esuturi canceroase rectale.

3.Rezultate

4. Discuii
Acest studiu si-a propus s depeasc etapa determinrii unui singur parametru
pentru stabilirea prognosticului i s ofere o imagine de ansamblu asupra expresiei
multigenice n evaluarea supravieuirii unui pacient cu cancer colorectal n stadiu
avansat.
n urma analizei amnunite a analizei
expresiei genice, aceti parametrii pot
stabili cu o sensibilitate de 89.7% si o
specificitate de 81% rspunsul la CCRT
bazat pe fluoropirimidine. Identificarea
factorilor predictivi este deosebit de
important n selectarea pacienilor care
pot
beneficia
de
tratamentul
neoadjuvant
i
pentru
a
evita
tratamentul
inadecvat
n
cazul
pacienilor
non-responsivi.
Supravieuirea medie a pacienilor
responsivi a fost de 47.01 luni iar cea a
grupului doi de 22.16 luni.

n concluzie acest studiu sugereaz ca un panel de biomarkeri multigenici ce

cuprinde DPYD, TYMS, TYMP, TK1 i TK2 poate fi de un real ajutor n predicia ratei
de success a tratamentului utilind CCRT pe baz de 5-FU i n stabilirea
prognosticului vital al pacientului.

Bibliografie
1.G. C. Balch, A. De Meo, and J. G. Guillem, Modern man- agement of rectal cancer:
a 2006 update, World Journal of Gastroenterology, vol. 12, no. 20, pp. 31863195,
2006.
2. C. Rodel, P. Martus, T. Papadoupolos et al., Prognostic signif- icance of tumor
regression after preoperative chemoradiother- apy for rectal cancer, Journal of
Clinical Oncology, vol. 23, no.
34, pp. 86888696, 2005.
3. J. G. Guillem, D. B. Chessin, A. M. Cohen et al., Long-term oncologic outcome
following preoperative combined modality therapy and total mesorectal excision of
locally advanced rectal cancer, Annals of Surgery, vol. 241, no. 5, pp. 829838,
2005.

4. M. D. van Brink, A. M. Stiggelbout, W. B. van den Hout et al., Clinical nature and
prognosis of locally recurrent rectal cancer after total mesorectal excision with or
without preoperative radiotherapy, Journal of Clinical Oncology, vol. 22, no. 19, pp.
39583964, 2004.
5. B. H. Lee, M. Y. Chang, S. K. Park et al., Laparoscopic assisted distal rectal
cancer resection with preoperative concurrent chemoradiotherapy, Cancer
Research and Treatment, vol. 39, no. 1, pp. 1015, 2007.
6. C. Jakob, D. E. Aust, W. Meyer et al., Thymidylate synthase, thymidine
phosphorylase, dihydropyrimidine dehydrogenase expression, and histological
tumour regression after 5-FU- based neo-adjuvant chemoradiotherapy in rectal
cancer, Jour- nal of Pathology, vol. 204, no. 5, pp. 562568, 2004.
7. C. Jakob, T. Liersch, W. Meyer, H. Becker, G. B. Baretton, and D. E. Aust,
Predictive value of Ki67 and p53 in locally advanced rectal cancer: correlation with
thymidylate synthase and histopathological tumor regression after neoadjuvant 5FU-based chemoradiotherapy, World Journal of Gastroenterol- ogy, vol. 14, no. 7,
pp. 10601066, 2008.
8. B. Pasche, M. Mulcahy, and A. B. Benson III, Molecular markers in prognosis of
colorectal cancer and prediction of response to treatment, Baillieres Best Practice
and Research in Clinical Gastroenterology, vol. 16, no. 2, pp. 331345, 2002.
9. J. G. Kuremsky, J. E. Tepper, and H. L. McLeod, Biomarkers for response to
neoadjuvant chemoradiation for rectal cancer, International Journal of Radiation
Oncology Biology Physics, vol.
74, no. 3, pp. 673688, 2009.
10. A. Jemal, R. Siegel, E. Ward, Y. Hao, J. Xu, and M. J. Thun, Cancer statistics,
2009, Cancer Journal for Clinicians, vol. 59, no. 4, pp. 225249, 2009.
11. P. Das, J. M. Skibber, M. A. Rodrigues-Bigas et al., Predictors of tumor response
and downstaging in patients who receive preoperative chemoradiation for rectal
cancer, Cancer, vol. 109, no. 9, pp. 17501755, 2007.