Rolul fizicianului n controlul calitii radiofarmaceuticelor

Pricope Andreea Simina

Coordonator:Dr.Cipriana tefnescu

Medicina nuclear

Capitolul I: Asigurarea calitii

"Asigurarea calitii este suma total a tuturor msurilor luate cu scopul de a asigura c produsele sunt de calitatea necesar pentru destinaia lor " Astfel, gradul de certitudine c un produs radiofarmaceutic va ndeplini funcia prevzut ntr-un mod sigur i eficace va depinde de fiecare aspect al procesului de utilizat pentru prepararea lui.

Principalele aspecte ale acestui proces sunt: Personalul - Obligaiile personalului-cheie, de formare, evaluare i igien Incintele i echipamentele - proiectarea, exploatarea, calibrarea i ntreinerea preventiv planificate Documentaie - Specificaii, proceduri i nregistrri Metodele de producie - definite i validate Controlul calitii

Controlul de calitate este, aadar, doar o parte din sistemul de asigurare a calitii totale. Acesta const dintr-o serie de n-proces controale i verificri finale privind produsul i componentele sale pentru a verifica dac acestea respect o serie de specificaii care au fost stabilite anterior pentru fiecare tip de element preparat. Din punct de vedere al standardelor de calitate si al reglementarilor europene in domeniul radiofarmaceuticelor, principalul ghid ce trebuie avut in vedere, nc din faza de cercetare a unui nou compus, este standardul GMP (good manufacturing practice, bun practic de fabricaie). Acesta urmrete: siguran si calitatea unui produs care se intenioneaz a fi injectat unor subieci umani; proceduri standard de operare (SOP), precum si procedurarea unor metode de laborator; In acest sens, pentru simplificare, toate etapele de sinteza si purificare trebuie gndite conform acestor standarde nc din faza de proiectare. De exemplu este indicat evitarea unor solveni organici de clasa 1 si alegerea unor solveni acceptai, iar n cazul utilizrii tehnicilor SPE (solid phase extraction) sau HPLC semipreparativa pentru purificarea compusului final, limitarea eluentului etanol la 10% n compusul final (limit acceptat pentru injectare). Metodele de laborator trebuie astfel planificate nct sa includ etape de trapare a solvenilor reziduali, diluare cu ser steril etc., astfel nct
1

soluiile finale sa corespund acestor standarde. Garantarea sterilitii sistemului de sintez este obligatorie. Sterilizarea prin nclzire este o garanie adiional, dac este posibila. Modalitile sterilizare standard sunt: ntre 20 min i 40 minute la 121C sau ntre 6 minute i 15 minute la 134 C. Substanele chimice este de dorit sa fie produse n sistem GMP (pentru asigurarea trasabilitii). Controlul de calitate este recomandat a se realiza prin HPLC; n plus se recomand efectuarea de teste privind osmolaritatea si pirogenitatea. GMP este o parte a Asigurrii Calitii si certifica faptul c produsele sunt n mod constant produse si controlate n conformitate cu standarde cerute de specificaia produsului precum i cu cerinele Autorizaiei de Punere pe Pia (APP). Prin GMP sunt vizate att producia ct si controlul. Controlul calitii este parte integranta a GMP care se ocup cu prelevarea probelor, testarea si analiza acestora pentru verificarea conformitii cu specificaiile acestora si cu organizarea, documentarea si eliberarea procedurilor care asigura ca testele necesare sunt relevante si aplicate efectiv si ca aceste materiale nu sunt eliberate la utilizare, nici ca produse eliberate pentru vnzare sau livrare pn ce calitatea lor nu a fost considerat satisfctoare. Unele dintre cerinele de baza ale controlului de calitate (QC) sunt: Existena facilitailor adecvate, instruirea personalului, proceduri aprobate pentru prelevarea probelor, inspectarea si testarea materiilor prime, materialelor de ambalare, controlul intermediarilor, a soluiilor stoc si produselor finite precum si, dup caz, a condiiilor de mediu pentru scopurile GMP; prelevarea probelor din materiile prime, materialele de ambalare, produsele intermediare, soluiilor stoc si produsele finale sunt luate de personal prin metode aprobate de QC. Metodele de testare sunt validate; nregistrrile sunt fcute conform specificaiilor;

Suficiente mostre de materii prime si produse finite trebuie reinute, pentru a

permite o viitoare examinare a produsului daca este necesar.1

Institutul National de C&D pentru Fizica si Inginerie Nucleara Horia Hulubei Departamentul de Fizica Teoretica

Capitolul II:Controlul calitii

Deoarece radiofarmaceuticele se administreaz la pacieni, este evident ca ele trebuie sa respecte o serie de calitate, ca orice medicament.Aceste norme obliga la un control care implica o serie de teste specifice care sa asigure puritatea fizico-chimic, identitatea produsului, eficacitatea radiotrasorului, puritatea biologica. Altfel spus, toate testele de calitate care trebuie aplecate unui medicament (neradioactiv) trebuie, deasemeni, aplicate si radiofarmaceuticelor, crora li se mai adauga teste in relaie cu proprietatea lor de a emite radiaii, si anume teste pentru puritatea radionuclidic si radiochimic. Testele cuprinse in controlul de calitate al radiofarmaceuticelor se pot mpri in doua categorii:teste fizico-chimice si teste biologice. Testele fizico-chimice implica punerea in evidenta si evaluarea cantitativa a impuritilor radiochimice, determinarea pH-ului, a caracterului ionic, osmolaritatea, aspectul fizic macroscopic, starea de agregare, prezenta unor particule coloidale. Testele biologice stabilesc sterilitatea, apirogenitatea si toxicitatea materialului . Multe dintre aceste teste efectuate de ctre firma productoare, nainte de expedierea moleculei vectoare sau a radioizotopului spre laboratoare de medicina nucleara.Unele, insa, se efectueaz in Laboratorul de Medicina nucleara, dup radiomarcarea moleculei vectoare si condiioneaz posibilitatea administrrii la pacient a moleculei radiomarcate preparate. Ca urmare, nainte de administrarea unui radiofarmaceutic pacientului acesta trebuie testat pentru: 1. puritatea chimic (detecia impuritilor chimic active, msurarea pH-ului); 2. puritatea radiochimic (detecia altor compui chimici secundari, marcai de radioizotopul utilizat pentru marcarea moleculei vectoare); 3. puritatea radioizotopic (detecia altor radioizotopi, rezultai secundar in preparat) 4. puritatea biologic, pirogenitatea (soluia nu trebuie sa conin ageni pirogeni, susceptibili sa produc febra).2

De la fizica si biofizica radiofarmaceuticelor la imagini functionale si moleculare Cipriana Stefanescu,Valeriu Rusu Tehnopress,Iasi-2007

Puritatea radiochimica
Puritate radiochimic (PCR) poate fi definit ca "proporia din totalul de radioactvitate n eantion, care este prezent ca specie dorit marcat radioactiv". Puritatea radiochimic este important n radiopharmacie, deoarece este forma radiochimic ce determin biodistribuia radiofarmaceuticului. Impuritile radiochimice vor avea modele diferite de biodistribuie, care pot agrava imaginea de diagnosticare obinuta. Msurarea PCR necesit utilizarea unei metode de a separa speciile chimice care pot fi prezente in prepararea radiofarmaceuticului.

Metoda cea mai frecvent utilizat este cromatografia, care separ diferitele specii pe thebasis de afinitile lor diferite pentru o varietate de faze solide sau lichide. Procedura cea mai simpl i larg efectuat utilizeaz cromatografia n strat subire (TLC), n care diveri compui pot fi separai, deoarece sunt diferit distribuite ntre un lichid (mobil) i o faz solid (staionare) de sprijin in cea mai mare mare compusa din gel de siliciu, n mod normal, legat de sticl -fibre de coli. (Instant cromatografie n strat subire sau ITLC). Cromatografie lichid (LC) este o alternativ din ce n ce mai populara pentru TLC n care componentele sunt separate de stabilirea unei coloane de eluie cu o faz mobil adecvata. LC poate fi efectuata utiliznd cromatografie lichid de nalt presiune (HPLC), un mod foarte eficient de separare, care necesit echipamente scumpe de specialitate, dar aceleai principii se aplic la Solid-faza de extracie (SPE), o versiune low-tech de cromatografie de lichide, care necesit foarte puin n mod de echipament.O alternativ pentru cromatografia este de a folosi electroforez n care componentele ntr-un produs radiofarmaceutic pot fi separate de mobiliti lor diferite ntr-un cmp electric.

Identitatea radionuclidului
Identitatea radionuclid este critic, deoarece n radiopharmacie radionuclidul utilizat determin doza de radiaii la pacient, biodistribuia de radiofarmaceutic, calitatea imaginilor obinute sau orice eficacitate din orice preparat terapeutic. Identitate radionuclidului poate fi stabilit fie prin msurarea a jumtate de via sau de energie a radiaiilor emise de proba. Msurarea de njumtire este consumatoare de timp, mai mult, dar necesit mai puin n modul de echipament de specialitate. Msurtorile de radioactivitate trebuie s fie luate pe o perioad suficient de timp. Se recomanda un timp in care radioactivitatea se dezintegreaz la aproximativ 1020% din nivelul su iniial i anume peste aproximativ trei jumti de via, cu toate acestea, uneori, o perioad mai scurt poate sa fie folosita n special pentru produsele radiofarmaceutice cu emisii de pozitroni. Logaritmul de radioactivitate se reprezint apoi n funcie de timp i constanta () de degradare, determinat de panta liniei drepte obinu. Timpul de njumtire poate fi apoi calculat din ecuaia T1 / 2 = ln (2) / i identitatea radionuclidului.

Msurarea de radiaii de energie se realizeaz cu ajutorul gama-raze de spectroscopie de la un detector de scintilaie interfeele la un analizor multicanal (MCA). Puritatea radionuclidului Puritatea radionuclidic este definita ca "raportul, exprimat ca procent, de radioactivitate a radionuclid dorit cu radioactivitatea total a sursei". Puritatea radionuclidic este important n radiopharmacie, deoarece orice impuritate radionuclidic poate crete doza de radiaii primit de pacient i poate degrada, de asemenea, calitatea oricrei proceduri de imagistic efectuate. Proba de radionuclid nu este 100%, pur i conine anumii contaminani care decurg din procesul de producie sau de degradare a radioizotopilor primari. n scopul de a controla efectele acestor contaminani la doza de radiaie primit de ctre pacient, limitele trebuie s fie stabilite la nivelurile maxime admise de contaminare. Aceste limite sunt definite n monografiile din Farmacopeea i variaz n funcie de cauz,radionuclid i caracteristicile fizice de dezintegrare de substane contaminante posibile.
5

Msurarea de puritatea radionuclidic n mod normal, este realizat cu ajutorul razelor gama spectroscopice. Msurarea puritii radionuclidice de technetiu-99m este deosebit de important, deoarece:

acesta este izotopul cel mai utilizat pe scar larg n medicina nuclear i impuritile n probele de 99m Tc pot influena n mod semnificativ doza de radiaii primita de populaia de pacieni;

radionuclidul este produs in-house de la un 99 Mo / 99m Tc generator i, prin urmare, este mai puin uor de a controla nivelul de impuriti dect la un site de fabricaie central.

Puritatea radionuclidic de sodiu [99m Tc] pertechnetat depinde de sursa de tata molibden-99: Cnd Mo-99 este produs prin bombardarea cu neutroni de Mo-98 nu mai mult de 0,1% din radioactivitatea total poate fi prezent n form de Mo-99 i nu mai mult de 0,01%, n form de orice impuritate radionuclidica. Cnd Mo-99 este produs din fisiunea uraniului puritatea radionuclidic este mult mai stricta:

Radionuclid Mo-99 I-131 Ru-103 Sr-89 Sr-90 emitori alfa

Limita 0,1% 0,005% 0,005% 0.00% 0.00% 0.00%

Impuritatea chimica:

Puritatea chimic este definit ca "parte din masa total, n prezent sub forma chimic declarata". Puritatea chimic este deosebit de important n radiopharmacie, din cauza nivelului la care trasorul chimic funcioneaz. Cu toate acestea, n practic, puritate chimic n sine nu este n mod normal, msurat, dar nivelul unor componente non-radioactive poate fi determinat. Dac niveluri semnificative de impuriti chimice sunt prezente, atunci este posibil ca acestea sa poat interveni n procesul de etichetare. Unii compui pot fi, de asemenea, toxici pentru pacient. Din acest motiv, toi reactivii folosii n formulele radiofarmaceutice sunt n mod normal, de cea mai mare puritate, care poate fi obinuti.

pH-ul

Controlul pH-ului a unui preparat radiofarmaceutic poate fi critic n cazul n care complexele sunt corecte pentru a fi obinute n timpul procedurii de etichetare n special n cazul unor marcatori, cum ar fi 99m Tc-DMSA i 99m Tc-HMPAO. pH-ul este n mod normal, meninut prin utilizarea de buffere adecvate n formulare. PH-ul unui preparat poate fi verificat cu ajutorul unui pH-metru calibrat n mod corespunztor, dar mai uor, utiliznd n band ngust hrtie de pH, care necesit doar un mic eantion.
7

Aluminiu :

Aluminiul este o impuritate care poate aprea potenial din coloanele de aluminiu prezente n 99 Mo / 99m Tc generatorului. Dei este rar pentru ca acest lucru s se ntmple, defalcarea structurii coloanei poate aprea, ocazional, ca rezultat, n niveluri semnificative de ioni
Al

+ + n generatorului eluai. Niveluri de ioni Al + + + mai mare de 10g pe

ml poate provoca floculare a celulelor sanguine marcat radioactiv i de agregare ale unor radiofarmaceutice coloidale cu o schimbare rezultat n biodistribuia a acestor ageni. Niveluri de de ioni Al + + + +de mai mult de 10g pe ml, poate fi msurat cu ajutorul unui test colorimetric sau folosind hrtie indicatoare speciale.

Sterilitatea
Cele mai multe radiofarmaceutice sunt administrate prin injectare intravenoas i pentru a se asigura c nu exist nicio posibilitate ca pacienii ar putea fi infectai de micro-organisme n pregtire, este esenial ca ele sa fie sterile n momentul de administrare.

Aceast cerin este valabil pentru toate produsele farmaceutice parenterale i procedura normal este de a efectua un test de sterilitate pharmacopee pe produs nainte ca acesta sa fie eliberat pentru utilizare. Cu toate acestea, deoarece un test de sterilitate dureaz dou sptmni i radiofarmaceutice multe au timp de activare de doar cteva ore de la preparare, aceasta n mod normal, nu este posibil pentru a face un test de sterilitate pe majoritatea produselor radiofarmaceutice nainte de a fi utilizate.
8

Cu toate acestea, acest lucru nu exonereaz radiopharmacia de la necesitatea de a asigura c pregtirile sunt ntr-adevr sterile.ncrederea n sterilitatea produsului poate fi realizat prin munc ntr-un mediu curat i n urma unei proceduri de operare definite, care include tehnici aseptice de transfer. Aceast ncredere poate fi aprobat prin efectuarea de teste de sterilitate retrospective, pe un eantion de radiofarmaceutice pregtite pentru a se asigura c acestea sunt ntr-adevr sterile. n Marea Britanie, se recomand testarea sterilitii eluatului generator care rmne ne-utilizat n primele zile i ultima de via a generatorului, precum si o varietate de tipuri diferite de produse preparate n radiopharmacie.

Pirogenitatea
Pirogenele sunt materiale care cauzeaz o cretere a temperaturii atunci cnd sunt administrate la animale sau oameni. Cel mai important tip de apirogen n domeniile farmaceutice este Endotoxina bacteriana - fragmente ale peretelui celular bacterian, care, dac sunt prezente ntr-un farmaceutic parenteral poate duce la un rspuns pirogen (frisoane, febr, cefalee, mialgie, stare general de ru), de ctre destinatar. Limita admis farmacopee, pentru administrarea de pirogene este de 5 UE (uniti de endotoxine) / kg / or (PhEur 3rd Edition 1997). Necesitatea de a controla pirogenele este cel mai important n volum parental de mari dimensiuni, cum ar fi lichide de perfuzie n cazul n care, dac sunt prezente chiar i n concentraii mici, o doza mare de endotoxina poate fi uor de administrat. Din moment ce produsele radiofarmaceutice sunt furnizate numai n cantiti mici, endotoxinele ar trebui s fie prezente n concentraii mari pentru provoca un rspuns. Pentru un adult normal, doza ar trebui s conin mai mult de 300 de UE s fie susceptibile de a provoca un rspuns pirogen. Toate produsele radiofarmaceutice liceniate i materialele folosite n pregtirea lor, ar fi n mod normal, testate pentru pirogene de ctre productor i testate apirogen, prin urmare, nu este necesar n mod normal n Radiopharmacie. Cu toate acestea, n cazul n care un produs radiofarmaceutic este dezvoltat i pregtit n cas, atunci testul apirogen poate fi necesar. Pirogene sunt mult mai eficiente atunci cnd sunt administrate intratecal. Limit acceptabil pentru IT injectabil este de numai 0,2 EU / kg / or. Toate injecii intratecale trebuie s fie testate pentru nivelurile de endotoxine.

Biodistribuia Testul final de calitate a unui radiofarmaceutic este biodistribuia.Adesea, primul indiciu c ceva ar putea fi greit cu un radiofarmaceutic este un model neateptat de biodistribuie constatat n timpul unei proceduri de imagistic. Exemplu arat absorbie de stomac pe un os de scanare din cauza nivelului ridicat de 99m Tcpertechnetat n pregtire.

Fluor-18 Micro-PET imaginea unui schelet obolan Digital autoradiograph de o felie de un creier de obolan

Studiile de biodistribuie la animale pot fi efectuate de ctre productorii de medicamente radiofarmaceuticelor liceniate, ca parte a procedurii lor de asigurare a calitii nainte de un lot de kituri, de exemplu, este eliberat de vnzare. Aceste studii pot identifica deficienele n calitatea unui produs, mai ales atunci cnd compoziia chimic exact a compusului este incert,
99m

Tc-metilen diphosphonate, de exemplu. Cu toate acestea, atunci cnd structura exact a

complexului este cunoscut, cum este cazul pentru produsele cel mai recent dezvoltate, atunci metode fizico-chimice de analiz va furniza n mod normal, toate informaiile necesare cu privire la calitatea de un nou lot de produs. Studii de biodistribuie la animale sunt aproape ntotdeauna efectuate n timpul dezvoltrii unui roman radiofarmaceutic nainte de a fi primul administrat la om. Aceste studii se pot face la animalele cu fenotipuri normale, dar din ce n ce mai mult se efectueaz la animalele transgenice care au anumite caracteristici, care reflect cele ale beneficiarilor finali umani. Studiile de biodistribuie pot fi efectuate de ctre imagistica animal pe dispozitive de imagistic unic de fotoni sau PET sau prin uciderea animalelor n anumite momente dup administrarea de radiofarmaceutice i de msurare a radioactivitii de distribuie n esuturi prin numrare sau de tehnici de autoradiographica.3

http://nucleus.iaea.org/HHW/Technologists/NuclearMedicineTech/Educationalresources/Radiopharmacy_for_NMT/QC_ Procedures_for_RP/index.html

10

Capitolul III:Materiale i procedee de control al calitii

Se taie hartia in 31 de benzi de 1cm x 6cm,se traseaza pe benzile de hrtie,linii la 1, 3 si 5 cm cm de la capatul perforat iar sectiunea rezultat se imparte in 2 sectiuni mai mici,numerotate cu 1 si si 2.Pentru a identifica fiecare band mai uor, o band de culoare a fost adugat la partea de sus a sus a fiecrui tip de hrtie cromatografic.Benzile de hartie sunt plasate in flacoane de 10ml peste care peste care se adauga 1ml de solvent.Se asteapta pn cnd se observ c frontul de solvent a migrat la migrat la linia de creion de sus.Benzile sunt uscate si se taie in opt segmente egale.Patru de deasupra liniei de mijloc si patru din dedesubtul acesteia.Fiecare segment se noteaza pentru o activitate.4

Rapid Miniaturized Chromatographic QualityControl Procedures for Tc-99m Radlopharmaceuticais A. Michael Zimmer and Dan G. Pavel University of Illinois Medical Ce,uer, Chicago, Illinois

11

Procedura Myoview (Cromatografie) Materiale necesare: Whatman 31 benzi Acetat de etil Foarfece Creion Numrarea tuburi / flacoane MCA sau SCA sau videoscaler cu scintilatie Procedur: 1. Se realizeaz procedura in urma careia se obtin cele dou seciuni S1 si S2. 2. Pentru a migra solventul pe band, il punem n acetat de etil. 3. Se las solventul s migreze la faa locului de cerneal / linie la partea de sus a benzii. 4. Scoatei banda de solvent. 5. Taiati banda la jumatate. 6. Contorizarea fiecare seciune a benzii. Tag% Tc-99m = (numrul de sus) / (numrul de jos + numrul de sus) x 100 USP puriti minime acceptate: Myoview 90%. USP puriti minime acceptate: MAA 90% HSA 90% DMSA 90% Sulf coloidal 92% Albumina coloidal 90%

Puritate chimic
Atunci cnd un generator de Mo-99/Tc-99m este eluat, este posibil s se elueaz ion de aluminiu, mpreun cu Tc-99m. Al XXIII-lea USP nu permite mai mult de 10 micrograme de ioni de aluminiu per mililitru de Tc-99m eluat de la un generator de fisiune produs. Aluminiu excesiv indic lipsa de stabilitate a coloanei generatorului. Echipament necesar:
12

Kit de testare disponibile n comer colorimetric pentru aluminiu Ion Procedur: 1. Punei o pictur de soluie standard de pe o band indicator prevzut n kit. Soluia standard conine 10 micrograme per mililitru de ioni de aluminiu. 2. De lucru n spatele unei staii de lucru ecranate, retrage aseptic o cantitate mic de eluat. Punei o pictur de eluat de pe banda de lng indicatorul de la faa locului, soluia standard. 3. Compara intensitatea culorii din cele dou locuri. 4. n cazul n care la faa locului eluatul este mult mai intens (mai inchisa) decat standard, de aluminiu este n exces. Eluat trebuie aruncat. 5. Urmai toate instruciunile suplimentare i kit de rezultate record ca fiind pozitive sau negative.

13

Cuprins
Capitolul I: Asigurarea calitii ................................................................................................................. 1 Capitolul II:Controlul calitii................................................................................................................... 3 2.1 Puritatea radiochimica .................................................................................................................. 4 2.2 Identitatea radionuclidului .......................................................................................................... 5 2.3 Puritatea radionuclidului .............................................................................................................. 5 2.4 Impuritatea chimica: ..................................................................................................................... 7 2.5 pH-ul ............................................................................................................................................... 7 2.6 Aluminiu : ...................................................................................................................................... 8 2.7 Sterilitatea....................................................................................................................................... 8 2.8 Pirogenitatea................................................................................................................................... 9 2.9 Biodistribuia ................................................................................................................................ 10 Capitolul III:Materiale i procedee de control al calitii ..................................................................... 11 3.1 Procedura Myoview (Cromatografie) ........................................................................................ 12 3.2 Puritate chimic ........................................................................................................................... 12

14

15