Universitatea de Medicin i Farmacie Carol Davila Bucureti Facultatea de Farmacie

Catedra: Tehnologie Farmaceutic i Biofarmacie Disciplina: Biofarmacie

Lucrri practice
Descriere: Teste de dizolvare sau de cedare in vitro - Principii generale

Sumar
1. Principii de dezvoltare a echipamentelor utilizate n studii de dizolvare

2. Politicile oficiale ale Farmacopeei Americane n dezvoltarea testelor de dizolvare (1976)

3. Caracteristici generale ale testelor de dizolvare

4. Aplicabilitatea testelor de dizolvare

5. Direcii de dezvoltare

6. Capitolele compendiale generale (USP36/NF31) i ghiduri referitoare la testele de dizolvare

7. Elementele constitutive ale echipamentelor de dizolvare

8. Procedura general de efectuare a testelor de dizolvare

1. Principii de dezvoltare a echipamentelor utilizate n studii de dizolvare1

1. Forma, dimensiunile i poziia fiecrui component standardizate.
2. Design-ul trebuie s fie relativ simplu, facilitnd utilizarea i adaptarea la diferite condiii de
testare, genernd rezultate reproductibile.
3. Vitezele de dizolvare obinute n condiii similare celor fiziologice trebui s se coreleze cu
procesele de asborbie in-vivo pentru care dizolvarea este etap limitant.
4. Aparatul trebuie s permit obinerea unei intensiti variabile, controlate a agitrii lichidului
(uniform, moderat, non-turbulent).
5. Trebuie s permit introducerea uoar a formei farmaceutice n mediul de dizolvare, dar i
meninerea complet imersat. Pe durata testului, comprimatul sau capsula trebuie s sufere eroziuni,
frecri sau loviri minime.
6. Sistemul de stocare a mediului de dizolvare trebuie s permit evitarea evaporrii,
termostatarea i, preferabil, inspectarea vizual a coninutului (dezintegrare, direcii de curgere a
fluidului etc.). Meninerea condiiilor sink se realizeaz prin volume mari sau prin funcionarea n flux,
cu nlocuirea permanent a fluidului din vas.
7. Prelevarea probelor pentru analiza cantitativ, manual sau automat, trebuie s se poat
realiza fr ntreruperea agitrii. Pentru prelevarea automat este necesar efectuarea filtrrii n flux.
8. Aparatul trebuie s permti evaluarea mai multor tipuri de forme farmaceutice (comprimate
dezintegrabile, non-dezintegrabile, dense, flotabile; capsule, pulberi fine etc.).

2. Politicile oficiale ale Farmacopeei Americane n dezvoltarea testelor de dizolvare (1976)2

(1) analiza datelor furnizate de industrie legate de dizolvarea in-vitro i biodisponibilitate, ca baz pentru
selectarea monografiilor i condiiilor de acceptare;
(2) stimularea utilizrii aparatelor USP I i II (descurajarea proliferrii inutile a aparatelor);
(3) analiza profilelor de dizolvare, n selecia punctelor de prelevare i a limitelor de acceptare;
(4) includerea n analiz a datelor de biodisponibilitate existente;

Pagina 1 din 9
 Universitatea de Medicin i Farmacie Carol Davila Bucureti Facultatea de Farmacie
Catedra: Tehnologie Farmaceutic i Biofarmacie Disciplina: Biofarmacie
Lucrri practice
Descriere: Teste de dizolvare sau de cedare in vitro - Principii generale

(5) n absena datelor de biodisponibilitate, standardele se stabileau pornind de la formulrile cu utilitate

terapeutic dovedit;
(6) n cazul adoptrii oficiale a unei monografii specifice incluznd test de dizolvare, acesta nlocuia
vechiul test de dezagregare (cu excepia utilizrii mediilor hidroalcoolice, pentru substanele greu
solubile n sisteme apoase).

3. Caracteristici generale ale testelor de dizolvare3

Pot avea caracter non-discriminatoriu sau supra-discriminatoriu n raport cu performanele in-
vivo.
Formulrile care asigur o dizolvare a substanei active 70% n cel mult 45 de minute nu
prezint probleme semnificative de bioechivalen.
Testele de dizolvare cu un singur punct de prelevare (proceduri de control al calitii pentru
formele cu cedare imediat) nu furnizeaz dovezi adecvate privind calitatea farmaceutic sau
biodisponibilitatea.
Un test de dizolvare este biorelevant dac permite obinerea de corelaii in-vitro in-vivo (IVIVC).
IVIVC sunt specifice fiecrui produs.

4. Aplicabilitatea testelor de dizolvare3

Testarea inter-arj
Instrument de selecie pentru etapa de cercetare-dezvoltare
Test de control al procesului tehnologic i de asigurarea calitii
Evaluarea necesitii studiilor de bioechivalen:
scalarea ntre doze (concentraii) diferite;
impactul variaiilor (SUPAC, Scale-Up Post Approval Changes);
similaritatea (echivalena) produselor multi-surs.
5. Direcii de dezvoltare
Teste care semnaleaz cu acuratee posibile probleme de performan in-vivo, generate prin
schimbri de compoziie sau proces (asigur calitatea adecvat i performane reproductibile).
Asigurarea unui caracter predictiv asupra perfomanelor in-vivo.
Reducerea experimentrii clinice inutile, accelerarea procesului de cercetare-dezvoltare i a
procesului de evaluare a variaiilor (SUPAC).

6. Capitolele compendiale generale (USP36/NF314) i ghiduri referitoare la testele de dizolvare

Capitolul <711> Dissolution (Dizolvare)
Este armonizat ntre cele trei compendii oficiale (United States Pharmacopeia, USP; European
Pharmacopeea, EP; Japanese Pharmacopeea, JP). Cele trei organizaii de reglementare au stabilit de
comun acord s nu introduc modificri unilaterale. USP are prevederi specifice, evideniate n

Pagina 2 din 9
 Universitatea de Medicin i Farmacie Carol Davila Bucureti Facultatea de Farmacie
Catedra: Tehnologie Farmaceutic i Biofarmacie Disciplina: Biofarmacie
Lucrri practice
Descriere: Teste de dizolvare sau de cedare in vitro - Principii generale

descrierea monografiilor generale, dar include i monografii dedicate (specifice unor anumite forme
farmaceutice, substane active i concentraii).

Capitolul <724> Drug release (Cedarea medicamentelor)

Capitolul <1092> The Dissolution Procedure: Development and Validation (Procedura de
dizolvare: Dezvoltare i Validare) - n curs de revizuire
Guidance for Industry. Dissolution Testing of Immediate Release Solid Oral Dosage Forms.
U.S. Department of Health and Human Services. Food and Drug Administration, Center for
Drug Evaluation and Research (CDER). August 1997.

O unitate de dozare este definit ca o tablet, o capsul sau o cantitate definit n cadrul
monografiilor specifice (ca mas sau volum, n funie de tipul formei farmaceutice).
Formele enterosolubile sau cu cedare ntrziat au monografii dedicate, generale i specifice.
Pentru capsulele gelatinoase tari sau moi, respectiv pentru comprimatele al cror film de
acoperire conine gelatin, testele de dizolvare pot fi efectuate conform monografiei generale. n cazul
n care rezultetele testului nu sunt conforme cu criteriile de acceptare, se recomand urmtoarele
abordri:
1. pentru mediu de dizolvare cu pH mai mic de 6.8 sau ap, se recomand adugarea de
pepsin purificat, cu o activitate final mai mic sau egal cu 750.000 UI / 1000 mL.
2. pentru mediu de dizolvare cu pH mai mare de 6.8, se recomand adugarea de pancreatin,
cu o activitate final mai mic sau egal cu 1750 uniti USP / 1000 mL.

Fenomenul de Cross-linking (mbtrnire, n cazul capsulelor gelatinoase)

Formarea de legturi covalente, implicnd gruparea amin din lisin - fenomen reversibil prin
aciunea in-vivo a proteazelor (ruperea legturilor peptidice).
Aldehide din compoziie (formaldehid, glutaraldehid, glioxal):
(ca atare, impuriti sau produi de degradare a unor excipieni):
stabilizani ai amidonului de porumb;
polietilenglicoli, prin auto-oxidare.
Expunere la:
umiditate mare;
lumin UV (n condiii de cldur sau umiditate mari).
Formarea de legturi mai slabe, implicnd grupri carboxilice din dou macromolecule i ioni
trivaleni (Fe3+ sau Al3+), prezeni n cadrul coloranilor sau ca impuriti n materiile prime.
Efect: dizolvarea lent in-vitro, prin meninerea particulelor de substan solid captive, fr
corelare cu performanele in-vivo.
Pentru corelare in-vitro in-vivo: adugarea de enzime.
Probleme specifice:

Pagina 3 din 9
 Universitatea de Medicin i Farmacie Carol Davila Bucureti Facultatea de Farmacie
Catedra: Tehnologie Farmaceutic i Biofarmacie Disciplina: Biofarmacie
Lucrri practice
Descriere: Teste de dizolvare sau de cedare in vitro - Principii generale

Necesitatea determinrii activitii specifice a pepsinei sau pancreatinei,

Dependena de pH a profilului de activitate:
Pepsin activitate: maxim la pH=2; redus la pH=4.5 (70% din maxim);
inactivare reversibil la pH=5-7.5; inactivare ireversibil la pH > 7.5;
Alternative pentru pH=5-6.8: papain sau bromelain.
Inactivarea enzimelor, n prezena unor tensioactivi:
Pre-tratare cu mediul fr tensioactivi, un interval scurt de timp (mai puin de
15 min), etap urmat de adugarea tensioactivilor.

7. Elementele constitutive ale echipamentelor de dizolvare

Condiii pentru materialele inerte utilizate pentru fabricarea elementelor:
s nu adsoarb sau s nu reacioneze cu componentele analizate,
s nu cedeze componente.
Vasele de dizolvare - sticl sau alt material inert, transparent.
Volum util (mL) 1000 2000 4000
Diametru interior (mm) 98 - 106 (100) 145 155 (150)
nlime interioar (mm) 160 - 210 280 - 300

Vas de sticl, Vas de sticl Vas de plexiglas, Vas de sticl,

1000 mL brun, 1000 mL 1000 mL 2000 mL5

Vasele sunt prevzute cu capace de dimensiuni adecvate, permind introducerea elementelor

de agitare i a unitilor de dozare, dar i prelevarea probelor (manual sau automat) sau
monitorizarea parametrilor (de exemplu, a temperaturii, uneori a pH-ului).
Motor - permite controlul direct i meninerea constant a vitezei de agitare (4 rpm).
Tij metalic, avnd fixat direct sau adaptat (printr-o tij intermediar nfiletat n tija principal)
un element specific n care se introduc unitile de dozare, la nceputul testului de dizolvare

Pagina 4 din 9
 Universitatea de Medicin i Farmacie Carol Davila Bucureti Facultatea de Farmacie
Catedra: Tehnologie Farmaceutic i Biofarmacie Disciplina: Biofarmacie
Lucrri practice
Descriere: Teste de dizolvare sau de cedare in vitro - Principii generale

Coule - aparatul 1 USP / palet - aparatul 2 USP (oel inox AISI 316).
Acestea trebuie s fie perfect uscate iniial, pentru a preveni iniierea unor procese de
dezintegrare sau dezagregare nainte de imersarea complet n fluid).
Aparat 1 USP5

Coule 10 mesh Coule 20 mesh Coule 40 mesh Coule 150 mesh Coule Palmieri

Aparat 2 USP5

Palet acoperit cu PTFE Palet din PTFE Palet din oel inox

Vase confecionate din material plastic

Avantaje
fabricate prin turnare variabilitate redus a dimensiunilor, reproductibilitatea formei;
manipulare uoar i sigur;
cost redus.

Pagina 5 din 9
 Universitatea de Medicin i Farmacie Carol Davila Bucureti Facultatea de Farmacie
Catedra: Tehnologie Farmaceutic i Biofarmacie Disciplina: Biofarmacie
Lucrri practice
Descriere: Teste de dizolvare sau de cedare in vitro - Principii generale

Dezavantaje
transfer termic lent (nclzire mai lent; uneori temperatura setat este mai mare dect cea de
lucru);
rezisten redus la uzur (nlocuire mai frecvent; zgrieturi - captarea particulelor sau alterri
hidrodinamice);
deformare prin utilizare ndelungat (verificare frecvent);
scderea transparenei n timp.

Condiii generale de reglare a aparatelor 1 i 2 USP

Deviaiile admise ntre axul tijei i cel al vasului sunt de maxim 2 mm, n orice punct, fr
vibraii semnificative care s determine modificri ale proceselor de dizolvare.
Distana dintre captul inferior al elementului specific (centrul couleului, respectiv al tijei) i
fundul vasului este reglat la 252 mm.
Pentru aparatul 2 USP se accept construcia din 2 segmente detaabile, respectndu-se
condiiile menionate anterior.
Elementele sunt fabricate din oel inox acoperit sau nu cu un material inert (de exemplu
tetrafluoroetilen).
Pentru formele farmaceutice flotabile, se permite utilizarea unor spire din material inert (sinker).
JP descrie un tip special de sinker cilindric.

8. Procedura general de efectuare a testelor de dizolvare

8.1. Aparatele 1 i 2 USP - forme cu cedare imediat

Parametrii de operare:
Mediu
Aparat / vitez de agitare
Design-ul studiului (prelevarea probelor)
Interpretarea rezultatelor. Criterii de acceptare

Mediu
Este indicat n monografiile specifice sau este selectat un mediu adecvat (natura formei
farmaceutice i a substanei active, doza etc.).
Volumul indicat trebuie msurat la 20 - 25C.
Dac mediul este un sistem tampon, valoarea pH-ului trebuie msurat i ajustat la valoarea
int 0.05 uniti.
Mediul trebuie degazat n prealabil, n special n cazul n care bulele de aer generate n cadrul
unitilor de testare influenaz semnificativ datele experimentale. O metod de degazare
recomandat de USP prevede nclzirea la 41C sub uoar agitare. Imediat dup nclzire,

Pagina 6 din 9
 Universitatea de Medicin i Farmacie Carol Davila Bucureti Facultatea de Farmacie
Catedra: Tehnologie Farmaceutic i Biofarmacie Disciplina: Biofarmacie
Lucrri practice
Descriere: Teste de dizolvare sau de cedare in vitro - Principii generale

mediul se filtreaz sub vid prin membrane filtrante cu diametrul meiu al porilor de 0.45 m, sub
agitare intens. Agitarea continu timp de 5 minute, dup terminarea filtrri. Sunt acceptate i
metode alternative validate de degazare.
Ulterior volumul indicat sau selectat de mediu se msoar i se aduce n fiecare vas,
ateptndu-se nclzirea la 370.5C fr agitare.

Prelevarea probelor (punctul A din figur)5

Se realizeaz prin poziionarea unor tije adaptate la jumtatea distanei dintre captul superior
al couleului sau paletei i nivelul mediului din vas, la cel puin 1 cm de peretele vasului.

Punct de prelevare

Vas de disolvare

Coule (USP2)
Palet (USP1)

Forma farmaceutic

nlocuirea mediului prelevat

Dup prelevare, se realizeaz nlocuirea cu un volum egal de mediu proaspt (blank).
Cnd volumul colectat pe toat durata testului nu este semnificativ, raportat la volumul iniial
din vas, se poate renuna la procedura de nlocuire.
n ambele cazuri, calculele efectuate dup analiza probelor va ine cont de impactul procedurilor
de prelevare (includerea cantitilor de substan activ nlturate prin prelevare, respectiv
scderea consecutiv de volum).
Probele sunt prelevate la intervale de timp prestabilite, cu o toleran de 2min.

Filtrarea
Imediat dup prelevare, probele sunt filtrate prin filtre adecvate (respectnd condiiile
specificate pentru toate elementele care vin n contact cu coninutul vasului: lipsa reactivitii
sau a fenomenelor de adsorbie, fr cedare unor componente care s interfere cu analiza
probelor prelevate).

Pagina 7 din 9
 Universitatea de Medicin i Farmacie Carol Davila Bucureti Facultatea de Farmacie
Catedra: Tehnologie Farmaceutic i Biofarmacie Disciplina: Biofarmacie
Lucrri practice
Descriere: Teste de dizolvare sau de cedare in vitro - Principii generale

Uneori, filtrarea se realizeaz prin filtre tip canul, fixate la captul inferior al tijelor de prelevare.
n alte cazuri, filtrarea nu este considerat necesar.

8.2. Aparatele 1 i 2 USP - forme cu cedare prelungit

Procedurile sunt similare celor descrise anterior pentru formele cu cedare imediat.
Testele includ minim 3 probe, la intervale de timp de ordinul orelor.

8.3. Aparatele 1 i 2 USP - forme cu cedare ntrziat

Sunt descrise dou metode, fiecare incluznd dou stadii de testare: stadiul acid (acid clorhidric
0.1 N) i stadiul tampon (pH=6.8 0.05).

Metoda A6
Stadiul acid: durata 2 ore; mediu: 750 mL acid clorhidric 0.1 N; temperatura: 370.5C; se
preleveaz o singur prob la finalul celor 2 ore.
Stadiul tampon: durata 45 min sau conform monografiei specifice; mediu: 250 ml fosfat trisodic
0.2 M, pre-echilibrat la 370.5C i adugat la mediul utilizat n stadiul acid; mediul rezultat:
1000 mL tampon fosfat pH=6.8 0.05 (prin ajustare cu acid clorhidric 2 N sau hidroxid de sodiu
2 N; operaiile de adugare i ajustare se realizeaz n maxim 5 min).

Metoda B
Stadiul acid: durata 2 ore; mediu: 1000 mL acid clorhidric 0.1 N; temperatura: 370.5C; se
preleveaz o singur prob la finalul celor 2 ore.
Stadiul tampon: durata 45 min sau conform monografiei specifice; mediu: 1000 mL tampin
fosfat pH=6.8 0.05 (prin amestecare de acid clorhidric 0.1 N i fosfat trisodic 0.2 M, n raport
3:1; pH se ajusteaz cu acid clorhidric 2 N sau hidroxid de sodiu 2 N); mediul se adaug dup
drenarea complet a mediului utilizat n stadiul acid; o metod alternativ este nlocuirea
vaselor cu un alt set coninnd mediul prenclzit i transferul formei farmaceutice.

Pagina 8 din 9
 Universitatea de Medicin i Farmacie Carol Davila Bucureti Facultatea de Farmacie
Catedra: Tehnologie Farmaceutic i Biofarmacie Disciplina: Biofarmacie
Lucrri practice
Descriere: Teste de dizolvare sau de cedare in vitro - Principii generale

8.4. Interpretarea rezultatelor. Stadii de testare i criterii de acceptare

Exemplu pentru formele farmaceutice cu cedare imediat

Interpretarea se realizeaz prin intermediul limitelor Q indicate n monografiile specifice, pentru

valoarea fraciilor dizolvate (prin raportare la coninutul declarat).
Fi/n media fraciilor dizolvate pentru cele n uniti de dozare testate.

Numr de uniti de
Stadiu Criterii de acceptare pentru fracia dizolvat (Fi)
dozare testate (n)
Fi (Q + 5%);
S1 6
i=1 .. n; n = 6.
Fi/n Q,
S2 6 Fi Q - 15%;
i=1 .. n; n = 12 (S1 + S2).
Fi/n Q,
Fi < Q - 15% pentru cel mult 2 uniti,
S3 12
Fi Q - 25%;
i=1 .. n; n = 24 (S1 + S2 + S3).

n absena unor indicaii specifice referitoare la valorile individuale, este permis analiza
fraciilor cumulate - pooled samples (reunirea probelor prelevate individual i determinarea
analitic a unui coninut mediu de substan activ).
Numr de uniti de Criterii de acceptare pentru fracia dizolvat n
Stadiu
dozare testate (n) probele cumulate (FC)
FC (Q + 10%);
S1 6
n=6.
FC (Q + 5%);
S2 6
n = 12 (S1 + S2).
FC Q;
S3 12
n = 24 (S1 + S2 + S3).

Bibliografie
1. Pernarowski M, Woo W, Searl RO. Continuous flow apparatus for the determination of the dissolution characteristics
of tablets and capsules. J Pharm Sci. 1968;57(8):1419-21.
2. Cohen JL, Hubert BB, Leeson LJ, Rhodes CT, Robinson JR, Roseman TJ, Shefter E. The development of USP
dissolution and drug release standards. Pharm Res. 1990;7(10):983-7.
3. Yu LX, Amidon GL, Polli JE, Zhao H, Mehta MU, Conner DP, Shah VP, Lesko LJ, Chen ML, Lee VH, Hussain AS.
Biopharmaceutics classification system: the scientific basis for biowaiver extensions. Pharm Res. 2002;19(7):921-5.
4. USP36-NF31, 2013. United States Pharmacopoeia 36 - National Formulary 32, 2013, United States Pharmacopeial
Convention, Rockville, MD 20852.
5. Labhut.com Tablet Dissolution Accesories, in association with QLA Qulaity Lab Accesories, SMI-LabHut Ltd, UK,
with permission.
6. Erweka Dissolution Catalogue, 2012.

Pagina 9 din 9