Genele

1. Definiia genei
Gena poate fi definit ca un segment din macromolecula de ADN sau ARN viral, format dintr-o anumit secven de nucleotide care conine o cantitate de informaie genetic necesar pentru sinteza unui lan polipeptidic sau a altor biomolecule (ARNr, ARNt etc. . Dac !n privina funciei, gena acioneaz ca un !ntreg, deci poate fi considerat unitate de funcie, nu acela"i lucru se poate spune despre mutaie "i recombinare. #utaii ale aceleia"i gene pot s apar prin sc$imbarea oricreia din cele c%teva mii de nucleotide care o alctuiesc. Recombinrile pot s apar cu frecven mai redus, c$iar !n interiorul genei (crossing-over intragenic . &n acest fel se clarific "i terminologia introdus !n anul '()* de ctre +enzer, care a propus termenii de, muton, recon, cistron. Mutonul este unitatea de mutaie a genei, corespunz%nd la o perec$e de nucleotide din macromolecula de ADN, care poate suferi mutaii independente, numite mutaii punctiforme. Reconul este unitatea de recombinare a genei corespunz%nd cu o perec$e de nucleotide din macromolecula de ADN, care poate fi separat prin crossing-over. Cistronul reprezint cea mai mic unitate a materialului genetic, corespunz%nd unui segment din macromolecula de ADN sau ARN viral, capabil s funcioneze ca un !ntreg, determin%nd sinteza unui lan polipeptidic, segment identificat cu a-utorul testului cis-trans. . alta definiie a genei este, o colecie liniar de secvene dezo/iribonucleotidice (sau ribonucleotidice !n cazul ribovirusurilor transcrise !ntr-o singur macromolecul de ARN "i realiz%nd !mpreun cu elementele de control adiacente ambelor capete, o unitate structural "i funcional. 0e admite astzi c la mamifere o celul produce !ntre 12.222 3 ')2.222 de proteine diferite, ceea ce !nseamn c ADN codific circa 1 3 '' milioane de polipeptide. 4entru acest numr foarte mare de polipeptide, este activ doar o foarte mic parte din ADN genomic ('15 , marea mas a ADN genomic neav%nd (cel puin at%t c%t se cunoa"te !n prezent nici o funcie genetic definit. Locus-ul (plural loci reprezint locul ocupat de o gen pe $arta fizic a cromosomului.

2. Testul cis-trans
4entru a recunoa"te dac dou mutaii localizate diferit afecteaz aceea"i gen, se utilizeaz testul complementaritii, denumit "i testul cis-trans. Testul cis-trans este deci o metod genetic folosit pentru determinarea alelismului funcional, adic pentru a afla dac dou mutaii recesive localizate apropiat afecteaz aceea"i gen sau gene diferite. Acest test se bazeaz pe faptul c un organism care are dou mutaii diferite !n poziie trans pe doi cromosomi diferii, manifest un fenotip mutant dac ambele mutaii afecteaz aceea"i gen, sau are fenotip normal dac mutaiile afecteaz gene diferite (6igura ' . Dac cele dou mutaii !n poziie trans afecteaz aceea"i gen, atunci ambii cromosomi vor determina sinteza unor lanuri polipeptidice mutante, rezult%nd un fenotip mutant. Dimpotriv, dac cele dou mutaii afecteaz dou gene diferite, atunci cei doi cromosomi vor deine c%te una din gene !n stare de a sintetiza lanul polipeptidic normal, astfel c, celula va deine ambele lanuri polipeptidice normale "i deci fenotipul normal.

6igura ' +azele teoretice ale testului cis-trans

3. Efectul e po!iie
. gen este responsabil de conferirea unei anumite caracteristici unui organism. Aciunea ei poate fi influenat at%t de factori e/terni c%t "i de mediul genotipic (celelalte gene din genom . &n acest sens aciunea respectivei gene poate fi dependent de poziia ei !n ansamblul de gene "i !n special de poziia ei fa de genele vecine. Acest fenomen de dependen a unei gene fa de genele vecine poart numele de efect e po!iie. 7fectul de poziie apare evident atunci c%nd gena respectiv este scoas din ansamblul normal de gene "i este pus !n alt grup de gene. 7/perimental, acest lucru se poate realiza printr-o mutaie cromosomial, !n care un segment dintr-un cromosom este introdus !n alt cromosom. &n acest caz, gena din zona secionat (dup realipirea segmentelor cromosomiale rmase capt o alt gen vecin (anomalie care !i poate influena primei gene modul de aciune, aceasta manifest%ndu-se printr-un nou efect. Dovada c noul efect nu se datoreaz unei a treia gene const !n faptul c prin refacerea iniial a cromosomului (prin realipirea segmentului tiat se restabile"te secvena iniial a lanului de gene, respectivul efect dispr%nd "i fiind !nlocuit de efectul iniial (cel de dinaintea secionrii cromosomului . &n acest caz, este prezentat un efect de poziie care a disprut o dat cu !ntoarcerea genei !n ansamblul iniial de gene.
2

Acest efect de poziie apare foarte clar atunci c%nd gene dintr-un segment eucromatic a-ung !n vecintatea $eterocromatinei. &n acest caz pot apare inactivri ale unei singure gene sau ale mai multor gene. 8otu"i, trebuie menionat c nu !ntotdeauna o modificare de poziie a unei gene atrage dup sine un efect evident. 7fectul de poziie depinde de regul de intensitatea de manifestare a aciunii respectivei gene (e/presivitate . 9n aspect al efectului de poziie !l reprezint efectul cis-trans, evideniat "i e/perimentat la eucariote.

". E#presi$itatea %i penetrana

&n general, !n condiii normale, genele imprim organismelor manifestri caracteristice, stabile. Respectivele caracteristici pot fi u"or identificate. 8otu"i, numeroase gene imprim organismului purttor manifestri labile. :abilitatea respectiv a caracteristicilor genice se manifest !n diferite grade de intensitate, labilitatea de manifestare put%nd merge p%n la dispariia evident a aciunii respectivei gene, de"i gena este prezent. &n asemenea situaii, gena respectiv nu mai este capabil s se e/prime. :abilitatea de manifestare a aciunii unei gene poate fi caracterizat prin e/presivitate (la un individ "i penetran (la un numr de indivizi . E#presi$itatea unei gene reprezint intensitatea de manifestare a caracteristicii pe care respectiva gen o confer organismului. #anifestarea unei caracteristici !n acela"i organism !n diferite organe variaz foarte mult. 7ste posibil ca !ntr-un anumit organ, aciunea genei respective s nu poat fi deloc recunoscut, !n timp ce, !n alte organe, e/primarea aceleia"i gene s fie at%t de pregnant, !nc%t s poat fi considerat gre"it drept mutant. &n acest caz, respectiva gen prezint o e/presivitate variabil. ;ariaiile mici de intensitate ale unei caracteristici sunt foarte frecvente. 7/presivitatea unei gene poate fi influenat de factori e/terni, de mediul genotipic (prezena !n genom a altor gene specifice sau de evoluia ontogenetic. 0pre deosebire de penetran, e/presivitatea este evaluat la un singur individ. &enetrana unei gene reprezint frecvena manifestrii respectivei caracteristici controlate de gen !n cursul unei linii celulare sau a unei clone. 4enetrana variaz mai rar dec%t e/presivitatea. 4entru aprecierea penetranei sunt necesari mai muli indivizi cu acela"i genotip. 4enetrana se e/prim !n procente. . penetran de *25 !nseamn c *25 dintre indivizi sunt $omozigoi pentru o anumit gen a crei aciune apare evident. 4entru restul de 125 dintre indivizi, gena nu se manifest. :a ace"ti 125 din indivizi e/ist din punct de vedere fenotipic forma normal de tip slbatic (non-mutant , !ns din punct de vedere genotipic a aprut o mutaie care poate fi evideniat doar indirect. 4enetrana genelor mutante poate fi influenat at%t de factorii de mediu e/terni, c%t "i de factorii genetici (alte gene . :a plante, fenomenul de penetran s-a dovedit a fi dependent de clim. 0-a constatat c fenomenul respectiv este mai frecvent !n zona temperat "i absent la anumite specii din zona subtropical "i tropical.

'. (tructura genei

Gena este un segment din macromolecula de ADN, segment care este transcris (copiat !ntr-o macromolecul de ARN funcional !n procesul de transcripie. &n consecin, genele mai pot fi definite "i ca <uniti de transcripie=. :a !nceputul "i la sf%r"itul genei se gsesc elementele structurale care regleaz e/presia genic. #ai precis, aceste elemente fac ca gena s fie transcris la timpul potrivit, !n tipul de celul adecvat "i !n cantitatea necesar. De e/emplu, seminele plantelor cultivate acumuleaz cantiti mari de proteine de rezerv. &n sm%na de soia, proporia proteinelor este de >25, -umtate din cantitatea total fiind reprezentat de glicinin "i conglicinin. 6iecare dintre aceste dou proteine este codificat de o mic familie de gene, care sunt e/primate foarte intens !n timpul dezvoltrii seminelor. &n alte organe, aceste dou proteine nu se gsesc, deoarece genele !n cauz sunt inactive.
3

Genele eucariotelor superioare sunt formate din '22.222 3 ?.222.222 de nucleotide, de"i pentru sinteza unei polipeptide de dimensiuni medii sunt necesare doar '.222 de nucleotide. &nc din anul '(** s-a demonstrat c genele pot avea o structur) iscontinu), prin care se !nelege c, gena este alctuit din segmente informaionale, care sunt transcrise !n ARN mesager, segmente care se numesc e#oni, "i segmente noninformaionale, denumite introni. @ntronii sunt eliminai !n procesul transcripiei. #odelul e/perimental folosit, a fost un adenovirus responsabil de infecii ale cilor aeriene respiratorii, al crui genotip prezint mari asemnri cu cel al organismelor superioare. Aproape imediat dup aceast constatare, s-a stabilit c genele cu structur discontinu (mozaicat, !ntrerupt sunt o prezen obi"nuit la organismele superioare, inclusiv la om (6igura ? . 0tructura mozaicat a genelor a mai fost evideniat "i la virusurile celulelor eucariote, la Archaebacterii, !n ADN-ul mitocondrial "i cloroplastic. :a eubacterii s-au descris numai gene de tip continuu, care nu prezint alternan de segmente e/onice "i intronice, altfel spus genele continue sunt alctuite numai din e/oni. :a eucariotele inferioare, genele sunt de asemenea continue (6igura ? . 0e pare c intronii au fost prezeni !n genele ancestrale, dar au fost pierdui !n cursul evoluiei de ctre organismele cu ciclu de dezvoltare foarte rapid (eubacterii, dro-dii sub aciunea unor presiuni de selecie. 4oziia intronilor !n unele gene la eucariotele superioare se admite a fi vec$e de cel puin un miliard de ani. 0e consider c acest mecanism comun de segmentare a genelor a aprut !nainte de diferenierea regnului animal "i anume la fungi "i la plante.

6igura ? Aomparaie !ntre gena bacterian "i gena eucariotelor superioare

0ecvenele care nu codific (intronii - specifice ca lungime "i numr fiecrei gene 3 sunt "i ele transcrise !n ARN mesager. Din aceast cauz, e/presia genei !nseamn de fapt, sinteza unui transcript primar, care va fi modificat !nainte de a a-unge !n citoplasm. 9na dintre modificrile care au loc !n nucleu const !n eliminarea secvenelor care nu codific (intronii "i !n asamblarea secvenelor care codific (e/onii proces ec$ivalent cu <maturarea ARN=. :ungimea e/onilor este mai mic dec%t cea a intronilor. &n medie, e/onii genelor umane sunt formai din ')2 perec$i de nucleotide (perec$i de baze, notate pb , !n timp ce intronii au dimensiuni cuprinse !ntre c%teva sute "i c%teva mii de pb. 7/ist "i gene ai cror e/oni conin doar B 3 * pb (gene codificatoare ale unor proteine implicate !n contracia muscular . Numrul e/onilor unei gene variaz !n limite largi de la ? la c%teva sute, cu o medie de C. &ntruc%t genele !ncep "i se termin cu e/oni, numrul acestora !l dep"e"te cu o unitate pe cel al intronilor. &n genomul uman, ca "i al altor eucariote superioare, e/ist "i gene de tip continuu, cum sunt genele interferonilor "i ale $istonelor. Genele fr introni de la eucariotele superioare reprezint mai puin de B5 din structura genomului. &n ce prive"te informaia coninut !n e/oni, s-a stabilit c aceasta este tradus !n subuniti polipeptidice distincte, numite mo ule, capabile s-"i asume conformaii spaiale care le confer capaciti funcionale specifice. #odulele corespund diferitelor domenii ale proteinelor din care fac parte, de legare la substrat, de cuplare cu cofactori, de polimerizare etc. @ntronilor li s-a atribuit iniial doar un rol pasiv, acela de spaiatori ai e/onilor. 9lterior s-a stabilit c intronii unora dintre genele eucariotelor pot !ndeplini funcii comple/e,
4

codific biopolimeri (ARN "i proteine D realizeaz autoclivarea ARND particip la reglarea e/presiei genelor.

De e/emplu, gena uman UHG (U22 host gene) este alctuit din '' e/oni ale cror secvene nucleotidice nu sunt traduse !n proteine. &n sc$imb, C din cei '2 introni ai genei codific fiecare c%te o molecul de ARN mic nucleolar ( small nucleolar RNA, snoRNA , esenial implicat !n procesarea intranucleolar a ARN ribosomal 'C0. A"adar, UHG este o gen care !ncalc total regula potrivit creia informaia specific, necesar sintezei de biopolimeri funcionali, se afl !nscris e/clusiv !n e/oni. 0unt "i e/emple de !nclcare parial a acestei reguli, cum este gena uman NF1 (neurofibromatosis 1 ale crei mutaii se fac rspunztoare de producerea bolii Von Recklinghausen (neurofibromatoza de tip ' . Aomple/itatea funciilor !ndeplinite de introni este ilustrat "i de alte categorii de observaii, unii introni sunt dotai cu capacitatea de a-"i efactua propria ablaie (eliminare D mutaiile punctiforme ale unuia dintre intronii protooncogenei ras se soldeaz cu o cre"tere de apro/imativ '2 ori a activitii transcripionale "i cu implicita dob%ndire de ctre ras a potenialului oncogenic. &n conte/tul actual, diferenierea e/onilor de introni !n funcie de coninutul informaional nu mai poate fi operant, e/onii "i intronii se definesc ca secvene ale genei prezente !n transcriptul primar "i pe care matisarea le separ fizic. Aare dintre aceste secvene vor fi asamblate !n ARN matur "i traduse !n lanuri polipeptidice reprezint o decizie ale crei cauze sunt neelucidate. Asociate cu unitile transcrise (genele sunt secvenele implicate !n iniierea, terminarea "i reglarea transcripiei. (ec$enele e iniiere "i terminare a transcripiei sunt considerate pri ale genei. 4e o lungime de apro/imativ '222 de nucleotide, !naintea locului de iniiere a transcripiei, se afl secvena reglatoare numit promotor. 6iecare gen are propriul ei promotor "i un comportament independent. 4romotorul unei gene poate fi !mprit !n dou poriuni, promotorul minimal, alctuit din apro/imativ '22 de nucleotide, care constituie secvena minim de ADN ce permite genei s se e/primeD la nivelul acestui promotor se asambleaz comple/ul de iniiere a transcripiei reprezentat de factori de transcripie "i enzimeD elementele reglatoare, care controleaz e/presia promotorului minimal prin intermediul unor proteine a cror aciune const !n sporirea ratei de formare a comple/elor de iniiere a transcripiei "i !n final, a cantitii de ARN mesager sintetizate. 7lementele reglatoare au o relaie fi/ cu gena pe care o controleaz. 7le confer genei respective fie o e/presie specific !n funcie de esut sau organ, fie o e/presie inductibil prin rnire, lumin, stres termic, sau prin atacul unui patogen (!n cazul plantelor . 7/ist de asemenea, promotori constitutivi, care permit e/primarea genei !n toate esuturile organismului. De e/emplu, elementele reglatoare ale genelor care rspund la lumin dein o secven intern specific, AAAG8G. 7lementele reglatoare ale genelor a cror transcripie este indus de "ocurile termice posed <modulul "oc termic=, cu secvena GAAnn88AnnGAAnn88A. 0e poate considera deci c promotorul genei nu este un simplu <!ntreruptor=, care are numai dou poziii, desc$is "i !nc$is. 7ste o structur comple/, cu numeroase componente diferite, sau module, care funcioneaz ca senzori, ce-i permit s rspund la semnalele venite de la alte gene sau din mediu. Aceste semnale indic unde "i c%nd s declan"eze activitatea genei, cu ce intensitate "i pentru c%t timp. &n anumite circumstane, promotorul poate fi in$ibat, rm%n%nd tot timpul <!nc$is=. Au fost identificate elemente reglatoare care controleaz transcripia genelor spaial, temporal sau cantitativ, !n organele vegetative ale plantelor, !n flori sau !n fructe. &n concluzie, structura unei gene de tip eucariot include, un promotor, o secven codificatoare "i o secven terminal (6igura 1 .
5

6igura 1 0tructura unei gene de tip eucariot

*. +uncionalitatea genei
Gena este responsabil de conferirea unei anumite caracteristici unui organism. :a realizarea acestei caracteristici, alturi de respectiva gen contribuie "i mediul genotipic (celelalte gene din genom "i !n primul r%nd genele !nvecinate din acela"i cromosom . &ntregul set de gene dintr-un organism constituie un fel de climat sau fundal genetic de natur s modifice "i s influeneze efectele oricrei gene !n spe. #utaia genic reprezint apariia unei noi caracteristici datorit proprietii de mutabilitate a genei, proprietate de baz a acesteia. @nvestigaiile e/perimentale de natur s descifreze mecanismul molecular al e/primrii genelor au demonstrat c !ntr-o prim etap are loc copierea !n molecule de ARN a ambelor tipuri de secvene genice (e/oni "i introni . Rezult o macromolecul de ,R- premesager sau .eterogen. &nainte de a fi e/portat !n citoplasm, ARN premesager este supus matis)rii, adic procesului care realizeaz separarea fizic a e/onilor de introni "i eliminarea consecutiv a secvenelor intronice. &n final rezult un ,R- mesager matur (6igura 1 . #atisarea e/onilor se poate realiza pe mai multe ci, #atisare constitutiv, c%nd e/onii se sudeaz !ntre ei !n ordinea succedrii lor !n transcriptele primare. #atisare alternativ, fiind una dintre cele mai utilizate ci de care dispun celulele pentru a-"i diversifica producia de proteine. #atisarea alternativ presupune integrarea !n ARNm matur doar a anumitor e/oni, cu pstrarea ordinii !n care ace"tia se succed !n interiorul genelor (6igura 1 .

6igura 1 6ormarea ARNm matur la eucariote (transcrierea unei gene ADN

Amestecarea e/onilor (exon shuffling este o modalitate de procesare a transcriptelor primare la care celulele recurg foarte rar. Amestecarea e/onilor const !n -u/tapunerea e/onilor din gen, !ntr-o ordine diferit (6igura > . 8ransmatisarea este !nt%lnit la tripanosome (protozoare parazite oferind acestora marea variabilitate antigenic. 0ubstraturile transmatisrii sunt reprezentate de transcriptele primare ale tuturor genelor care codific proteine "i de o secven ARN specificat de o gen separat. 9n domeniu al acestei secvene este adugat prin transmatisare la captul )E al fiecrui transcript primar. Date fiind pe de o parte, e/istena mai multor situsuri intronice acceptoare "i pe de alt parte, caracterul aleatoriu al alegerii acestora, !ntre produ"ii transcripiei unei gene vor e/ista anumite diferene. Diferenele !n structura proteinelor de suprafa, se fac rspunztoare de marea variabilitate antigenic a tripanosomelor "i implicit, de e"ecul organismelor parazitate de a se apra prin elaborare de anticorpi specifici.

6igura > #atisarea alternativ "i amestecarea e/onilor

/. Categorii e gene
:u%nd !n considerare produ"ii de e/primare genic, genele aparin%nd unui anumit genom, pot fi clasificate !n trei categorii, gene codificatoare de proteine, de ARN ribosomal "i gene codificatoare de ARN transportor. '. Gene co ificatoare e proteine :a r%ndul lor, genele codificatoare de proteine sunt de trei feluri, !n funcie de numrul de copiiFgenom "i anume, a. Gene cu copie unic, - sinteza ma-oritii proteinelor este codificat de gene cu o singur copieFgenom. :a "oareci, s-a evideniat c *25 din ADN, este reprezentat de secvene unice de baze. 0-a demonstrat c o gen unic, poate fi matria sintezei a '2 > macromolecule de ARNm, iar fiecare macromolecul de ARNm, poate fi matria sintezei a '2 ) proteine. Deci, o singur gen este suficient pentru sinteza a '2( molecule de proteine. b. Gene duplicate Aercetrile efectuate la nivelul genomului diferitelor organisme, au artat c se produc foarte frecvent duplicaii de gene care, prin presiune selectiv, pot fi ulterior stabilizate. c. Gene cu numr !nalt de copii Aceste gene e/ist !ntr-un numr multiplu de copiiFgenom i se formeaz prin fenomenul de amplificare genic. Din acest categorie, fac parte mai ales genele co ificatoare e .istone, care, e/ist !ntr-un numr de copii !nalt repetitive, fiind prezente numai la eucariote. &n timp ce la dro-dii e/ist doar dou copii pentru
8

fiecare tip de $istone, la alte specii eucariote, (de e/emplu la ariciul de mare , se a-unge la un numr de 122-'222 de copiiFgenom. 4rezena unui numr c%t mai mare de copii $istonice !ntr-un organism, depinde de nevoia de sintez rapid a ARNm $istonic (codificator pentru sinteza $istonelor . Dup decodificarea ARNm $istonic, rezult $istonele, care sunt principalele proteine constitutive ale cromatinei. Aaracteristic pentru genele $istonice este faptul c, - genele $istonice nu au !n structur introni (sunt gene de tip continuu D - ARNm $istonic nu prezint cozi poli A (poliadenilice . 0-a emis ipoteza c absena intronilor "i a cozilor poli A ar facilita sinteza "i transportul foarte rapid, prin citoplasm, a $istonelor. Gene cu o singur copie, pot deveni !nalt repetabile, ca rezultat al amplificrii "i seleciei. Descoperirea fenomenului e amplificare a genelor, a aruncat o lumin nou asupra modificrilor dinamice care pot avea loc la nivelul genomului. 9n e/emplu !n acest sens !l ofer aplicarea c.imioterapiei antitumorale, c%nd prin e/punere prelungit a celulelor la doze subletale de agent in$ibitor, agent cu rol de presiune selectiv, poate aprea re!istena la rog a acestor celule, datorit fenomenului de multiplicare a genelor care imprim rezisten c%"tigat la drog. ?. Gene co ificatoare e ,R- ri0osomal Aceste gene sunt localizate !n cromosom, !n regiuni specializate, care sunt asociate cu nucleolii. #utanii celulari fr nucleoli, nu sunt viabili, deoarece sintetizeaz cantiti insuficiente de ARNr "i implicit, mutanii respectivi, vor avea un numr insuficient de ribosomi "i deci de proteine. Aproape toate eucariotele, au peste '22 de copii ale genelor pentru ARNr. Aceste secvene repetabile (copii sunt separate !ntre ele prin segmente spacer "i se repet !n tandem. 1. Gene co ificatoare e ,R- transportor &n celula procariot de scherichia coli au fost descrise B2 asemenea gene codificatoare de ARNt. :a eucariote, ca "i la procariote, e/ist !n fiecare genom un numr de copii de redundan a genelor codificatoare de ARNt. :a om, au fost descrise '122 de asemenea geneFgenom. Aceste gene sunt rsp%ndite pe diferii cromosomi. . gen este responsabil de imprimarea unei anumite caracteristici a organismului. 0e pare !ns c, pentru realizarea respectivei caracteristici, un rol !nc neclar, !l -oac o a doua gen, vecin celei !n cauz, gen care poate !ntri sau slbi efectul genei principale. Aciunea specific a unei gene, poate fi evaluat atunci c%nd aceasta rm%ne stabil, nemodificat structural, transmi%ndu-se nealterat din generaie !n generaie. &n cursul evoluiei, s-au evideniat mecanisme active de reparare, care reu"esc s menin starea de stabilitate a genelor. 8otu"i, e/ist "i numeroase cazuri !n care, spontan sau pe cale e/perimental, este modificat structura unei gene. Acest aspect reprezint fenomenul de mutaie a genei. ;iteza de mutaie a diferitelor situs-uri (una sau mai multe perec$i de baze nucleotidice din secvena ADN corespunztoare unei gene este diferit. &n timp ce, pentru un numr mare de situs-uri, e/ist viteze egale de mutaie spontan, pentru un numr mic de situs-uri e/ist o tendin mare de mutaie, aceste situs-uri reprezent%nd a"a-numitele .ot spots. 4rin fenomenul de mutaie, gena trece !ntr-o nou stare stabil, care corespunde unei noi caracteristici, ce se va transmite ulterior la descendeni, din generaie !n generaie. Muta0ilitatea este proprietatea de baz a unei gene. Acest proprietate dovede"te c o gen, poate duce la apariia mai multor structuri active posibile, care pot s apar !n cursul evoluiei. :a eucariote, genele sunt !n"iruite liniar !n cromosom. 6iecare cromosom, deine un anumit numr de gene specifice, a cror succesiune "i implicit vecintate, sunt constante. 4rin studiile de localizare a genelor !n cromosom, s-a a-uns la alctuirea $rilor genetice. &n raport cu funcia !ndeplinit, au fost descrise, gene structurale "i gene reglatoare. Aonform modelului !ritten"#a$i%son, la eucariote, genele ar fi localizate !n <comple/e genice= (familii genice ierar$izate, comple/e de gene structuraleD
9

comple/e de gene receptoareD comple/e de gene activatoare (reglatoare D comple/e de gene senzor (care recepioneaz mesa-ele din mediu .

1. Tipuri particulare e gene

Alturi de genele normale prezentate anterior, organismele mai dein "i alte tipuri genice, considerate particulare. Acestea sunt, gene suprapuse, gene antisens, gene egoiste i gene sritoare. Gene suprapuse Acest fenomen a fost descoperit pentru prima oar la bacteriofagul GH'*> care paraziteaz bacteria scherichia coli. &n structura genomului acestui fag, au fost identificate '2 gene, notate A, +, A, D, 7, 6, G, I, J, K. Genomul fagului respectiv, este reprezentat de o macromolecul circular de ADN monocatenar. &n conformitate cu numrul de lanuri polipeptidice pe care macromolecula de ADN a acestui fag le codific, cele )1*) de nucleotide identificate, nu sunt suficiente pentru a codifica proteinele produse. 8eoretic, macromolecula de ADN a fagului ar trebui s conin cel puin B'22 de nucleotide, pentru codificarea celor '2 proteine. Diferena !ntre capacitatea real de codificare a genomului viral "i cea teoretic, a ridicat problema activitii unor gene suprapuse. Aceasta !nseamn c o anumit secven de nucleotide, poate fi <citit= !n mod repetat, realiz%ndu-se astfel sinteza a dou lanuri polipeptidice diferite. Acest fenomen a fost e/plicat atunci c%nd s-a constatat c gena + reprezint partea terminal a genei A, care este mult mai mare, deci genele A "i + sunt suprapuse, gena + fiind transcris dintr-un punct de iniiere intern. Genele D "i 7 sunt de asemenea, suprapuse (6igura ). 6enomenul acoperirii genelor, a fost observat "i la ali fagi, 0'1, G>, A;>2 etc. Avanta-ul fenomenului !n cauz, const !n faptul c, face posibil utilizarea cu ma/im eficien, a materialului genetic, deoarece acela"i segment de ADN, are o capacitate de codificare multivalent. Dezavanta-ul fenomenului se produce c%nd o mutaie aprut !n regiunea de suprapunere a genelor, condiioneaz apariia simultan a dou sau c$iar trei proteine mutante. &n cazul genelor suprapuse, transcripia, !nceput din puncte diferite ale aceluia"i fragment de ADN, duce la sinteza de macromolecule diferite de ARNm, ceea ce determin sinteza diferitelor proteine. De regul, numai una dintre catenele ADN conine mesa-ul genetic. Gene antisens Aatena sens a ADN conine genele propriu-zise, !n timp ce catena perec$e, antisens menine integritatea secvenelor codificatoare. 8otu"i, s-a demonstrat c dou gene pot ocupa acela"i segment dublu catenar de ADN, fiind plasate fa !n fa, pe cele dou catene cu polariti diferite. J.4. Adelman "i colaboratorii lor (09A au identificat !n esuturile cerebrale de "obolan, gena pentru $ormonul ce elibereaz gonadotropina, gena fiind notat GnRI (gonadotropin releasing $ormone .

10

H A

G B C D F I E

6igura ) Genomul bacteriofagului H '*> care conine gene suprapuse

Au descoperit c secvena nucleotidic de pe catena perec$e, opus cu secvena genei GnRI, este transcris. Aceast gen localizat opus fa de gena GnRI, a fost numit gen antisens 0I. Gena GnRI codific un $ormon necesar pentru dezvoltarea se/ual, iar absena sa induce sterilitate. Din aceast cauz, gena este foarte stabil. Gena 0I profit "i ea de stabilitatea genei GnRI, av%nd posibil un rol biologic foarte important, neelucidat !nc. 7/ista astzi te$nici de terapie genic cu oligomeri antisens. 0e cunosc dou te$nici de acest fel, '. 8e$nica triple/ ADN, se bazeaz pe faptul c oligomerii sintetizai artificial pot !ncon-ura dublul $eli/ de ADN, rezult%nd triple/uri de ADN. 8riple/urile de ADN bloc$eaz transcripia anumitor gene, adic sinteza de ARNm. 4artea codificatoare a genei este acoperit cu proteine protectoare "i ca urmare, este inaccesibil pentru medicamente, !n timp ce, regiunea reglatoare de control, este semnificativ mai accesibil. Regiunea reglatoare a genei, controleaz rata transcripiei. 4rin utilizarea de oligonucleotide, se formeaz triplete 8A8 "i GGA !n regiunea reglatoare a genei, realiz%ndu-se astfel triple/ul ADN. Acest fenomen bloc$eaz transcripia. ?. 8e$nica ADN antisens, prin care oligonucleotidele antisens se cupleaz cu ARNm, bloc%nd translaia, adic sinteza de proteine. &nc din perioada anilor EC2 s-a demonstrat c unele microorganisme produc !n mod natural ARN antisens, !n scopul controlului e/presiei unor gene. Aceast strategie antisens este utilizat de asemenea de plante "i animale, pentru regla-ul genetic al activitii unor gene. .ligomerii antisens, se utilizeaz !n prezent, pentru combaterea unor infecii virale, cum este cea cu virusul &a'lilloma, care provoac afeciuni genitale. 0e !ncearc utilizarea unui oligomer antisens direcionat contra produsului genei gag( de la virusul imunodeficienei umane. De asemenea, se efectueaz cercetri pentru utilizarea oligonucleotidelor antisens direcionate, pentru distrugerea celulelor tumorale. &n acest scop, se folose"te te$nica <e/ vivo= a mduvei osoase, care se trateaz cu oligonucleotidele antisens direcionate contra ARNm, sintetizat de gena p)1, gen considerat supresoare de tumori, dar care la bolnavii de leucemie acut mielogen este superactiv. . alt gen int !n cazul acestei maladii, este gena c"m)b, care !n mod normal, promoveaz !nmulirea celulelor sangvine. 6uncionarea anormal a acestei gene este implicat !n leucemia uman, ca "i !n alte maladii. 0-a decoperit c !n sisteme celulare libere, utilizarea de oligomeri bloc$eaz transcripia unor gene virale sau reduce considerabil nivelul transcripiei.
11

&n prezent, se studiaz astfel de medicamente pe baz de oligomeri antisens, care se pot cupla cu ARNm, bloc%nd translaia, sau cu regiunea de control a genei (ADN , bloc%nd transcripia. Aceasta este ceea ce se nume"te terapie genic), realizat la nivelul acizilor nucleici. Gene egoiste Noiunea de ,D- egoist a fost introdus !nc din anul '(C2, de ctre @. .rgel "i 6.I.A. AricL, pe de o parte "i M.6. Doolittle "i A. 0apienza, pe de alt parte. 4rin ADN egoist se !nelege, e/istena unor macromolecule de ADN din organismele eucariote, care sunt lipsite de orice funcie pentru organism. Denumirea se -ustific pentru c, de"i consum energie "i precursori pentru a se replica, acest ADN nu pare a fi anga-at !n realizarea vreunei funcii celulare. Deci, ADN egoist se menine pe el !nsu"i "i se reproduce pe cont propriu, ca un parazit molecular. A"adar, celulele eucariote conin pe l%ng genele utile organismului "i <gene parazite= care par c nu-i servesc la nimic. Aceste gene au fost denumite gene egoiste. 0e consider c e/istena genelor egoiste e/plic prezena ADN satelit (micro- "i macrosatelii , al genelor care se repet de-a lungul macromoleculei de ADN de mai multe ori. :a om, genele propriu-zise ocup doar '25 din ADN genomic. Restul de (25 este reprezentat de secvene ADN egoist. Nu este e/clus ca, ADN redundant, s !ndeplineasc roluri ar$itecturale, furniz%nd situsuri pentru legarea proteinelor armturii cromosomiale, dup cum nu este e/clus nici posibilitatea interveniei lor, !n iniierea proceselor de recombinare. Gene s)ritoare @niial, genomul era considerat ca o colecie de gene plasate stabil !n cromosomi, !ntr-o anumit ordine. Aceast concepie a e/istat p%n la descoperirea elementelor genetice mo0ile (mo$eable genetics elements . Acestea au fost identificate pentru prima oar de ctre cercettoarea american +arbara #c. AlintocL, !n anul '(>2, pe baza unor e/periene efectuate la porumb. 0tudiind legtura dintre pigmentaia boabelor la porumb "i modificrile cromosomilor acestei plante, AlintocL a concluzionat c modificarea pigmentaiei, se datoreaz unor elemente genetice mobile, care circul !n interiorul genomului "i au posibilitatea de se include !n interiorul diverselor gene, determin%nd blocarea sau inactivarea parial a lor. Aceste elemente genetice mobile au fost considerate adevrate gene sritoare (*um'ing genes , iar ulterior au fost denumite transpo!oni. 4rimul element genetic mobil, care se manifest "i ca o poziie a ruperii cromosomului sau disociere, a fost numit locusul #isociator, notat #s, care are capacitatea de a-"i sc$imba poziia !n cadrul aceluia"i cromosom sau c$iar !n alt cromosom. 0-a constatat c activitatea locusului #s se realizeaz numai !n prezena altui locus, numit Acti$ator, notat Ac, care are capacitatea de a activa ruperea !n locusul #s. @ntegrarea genei #s !n apropierea imediat a genei +, care determin culoarea aleuronei, contribuie la inactivarea genei +. &n acest fel, seminele $eterozigote +,c,c (endospermul este un esut triploid , devin necolorate. &n prezena activatorului Ac, gena #s poate prsi locusul +, condiion%nd prin aceasta, apariia de pete colorate, pe suprafaa incolor a endospermului. 7lemente genetice mobile au fost evideniate "i la alte eucariote, gr%ul, inul, dro-dia de bere, drosofila, "oareci etc. Astfel de structuri mobile s-au descoperit "i la procariote. 0e admite c transpozonii ofer mari posibiliti de rearan-are la nivelul macromoleculei de ADN (inversii, deleii, duplicaii, adiii "i asigur recombinarea genetic nelegitim (!ntre segmente neomoloage de ADN . &n acest fel, transpozonii dein un important rol !n evoluia organismelor. Deplasarea transpozonilor dintr-un locus !n altul, condiioneaz nu numai efecte evolutive, ci c$iar !n generaia respectiv, contribuie la funcionarea sau inactivarea genelor adiacente. 0tudiul structurii "i al modului de aciune a transpozonilor, face posibil folosirea lor !n procesul de manipulare a mesa-ului genetic. Actualmente, se efectueaz cercetri, care arat c transpozonii, pot fi utilizai ca vectori, !n scopul transferului de gene, !n cadrul investigaiilor de inginerie genetic.

12

2. Reglarea acti$it)ii genelor

Dup cum s-a precizat anterior, la procariote "i la eucariotele inferioare (dro-dii , genele sunt continue, adic formate numai din e/oni (gene active , !n timp ce la eucariotele superioare (plante "i animale , genele sunt discontinue. 0tructura genei, influeneaz $otr%tor modul de transmitere a mesa-ului genetic la nivelul ribosomilor, unde are loc traducerea informaiei !n procesul de translaie. . celul are mai multe posibiliti, de a controla transmiterea informaiei genetice, de la gen la protein "i anume prin, controlul transcrierii (citirea genei la nivelul ARNm D controlul procesrii ARNm primar (!ndeprtarea intronilor la eucariotele superioare D controlul translaiei (!n citoplasm, la nivelul ribosomolor D controlul descompunerii ARNm !n citoplasmD controlul proceselor posttranslaionale (procesarea proteinelor dup eliberare de la nivelul ribosomilor "i a !nmagazinrii acestora !n citoplasm. 9.1 Reglajul genetic la procariote :a procariote, regla-ul genetic se realizeaz la nivel transcripional "i la nivel translaional. 4rocariotele au capacitatea de a-"i conserva energia "i resursele, prin producerea de proteine doar c%nd acestea sunt necesare. Aoninutul proteic al unei bacterii, se poate sc$imba !n funcie de condiii. 7/ist c%teva ci prin care o celul procariot !"i poate bloca aportul unei proteine care nu este necesar !ntr-un anumit moment. +locarea transcripiei ARN pentru acea protein Iidroliza ARNm dup ce a fost sintetizat, !naintea procesului de translaie 4revenirea translaiei ARNm la nivelul ribozomilor Iidroliza proteinei dup ce a fost produs @n$ibarea funciilor proteinei. ,. Regla3ul genetic la ni$el transcripional '. Regla-ul negativ Acest tip de regla- reprezint mecanismul de reglare genetic care duce la represarea operonului, !n vederea opririi transcrierii (transcripiei . 9n asemenea tip de regla- este reprezentat de modelul clasic 4aco0 5 Mono , descris !n celula bacterian de scherichia coli. &n acest caz este prezent un operon represa0il tip lactoz. #odelul Jacob 3 #onod reprezint unul dintre mecanismele de feed-bacL negativ (mecanism !n care e/ist o relaie invers proporional !ntre concentraia unui produs final "i intensitatea sintezei acestuia . Acest model se bazeaz pe e/istena operonului lac (responsabil de metabolismul lactozei !n genomul celulei bacteriene de scherichia coli. .peronul reprezint cea mai important caracteristic a genomului bacterian. 4rin operon, se !nelege unitatea funcional integrant a materialului genetic, de la procariote. .rice operon este alctuit din gene structurale care codific proteine, o gen operatoare "i una promotoare, care controleaz activitatea genelor structurale. 9nitatea operon de la procariote, format din secvene codificatoare (genele structurale "i din secvene de control (gena operatoare "i gena promotoare , reprezint unitatea de transcripie a genomului procariot. Din aceast unitate de transcripie, sunt transcrise numai secvenele codificatoare. :a o anumit distan de operon, se afl gena reglatoare, !mpreun cu promotorul acesteia, acestea av%nd rolul de a regla activitatea !ntregului operon.
13

&n mod normal, celula de - coli metabolizeaz glucoza, iar !n lipsa acesteia, lactoza. 4entru metabolizarea lactozei, celula bacterian deine !n genom, un sistem de reglare. Acest sistem cuprinde dou regiuni diferite, - regiunea operonului lac (unitatea de transcriere D - regiunea reglatoare a operonului lacRegiunea operonului lac este format din trei gene structurale, notate z ( )( a, fiecare codific%nd c%te una din cele trei enzime, - -galactozidaza, pentru $idroliza lactozei !n glucoz "i galactozD - -galactozid-permeaza, pentru transportul lactozei prin membrana celularD - tiogalactozid-transacetilaza, enzim neesenial pentru metabolismul lactozei, cu rol incert. Alturi de cele trei gene structurale, se afl gena operator, notat . "i gena promotor a operonului, notat &.. Regiunea reglatoare a operonului este format din gena reglatoare propriu-zis, notat R "i promotorul genei reglatoare, notat &!. Aceast regiune controleaz activitatea regiunii operonului lac. 4entru metabolizarea lactozei, regiunea operonului lac devine activ, numai c%nd !n mediul e/tern lipse"te glucoza. &n aceste condiii, !n operonul lac, cele trei gene structurale se transcriu simultan, ca o unitate, !n trei macromolecule de ARNm, legate !ntre ele "i care se translaioneaz !n cele trei proteine-enzime, deoarece fiecare din cele trei ARNm are un codon start "i un codon stop propriu. Gena promotor a operonului lac (&.) reprezint o secven start pentru sinteza ARNm pe care se leag ARN-polimeraza. &n celula bacterian de - coli, conform modelului Jacob-#onod, metabolizarea lactozei presupune dou etape, -galactozidaz @. lactoz allolactoz @@. allolactoz glucoz + galactoz Astfel, atunci c%nd !n mediu e/ist, - o cantitate foarte mic de lactoz sau aceasta lipse"te total este activat sistemul represor. 4roteina represor activ, determin (prin legarea de promotorul operonului , oprirea transcrierii, ceea ce are drept rezultat, in$ibarea sintezei celor trei proteine-enzime "i acumularea lactozei !n mediu (6igura B . - o cantitate mare de lactoz determin in$ibarea represorului, care duce la declan"area transcrierii "i deci la sinteza celor trei proteine-enzime, cu scderea cantitii de lactoz !n mediu. Represorul este o protein cu greutate molecular de ')2.222 daltoni, format din patru subuniti identice. 6n uctorul este reprezentat de lactoz. Gena operatoare "i gena promotoare sunt adiacente, fiind constituite din c%te circa '22 de nucleotide, ambele fiind situate la !nceputul operonului lac. #odelul Jacob-#onod este valabil, nu numai pentru celula bacterian de scherichia coli, pentru bacterii !n general "i pentru virusuri. :a - coli au fost identificai peste '22 de operoni, dintre care cei mai muli se pare c !"i e/ercit aciunea dup principiul operonului de lactoz. ?. Regla-ul pozitiv Regla-ul pozitiv reprezint mecanismul de reglare genetic care determin inducerea operonului !n vederea declan"rii transcrierii. &n acest caz, operonul este inductibil. Astfel de e/emple sunt operonul /-ara (pentru sinteza arabinozei la - coli "i operonul mal (pentru sinteza maltozei la - coli . &n ambele cazuri, respectivii operoni, sunt indu"i prin inactivarea represorului, cuplat !n prealabil cu un aporepresor. 9n aspect particular al regla-ului pozitiv, !l reprezint inducerea enzimelor de reparare a ADN. Ambele tipuri de regla-, negativ "i pozitiv se realizeaz printr-un circuit de feed-bacL negativ, ceea ce semnific transmiterea comenzii de reglare de la concentraia produsului final ctre substratul iniial inductor al respectivei ci metabolice.
14

4entru a avea loc transcrierea ARNm policistronic (ARNm rezultat din transcrierea simultan a mai multor gene structurale adiacente, gene ce aparin aceluia"i operon , la nivelul sistemului de regla- genetic al celulei bacteriene este obligatoriu ca, - operonul s nu fie cuplat cu represorulD - comple/ul A#4c-AA4 s fie legat la un situs specific din promotor. A#4c N acid adenosin-monofosforic-ciclic. AA4 N proteina activat de catabolit. 7ste un dimer cu dou subuniti identice de ?? Ld. Aomple/ul A#4c-AA4 va facilita aciunea ARNm-polimerazei !n cursul procesului de transcriere. 8rebuie precizat faptul c, clasificarea anterioar este din ce !n ce mai putin utilizat, o dat cu identificarea diferitelor componente ale operonilor i a diferentelor e/istente !ntre acetia. Astfel, referitor la structura mecanismelor de reglare, e/ist dou tipuri de sisteme, '. 0isteme inductibile Aompu"ii care stimuleaz sinteza unei enzime (7/, lactoza sunt numii in uctori, iar enzimele produse sunt considerate ca fiind in ucti0ile, !n timp ce enzimele care sunt produse permanent, !n mod constant, sunt numite en!ime constituti$e. 7/emplul clasic de sistem inductibil, este reprezentat de operonul lac 3 descris anterior

6igura B Reprezentarea sc$ematic a sistemului de reglare, a metabolismului lactozei la scherichia coli

&n continuare, sunt detaliate cele doua etape de regla- ale operonului lac

15

6igura * A%nd lactoza 3 inductorul, lipsete din mediu, nu poate inactiva represorul

6igura * &n prezena lactozei (inductorul , represorul este inactivat i se poate desf ura sinteza

?. 0isteme represibile A%nd sinteza unei enzime poate fi blocat, !nseamn c enzima este represi0il). &n sistemele represibile, proteina represoare nu !"i poate bloca operonul, dec%t dac este legat cu un corepresor, care poate fi c$iar produsul final de metabolism (7/, triptofanul sau un analog de-al su. Dac produsul final nu este prezent, proteina represoare nu se poate lega la
16

operator, iar operonul este transcris la capacitate ma/im. Dac produsul final este prezent, represorul se leag la operator, iar operonul este blocat (6igurile C 3 ( .

6igura C &n absena triptofanului (corepresorul , represorul este inactiv i se desfoar sinteza

17

6igura ( &n prezena triptofanului (corepresorul , represorul este activat i nu se desfoar sinteza

Diferenele dintre sistemele inductibile "i represibile sunt mici, dar importante, - &n sistemele inductibile, substratul cii metabolice (inductorul , interacioneaz cu o protein reglatoare (represorul pentru a-i anula capacitatea de a se lega la operator, permi%nd astfel transcripia - &n sistemele represabile, produsul cii metabolice (corepresorul interacioneaz cu o protein reglatoare pentru a-i permite cuplarea cu operatorul, ceea ce duce la o blocare a transcripiei. &n general, sistemele inductibile controleaz cile de catabolism (care sunt activate numai c%nd substratul este disponibil , iar sistemele represibile controleaz cile de biosintez (care sunt blocate p%n c%nd produsul devine indisponibil . &n ambele tipuri de sisteme, moleculele reglatoare, funcioneaz prin legarea la operator. 1. #ecanisme reglatorii ale factorilor de virulen la bacterii &n cazul operonilor, pe l%ng secvenele ADN cu rol structural, implicate !n sinteza diferitelor componente celulare e/ist "i secvene ADN cu rol reglator. Regulonul reprezint un ansamblu de gene aflate sub incidena aceleia"i gene reglatoare. 9n e/emplu foarte cunoscut este regulonul 0oxR, descris la tulpinile de Vibrio cholerae grup .', biotip clasic. &n cadrul regulonului 0oxR, gena reglatoare 8o/R coordoneaz activitatea a cel puin '* gene structurale cunoscute p%n !n prezent ( ctxA, ctx!, factorul de
18

colonizare +0&, factorul accesoriu de colonizare, proteinele de membran om'0 "i om'U, trei lipoproteine etc. . 7. Regla3ul genetic la ni$el translaional :a acest nivel, e/ist mai multe tipuri de regla- genetic, mecanisme de atenuare, rspunsul stringent, represia translaiei de ctre proteine ribosomale libere, in$ibarea sintezei proteice de ctre <ARNmic=. '. #ecanisme de atenuare Asemenea mecanisme e/ist la bacterii, !n condiiile !n care procesul de transcriere se suprapune parial peste procesul de translaie. #ecanismul de atenuare, face parte din regla-ul fin al e/presiei genice. Acest mecanism, a fost descris !n cursul procesului de biosintez a triptofanului. &n cursul acestui proces, a fost evideniat faptul c, !n afar de aciunea de reglare la nivel de transcriere, de ctre produsul final de sintez (triptofanul , e/ist "i un al doilea mecanism de reglare a respectivei biosinteze a triptofanului, la nivel de translaie. &n acest al doilea mecanism de reglare, intervine o secven de '?1 - ')2 de ribonucleotide, situat la captul )E al moleculei de ARNm policistronic, care are capacitatea de a modula viteza de traducere a respectivului lan ARNm. Deleia acestei secvene <atenuatoare=, determin amplificarea de "ase ori a traducerii. ?. Rspunsul stringent Acest tip de regla- apare !n cazul cultivrii celulelor bacteriene, !ntr-un mediu srac !n aminoacizi. Aarena !n aminoacizi, este sesizat de celul, care reacioneaz prin scderea rapid a sintezei proteinelor ribosomale. 0cderea sintezei proteinelor ribosomale, se realizeaz sub aciunea <factorului stringent=, care este un guanosin tetrafosfat, notat ''G'', situat pe subunitatea ribosomal )20. Acest factor, prin legare de ARNm - polimeraza "i ARNt 3 polimeraza pe care le inactiveaz, bloc$eaz sinteza ARNm "i respectiv ARNt . 1. Represia translaiei de ctre proteine ribosomale libere Asemenea proteine ribosomale libere, -oac rol de represor, leg%ndu-se de ARNm !n apropierea situs-ului de iniiere, pentru propria lor sintez "i bloc$eaz sinteza mai multor proteine codificate de ctre mesa-ul ARNm policistronic. >. @n$ibarea sintezei proteice de ctre ARNmic ARNmic (mRNA-interfering com'lementar) RNA este un ARN complementar "i interferent cu ARNm, adic un ARN antisens. 0-au descris gene mic implicate !n sinteza ARNmic. ARNmic are rol !n reglarea genetic la nivel de translaie. 7/presia genelor poate fi reglat prin molecule de ARNmic (ARN complementar , care sunt capabile s se lege de ARNm-urile corespunztoare diferitelor gene "i deci s in$ibe procesul de translaie. Ael mai eficient ARNmic este cel complementar secvenei ribonucleotidice 1hine" #algarno (acest secven preced codonul de iniiere A9G pentru iniierea translaiei la procariote a ARNm-ului, deoarece !mpiedic fi/area ribosomilor de captul )E al acestui ARNm, !mpiedic%nd iniierea translaiei. ARNmic determin in$ibiia aproape complet a proliferrii colifagului 04 integrat !n celula bacterian de - coli. &n acest caz, ARNmic in$ib sinteza proteinei fagice prin !mpiedicarea translaiei la nivelul ribosomilor celulei bacteriene gazd. ARNmic prin $ibridizare cu ARNm implicat !n sinteza unor proteine ma-ore de membran e/tern poate in$iba sinteza respectivelor proteine. 6olosirea ARNmic (ARN-antisens !n scopul in$ibrii e/presiei genelor virale s-a dovedit a fi o cale eficient !n prevenirea infeciilor virale. ARN-antisens are o foarte larg specificitate, ceea ce prezint un mare avanta- !n utilizarea lui clinic (vezi subcap. ).C. .

19

9.2. Reglajul genetic la eucariote &n comparaie cu celula procariot, celula eucariot deine o cantitate de ADN de '22'2222 ori mai mare "i cu totul alte mecanisme de regla- genetic. 4entru acest tip de celule, cu funcii diferite, se accept "i e/istena unor pattern-uri diferite de gene (active "i inactive . .peronii, foarte rsp%ndii la procariote, de gsesc doar la un numr foarte redus de eucariote inferioare. De e/emplu, la dro-dii, a fost descris un operon care conine o gen pentru descompunerea galactozei. :a eucariote, reglarea activitii genelor se efectueaz la trei nivele, la nivelul replicrii ADN, la nivelul transcrierii, la nivelul translaiei. ,. Regla3ul genetic la ni$elul replic)rii ,D:a acest nivel, reglarea e/presiei genice se face prin, - activitatea e/onucleazic !n direcia )E1E a ADN-polimerazei ' (fenomenul de 'roofrea%ing D - gradul de condensare al ADN cromosomial, !n urma interaciunii cu proteinele $istonice "i non$istonice. De formarea comple/elor $istone-non$istone depinde gradul de despiralizare a macromoleculelor de ADN "i implicit gradul de transcriere a acestora. 7. Regla3ul genetic la ni$elul transcrierii Aile de reglare !n acest caz sunt, - 4romotorii cu rol !n iniierea transcrierii, -promotori pro/imali, situai pe lanul ADN la nivelul secvenei 0A0A"box (sau varianta acesteia D -promotori specifici (enhancer , situai !n amonte de secvena 0A0A"boxD -factori de transcriere (proteine . Ace"tia se leag specific la nivelul unor scobituri din lanul de ADN, -deasupra sau sub secvenele codificatoare ale genei specifice a crei activitate o regleazD -!n mi-locul genei, pe regiunea de control intern (e/. gena pentru sinteza ARNr )0 . &n acest caz, factorul de transcriere este factorul 0F 222 AD - #etilarea ADN. Acest procedeu intervine at%t !n reglarea activitii genelor, c%t "i !n procesarea transcriptelor primare. C. Regla3ul genetic la ni$elul translaiei :a acest nivel, regla-ul genetic se realizeaz prin, - 4rocese de maturare ale ARNm !n vederea translaiei. 6enomenul de 0onetare (ca''ing la captul )E al ARNm primar (ARNm premesager , fenomenul de polia enilare la captul 1E al ARNm primar "i fenomenul de procesare intracatenar) (s'licing intervin !n maturarea ARNm primar. - Aspectul particular al fenomenului de splicing 8n trepte, pornind de la aceea"i secven genic, !n cazul sintezei imunoglobulinelor. Astfel, se poate a-unge la o mare variabilitate a moleculelor imunoglobulinice, cu un minimum iniial de material genetic.

20