UNIVERSITATEA DE TIINE AGRONOMICE I MEDICIN

VETERINAR

TEHNICA ELISA

PATRICHE MDLINA-MIRELA
GRUPA 2

Tehnica ELISA

ELISA ( enzyme-linked immunosorbent assay) este utilizat pe scar larg

ca instrument de diagnosticare n medicin i ca msur de control al calitii n
diverse industrii. Este de asemenea, folosit ca instrument analitic n cercetarea
biomedical pentru detectarea i cuantificarea specific anticorpilor dintr-o prob
dat. Un test biochimic care utilizeaz anticorpi si o schimbare de culoare mediate
de enzime pentru a detecta prezena antigenului (proteine, peptide, hormoni, etc.)
sau a anticorpilor ntr-o prob dat.
ELISA utilizeaz conceptul imunologiei de baz a unui antigen de legare la
anticorpul su specific, care permite detectarea unor cantiti foarte mici de
antigene, cum ar fi proteinele, peptidele, hormoni.
Tipuri de teste ELISA
1. Testul ELISA indirect
O prob care trebuie analizat pentru un antigen specific ader la
godeurile unei plci de microtitrare, urmat de o soluie de protein neactiv cum
ar fi albumina seric bovin pentru a bloca orice zon din sondele neacoperite cu
antigen. Se adaug anticorpul primar, care se leag n mod specific de antigen,
urmat de un anticorp conjugat cu enzime secundare. Se introduce un substrat
pentru enzime, care cuantific un anticorp primar printr-o schimbare de culoare.
Concentraia de anticorp primar prezent n ser se coreleaz direct cu intensitatea
culorii.
Un dezavantaj principal al acestui test este c metoda de imobilizare a antigenului
nu este specific. Cnd serul este folosit ca antigen de testare, toate proteinele din
prob pot adera la godeurile unei plci de microtitrare.

2. Sandwich ELISA
Tehnica sandwich este utilizat pentru a identifica un antigen specific. Un
avantaj al folosirii unui anticorp specific purificat pentru a capta antigen este c
elimin necesitatea de a purifica antigenul dintr-un amestec de al i antigeni,
simplificnd astfel analiza de cretere, specificitatea i sensibilitatea.
3. Testul ELISA competitiv
Evenimentul cheie din acest test este procesul de reacie concurenial ntre
antigenul prob i antigenul legat la godeurile unei plci de microtitrare cu
anticorpul primar.
Principalul avantaj al testului este sensibilitatea ridicat la diferena de compozi ie
n amestecurile complexe de antigen, chiar i atunci cnd anticorpul de detectare
specific este prezent n cantiti relativ mici. Este adesea folosit pentru detectarea
anticorpilor HIV n serul pacienilor.
4. Testul ELISA multiplu si portabil
Este o tehnic nou care utilizeaz un dispozitiv multicatcher cu 8 sau 12
proeminene centrale pe un stick care poate fi cufundat ntr-o prob colectat.
Principalul avantaj al acestor kituri de laborator este c acestea sunt relativ ieftine,
pot fi folosite pentru un numr mare de persoane, i nu necesit personal calificat
sau echipamente de laborator.
ELISA este o metod puternic nu numai pentru cercetarea biomedical
general, ci este folosit i ca un instrument de diagnosticare. Aceasta permite
detectarea tuturor tipurilor de molecule biologice n concentraii i cantiti foarte
mici. Dei are limite, ELISA rmne un instrument important att n cercetare
clinic i de baza, precum i n diagnostic clinic.