BILIRUBINA

Bilirubina este produsa in macrofage prin catabolismul enzimatic al fractiunii hem din diverse
hemoproteine. Aproximativ 80% din bilirubina circulanta deriva din eritrocitele imbatranite.
Cand eritrocitele circulante ating sfarsitul vietii lor normale de aproximativ 120 zile, ele sunt
distruse de celulele reticuloendoteliale. Oxidarea hemului genereaza biliverdina, care este
metabolizata la randul sau in bilirubina. Restul de 15-20% din bilirubina circulanta provine
din alte surse (distrugerea eritrocitelor mature din maduva osoasa hematogena sau
metabolismul altor proteine ce  contin hem – citocromii hepatici, mioglobina musculara,
enzime)5;6.

Bilirubina astfel formata circula in sange, fiind transportata la ficat sub forma unui complex
solubil bilirubina- albumina. Desi bilirubina este legata destul de puternic de albumina, ea
poate fi extrasa cu usurinta din sange de catre ficat. La nivel hepatic are loc conjugarea
bilirubinei cu acidul glucuronic, sub actiunea UDP-glucuronil transferazelor. Bilirubina
conjugata include bilirubin-monoglucuronid, care predomina in ficat, si bilirubin-
diglucuronid, care predomina in lichidul biliar. Bilirubina conjugata este transportata in
canaliculele biliare, de unde este deversata impreuna cu bila in caile biliare si apoi in intestin,
unde sufera o serie de reduceri succesive cu formare de urobilinogen si stercobilinogen.
Stercobilinogenul si o mica parte din urobilinogen sunt eliminate prin fecale; cea mai mare
parte a urobilinogenului este reabsorbita intestinal, ajunge prin circulatia portala la ficat
(circuitul entero-hepatic), fiind reexcretata prin bila10.

Nivelurile bilirubinei serice cresc atunci cand productia depaseste metabolismul si excretia
acesteia. Clinic hiperbilirubinemia apare ca icter – pigmentarea galbena a tegumentului si
sclerelor, care se instaleaza la valori ale bilirubinei de 2–2.5 mg/dL.

Tulburarile metabolismului bilirubinei pot fi impartite in patru categorii majore:

 productie crescuta de pigment;

 preluare hepatica scazuta;
 conjugare hepatica inadecvata;
 excretie redusa de pigment conjugat din ficat si bila1;2.

In laborator se masoara doua fractiuni ale pigmentului -  fractiunea hidrosolubila conjugata,

care da reactia directa cu reactivul diazo si care reprezinta bilirubina conjugata (sub forma de
mono- si diglucuronid) si fractiunea liposolubila care reprezinta bilirubina neconjugata9.

Primele trei tulburari ale metabolismului bilirubinei sunt asociate cu bilirubinemie

predominant neconjugata, iar a patra categorie este asociata cu bilirubinemie predominant
conjugata si bilirubinurie.

Bilirubina serica totala prezinta valori crescute in urmatoarele cazuri:

• hemoliza necomplicata;
• icter hepatocelular;
• obstructie biliara extrahepatica;
• hepatita virala;
• hepatita alcoolica.

1
Bilirubina indirecta (BI)

Bilirubina neconjugata sau bilirubina indirecta se obtine prin diferenta dintre valoarea
bilirubinei totale si a celei directe. Concentratia plasmatica a bilirubinei neconjugate este
determinata de:

• rata cu care bilirubina nou sintetizata intra in plasma (turnover-ul bilirubinei);

• rata eliminarii bilirubinei de catre ficat (clearance-ul hepatic al bilirubinei)8.

Cresterile valorilor bilirubinei neconjugate in ser pot avea urmatoarele cauze:

• turnover-ul crescut caracterizat prin distrugerea crescuta a eritrocitelor circulante – apare in

afectiuni asociate cu hemoliza:

 anemiile hemolitice – in majoritatea cazurilor de hemoliza necomplicata

nivelul mediu al bilirubinei serice este de 3-4 mg/dL;
 icterul datorat productiei crescute de pigment ca urmare a infarctelor tisulare
(infarcte pulmonare, colectii sanguine in tesuturi, dupa cateterisme, rupturi de
anevrisme aortice);

• preluare hepatica alterata produsa de unele medicamente (acid flavaspidic, novobiocina);

• conjugare alterata a bilirubinei datorata activitatii scazute a bilirubin-glucuronil-transferazei;

 icterul neonatal – aproape toti nou-nascutii manifesta un grad de

hiperbilirubinemie neconjugata tranzitorie intre a doua si a cincea zi de viata ca
efect al faptului ca in acest stadiu enzima hepatica glucuroniltransferaza este
inca imatura. Valoarea bilirubinei indirecte nu depaseste 5 mg/dL. La nou-
nascutii cu un proces hemolitic supraadaugat, incarcatura de pigment duce la
un icter mai pronuntat si nivelul bilirubinei poate depasi 20 mg/dL.
 deficitul ereditar de glucuroniltransferaza:
o -sindrom Gilbert (hiperbilirubinemie usoara si persistenta cu valori
medii de 1.2–3 mg/dL, rareori depasind 5 mg/dL);
o sindrom Crigler Najjar (tipul I cu absenta glucuroniltransferazei si
valori ale BI de 20-45 mg/dL si tipul II cu deficit partial de
glucuroniltransferaza si valori ale BI cuprinse intre 6-20 mg/dL);

 deficit dobandit de glucuroniltransferaza;

o inhibitie medicamentoasa;
o icterul laptelui de san (inhibitie reversibila a glucuroniltransferazei)3;5;6.

Bilirubina directa (BD)

Bilirubina conjugata, hidrosolubila si cu reactivitate crescuta, da o reactie de culoare cu

reactivul diazo, fiind cunoscuta sub numele de bilirubina directa. Cresterea valorilor
bilirubinei directe in ser este asociata cu excretia redusa de pigment conjugat din ficat si bila
si apare in icterele colestatice sau in cele hepatocelulare. Cresterea patologica a bilirubinei

2
directe duce la aparitia acestui pigment in urina. Intrucat bilirubina indirecta nu se elimina
prin urina, prezenta bilirubinei in urina denota cresterea in ser a bilirubinei conjugate.

Valori crescute ale bilirubinei directe apar in:

• obstructie intrahepatica:

*datorata unor defecte familiale ale functiei excretorii hepatice:

-sindromul Dubin Johnson (icter cronic idiopatic cu valori ale bilirubinei totale intre 3-15
mg/dL cu preponderenta bilirubinei conjugate;

-sindromul Rotor;

*datorata unor defecte dobandite ale functiei excretorii hepatice:

-colestaza indusa de medicamente;

-icter postoperator;

-hepatita si ciroza – in bolile hepatocelulare exista de obicei o interferenta intre cele trei etape
ale metabolismului bilirubinei: preluare, conjugare si excretie. Excretia este totusi etapa cea
mai afectata si ca urmare in ser predomina bilirubina conjugata.

• obstructie extrahepatica – obstructia mecanica a ductelor biliare se datoreaza cel mai adesea
calculilor, tumorilor sau stricturilor. Nivelul bilirubinei serice depaseste rareori 35 mg/dL3;5;6.

NOTA:

Bilirubina totala = Bilirubina neconjugata (indirecta) + Bilirubina directa

Bilirubina totala si directa sunt determinate de analizor; bilirubina indirecta rezulta prin
calcul8.

Metoda - spectrofotometrica (colorimetrica)7.

Valori de referinta7

Bilirubina totala

Varsta Valori (mg/ dL)

Prematuri: 1 zi  <6  
Prematuri: 2 zile <8
Prematuri: 3-5 zile <15
La termen: 1 zi <6
La termen: 2 zile <7
La termen: 3-5 zile  <12
Copii si adulti  <1

3
 

Bilirubina directa <0.3 mg/dL

Bilirubina indirecta <1 mg/dL

Factor de conversie: mg/dL x 17.1 = µmol/L.

Limita de detectie – 0.1 mg/dL (1.71 μmol/L)4.

Valori critice - >15 mg/dL (bilirubina totala)4.

PRINCIPIUL METODEI:METODELE TRADIŢIONALE DE DOZARE A BILIRUBINEI SE

BAZEAZĂ PE REACŢIA ACESTEIA CU UN REACTIV DIAZO CU FORMAREA UNUI COMPUS
COLORAT:AZOBILIRUBINA.ACEASTĂ REACŢIE POATE FI ACCELERATĂ PRIN
ADĂUGAREA UNOR DIVERSE SUBSTANŢE CHIMICE,DE
EX:METANOL,CAFEINĂ,DIMETILSULFOXID(DMSO). MODIFICAREA ACESTOR METODE INCLUDE
ADĂUGAREA UNOR SURFACTANŢI CA AGENŢI SOLUBILIZANŢI.BILIRUBINA TOTALĂ
REACŢIONEAZĂ CU AGENTUL DIAZO ÎN PREZENŢA UNUI SURFACTANT FORMÂND
AZOBILIRUBINA.REACŢIA DIAZO ESTE ACCELERATĂ PRIN ADĂUGAREA UNUI SURFACTANT
CA AGENT SOLUBILIZANT.EXTINCŢIA LA 548 nm A AZOBILIRUBINEI ESTE DIRECT
PROPORŢIONALĂ CU CONCENTRAŢIA BILIRUBEI TOTALE.
REACTIVI
KITUL PENTRU BILIRUBINA TOTALĂ SE PREZINTĂ CA UN LICHID, GATA DE FOLOSIT.KITUL
CONŢINE 2 REACTIVI :
R1: SURFACTANT 1,3%
R2: 2,4-DICLOROANILINA 0,81 g/L
HCl 5,563 g/L
NITRIT DE Na 0,345 g/L
SURFACTANT 2,00%