AST(GOT)

ASPARTAT AMINOTRASFERAZA(AST) ARE ORIGINE ÎN DIFERITE ŢESUTURI

ŞI ESTE O MOLECULĂ DIMER CONŢINÂND O MOLECULĂ DE PIRIDOXAL
FOSFAT(COENZIMĂ) ÎN FIECARE MONOMER,ESENŢIALĂ PENTRU
ACTIVITATEA CATALITICĂ.ÎN FUNCŢIE DE LOCALIZAREA ÎN INTERIORUL
CELULEI,EXISTĂ 2 IZOENZIME CU DIFERITE PH-URI OPTIME
DEACŢIUNE:AST MITOCONDRIALĂ (m-AST) ŞI AST CITOSOLICĂ(S-
AST).CELE 2 IZOENZIME POT FI SEPARATE PRIN ELECTROFOREZĂ.AST
CATALIZEAZĂ TRANSFERUL GRUPĂRILOR AMINO ÎN CADRUL
METABOLISMULUI AMINOACIZILOR ŞI ALFA-CETOACIZILOR.
ACTIVITATEA AST ÎN SER ESTE SEMNIFICATIV CRESCUTĂ ÎN AFECŢIUNILE
INIMII,FICATULUI,RINICHILOR ŞI MUŞCHILOR.ACTIVITATEA AST CREŞTE
LA 4-8 ORE DUPĂ UN INFARCT MIOCARDIC,ATINGE UN VÂRF LA 2-3 ZILE
ŞI SCADE DUPĂ 5-6 ZILE.
PRINCIPIU
DOUĂ SUBSTRATURI PARTICIPĂ LA REACŢIA CATALIZATĂ DE AST:L-
ASPARTAT ŞI OXOGLUTARAT.CU PARTICIPAREA NADH CA ŞI
COENZIMĂ,MALAT DEHIDROGENAZA (MDH)CONŢINUTĂ ÎN REACTIV
CATALIZEAZĂ TRANSFORMAREA OXALOACETATULUI ELIBERAT ÎN PRIMA
REACŢIE.TRANSFORMAREA NADH ÎN NAD+ DETERMINĂ O SCĂDERE A
ABSORBANŢEI LA 340nm.LACTAT DEHIDROGENAZA(LDH) PREZENTĂ ÎN
MEDIU DE REACŢIE CONTRACAREAZĂ EFECTUL NEDORIT AL
PIRUVATULUI DIN PROBA DE ANALIZAT.

AST

L-ASPARTAT + -CETOGLUTARAT  L-GLUTAMAT  OXALOACETAT

MDH

OXALOACETAT + NADH  L-MALAT +NAD +

VALORI NORMALE
<37 U/l
REACTIVI
R1
TAMPON TRIS, pH=7,8 88 mmol/l
L-ASPARTAT 260 mmol/l
R2
NADH 0,22 mmol/L
LDH 900 U/L
MDH 600 U/L
-CETOGLUTARAT 12 mmol/L
PROBELE DE ANALIZAT
SER FĂRĂ HEMOLIZĂ
SERURILE HEMOLIZATE SAU LIPEMICE INFLUENŢEAZĂ REZULTATELE
STABLITATEA REACTIVILOR
LA 2-8C ŞI PROTEJAŢI DE LUMINĂ REACTIVII SUNT STABILI:
ÎNAINTE DE DESCHIDERE-PÂNĂ LA DATA EXPIRĂRII INDICATĂ PE CUTIE
DUPĂ DESCHIDERE-60 ZILE

MODUL DE LUCRU
PREPARAREA ŞI STABILITATEA REACTIVILOR DE LUCRU
 DIZOLVAŢI REACTIVUL R2 ÎNTR-O CANTITATE EGALĂ DE
REACTIV R1
 STABILITATEA LA 20-25C 5 ZILE
LA 2-8C 28 ZILE
 DACĂ ABSORBANŢA REACTIVILOR DE LUCRU LA 334 nm ESTE
MAI MICĂ DE 1,2 REACTIVUL NU POATE FI FOLOSIT.

CONDIŢII DE PĂSTRARE
  340 (334-365) nm
 TEMPERATURĂ 37C
 CUVETE 1cm
 METODA CINETICĂ

CALIBRAREA (37C,METODA FĂRĂ PIRIDOXAL FOSFAT)

S1:APĂDISTILATĂ
S2:Roche C.F.A.S.(CALIBRATOR PENTRU SISTEME AUTOMATE) sau
RANDOX SER DE CALIBRARE NIVEL 1 sau
RANDOX SER DE CALIBRARE NIVEL 2.
FRECVENŢA CALIBRĂRII:SE RECOMANDĂ CALIBRAREA ÎN 2 SITUAŢII:
-DUPĂ SCHIMBAREA LOTULUI DE REACTIVI
-CONFORM PROCEDURILOR DIN CONTROALELE DE CALITATE.

LINEARITATE-PÂNĂ LA 300 U/l

SENSIBILITATE: ÎN CONDIŢII MANUALE O MODIFICARE A
ABSORBANŢEI LA 334nm DE 0,001 UNITĂŢI/MIN CORESPUNDE CU VALORI
AST DE 1,79 U/l
SPECIFICITATE URMĂTOARELE SUBSTANŢE POT INTERFERE CU
DETERMINAREA UREEI:BILIRUBINA (LA VALORI PESTE 0,5 g/l),GLUCOZA
(PESTE 10 g/l) ŞI ACIDUL ASCORBIC (PESTE 0,1g/l).