LABORATOR

DETERMINAREA CONȚINUTULUI TOTAL DE POLIFENOLI

(METODA FOLIN CIOCÂLTEU)

Pentru această determinare este necesară trasarea curbei de calibrare a spectrofotometrului și

determinarea ecuației de regresie.

1. Curba de calibrare. Ecuația de regresie

1.1. Prepararea soluțiilor de acid galic

Materiale, echipamente
- acid galic
- etanol / metanol
- apă distilată
- balanță analitică
- pisete, pipete, baloane cotate 100mL

Prepararea solutiei stoc

Mod de lucru
Se dozează 0.500 g acid galic și se introduc în balon cotat 100 mL.
Se adaugă solvent (etanol 96%) sau apă distilată până la semn. Titrul soluției stoc este 5mg
acid galic / mL.
Preparare soluții etalon
Se preparaă 7 soluții etalon utilizând volume de soluție stoc și volume de etanol indicate în
tabelul 1.

1.2. Determinarea absorbanțelor probelor la 725 nm

Probele din cele 7 baloane cotate se citesc la spectrofotometru, iar valorile obținute se introduc
în tabelul 1.

Tabelul 1
Absorbanța 725nm
Nr Volum Volum sol stoc Absorbanța dupa parcurgerea Concentrația (mg
balon solvent (mL) acid galic (mL) 725nm etapelor metodei acid galic/mL)
Folin Ciocâlteu
1 100 0 0
2 95 5 0.25
3 90 10 0.5
4 85 15 0.75
5 80 20 1
6 75 25 1.25
7 70 30 1.5
 1.3. Determinarea absorbanțelor probelor etalon după parcurgerea etapelor din
metoda Folin Ciocâlteu

Principiul metodei
Compușii fenolici din probe sunt oxidați de reactivul Folin Ciocâlteu (un amestec de acid
fosfotungstic, H3PW12O40 și acid fosfomolibdic, H3PMo12O40 care, după oxidarea fenolilor, este redus
la un amestec de oxizi de tungsten, W 8O23 și molibden Mo8O23). Culoarea albastră produsă are o
absorbanță maximă la lungimea de undă 725 nm și este proporțională cu cantitatea totală de compuși
fenolici prezenți inițial în probă.
Materiale, echipamente
- reactiv Folin Denis (Folin Ciocâlteu) (1:10)
- soluție carbonat de sodium 7,5%
- spectrofotometru
- pisete, pipette, eprubete
Mod de lucru
Într-o eprubetă se introduc 0,5 ml soluție acid galic şi 1,5 ml reactiv Folin Denis (1:10). Se
lasă în repaus 5 minute şi apoi se adaugă 2 ml soluţie carbonat de sodiu 7,5 %. Se lasă în repaus 90
minute şi apoi se citeşte absorbanţa la 725 nm.
Valorile obținute se introduc în tabelul 1.

1.4. Trasarea curbei de calibrare

Pe baza valorilor din tabelul 1 se trasează curba de calibrare și se determină ecuația de regresie
(se trasează graficul Absorbanțe la 725nm în funcție de concentrația soluțiilor etalon de acid galic).

2. Determinarea conțintului total de polifenoli

Un ml din produsul lichid supus testarii (extract) se omogenizează cu 10 ml etanol 96%, se

agită puternic timp de 2-3 minute şi se filtrează prin filtru cutat. Într-o eprubetă se introduc 0,5 ml
extract şi 1,5 ml reactiv Folin Denis (Folin Ciocâlteu) (1:10). Se lasă în repaus 5 minute şi apoi se
adaugă 2 ml soluţie carbonat de sodiu 7,5 %. Se lasă în repaus 90 minute şi apoi se citeşte absorbanţa
la 725 nm. (spectrofotometrul la care s-a realizat calibrarea). Conținutul total de polifenoli (exprimat
în mg acid galic echivalenți la mL) se determină pe baza curbei de etalonare obținute conform
metodei prezentate în paragraful anterior.
Formula de calcul utilizată pentru determinarea conținutului total de polifenoli din probele
care vor fi testate este următoarea:

CTP (mg echivalenți acid galic /mL proba) = [D x (A725nm-b)/a] x V

CTP= conținut total de polifenoli

D = diluția;
A725nm = absorbanța probei la lungimea de undă =725nm;
V = volumul folosit pentru extracție (10ml).
b= ....... (din ecuația de regresie / din curba de calibrare)
a=........(din ecuația de regresie / din curba de calibrare)
A725nm= (citirea la spectrofotometru).