Determinarea reziduurilor

medicamentoase(antibiotic) din miere

Tanasie Elena Roxana

1. Principiul Metodei
Metoda HPLC(cromatografie lichida de inalta performanta) aplicabila tuturor probelor
de miere,pentru determinarea prezentei oxitetraciclinei si tetraciclinei.Pregatirea
probei are la baza purificarea si extractia reziduurilor de tetraciclina din
miere,utilizand colonite MCAC.

2. Reactivi si materiale
-apa ultrapura
-acetonitril
-solutie de extractie(1.18 g de acid succinic se dizolva in 80 ml apa distilata,se
ajusteaza ph la 4 cu colutie NaOH si se aduce la semn cu apa in balon cotat de 100
ml).
-solutie NaOH
-alcool etilic absolut
-Rasina sepharose
-metanol
-Solutie eluenta pentru separarea cromatografica(faza mobila)
Faza mobila A: acid oxalic 0.01M(0.9 g adic oxilic anhidru se aduc la semn cu apa in
balon cotat de 1000 ml)
Faza mobila B: Acetonitril:Metanol 3:2

3. Echipamente de masurare
-balanta analitica Kern,precizie de 0.1/0.01mg
-sistem cromatografic in faza lichida de inalta performanta cu pompa binara
-sistem de extractie in faza solida de 24 locuri
-agitator magnetic
-agitator orbital Biosan
-centrifuga cu racire
-baloane cotate 10 ml,25ml,50ml,200ml,1000ml.
-pipete gradate
-pahare berzelius
-cilindri gradati
-hartie de filtru
 -eprubete cu dop

4. Mod de lucru
Se cantaresc 10 g de miere intr-o eprubeta cu dop. Se adauga 20 ml solutie de extractie
si se agita 10 minute pentru dizolvare,iar apoi se centrifugheaza 5 minute la 2040
rpm.Se pregateste sistemul Maniford de extractie in faza solida prin montarea
colonitelor cu frita si robinetul de plastic inchis.Se adauga 1,5 ml suspensie resina
sepharose,se asteapta decantarea rasinii,se deschide robinetul de plastic pentru
indepartarea solventului aflat deasupra rasinei.
Conditionarea cartusului SPE se realizeaza prin adaugarea succesiva a:6 ml apa
distilata,5 ml solutie CuSO4.Extractul se filtraza prin filtru de seringa si se injecteaza la
HPLC imediat sau se pastreaza la frigider 24 de ore.

5. Interpretarea rezultatelor
Se prepara cate o solutie stoc de standarde de oxitetraciclina si tetraciclina de 0.1
mg/ml(100 ppm) si se realizeaza apoi dilutii succesive cu faza mobila pentru obtinerea
concentratiilor:75,50,40,30,20,10,5 µg/l,care se injecteaa pe rand,in duplicat,la
HPLC.Dupa inregistrarea cromatogramelor,se construiesc curbele de calibru,care se
vor utiliza in determinarea concentratiilor necunoscute de tetraciclina din probele de
miere analizate.
Continutul de reziduri de oxitetraciclina sau tetraciclina al probei se calculeaza prin
compararea ariei semnalului corespunzator probei cu cea data de solutia
standard,tinand cont de dilutie.Exista o proportinalitate directa intre concentratie si
aria semnalului dat de aceasta.

Concentratie reziduri( µg/kg)=(Veluare/mproba)xCc

Veluare- volumul de eluare(3 ml)
Mproba-masa probei de miere(g)
Cc – concentratia citita pe curba de calibrare
 Bibliografie

1.PO-–APHIS–-08-Determinare-Tetracicline-ISV
2. http://www.veterinarypharmacon.com/docs/982-2011-ART.%2010.pdf
3. http://usamvcluj.ro/files/teze/2011/bonta.pdf