1

GC-MS
Cromatografia gazoasă-spectrometrie de masă este tehnica analitică bazată pe utilizarea
unui gaz cromatograf cuplat la un spectrometru de masă .
GC: Ca toate cromatografiile, se bazează pe distribuția diferită a diferitelor substanțe între o
fază staționară și o fază mobilă, în funcție de afinitatea fiecărei substanțe cu faza staționară.
Singura limitare majoră a gazului de cromatografie este reprezentată de faptul că eșantionul
trebuie să fie volatil într-un interval de temperatură între ambiant și 350 ° C, temperatura
atinsă de cuptoarele obișnuite ale instrumentelor de pe piață și compatibilă cu coloanele
cromatografice utilizate. Cu toate acestea, există o serie lungă de aplicații (începând cu
analiza compușilor volatili și a gazelor în sine) care fac prezența cromatografului gazos
foarte utilă în fiecare laborator de analize.
Mecanismele de bază de separare care sunt exploatate în cromatografia de gaze sunt
adsorbția și distribuția (între faze):

 adsorbție: faza staționară este un solid pe a cărui suprafață există situsuri active capabile
să stabilească o serie de legături secundare (dipol-dipol, punte de hidrogen, Van der
Waals, dipol-dipol indus etc.) cu diferitele molecule ale amestecului pentru a fi rezolvat,
vorbim deci de cromatografie gazo -solidă (GSC).
 distribuție: dacă faza staționară este lichidă, are loc o solubilizare reală a substanțelor în
faza staționară, care sunt împărțite între cele două faze nemiscibile. Vorbim despre
cromatografie gaz-lichid (GLC).
Faza staționară constă în general dintr-un lichid nevolatil sprijinit pe o pulbere care umple
uniform o coloană („coloană ambalată”) sau distribuită ca o peliculă subțire cu câțiva
micrometri grosime pe peretele intern al unei coloane în mod normal mai mare de 10 metri și
în diametru mai mic de un milimetru („coloană capilară”). Acest lichid poate varia în funcție
de aplicație, adică de tipul de compuși de analizat.
Faza mobilă este un gaz , numit și gaz purtător , gaz purtător sau gaz purtător. În general,
sunt selectate gaze inerte chimic, cu vâscozitate scăzută și care pot fi obținute la puritate
ridicată (99,9%), cum ar fi azotul , heliul sau argonul ; hidrogenul sau dioxidul de carbon
sunt de asemenea utilizate pentru unele aplicații. Derivatizarea permite creșterea volatilității
anumitor analiți, astfel încât aceștia să poată fi supuși analizei cromatografice gazoase într-un
mod adecvat. Prezența apei trebuie limitată, deoarece poate contribui la deteriorarea fazei
staționare sau poate deteriora detectorul, desigur, totul depinde de tipul de analiză, de
coloană și de solventul utilizat.
Cromatograful de gaze separă compușii prezenți în probă în timp ce spectrometrul de masă
funcționează ca un detector. Componentele principale ale unui cromatograf de gaz sunt faza
 2

mobilă, o sită moleculară, coloana și în cadrul acesteia faza staționară pe lângă un detector. GC
se efectuează în felul următor:
Proba este introdusă mai întâi în cromatograful de gaze (GC) chiar înainte de coloană, adesea
folosind o seringa. Moleculele sunt separate în funcție de modul în care interacționează cu faza
staționară. Asemenea separă, de aceea coloanele nepolare sunt bune pentru separarea analiților
nepolari, iar coloanele polare sunt bune pentru separarea analiților polari. Apoi, odată ce
diferitele componente ale probei ies din coloană, acestea sunt detectate și rezultatele sunt afișate
într-o cromatogramă de gaze, DAR în plus intră și în partea de spectrometrie de masă a
dispozitivului pentru analize ulterioare. Deși toate spectrometrele de masă ionizează și apoi
separă proba introdusă pe baza raportului său masă-încărcare, modul în care fac acest lucru
variază de fapt destul de mult. În cazul GC-MS, o metodă comună de spectrometrie de masă este
spectrometria de masă cu patru poli.
Pe scurt, proba este mai întâi ionizată folosind ionizarea electronică, care practic este doar
bombardarea eșantionului cu electroni până când se ionizează.Apoi proba intră în partea
analizorului de masă a dispozitivului. Aici 2 câmpuri electrice cauzate de cele 4 tije paralele
încep să afecteze proba ionizată. Aceste câmpuri magnetice fac ionii să oscileze în funcție de
raportul lor masă-încărcare. Variind puterea acestor 2 câmpuri magnetice, ionii de diferite
dimensiuni pot fi selectați de analizorul de masă.
GC-MS: Începând cu cromatograma gazoasă, acesta afișează vârfurile curentului generat de la
detector față de timpul de retenție. Cu alte cuvinte, cât de mult eșantion iese din coloană, cât timp
durează componenta eșantion să înceapă să iasă din coloană din momentul în care a fost
introdusă în ea și cât timp iese din coloană din momentul în care începe să iasă din ea. Zona de
sub vârf ne oferă informații despre concentrația probei. Mai multă zonă, mai multă concentrare și
mai puțină zonă, mai puțină concentrare.Apoi, spectrometria de masă oferă o altă dimensiune în
care putem analiza în continuare aceste vârfuri diferite. Prin selectarea oricăruia dintre vârfurile
din cromatograma gazoasă, obținem un grafic spectrului de masă al acelui vârf specific cu
informații detaliate despre raportul masă-încărcare al componentelor constitutive care alcătuiesc
acel vârf. În acest fel, chiar și atunci când nu avem informații anterioare despre un anumit vârf în
cromatograma gazoasă, putem utiliza graficul spectrului de masă din partea de spectrometrie de
masă a dispozitivului pentru a determina substanța specifică în cauză.
GC-MS (Cromatografie gazoasă-spectrometrie de masă) este un instrument care combină
utilizarea cromatografiei în gaze și a spectrometriei de masă. Spectrometria de masă poate
efectua analize calitative eficiente, dar este neputincioasă pentru analiza compușilor organici
complecși; în timp ce cromatografia este o metodă eficientă de separare și analiză pentru
compușii organici și este deosebit de potrivită pentru a efectua analize cantitative ale compușilor
chimici organici, dar analizele calitative sunt mult mai dificile. Prin urmare, combinația eficientă
a acestor două va oferi cu siguranță chimiștilor și biochimiștilor un instrument eficient de analiză
calitativă și cantitativă pentru compuși organici complecși. Combinația a două sau mai multe
 3

metode ca aceasta se numește tehnică de cuplare, iar instrumentul care combină un gaz
cromatograf și o masă spectrometru se numește spectrometru gaz-masă.
Cromatografia gazoasă-spectrometria de masă este utilizata pe scară largă în izolarea și
caracterizarea constituenților complecși. Datorită rezoluției înalte a GC și sensibilităților mari ale
spectrometriei de masă, acestea sunt instrumente eficiente pentru calificarea și cuantificarea
produselor farmaceutice și a unui metabolit în specimenele biologice. Părțile de bază ale unui
spectrometru de masă sunt: o sursă de ioni, un filtre de masă și o detecție, care sunt plasate într-o
conductă principală de vid.
Structura GC-MS

Dispozitivul GC-MS este compus în principal din următoarele părți: parte cromatografică,
interfață gaz-masă, parte spectrometru de masă (sursă de ioni, analizor de masă, detector) și
sistem de procesare a datelor.

Secțiunea cromatografică este practic aceeași cu cromatograful general, incluzând camera

coloanei, camera de gazeificare și sistemul de gaz purtător. Cu excepția nevoilor speciale,
majoritatea nu mai sunt echipate cu detectoare, dar MS este folosit ca detector. În plus, secțiunea
cromatografică are și un sistem de injecție split/non-split, sistem programat de creștere a
temperaturii, sistem automat de control al presiunii și debitului etc. Rolul principal al secțiunii
cromatografice este separarea, unde proba de amestec este separată în componente individuale.
în condiții cromatografice adecvate și apoi introduse în spectrometrul de masă pentru
identificare. Cromatografele funcționează la presiunea atmosferică, în timp ce spectrometrele de
masă necesită vid înalt, așa că dacă cromatograful folosește o coloană compactă, aceasta trebuie
să treacă printr-un dispozitiv de interfață - un separator molecular - care îndepărtează gazul
purtător cromatografic și permite gazului eșantionului să intre în spectrometrul de masă. Dacă
cromatograful folosește o coloană capilară, capilarul poate fi introdus direct în sursa de ioni a
spectrometrului de masă deoarece debitul de gaz purtător în capilar este mult mai mic decât cel al
unei coloane compacte și nu va distruge vidul spectrometrului de masă.

Interfața gaz-masă este componenta de conectare de la GC la MS. Cea mai comună metodă de
conectare este metoda de conectare directă, în care coloana capilară este introdusă direct în
spectrometrul de masă și etanșată cu o garnitură de grafit (85% Vespel + 15% grafit). Interfața
trebuie încălzită pentru a preveni condensul componentelor separate, iar temperatura interfeței
este în general setată la valoarea maximă a programului GC.

Spectrometrul de masă este atât un detector de uz general, cât și unul selectiv. Ionizează
moleculele eșantionului din secțiunea sursă de ioni pentru a forma ioni și fragmente de ioni, care
sunt apoi separați de analizorul de masă în funcție de raportul masă-încărcare, iar în cele din
urmă semnalul este generat în secțiunea detector și amplificat și înregistrat la obţine spectrele de
masă.
 4

Funcția sursei de ioni este de a primi proba pentru a produce ionul, iar modalitățile comune de
ionizare:
EI (ionizarea prin impact de electroni) este una dintre cele mai frecvent utilizate surse de ioni.
Moleculele organice sunt bombardate de un flux de electroni (în general 70 eV în energie) și
pierd un electron exterior pentru a forma ioni moleculari încărcați pozitiv (M+), care se
fragmentează în diverși ioni fragmentare, ioni neutri sau radicali liberi. Sub acțiunea unui câmp
electric, ionii pozitivi sunt accelerați, focalizați și analizați într-un analizor de masă.
Caracteristici:

 Structură simplă, ușor de operat.

 Spectrul este caracteristic și fragmentarea moleculară a compusului este mare, ceea ce

poate oferi mai multe informații și este foarte benefică pentru identificarea și rezoluția
structurii compusului.
 (3) Picurile ionilor moleculari obținute nu sunt puternice și uneori nu pot fi identificate.
 (4) Metoda nu este potrivită pentru compuși cu greutate moleculară mare și instabili
termic.

CI (ionizarea chimica) în GC-MS amestecă gazul de reacție (metan, izobutan, amoniac etc.) cu
proba într-un anumit raport și apoi efectuează bombardarea cu electroni. Moleculele de metan
sunt mai întâi ionizate pentru a forma ioni primari și secundari, iar acești ioni reacționează apoi
cu moleculele eșantionului pentru a forma ioni (M+1) care sunt cu un număr de masă mai mare
decât moleculele eșantionului sau numiți ioni cvasi-moleculari. Ionul excimer poate pierde, de
asemenea, un H2 pentru a forma un ion (M-1).
Caracteristici
(1) Schimbul puternic de energie nu are loc ca în EI, cu mai puțină rupere a legăturilor chimice și
o formă spectrală simplă.

 (2) Vârful ionului molecular este slab, dar vârful (M+1) este puternic, ceea ce oferă
informații despre greutatea moleculară.
 (3) Ionizarea câmpului (FI) este potrivită pentru ionizarea moleculelor volatile, cum ar fi
carbohidrați, aminoacizi, peptide, antibiotice, amfetamine etc. Poate produce vârfuri
puternice de ionizare moleculară și vârfuri de ionizare cvasi-moleculară.

FD (ionizare prin desorbtie in camp) este utilizat pentru compuși care sunt foarte polari, greu de
gazeificat și instabili la încălzire. Ionizarea chimică cu ioni negativi, NICI
NICI este o metodă de ionizare dezvoltată pe baza ionilor pozitivi MS, care dă vârfuri
caracteristice de ioni negativi cu o sensibilitate ridicată (10-15 g).

2. Analiza de masa: Într-un gaz cromatograf, analiza masei este utilizată pentru a separa ionii
generați în camera de ionizare prin raportul masă-încărcare (m/z) pentru detectarea
 5

spectrometrică de masă. Analizatoarele de masă obișnuite sunt:

2.1. Analizorul cvadrupol este format din patru electrozi cilindrici paraleli, care sunt împărțiți
în două grupuri, respectiv cu tensiune DC și tensiune AC de o anumită frecvență. După ce ionii
eșantionului intră în câmpul electric de-a lungul direcției axiale dintre electrozi, ei oscilează între
electrozii cu polaritate opusă și numai ionii cu raporturi masă-încărcare într-un anumit interval
pot trece prin cvadrupol și ajunge la detector, în timp ce restul ionilor se ciocnesc cu electrozii
din cauza amplitudinii excesive și sunt neutralizați de descărcare și apoi sunt atrași. Prin urmare,
prin schimbarea tensiunii sau a frecvenței, ionii cu diferite rapoarte masă-încărcare pot ajunge pe
rând la detector și pot fi separați și detectați.
2.2. Analizorul de masă din sectorul magnetic este accelerat de câmpul electric în câmpul
magnetic, mișcarea orbitei ionice îndoită, deviația orbitei ionice poate fi exprimată prin formula:
când H, V este sigur, doar un anumit raport masă-încărcare de ioni pot trece prin fantă pentru a
ajunge la detector. Analizorul de masă cu sector magnetic se caracterizează prin rezoluție scăzută
și dificultate în rezolvarea ionilor de aceeași masă și energii diferite.

2.3. Testul de masă cu focalizare dublă constă dintr-un analizor electrostatic și un analizor
magnetic. Analizorul electrostatic permite trecerea ionilor cu o anumită energie și focalizarea în
funcție de diferite energii, care intră succesiv în analizorul magnetic și sunt focalizați de două
ori, îmbunătățind foarte mult rezoluția.

2.4. Principiul unui detector cu capcană de ioni este similar cu un analizor cvadrupol, dar
permite ionilor stocați în puț, să modifice tensiunea electrodului, astfel încât ionul să se miște
atât în sus, cât și în jos pentru a intra în detector prin intermediul unui mic orificiu la bază.
Funcția detectorilor este de a transforma razele ionice în semnături electrice și de a mări
semnalele, detectorul folosit în mod obișnuit este un multiplicator de electroni. Când ionii lovesc
detectorul cauzat de suprafața electrodului multiplicator, au ejectat câțiva electroni, au fost
ejectați din cauza diferenței de potențial au fost accelerați la al doilea electrod multiplicator, au
ejectat mai mulți electroni, astfel acțiune continuă, fiecare coliziune de electroni următorul
electrod poate ejecta 2 ~ 3 electroni De obicei, multiplicatorul de electroni are un electrod
multiplicator de 14 niveluri, poate îmbunătăți foarte mult sensibilitatea de detectare.

2.5. Sistem de vid:. Funcția principală a pompei de vid pre-etapă este de a oferi un mediu de
funcționare pentru pompa de vid înalt, care este de obicei o pompă mecanică cu palete rotative.
Pompa de vid înalt include în principal pompă de difuzie a uleiului și pompă turbo moleculară,
iar aplicația principală este pompa moleculară turbo în prezent.

Principalii indicatori de performanță ai GC-MS: Indicatorii generali de performanță ai

cromatografului în gaze sunt următorii: domeniul de masă, rezoluția, sensibilitatea, precizia
masei, viteza de scanare, stabilitatea axei masei și domeniul dinamic.
 6

Intervalul de masă se referă la masele cele mai mici și mai mari care pot fi detectate și determină
domeniul de aplicare al instrumentului, în funcție de tipul de analizor de masă. Analizorul de
masă cu patru poli are un interval de masă inferior de la 1 la 10 și un interval de masă superior de
la 500 la 1200.

 Rezoluția este capacitatea unui spectrometru de masă de a rezolva două mase de ioni
adiacente, iar tipul de analizor de masă determină puterea de rezoluție a spectrometrului de
masă. Rezoluția unui analizor de masă cu patru poli este în general rezoluția pe masă.
 Sensibilitate: Analizoarele de masă de gaz utilizează în general octafluoronaftalenă ca
compus pentru testarea sensibilității, iar ionii cu număr de masă 272 sunt selectați pentru a fi
exprimați ca raportul semnal-zgomot (RMS) de 1 pg octafluoronaftalină. Nivelul de
sensibilitate nu este legat doar de performanța cromatografului de gaze, dar și condițiile de
testare au un impact asupra rezultatelor.

 Precizia de masă este determinarea acuratetii masei ionice și depinde de tipul analizorului de
masă cât și de rezoluție.

 Viteza de scanare, definită ca numărul maxim de mase scanate pe secundă, este un parametru
fundamental pentru achiziția de date și are un impact semnificativ asupra obținerii de spectre
rezonabile și forme bune de vârf.
 Stabilitatea axei de masă se referă la măsura în care scara de masă este deplasată într-un
anumit timp în anumite condiții și este, în general, exprimată în general ca modificarea unei
anumite valori de măsurare a masei în 24 de ore.Intervalul dinamic determină domeniul de
concentrație al cromatografului de gaze.

Spectrometria de masă este o tehnică analitică prin care speciile chimice sunt ionizate și sortate
pe baza raportului masă / sarcină (m/z). Spectrometria de masă este utilizată în diferite ramuri și
poate fi aplicată atât pentru substanțe pure, cât și pentru amestecuri complexe. Cu ajutorul acestei
tehnici se pot măsura masele moleculare relative ale unor compuși unitari, dar se și pot pune în
evidență anumite specii atomice și grupe funcționale. Cel mai puternic vârf din spectrograma de
masă se numește vârf de bază, iar intensitatea lui este specificată ca 100%, iar celelalte vârfuri
sunt folosite pentru a determina intensitățile lor relative.

- metoda de caracterizare utilizata intens in caracterizarea macromoleculelor sintetice sau

naturale: informatii despre compozitie, distributia masei moleculare
- principiul: transformarea ionilor din faza lichida → ioni in faza gazoasa, accelerarea si
separarea acestora functie de raportul m/z, detectia si inregistrarea spectrului
 7

Speciile ionice formate sunt separate pe baza masei lor şi înregistrate. Rezultatul se prezintǎ sub
forma unor linii (picuri) repezentând abundenţa ionilor în funcţie de masa lor. Prin definiţie celui
mai abundent ion i se atribuie valoarea 100, restul reprezentând procente din aceastǎ abundenţǎ.
Acest pic este denumit pic de bazǎ = PB. Picul corespunzǎtor masei moleculare a compusului
iniţial (de fapt ionului molecular) este denumit pic molecular = PM.

Producerea ionilor: În urma procesului de ionizare rezultǎ particule foarte reactive care trebuie
separate în funcţie de masa lor. Pentru evitarea coliziunilor şi a reacţiilor posibile datorate
acestora, în sistemul de generare şi în analizorul care urmeazǎ este necesar vid înaintat (~ 10-6
mmHg) Practic existǎ douǎ metode de producere a ionilor:

1. Impactul electronic: Compuşii organici conţin e - perechi în orbitali de legǎturǎ  interacţiunea

cu fascicolul de electroni va determina eliminarea unui electron rezultând un radical-cation
molecular. Uneori se poate produce capturarea unui electron din fascicol pe un orbital vacant. În
aceastǎ situaţie se va obţine un radical-anion molecular. Acest proces are loc cu o frecvenţǎ de
104 ori < practic nu prezintǎ interes. Avantaj: Fragmentarea produsǎ determinǎ apariţia multor
ioni cu mase mai mici astfel încât se poate urmǎri procesul de fragmentare şi de aici reconstrucţia
structuralǎ a moleculei. Metoda este cu atât mai utilǎ cu cât existǎ deja biblioteci de fragmente
astfel încât spectrul realizat se poate compara cu baza de date. Dezavantaj: De multe ori lipseşte
ionul molecular, deci nu se poate determina masa molecularǎ. Acest lucru este datorat energiei
mari implicate în bombardarea cu fascicol de electroni.

2. Ionizarea chimicǎ: Rezolvǎ parţial dezavantajul ionizǎrii prin impact electronic. Metoda
presupune utilizarea unui compus iniţial care se supune impactului electronic, dar cu un fascicol
de electroni cu energie mult mai mare (~300 eV) şi presiune de aprox 1 mmHg. Moleculele
folosite în aceastǎ etapǎ sunt dintre cele care nu se fragmenteazǎ sau a cǎror fragmentare este
uşor de urmǎrit: metan, izopropan, amoniac.
 8

-ESI (electrospray ionization)– este o metodă de ionizare moale care permite formarea ionilor
moleculari (aproape exclusiv). În plus permite determinarea maselor moleculare pe baza unor
probe foarte mici. De asemenea permite detecția cationilor și anionilor. Se aplică în special
compușilor organici cu masă moleculară medie și mai ales moleculelor „biologice” (peptide,
proteine, zaharide, ologonucleotide, etc.).

- MALDI (Matrix Assisted Laser Desorption)- Este o metodă nedistructivă de vaporizare și

ionizare, care poate fi folosită atât la moleculele mici cât și la biomolecule. În această tehnică,
proba este obținută prin amestecarea compusului de analizat cu un material capabil sa absoarbă
radiație luminoasă (matricea, de ex. Un acid organic slab) în raport molar de aprox 1:5000 (un
exces foarte mare al matricii). O picătură din soluția obținută este depusă pe o placă metalică și
lăsată să se usuce permițând ca proba și matricea să rămână în stare cristalină (co-cristalizare).

Pentru funcționarea corectă a instrumentului spectrometrului de masă, este necesar să se

compună o cameră de vid pentru un sistem de vid înalt. Instrumentul folosește o pompă
turbomoleculară de înaltă performanță cu o pompă de vid pre-etapă pentru a forma o unitate de
vid în două trepte pentru a asigura vidul necesar. Proba analizată este separată de o coloană
capilară și intră în sursa de ioni. O configurație standard alimentată electronic (EI) este utilizată
pentru a genera ioni pozitivi, care sunt alimentați în sistemul cvadrupol prin acțiunea electrozilor
de împingere-repulsie, focalizare și plumb. Cvadrupolul formează un câmp electric de înaltă
frecvență sub acțiunea combinată a tensiunii de înaltă frecvență și a tensiunilor pozitive și
negative. Sub acțiunea tensiunii de scanare, numai ionii conformi cu ecuația de mișcare a
câmpului cvadrupol pot ajunge la detectorul de ioni prin centrul de simetrie a cvadrupolului, care
este apoi amplificat de un amplificator de flux ionic pentru a produce un semnal de spectrometrie
de masă. Se obțin spectre de masă, iar compoziția probei necunoscute este identificată prin
interpretarea spectrelor sau efectuarea unei căutări în bibliotecă spectrală.

Un sistem tipic GC-MS :Proba de analizat este separată inițial de o coloană GC cu un gaz
purtător (hidrogen sau heliu), iar componentele din coloană sunt transferate prin modulul de
interfață GC-MS către unitatea sursă de ioni a modulului MS, unde sunt ionizat pentru a forma
 9

ioni care sunt analizați prin analiza masei din modulul MS. Datele obținute în urma analizei sunt
prelucrate și afișate de către modulul de prelucrare a datelor al platformei GC-MS, iar căutarea și
compararea bazelor de date sunt efectuate. Datele obținute în urma analizei sunt prelucrate și
afișate de către modulul de prelucrare a datelor al platformei GC-MS, iar căutarea și compararea
în baza de date sunt efectuate. Întreaga secvență de proces implicată în analiză este controlată și
coordonată de modulul de control al instrumentului al platformei GC-MS.

Clasificarea cromatografelor de gaze poate fi împărțită în funcție de principiul de funcționare al

analizorului de masă:

1. Cromatograf cu gaze cvadrupol

2. Cromatograf gazos cu capcană de ioni
3. Cromatografe în timp de zbor, 4. Spectrometru gaz-masă cu transformată Fourier