HISTOLOGIE

Lucrare practic 1
 HISTOLOGIA
tiina care se ocup cu studiul structurii
microscopice a celulelor, esuturilor i organelor

Compartimente:
Citologia
Histologia general: studiul esuturilor
Histologia special: studiul organelor: org. tubulo-
cavitare, org. parenchimatoase

Legturi:
Biologia celular
Histopatologia
 HISTOLOGIA
Ramuri:

Histologia de diagnostic
Obine continuu date privitoare la structura i funcia
unui anumit esut sau organ

Histologia de cercetare
Evideniaz i studiaz:
- o categorie celular / tisular nedescoperit nc
- modul de comportament al celulelor i esuturilor n
condiii fiziologice i patologice neexplorate
 HISTOLOGIA

ESUTURILE
Structuri supracelulare alctuite din celule unite
ntre ele printr-o substan intercelular
Celulele ndeplinesc n organism aceeai funcie sau
acelai grup de funcii.
4 categorii de esuturi: epitelial, conjunctiv,
muscular, nervos
esuturile alctuiesc ORGANE
 Metode de studiere a celulelor i
esuturilor

Metode utilizate n practica clinic

Metode utilizate n cercetare

 I. Metode utilizate n practica clinic

Coloraia uzual Hematoxilin-eozin

Coloraiile speciale
Examenul microscopic extemporaneu
Coloraiile imunohistochimice
 Preparatul microscopic
Totalitatea obiectelor pregtite pentru a fi
examinate la aparate optice mritoare n vederea
studierii structurii lor.
Componentele:
1. Obiectul
2. Suportul: lama
3. Lamela
Sunt de 2 tipuri: extemporanee i permanente
 Preparatul microscopic
I. Recoltarea
Biopsie
Necropsie
De la animale
 Preparatul microscopic
Recoltarea
Excizia
Incizia
Rezecia
Puncia biopsie
 Preparatul microscopic
II. Fixarea
Piesa e introdus n fixatori care previn degradarea
enzimatic (autoliza) i pstreaz intact structura
tridimensional a esutului.

Formaldehida

Fixatorii acioneaz asupra proteinelor din esuturi

prin 3 mecanisme: denaturare, coagulare i
precipitare
 Preparatul microscopic
Fixarea
Aspectul unui fragment de esut dup fixare
 Preparatul microscopic
III. Splarea
ndeprteaz excesul de fixator
Se face cu ap sau alcool (deshidratarea)

Decalcificarea
Preparatele de os sau dinte
Se face cu acizi i rini schimbtoare de ioni sau
prin electroliz
 Preparatul microscopic
IV. Includerea n parafin
Piesa e mbibat i nglobat ntr-o substan
solidificabil, denumit mas de includere.
Piesa devine rigid i poate fi secionat n felii de
ordinul m (5m).

Aceast secionare este necesar pentru a permite luminii s treac prin

preparatul microscopic i apoi s ajung la ochiul obsevatorului, care
va examina imaginea microscopic a esutului
 Preparatul microscopic
Includerea n parafin
Etape:
1. Deshidratarea- introducerea n bi de alcool de
concentraii crescnde alcoolul va nlocui apa din
esut;
2. Clarificarea cu solveni organici (xilen, toluen) miscibili
att n alcool ct i n parafin, vor scoate alcoolul din
esut
3. mbibarea cu parafin: parafina topit intr n celule
esutul va fi complet inclus n parafina care se va
ntri i va forma un bloc solid ce conine esutul;
4. Includerea propriu-zis
Preparatul microscopic
Includerea n parafin

esuturi incluse n blocuri de parafin

Preparatul microscopic
V. Secionarea
Preparatul microscopic
Secionarea
 Preparatul microscopic
VI. Colorarea
Evideniaz elementele structurale
Coloranii histologici se fixeaz pe anumite componente
structurale
Colorani artificiali: derivai din hidrocarburi aromatice i, n
funcie de natura cromoforului, pot fi:
1. Bazici: albastrul de metilen, albastrul de toluidin, fuxina
bazic
2. Acizi: eozina, fuxina acid, eritrozina, orange G
3. Neutri: eozinatul de azur de metilen
4. Indifereni: Sudan III, Scharlach Roth
Colorani naturali: carminul, hematoxilina, orceina
 Preparatul microscopic
Colorarea
Bazofilie
Acidofilie

Neutrofilie

Termeni care se refer la afinitatea tinctorial (de

coloraie) a diferitelor elemente fa de baze,
acizi sau substane neutre.
 Preparatul microscopic
Colorarea
Clasificarea coloraiilor
1. Dup electivitate: difuze i elective

2. Dup modul de aciune: directe i indirecte

3. Dup procedeul de executare: progresive i

regresive
4. Dup numrul de colorani folosii: simple i
combinate: succesive sau simultane
Coloraia ortocromatic
Coloraia metacromatic
 Preparatul microscopic
Coloraia HE
Coloraie uzual (95% din lame); e o metod direct,
progresiv, combinat, succesiv, ortocromatic.

Hematoxilina-colorant bazic- coloreaz n ALBASTRU

structurile bazofile: acizii nucleici- ADN-nucleu; ARN-
ribozomi
Eozina colorant acid- coloreaz n ROU structurile
acidofile sau eozinofile: proteinele n citoplasm i n
matricea extracelular

Structurile cu coninut ridicat de substane lipidice (celule

adipoase, mielina) rmn optic vide;
 Preparatul microscopic
Coloraia HE
Celulele: funcia biochimic i distribuia elementelor
componente.

Nucleii
Celulele tinere sau/i active metabolic, prezint nucleii
eucromi sau hipocromi (eucromatina este palid).
Celulele adulte sau mbtrnite, cu activitate metabolic
redus, au nuclei hipercromi (heterocromatina inactiv se
coloreaz intens bazofil)
 Preparatul microscopic
Coloraia HE
Citoplasma
Celulele care sintetizeaz proteine conin numeroi
ribozomi liberi i RER bine dezvoltat i prezint un
aspect bazofil al citoplasmei (H coloreaz ARN din
ribozomi n albastru)
Celulele implicate n transportul de ioni conin
numeroase mitocondrii i prezint un aspect eozinofil
al citoplasmei (E coloreaz proteinele cationice:
citocromii n rou).
Fibrele musculare au aspect intens eozinofil datorit
fixrii eozinei pe proteinele contractile din miofibrile.
Preparatul microscopic
Coloraia HE
Preparatul microscopic
Coloraia HE
 Preparatul microscopic
Coloraii speciale
Tricrom Masson,
tricrom Mallory
- pune n eviden es.
conjunctiv
Fibrele de colagen se
coloreaz n verde,
respectiv albastru
 Preparatul microscopic
Coloraii speciale
Rezorcin Fuxin Weigert: fibrele elastice sunt
colorate n violet nchis
Orcein: fibrele elastice sunt colorate n maro nchis

RFW Orceina
 Preparatul microscopic
Coloraii speciale
Impregnarea argentic: pune n eviden fibrele de
reticulin, neurofibrilele din neuroni (maro/negru) i
cimentul intercelular n epitelii

Ficat-impregnare argentic esut nervos- impregnare argentic

 Preparatul microscopic
Coloraii speciale
Sudan III, Sudan negru, Scharlach Roth-
folosite pentru a pune n eviden lipidele n
esuturi, pe care le coloreaz n galben, negru i
respectiv rou.
!!! Fragmentele de esut
nu sunt preparate cu
solveni organici,
pentru a nu dizolva
subst. lipidice.
 Preparatul microscopic
Coloraii speciale
Coloraia PAS (Periodic Acid Schiff)
Coloreaz carbohidraii
n roz intens.
Evideniaz
membrana bazal
a epiteliilor.
 Preparatul microscopic
Coloraii speciale
Acidul osmic- coloreaz n brun/negru
substanele lipidice
Evideniaz teaca de mielin
 Preparatul microscopic
Coloraii speciale
Hematoxilina Feric Heidenheim- coloreaz n
negru miofibrilele i evideniaz aspectul striat al
fibrelor musculare.
 Preparatul microscopic
Coloraii speciale
esutul osos compact lefuit, montat n balsam de
Canada !!! Preparat necolorat
Preparatul microscopic

VII. Montarea

VIII. Etichetarea
 Preparatul microscopic
Examenul extemporaneu (la ghea)
Permite un diagnostic rapid (15-20 min), care
orienteaz decizia terapeutic chirurgical
Frecvent utilizat n chirurgia oncologic
Nu are precizia examenului histologic clasic
 Preparatul microscopic
-examenul extemporaneu-
 Imunohistochimia
-principiu-
Utilizeaz principiul antigen-anticorp (Ag-Ac)
pentru a identifica prezena/absena unor
proteine specifice la nivelul esuturilor.

anticorp secundar
(brun)
anticorp primar
(invizibil)

antigen cautat
 Imunohistochimia
Imunoperoxidaz Imunofluorescen
 II. Metode utilizate n cercetare
SEM - scanning electron microscopy