Sunteți pe pagina 1din 41

La final de secol XVIII, Mikhail Tswett a separat un amestec de pigmeni naturali n zone colorate

prin trecerea unui extract de plante peste o coloan umplut cu material adsorbant. Mai trziu a
folosit termenul de cromatografie pentru a descrie procesul prin care a realizat acest lucru. n ziua
de azi termenul de cromatografie a cptat un sens mult mai larg. Astzi prin cromatografie se
nelege ansamblul de procese prin care substanele ce se separ sunt supuse unor partiii de
echilibru ntre cele dou faze. n majoritatea cazurilor una dintre faze este staionar i cealalt
mobil.
De obicei cnd se folosete un gaz pe post de faz mobil, alegerile optime pentru faza staionar
sunt cele solide sau lichide. Cele dou tehnici ce rezult se numesc cromatografie-gaz-lichid i
cromatografie-gaz-solid. Prima este mai util i este n general mai rspndit ct vreme a doua
este mai intens folosit pentru a separa amestecuri foarte volatile sau gaze. n general termenul de
cromatografie de gaze este folosit pentru a denomina ambele situaii.
n cromatografia de gaze, un film subire de faz staionar este fixat n coloan i un gaz purttor
(faz mobil) este trecut continuu peste ea. Exist mai multe tipuri de astfel de coloane.

Coloanele mpachetate (packed columns) au cam 2-5 m lungime, un diametru interior de 1-5 mm, i
sunt umplute cu un suport granular inert, fiecare particul de suport fiind acoperit cu faz
staionar. Coloanele micro-mpachetate sunt o versiune mai mic a coloanelor mpachetate cu
diametru interior sub 1 mm i cu granule mai mici. Lungimea unei coloane este limitat din punct
de vedere practic de cderea de presiune pe care o genereaz datorit rezistenei pe care o opune la
trecerea gazului.
Coloanele de tip tub-deschis sunt n general de trei tipuri. Cel mai intens folosite sunt cele cu faza
staionar depus pe perei (wall-coated-open-tubular) n care faza staionar exist sub forma unui
film subire uniform ataat de periferia interioar a unui tub deschis (coloana). n cazul coloanelor
cu tub deschis cu strat poros (coloane PLOT - porous-layer-open-tubular), faza staionar este fixat
sub forma unui strat poros de pereii coloanei, poriunea central fiind liber. Porozitatea poate fi
obinut prin dou modaliti, fie prin tratarea chimic a peretelui coloanei, fie prin depunerea de
particule poroase dintr-o suspensie. Substratul poros poate fi un suport pentru faza staionar sau o
faz staionar n sine. Coloanele cu suport acoperit (SCOT-support-coated-open-tubular) sunt un

sub-tip de coloan PLOT. Materialele adsorbante uzuale sunt de tip polimer poros, oxid de aluminiu
i diverse tipuri de zeolii. Unele coloane de tip tub-deschis au dimensiunea diametrului interior
ntre 0,5 i 0,75 mm, totui ele nu pot fi privite ca nite tuburi capilare n adevratul sens al
cuvntului. De obicei termenul de coloane capilare este folosit pentru coloane al cror diametru nu
depete 0,35 mm, dei nici aceste nu sunt nite capilare reale.
C vorbim de coloane mpachetate sau de tip tub-deschis, coloana, care este n mod normal
conectat cu un capt la portul de intrare i cu un capt la detector, este ajustat la o temperatur
convenabil i prin ea este trecut n mod continuu un gaz purttor (faza mobil). n momentul n
care n partea conectat la portul de intrare este introdus un amestec de compui volatili, fiecare
component din acel amestec este supus unui proces de partiie de echilibru foarte dinamic ntre faza
staionar i faza mobil conform constantei sale de echilibru (Kc=cS/cM).
S lum cazul unei benzi de solut care trece printr-un punct din coloan n timp. Moleculele care se
afl n faza mobil sunt preluate de gazul purttor, ct vreme moleculele adsorbite n faza
staionar sunt micate de ctre frontul de gaz purttor pe o distan scurt, finit. n acel moment
din timp, constanta de distribuie nu are sens la captul benzii, unde cS este finit i cM este zero, i la
nceputul benzii, unde cS este zero i cM este finit. Pentru a se restabili constanta de distribuie de-a
lungul benzii, partiia predominant este dinspre faza staionar spre faza mobil la captul benzii,
i dinspre faza mobil spre faza staionar la nceputul benzii. Cu alte cuvinte, frontul de faz
mobil interfer cu distribuia, distrugnd echilibrul la nceputul i la sfritul fiecrei benzi de
solut, producnd o evaporare continu la captul coloanei i restabilizare la nceputul fiecrei benzi
pe msur ce avanseaz prin coloan. Deoarece toi soluii au valori diferite ale constantei Kc, este
evident c fiecare solut se va mica cu vitez diferit prin coloan.
Cantitatea de solut care este prezent n coloan la orice moment n timp este dependent de
presiunea de vapori net a acestuia. Moleculele care au o presiune de vapori mai mare vor trece n
faza mobil. Ele au un parcurs scurt prin coloan i vor iei la detector primele. Restul de solui vor
avea o presiune de vapori mai mic, fie datorit faptului c au un punct de fierbere mai ridicat, fie
datorit faptului c interacioneaz mai bine cu faza staionar, reducndu-i astfel volatilitatea n
condiiile cromatografice folosite. Moleculele individuale ale acestui solut intr mai puin frecvent
n faza mobil, concentraiile acestuia n faza mobil sunt mai mici, i vor aprea la detector dup
mai mult timp, n acest fel obinndu-se separarea.
Cromatografia de gaze este un fenomen care are de-a face cu volatilitatea componentelor, prin
urmare este aplicabil doar substanelor care pot fi volatilizate. Nu se aplic proteinelor sau
metalelor. Uneori o substan greu volatil poate fi analizat prin tehnici de cromatografie de gaze,
folosindu-se o conversie a acesteia ntr-un derivat mai volatil.
Separarea cromatografic este un proces ce depinde de constanta de partiie, care la rndul ei este
dependent de temperatur, iar o concluzie logic este c, n coloan, controlul termic riguros este
absolut esenial. Dac temperatura este prea joas, compuii rmn parial sau integral n faza
staionar i intr mai greu, sau deloc, n faza mobil. Nu se separ unul de altul i nici nu prsesc
coloana. Dac temperatura este prea mare, soluii petrec un timp prea mare n faza mobil i intr
rareori sau deloc n faza staionar, la ieirea din coloan rezultnd amestecuri neseparate sau
incomplet separate.
Dei acest concept simplificat de vizualizare a gradului de separare cromatografic ca un ansamblu
de vaporizrii i rezoluii ntre moleculele diferite de solut este foarte util pentru a nelege
conceptele de baz, trebuie totui evideniat faptul c acest tablou este doar unul dintre aspecte.
Procesul cromatografic este mai degrab un proces continuu i dinamic, nu o sum de procese
statice. n condiii cromatografice fixe, gradul de separare este o funcie de factorul de retenie al
solutului i de concentraia acestuia.
Presiunea de vapori a solutului este un factor important al separrii. Dac presiunea de vapori a
solutului este prea mare, acesta va petrece prea mult timp n faza mobil i nu se separ. Dac
presiunea de vapori este prea mic, solutul petrece prea mult timp n faza staionar, crescnd
nejustificat timpii de analiz i afectnd sensibilitatea. Temperatura coloanei este doar unul dintre
modurile n care se poate ajusta convenabil presiunea de vapori. O alt metod este prin alegerea

convenabil a fazei staionare. O faz staionar polar reduce presiunea de vapori a soluilor
polari prin intermediul interaciilor suplimentare a acestora, interacii ce pot fi de tip legturi de
hidrogen sau de tip dipol-dipol.
Majoritatea specialitilor n cromatografie sunt de acord c coloanele de tip tub-deschis (opentubullar - capilare) au o putere de separare mult superioar coloanelor mpachetate. Desigur, n
majoritatea cazurilor, se apeleaz la cromatografie tocmai pentru puterea de separare, aceasta fiind
considerat o caracteristic important. Exist totui multe cazuri n care o putere de separarea prea
nalt poate fi duntoare. Ca i exemplu, dac lum cazul unui amestec de 4 compui a cror
separare n mod normal pe o coloan capilar ar necesita 30 de minute, pe o coloan mpachetat cu
o faz staionar aleas n mod convenabil se poate obine separarea n doar 2 minute, iar timpul de
analiz n cele mai multe cazuri este esenial. Din acest motiv, dar nu numai din acest motiv, n
cazul cromatografiei, o soluie universal nu este posibil, de cele mai multe ori fiecare problem
necesitnd o soluie adaptat problemei. Dac puterea de separare este ceea ce se dorete de la
coloan, amestecul supus separrii fiind un amestec cu foarte muli compui, atunci o coloan
capilar este cea mai bun alegere. Dac avem de-a face cu un amestec cu puini compui, 3-4
compui, atunci coloana mpachetat este o alegere mai potrivit.
Un compus supus unui proces de separare cromatografic (un solut) prin injectarea n coloan este
imediat supus unui proces de partiie ntre faza staionar i faza mobil. Acest proces este guvernat
de constanta de distribuie:
Kc=masa de solut pe unitate de volum de faz staionar/ masa de solut pe unitate de volum de faz
mobil
Kc este o constant de echilibru a crei magnitudine este dat doar de compus, de faza staionar i
de temperatur. Soluii polari se dizolv, se disperseaz i se implic n interacii intermoleculare
ntr-un grad mult mai mare dect soluii de tip hidrocarbur, mai nepolari, n cazul aceleiai faze
staionare. Logic, constanta Kc este mai mare n cazul compuilor polari dect n cazul celor
nepolari. O dat cu creterea temperaturii, constantele se modific, scznd semnificativ, dar
diferenierea ntre constante rmne valabil (polar-nepolar).
Un compus injectat n coloan petrece un timp pn la ieirea din aceasta egal cu timpul petrecut n
faza mobil plus timpul petrecut n faza staionar. Timpul petrecut n faza mobil poate fi msurat
direct pe baza timpului de retenie al unui compus nereinut de faza staionar, a unui compus care
petrece 100% din timp n faza mobil i a crui vitez n coloan este egal cu cea a fazei mobile.
Un astfel de compus este n majoritatea fazelor staionare metanul. Timpul de retenie ajustat,
considerat a fi timpul petrecut de compus n faza staionar, este calculat ca fiind diferena ntre
timpul de retenie total al compusului n coloan i timpul petrecut de metan.
n mod ideal, prin tehnica de injecie, o band de solui este injectat n coloan n aa fel nct
aceasta s ocupe o poriune foarte mic de coloan. Este de dorit ca banda de solut s creasc puin
pe parcursul traversrii coloanei. Astfel, este necesar ca domeniul de timp de retenie pentru fiecare
tip de solut n parte s fie foarte mic, adic deviaia standard pentru fiecare specie molecular s fie
mic. Astfel pe msur ce prsesc coloana, aceste benzi concentrate de solut ies sub form de
picuri foarte ascuite i cu o lime la baz foarte mic. Explicaia pentru acest fenomen este c,
chiar dac timpii petrecui de molecule n faza staionar i mobil sunt exact la fel, sunt alte
fenomene care contribuie la lrgirea benzii, cum ar fi difuzia longitudinal. Centrele benzilor cu
constante diferite se vor diferenia treptat pe msur ce trec prin coloan, dar dac difuzia
longitudinal este mare sau timpul petrecut de molecule diferite este destul de mare, parte din banda
final a primului compus poate intra peste partea de band iniial a celui de-al doilea compus,
rezultnd n picuri incomplet separate sau picuri care se suprapun. Deci, eficiena de separare a doi
compui nu este afectat doar de factorii de separare, ci i de alungirea benzii care are loc.
Datorit faptului c, n mod similar cu distilarea fracionat, i cromatografia de gaze se ocup cu
separarea amestecurilor de compui volatili, termenii n cormatografie au fost preluai din distilarea
fracionat. Astfel pentru a descrie eficiena unei coloane cromatografice a fost folosit termenul de

talere teoretice. Numrul de talere teoretice este definit ca fiind ptratul raportului ntre timpul
total petrecut de o band de solut de la intrarea n coloan pn la ieire tR i gradul de lrgire al
unei benzi .
N=(tR/ )2
Pentru a se evita necesitatea determinrii factorului , se presupune c picul este gaussian ideal,
pentru care ltimea la baz este egal cu 4, iar limea la semi-nlime este agal cu 2,354. Astfel
ecuaia se poate rescrie
N=(4tR/wb)2=16(tR/wb)2 sau
N=(2,35tR/wh)2=5,54(tR/wh)2
unde wb i wh sunt limile la baz respectiv la semi-nlime. ntruct limea la semi-nlime
poate fi determinat cu o mai bun precizie, muli experi prefer aceast form de exprimare a
ecuaiei. Totui e demn de menionat faptul ca aceast ecuaie are la baz presupunerea de
gaussicitate a picului, i, dei abaterile sunt neglijabile de obicei, n unele cazuri n care asimetria
este evident aceast ecuaie este foarte greu de aplicat.
n relaia de calcul a numrului de talere teoretice, prin folosirea timpului de retenie, se introduce n
ecuaie un termen tM, timpul de retenie al compusului neseparat, metanul, care are o contribuie
constant la fiecare compus n parte. Aceast contribuie, aparinnd unui compus neseparat, nu
contribuie deloc la eficiena separrii, dar produce o cretere a numrului de talere teoretice. Din
acest motiv de obicei se prefer folosirea unui timp de retenie ajustat, care este diferena ntre
timpul de retenie real si timpul dat de compusul nereinut.
tR'=tR-tM
Astfel putem rescrie formula numrului de talere teoretice pentru un numr de talere teoretice
eficiente, Neff, n modul urmtor:
Neff=5,54[(tR-tM)/wh]2=5,54(tR'/wh)2
Modul n care doi compui se separ este dat de timpul lor de retenie, sau mai bine zis de diferena
ntre timpii de retenie ajustai ai celor doi compui, i de ascuimea picului. Raportul ntre timpii de
retenie ajustai ai celor doi compui se numete factor . Acest factor determin doar separarea
ntre vrfurile celor doi compui.
=tR(2)/tR(1)
Prin convenie, este tot timpul supraunitar, i timpul de retenie al celui de-al doilea compus este
raportat la primul. Perechile de solut ce au un factor mare se pot separa chiar i pe coloane cu
rezoluie slab, dar pe msur ce se apropie de 1, separarea necesit coloane cu un numr mai
mare de talere teoretice. Desigur c acest lucru se poate rezolva i prin schimbarea fazei staionare a
coloanei cu una la care timpii de retenie sunt mai departe unul de altul.
Gradul la care dou componente sunt separate se numete rezoluie, se noteaz cu RS i are formula:
RS=2(tR(2)-tR(1))/(wb(1)+wb(2))
De notat c n cazul rezoluiei se folosete lrgimea la baz, nu la semi-nlime. Desigur, n multe
situaii, lrgimea la baz necesit extrapolare pentru o determinare exact. Dac se aplic prezumia
de pic gaussian, ecuaia se poate rescrie pentru lrgimea la semi-nlime:

RS=1,18(tR(2)-tR(1))/(wh(1)+wh(2))
Rezoluia este puternic afectat de asimetrie, totui, n cazul picurilor gaussiene perfect simetrice, o
rezoluie de 1,5 de obicei nseamn c cei doi compui sunt separai ntre ei la linia de baz.
Pentru orice tehnic cromatografic, lrgimea la baz este un factor foarte important. n cazul ideal,
aceast lrgime este afectat doar de difuziile longitudinale. n realitate ns, sunt destul de muli
parametri care afecteaz lrgimea picurilor:
efecte discriminatorii care au loc n momentul transferului de la sering la portul de intrare
(acestea se ntmpl mai des n cazul porturilor nclzite)
efecte discriminatorii ce au loc la momentul transferului de la portul de intrare ctre coloan
(porturile de intrare de obicei abund n situri active)
lungimea coloanei ocupat iniial de proba injectat (toate modurile)
rata i eficinea evaporrii probei n portul de intrare (modul de evaporare, splitarea probei,
etc)
viteza de intrare a probei de la portul de intrare la coloan
procentajul de prob transferat de la portul de intrare la coloan
omogenitatea temperaturii i a fazei de-a lungul ntregii benzi cu prob
Tehnica de injecie poate introduce diferene mari n cromatogram. Transferul de temperatur de la
portul de intrare nclzit la sering poate duce la o fracionare a probei. n porturile de intrare
fierbini, viteza mare de introducere a probei este de importan major. n modul split, injecia
manual nu este niciodat suficient de rapid pentru a evita fracionarea probei. Din fericire
injectoarele automate elimin aceast problem aproape complet. La injectoarele automate, seringa
petrece n portul de intrare sub 500 msec. Tehnica splitless (fr splitarea probei) este de obicei de
preferat n cazul porturilor nclzite. n multe cazuri, injecia manual a probei de ctre un utilizator
neexperimentat ducea la o dedublare a picurilor datorit vitezei mici de introducere a probei.
Chiar n cazul unei injecii n coloan ideal, la momentul cnd solventul mpreun cu
componentele supuse separrii intr n coloan, are loc o lrgire spaial a benzii cu prob. Aceasta
se produce datorit proceselor de difuzie care au loc n coloan. Printre altele, un factor important
poate fi vaporizarea incomplet n portul de intrare sau un port de intrare cu un volum prea mare
comparativ cu proba folosit. Un alt factor care poate afecta lungimea benzii este viteza fazei
mobile prin coloan, mai precis omogenitatea vitezei.
Dac o band de solut avanseaz prin coloan n condiii de neomogenitate a constantei de
distribuie, aceast neomogenitate cauzeaz o neomogenitate a vitezei prin coloan, afectnd astfel
lungimea benzii. Pentru acest tip de fenomene a fost ales termenul de efect al constantei de
distribuie. Acest efect este folosit n tehnicile de focalizare criogenic sau focalizare termic. Pe
msur ce temperatura crete, Kc crete, datorit creterii concentraiei n faza staionar i scderii
concentraiei n faza mobil. n toate cazurile de focalizare, proba evolueaz de la o zon mai cald
a coloanei spre o zon mai rece. Rcirea secundar, care este folosit n cazul porturilor de intrare n
coloan, n mod normal scade eficiena de separare, fenomen pus parial pe seama defocalizrii
constantei de distribuie cauzat de gradientul pozitiv de temperatur. Este foarte important de
reinut faptul c programarea de temperatur nu produce acest efect. n cazul programrii de
temperatur, schimbarea temperaturii induce o schimbare a constantei de distribuie care este
uniform pe toat lungimea coloanei.
Injeciile directe n coloane, printre care cele cu splitare a probei sau fr splitare a probei, intr ntro categorie numit injecii prin evaporare cu zon cald. Acestea implic de obicei injectarea probei
prin intermediul unei seringi ntr-un port de intrare care se poate nclzi. Rolul sistemului de injecie
este de a vaporiza ct mai rapid proba pentru a facilita accesul ctre captul coloanei. n cadrul
procesului de vaporizare, cei mai importani factori sunt transferul de cldur, timpul necesar
transferului de cldur i volumul de vapori produi de ctre procesul de nclzire.
Injecia n coloan cu splitarea probei este de obicei mai intens folosit n cazul coloanelor capilare.
Proba este introdus ntr-un port de intrare cald unde este vaporizat i omogenizat. Majoritatea
gazului generat prin vaporizare este direcionat ctre exteriorul sistemului printr-un port de

evacuare, doar o mic poriune fiind direcionat ctre coloan. Datorit faptului c un capt al
coloanei este situat n portul de injecie fierbinte iar restul coloanei se afl n cuptorul
cromatografului care este rece, proba avanseaz printr-un gradient negativ de temperatur, iar banda
este scurtat, focalizat termic. Porturile de intrare de tip cu programare termic (PTV) i cu splitare
a probei ofer n mod direct o scurtare a benzii prin modul de operare. Alte tipuri de porturi de
intrare necesit pai suplimentari pentru obinerea acestui avantaj important.
Modul de injecie split evapor proba i este important ca acest pas s nu genereze o presiune
prea mare, care s foreze proba nspre coloan sau nspre septum, prin urmare alegerea volumului
interior n care are loc evaporarea este foarte important. Avantajul mai important legat de modul de
operare split este legat nu neaprat de reducerea cantitii de prob care intr n coloan, ct de
curarea eficient a portului de intrare de reziduurile de prob, asigurnd un flux de gaz curat ctre
coloan dup momentul injeciei.
Un aspect important legat de aceste porturi de intrare este viteza de evaporare. Evaporarea trebuie
s aib loc instant, pentru a preveni lungirea benzii cu prob. Pentru ca acest lucru s fie realizabil,
de obicei porturile de intrare sunt nclzite la temperaturi mai mari, care pot s asigure o evaporare
rapid i complet, acest gen de temperaturi fiind o soluie proast pentru compuii care sunt
instabili termic.
Parametri de injecie, cum ar fi ordinul de splitare (care influeneaz timpul de staionare al probei
n portul de intrare), temperatura portului, solventul n care este dizolvat proba, sunt de obicei un
set de parametri care se influeneaz reciproc i a cror alegere este stabilit prin echilibru i
compromis. Spre exemplu o rat de splitare ridicat a probei, care n mod normal ar conduce la o
omogenitate mai mare a probei, conduce de fapt la o posibilitate mai mare de a pierde unii dintre
componeni datorit evacurii unei cantiti mari de prob.
Modul de injecie fr splitarea probei, similar cu cel cu splitare, folosete tot o evaporare a probei
n portul de injecie. Problemele legate de transfer termic, expansiune termic, eficien de
evaporare, se aplic i la acest mod de operare. Datorit faptului c proba care este injectat merge
n totalitate ctre coloan, se elimin problemele legate de cantitatea de prob care este transferat
sau de posibilitatea pierderii unor compui. Metoda fr splitarea probei este mai intens folosit
atunci cnd se dorete analizarea unui grup de compui cu punct de fierbere ridicat diluai ntr-un
solvent cu punct de fierbere relativ jos. Temperatura de operare pentru acest mod de operare
necesar unei evaporri complete i rapide a probei este de regul mai joas dect n cazul modului
de operare cu splitare.
Indiferent de modul de injecie ales, hidrogenul este o alegere mult mai bun pentru un gaz purttor,
deoarece separarea obinut este mult mai bun i timpii de analiz sunt mai scuri.
Porturile de injecie cu temperatur programabil ofer suficiente avantaje. De obicei pe aceste
tipuri de porturi de injecie se introduc cantiti mari de prob, fie prin injecie multipl, fie prin
folosirea unei seringi de volum mare. Injecia are loc la temperaturi joase, n portul de injecie rece,
timp n care valva de ventilare este deschis iar solventul n exces iese. Dup un timp suficient de
lung pentru ca portul s fie suficient de saturat n substane de analizat i suficient de srcit n
solvent se nchide valva de ventilaie i se nclzete gradual portul pentru a permite eluarea
compuilor de analizat n coloana cromatografic.
n cromatografie, deseori termenii selectivitate i polaritate sunt folosii abuziv, i uneori
confundai ntre ei. O substan polar (faz staionar sau substan de analizat) posed un moment
de dipol permanent. Fazele staionare polare sunt cele care posed o grupare funcional, de tipul
-CN, -OH, -CO, -C-O. Multe faze staionare de tip hidrocarbur (ex. Squalan i grsimile Apiezon)
sunt nepolare, i sunt de obicei folosite n coloane mpachetate. Nu sunt de obicei folosite n
coloanele tubulare. Fazele staionare cu polaritate redus (100% polidimetilsiloxan i 95% dimetil
5% difenil polisiloxan) sunt intens folosite i se bucur de o larg rspndire. Pe msur ce
procentajul de difenil polisiloxan crete coloana devine din ce n ce mai polar. Fazele staionare cu
30-35% difenil polisiloxan sunt considerate a fi de polaritate medie. O polaritate mai ridicat poate
fi obinut substituind o proporie din gruprile metil (50-100%) cu grupri cianopropil sau
cianoetil. Fazele extrem de polare (1,2,3,4-tetrakis(2-cianoetoxi)-butan, 1,2,3-tris(2-

cianoetoxi)propan) sunt exclusiv folosite n cazul coloanelor mpachetate, pe peretele coloanelor


capilare conducnd la formarea de filme instabile.
Este important de precizat faptul c n cromatografia de gaze, compuii elueaz din coloan n
ordinea presiunii lor de vapori nete, presiune care este diminat de suma interaciunilor care au
loc ntre compus i faza staionar avnd n vedere un set de parametri cromatografici fixai. Tria
interaciunilor care au loc ntre compui i faza staionar depidne foarte mult de solubilitatea acelui
compus n faza staionar. De exemplu, ntr-un amestec de compui, octanolul (punct de fierbere
194,5 C) va elua mereu naintea nonanalului (punct de fierbere 192C). Acetia sunt compui
relativ polari i nici unul dintre ei nu este complet solubil n faza staionar. Ambii compui
evoleaz mai repede prin coloan, dar efectul de excluziune este mai mare pentru alcoolul cu 8
atomi de carbon n molecul dect pentru aldehida cu nou atomi de carbon n molecul.
n ceea ce privete selectivitatea, att faza staionar, ct i compusul de analizat joac un rol
important. O coloan care se va dovedi extrem de selectiv pentru un compus s-ar putea s nu fie
suficient de selectiv pentru un altul cu alt grupare funcional. Un lucru rmne general valabil,
anume cu ct constanta Kc are o valoare mai mare n faza staionar, cu att acea faz staionar este
mai selectiv pentru compusul respectiv.
Fazele staionare polisiloxanice sunt intens folosite i au o arie larg de rspndire datorit faptului
c sunt cele mai tolerante la abuz. Totui natura gruprilor funcionale, gradul de puritate al fazei
staionare i omogenitatea acestor tipuri de faze staionare evolueaza n condiii de stress, nu sunt
indistructibile. O suprafat de sticl sau silice ce nu a fost deactivat corespunztor sau gruprile
silanolice libere prezente n faza staionar pot cauza deterioararea fazei staionare. Calitatea unei
faze staionare const n puritatea extrem a fazei staionare folosite, omogenitatea fazei staionare
pe tot parcursul coloanei i reproductibilitatea de la lot la lot. Dezavantajele acestor tipuri de faze
staionare este c sunt foarte puin selective, separea depinznd aproape exclusiv de forele de
dispersie.
Fluxul de gaz care trece prin coloan este o consecin direct a cderii de presiune ntre intrarea n
coloan i ieirea din coloan. Aceast diferen se poate msura aplicnd o presiune pe portul de
intrare i msurnd presiunea cu un flaumetru la ieirea detectorului i muli consider c aceast
diferen msurat reprezint cderea de presiune real pe coloan. Ceea ce nu este mereu adevrat.
Este foarte important ca msurtorile s aib loc la exact aceeai temperatur (temperatura coloanei
s fie aceeai cu temperatura mediului ambiant. Diferenele de temperatur ntre coloan i
flaumetru pot fi totui compensate prin folosirea unor factori de corecie.
Exist o diferen sesizabil ntre flux volumetric i vitez liniar a gazului prin coloan. Dei
presiunea la captul coloanei rmne constant att timp ct presiunea pe portul de intrare,
presiunea la ieire i temperatura coloanei rmn stabile, viteza liniar nu rmne constant pe tot
parcursul coloanei, ci variaz n anumite puncte. Datorit proprietii de compresibilitate a gazului
purttor, volumul de gaz rspunde la schimbrile de presiune care au loc datorit cderilor de
presiune calculate pentru a trimite gazul de-a lungul ntregii coloane. Dac ar fi posibil s secionm
coloana n x segmente infinitezimale a cror presiune s nu depind de presiunea anterioar i cea
ulterioar, s-ar putea scrie pentru fiecare astfel de segment o ecuaie de forma:
p(x)=p0 x {(pi/po)2-(x/L)[(pi/po)2-1]}1/2
unde pi i po sunt presiunea pe portul de intrare respectiv presiunea la ieirea din coloan, L este
lungimea coloanei, x este distana fa de portul de intrare, p(x) este presiunea la distana x de portul
de intrare. Relaia (pi/po) este numit deseori coeficient de compresie al fazei mobile.
n cazul unui sistem n care presiunea este reglat atent, creterea temperaturii descrete viteza
liniar. n cazul n care se regleaz debitul masic, creterea temperaturii crete viteza liniar.
Alegerea gazului purttor este important din dou puncte de vedere. Primul este viscozitatea
gazului purttor. Al doilea este rolul gazului purttor asupra constantei de distribuie. n unele
cazuri, azotul poate genera mai multe talere teoretice pentru un anumit compus, dar mai multe talere
teoretice folosind azot rezult n mrirea timpului de analiz. Cele mai comune alegeri de obicei

sunt hidrogenul datorit faptului c poate fi generat uor si relativ ieftin, dar cu potenial exploziv,
sau heliul, datorit faptului c este neexploziv.
Lungimea coloanei are un efect asupra eficienei separrii prin relaia ntre debitul pe coloan i
cderea de presiune pe coloan necesar pentru a produce acel debit n coloan. Diametrul interior
afectez volumul de gaz purttor care trece prin coloan n unitatea de timp. Diamtrele mici ale
coloanei mbuntesc separarea, dar las mai puin loc pentru greeli. Puritatea fazei staionare este
critic cu ct diametrul interior al coloanei scade. n ce privete selectarea grosimii de faz
staionar, mai multe conisderente trebuie luate n calcul. Capacitatea pentru prob crete cu
creterea grosimii fazei staionare, dar la fel va crete i bleed-ul coloanei (faz staionar care
prsete coloana i care nu poate fi evitat). Bleed-ul va genera o alungire a fiecrui pic
cromatografic (tailing) i o cretere a zgomotului de fond.
n ceea ce privete alegerea temperaturii, trebuie reinut faptul c n alegerea temperaturii corecte
este mult mai important impactul temperaturii asupra timpilor de retenie dect impactul
temperaturii asupra eficienei cromatografice.
Detectorul de tip Spectrometru de Mas este un detector foarte versatil i unul dintre detectoarele
cele mai intens folosite, att n cromatografia de gaze ct i n cromatografia de lichide. Avantajele
folosirii unui detector de tip spectrometru de mas sunt multiple.
Cel mai mare avantaj al detectorului de tip spectrometru de mas, care nu poate fi rivalizat de
celelalte tipuri de detectoare, este acela c achiziia pe ntreg domeniul de uniti atomice de mas
(amu atomic mass units) permite cutarea in baze de date, spectrul astfel obinut fiind unic pentru
fiecare substan n parte. Dar n acest mod, ceea ce i lipsete acestui tip de detector, este
selectivitatea, adic capacitatea de a genera un semnal foarte intens pentru compuii de interes, n
acelai timp un semnal ct mai mic (zgomot) pentru compuii care nu intereseaz, impuritile din
coloan, bleed-ul coloanei, etc., dnd astfel un raport semnal-zgomot foarte mare. n modul SIM
(single ion-monitoring), aceast sensibilitate este restabilit. O dat ce o prob dintr-o serie este
rulat n metod SCAN, o serie de ioni semnificativi poate fi stabilit i n acest mod se pot rula
restul probelor n mod SIM, sensibilitatea fiind mrit de aproape 100 de ori, prin mrirea timpului
de dwell (timpul pe care ionii l petrec in quadrupol).
Sensibilitatea spectrometrului de mas poate fi mrit i n alt mod, n situaii n care se dorete o
mrire a performanei aparatului. Pentru amplificarea semnalului, orice detector de acest tip
folosete un multiplicator de electroni, dispozitiv care este consumabil, dup un timp necesitnd
nlocuire. Durata de timp la care trebuie nlocuit variaz n funcie de gradul de uzur. Autotunning-ul aparatului genereaz o valoare cosniderat oportun pentru analizele de zi cu zi pentru
voltajul de pe multiplicatorul de electroni. Prin mrirea acestui voltaj se mrete semnificativ
semnalul, dar acesta se uzeaz mult mai repede. Folosirea multiplicatorului de electroni n acest
mod este o situaie de compromis, n cazul n care metoda SIM se dovedeste inoportun.

Bibliografie
Jennings, W., Mittlefehldt, E., Stremple, P., Analytical gas chromatography, Second edition,
Academic Press limited, 1997
Pavia, Donald L., Gary M. Lampman, George S. Kritz, Randall G. Engel (2006). Introduction to
Organic Laboratory Techniques (4th Ed.). Thomson Brooks/Cole.
Harris, Daniel C. (1999). "24. Gas Chromatography".Quantitative chemical analysis(Chapter) (Fifth
ed.). W. H. Freeman and Company. ISBN 0-7167-2881-8.
Higson, S. (2004). Analytical Chemistry. OXFORD University Press ISBN 978-0-19-850289-0

Archer J. P. Martin (1952). "The development of partition chromatography". Nobel Lecture,


December 12, 1952. Nobel Lectures, Chemistry 1942-1962, Elsevier Publishing Company,
Amsterdam, 1964.
Spectroscopia de infrarou cu transformat Fourier (Fourier-transformed infrared spectroscopy sau
FT-IR) are aplicaii foarte diverse, n funcie de modul de introducere a probei i de traseul optic
(spectru infrarou de absorbie, emisie, fotoconductivitate sau dispersie RAMAN n gaz, lichid sau
solid). Un spectrometru FT-IR colecteaz simultan date pe un domeniu de lungimi de und care
poate fi destul de mare. Metoda de FT-IR confera astfel un avantaj semnificativ asupra metodei
dispersive, unde se msoar de fiecare dat cte un domeniu relativ ngust de lungimi de und sau
cte o singur lungime de und o dat. Saltul tehnologic cauzat de apariia spectrometrelor cu
transformat Fourier a cauzat scoaterea complet din uz a spectrometrelor clasice de infrarou,dar
acest salt tehnologic a fost posibil doar datorit progreselor pe linia de tehnic de calcul, calculele
de transformat Fourier fiind suficient de complexe pentru a necesita putere de calcul.

Domeniul de infrarou a fost mprit n trei subdomenii, infrarou ndeprtat, infrarou mediu i
infrarou apropiat. Primele spectrometre construite erau n domeniul de infrarou ndeprtat,
datorit condiiilor mecanice superioare impuse de celelalte dou domenii i care nu erau
practicabile cu tehnologia vremii. Condiiile mecanice erau impuse i de lungimea de und folosit
pentru LASER. Odat cu progresele tehnologice din domeniul tehnologiei IT, s-a rezolvat i
problema unui sistem optic-mecanic de nalt precizie care s poat permite unui spectrometru FTIR s msoare i n domeniul de lungimi de und de infrarou apropiat i mijlociu. Infraroul
apropiat cuprinde domeniul 14000-4000 cm-1, domeniul 4000-400 cm-1 ine de infraroul mijlociu

iar infraroul ndeprtat este n zona 400-10 cm-1, aproape de domeniul de microunde. Domeniul de
infrarou mijlociu, cel mai frecvent folosit pentru studiul vibraiilor fundamentale i a spectrului de
rotaie-vibraie asociat cu structura.
Spectroscopia de infrarou se bazeaz pe faptul ca moleculele absorb energie numai la anumite
frecvene care sunt caracteristice structurii lor. Aceast absorbie se face la rezonan, adic
frecvena radiaiei absorbite se potriveste perfect cu energia de tranziie a legturii sau a gruprii
care vibreaz. Energiile sunt determinate de forma suprafeei moleculare de energie potenial, de
masa atomilor i de cuplajul vibronic asociat.
n funcie de modul de introducere a probei, spectroscopia FT-IR are diverse aplicaii. Cuplajul
spectrometriei FT-IR cu cromatografia de gaze este o alternativ mai ieftin la spectrometria de
mas, spectrometria FT-IR permind o cutare in baze de date i o identificare a compuilor care ies
din coloan, la fel i o cuantificare a acestora bazat pe intensitatea maximului principal.
Slbiciunea FT-IR este c nu poate detecta deloc compuii care nu prezint vibraii n IR, de genul
compuilor organici cu simetrie nalt (tetraclorura de carbon, tetracloretan, etc.).
Cuplajul tehnicii FT-IR cu un dipozitiv ATR sau ATR (reflexie total atenuat atenuated total
reflexion - ATR) de introducere a probei permite o usurin mai mare de introducere a probei prin
faptul c proba se depune prin presrare n cazul probelor solide sau picurare n cazul probelor
lichide pe suprafaa unui cristal, de obicei ZnSe. Tehnica ATR este deosebit de avantajoas
datorit lucrului cu cantiti foarte mici de prob.
Spectroscopia de UV-Vis, numit i spectroscopie de ultraviolet-vizibil, se ocup cu regiunea
spectrului electromagnetic corespunztoare luminii din domeniul vizibil i celei din domeniul
ultraviolet. Absorbia sau reflexia n domeniul vizibil afecteaz sau ete afectat direct de culoarea
chimic a probei de analizat.
n aceast regiune a spectrului electromagnetic moleculele sufer tranziii electronice. Aceast
tehnic este complementar tehnicii de fluorescen, prin aceea c tehnica de fluorescen msoar
energia corespunztoare tranziiilor din starea excitat n starea fundamental, pe cnd
spectroscopia de absorbie msoar energia corespunztoare tranziiilor din starea fundamental n
cea excitat.

Moleculele care conin electroni de tip sau electroni neparticipani la vreo legtur chimic pot
absoarbe energie sub form de lumin din domeniul ultraviolet sau vizibil, excitnd aceti electroni
pe un orbital molecular de antilegtur. Cu ct electronii sunt mai uor de excitat (diferena de
energie ntre benzi este mai mic) cu att lungimea de und absorbit este mai mare.
Spectroscopia de UV-Viz se foloseste cel mai des cu soluii lichide, dar n ultimii ani au aprut
diverse tehnici experimentale care se axeaz pe solide sau filme subiri sau chiar gaze.
Soluiile care conin ioni de metale tranziionale sunt colorate datorit electronilor de pe stratul d
care pot fi excitai. Culoarea ionilor metalici n soluie este afectata de prezena altor specii n
soluie, cum ar fi anumite specii anionice sau anumii liganzi. Culoarea unei soluii se poate
schimba n mod divers, dar schimbrile induse de prezena unei alte specii se pot rezuma la dou:
schimbare n intensitatea maximului de absorbie (mai intens, mai puin intens) sau n lungimea de
und a maximului de absorbie (picul de absorbie se mut la stnga sau la dreapta).
Spectrometria de UV-VIZ ca i metod cantitativ guvernat de legea Lambert-Beer, relaie care
leag absorbana UV-Viz de concentraia speciilor absorbante din soluie i de lungimea cuvei. n
acest mod, pstrnd lungimea cuvei constant n cadrul unor experimente repetare, se poate lega n
mod direct absorbana UV-Viz de concentraia speciilor absorbante prin folosirea unei curbe de
etalonare.
De reinut c legea Lambert-Beer nu depinde de volumul de prob, ci doar de traseul optic prin
prob, adic de lungime. Prin urmare nu este relevant ct de mult este umplut cuva cu prob. Ceea
ce este important este ca fascicolul s treac direct prin prob, prin urmare trebuie s avem suficient
volum n cuv pentru a evita msurarea aerului din interiorul cuvei i nu al probei propriu-zise.
Legea Lambert-Beer se poate scrie simplu:
A= xc xL
unde A este absorbana UV-Viz, c este concentraia speciilor absorbante n soluie, L este lungimea
cuvei i este coeficientul de extincie molar, o constant de material care indic ct de rapid se

schimb absorbana n funcie de concentraie.


Un alt aspect foarte important al legii Lambert-Beer este c ea nu este universal valabil, de aceea
este foarte important de tiut natura probei de analizat. Soluiile care nu sunt omogene pot genera
rezultate diferinte datorit schimbrilor de absorbant care au loc n timpul analizei.
Mai exist ns i alte aspecte care pot denatura absorbana. Legea Lambert-Beer nu ine cont de
recombinrile chimice care pot avea loc n prob, polimerizri, precum i alte fenomene fizice sau
fizico-chimice. Toate aceste fenomene afecteaz n principipal liniaritatea unei curbe de absorbie.
Dac n mod normal ne-am atepta ca absorban s creasc o dat cu creterea concentraiei, la
anumite specii un naumit prag de concentraie poate declana polimerizarea, polimerul nou format
putnd s aib o cu totul alt lungime la care s absoarb, absobana iniial scznd o dat cu
creterea concentraiei de polimer format. Este de asemenea posibil ca polimerul nou format s nu
prezinte deloc absorban in UV-Viz. Acelai fenomen poate avea loc n cazul recombinrilor
chimice din prob, iar calitatea rezultatului analitic depinde de liniaritatea curbei de calibrare. Din
acest motiv este foarte important s se cunoasc ct mai multe informaii despre proba de analizat,
despre natura matricii probei de analizat, precum i despre prezena sau absena posibilelor
interferene n prob. n anumite cazuri, cnd aceste informaii sunt greu de obinut sau este o prob
total necunoscut, o metod util pentru a obine informaii suplimentare este metoda adiiei de
standard, adic se adaug cantiti cunoscute din substana de analizat n prob si se msoar n mod
repetat. Dac la un moment dat absorbana n prob ncepe s prezinte fenomene de neliniaritate, n
cadrul curbei de calibrare nu se va depi concentraia limit.
n ciuda tuturor considerentelor de ordin practic care pot face din metoda UV-Viz o metod dificil
(limitrile legii Lambert-Beer), ea este totui o metod larg rspndit, n principal datorit faptului
c este o metod precis, economic i cu o robustee dovedit n timp. Aceste considerente au fcut
ca metoda UV-Viz s fie n continuare folosit. n industria farmaceutic, metodele cantitative de
UV-Viz nc au o pondere ridicat, dei metodele noi tind s migreze spre tehnici HPLC mai
automatizate.

1
1.1

Identificare VOC din aer prin GC-MS


Scop

Scopul acestei lucrri practice este de a analiza calitativ i cantitativ coninutul de compui organici
volatili din aer folosind tehnici de cromatografie i de extracie.
1.2

Termeni i definiii cuprini


1.2.1
VOC Volatile Organic Compound Compus organic volatil lichid i/sau
solid organic care se evapor spontan la temperatura i presiunea atmosferei cu care
este n contact.

Nota 1 : n cazul folosirii termenului de VOC n cadrul soluiilor de acoperire, cum ar fi vopselurile
i lacurile, termenul VOC denot de fapt coninutul n VOC.
Nota 2 : Conform legislaiei SUA, termenul de VOC denot doar compuii care sunt activi
fotochimic n atmosfer. Orice alt compus este definit ca i compus exceptat.
Nota 3 : Conform directivei europene 2004/42/EC termenul de VOC se refer la substane care au
punct de fierbere mai mic sau egal cu 250C msurat la presiunea standard de 101,3 kPa.

1.2.2
Coninut de VOC mas total de compui organici volatili prezent n
proba de analizat.
1.2.3
Compus exceptat compus volatil care nu particip n atmosfer la reacii
fotochimice.
1.3

Sumarul metodei

Dup etapa de pregtire a probei, VOC-urile sunt separate printr-o tehnic cromatografic. Pentru a
se putea atinge limitele de cuantificare ale sistemului GC/MS, avnd n vedere concentraiile extrem
de mici ale compuilor de interes n atmosfer, se va folosi o mediere n timp. Pe post de agent
absorbant se va folosi carbunele activ. nainte de folosire, crbunele se va reactiva la 105C n etuv
timp de 24 de ore. Pentru absorbie se va lsa crbunele activ expus la o atmosfer timp de 4
sptmni. Pentru desorbie se va folosi alcool metilic. Se spal crbunele activ cu o cantitate mic
de alcool, se filtreaz, si se introduce n fiola de analiz. Se folosete un sistem de introducere a
probei cu zon cald. Dup ce compuii au fost identificai, acetia pot fi cuantificai din aria picului
prin folosirea unui standard intern. Apoi printr-un calcul matematic se poate obine coninutul de
VOC din prob.

1.4

Factori de rspuns

Pentru calculul factorilor de rspuns se dilueaz compuii puri n solvent folosind balana analitic.
n soluia final se introduce i elementul de standard intern. Pentru diluie se folosete o fiol de 2
mL pentru GC. Se introduc 1 1,5 mL de solvent, dup care se adaug prin injecie prin septum
fiecare compus. Pentru injecie de folosete o sering de 10 L. Se folosesc 5 L din fiecare
compus pentru care se dorete calculul factorilor de rspuns. Se cntrete fiecare compus n parte
dup fiecare injectare. Fiecare cntrire se efectueaz la zecime de mg.
1.5

Important de tiut

nainte de a introduce o prob la GC-MS este bine de urmrit o serie de parametri pentru a se
asigura buna funcionare a GC-ului pe perioada rulrii probelor ct i pe viitor.
Fiola cu prob este cel puin pe jumtate plin
Fiola cu prob este centrat n autosampler, nu este nclinat sau strmb iar septumul folosit
este perfect plan.
Poziia probelor n autosampler coincide cu poziia probelor din secven
Flacoanele cu solvent de splare conin minim 4,5 mL de solvent (nivel maxim)
Seringa din injectorul autosampler-ului st ferm i nu joac
Seringa este nou sau a fost splat corespunztor
Liner-ul este nou sau curat i corespunde cu tehnica de injecie folosit
Detectorul MSD este sub vacuum de mai mult de 4 ore naintea rulrii probei
Se va rula o secven de autotune i se va salva pentru a a se asigura c detectorul se afl n
parametri standard de operare
1.6

Calcule matematice

VOC=(m1+m2+m3+...+mn)x100

VOC este coninutul total de VOC, n procente de mas


mi este masa n grame a compusului i ntr-un gram de prob
100 este un factor folosit pentru conversia din gram pe gram n procentaje de mas
mi=(ri x Ai x mIS)/(mS x AIS)

mi este masa n grame a compusului i n 1 g de amestec


ri este factorul de rspuns pentru compusul i
Ai este aria picului pentru compusul i
AIS este aria picului de standard intern
mIS este masa n grame a compusului folosit ca i standard intern
mS este masa n grame a amestecului de analizat ca i prob
n cazul n care coeluia a doi sau mai muli compui nu poate fi evitat din motive de separare
cromatografic, compuii respectivi trebuie tratai ca un singur pic i se va calcula factorul de
rspuns ca atare.
Pentru a se verifica puterea de separare cromatografic, pentru fiecare pereche de picuri se
va calcula rezolutia cromatografic.
R = 2 (tRb tRa)/(wb + wa)

R este rezoluia cromatografic a dou picuri a i b


tRb este timpul de retenie pentru compusul b
tRa este timpul de retenie pentru compusul a
wb este limea la baz a compusului b
wa este limea la baz a compusului a

Pentru ca o pereche de picuri s poat fi considerate bine separate din punct de vedere
cromatografic, rezoluia celor dou picuri trebuie s fie mai mare de 1,5.
Se va calcula de asemenea pentru cteva dintre picuri i numrul de talere teoretice.
Numrul de talere teoretice este o mrime care caracterizeaz eficiena coloanei cromatografice i
este un parametru adecvat pentru urmrirea n timp a gradului de uzur. Numrul de talere teoretice
scade n timp.
N = 16(tR)2 / (w)2

N este numrul de talere teoretice


tR este timpul de retenie
w este limea la baz
1.7

Parametri de metod cromatografic

Parametri de injector:
Volum de injecie 3,0 L
Splri cu prob 0
Splri cu solvent A 10 nainte de injecie, 10 dup
Splri cu solvent B 10 nainte de injecie, 10 dup
Pompri n prob nainte de injecie 5
Introducere prob:
Temperatura: 280C
Mod de operare: SPLITLESS
Rat de purjare: 36,0 mL//min la 0,80 min
Coloan: 1,5 mL/min constant
Program de temperatur:
50C iniial timp de 5 minute
3C/min pn la 300C
300C timp de 30 de minute
Temperatura pe linia de transfer ctre MS: 280C
ntrziere pentru solvent: 5 minute
Mod de operare detector MS: SCAN
Domeniu de scanare: 40-450
1.8

Exprimarea rezultatelor

Un rezultat se exprim ca i media a dou rezultate obinute de ctre un operator n condiii de


repetabilitate. Dac cele dou rezultate difer ntre ele prin mai mult de 8% fa de medie se poate
considera analiza suspect i ar trebui repetat.
Condiiile de repetabilitate prevd ca aceeai prob s fie analizat de acelai operator, pe acelai
aparat, n aceeai zi i n aceleai condiii. n mod uzual, probele se prepar i se analizeaz
simultan, sau, n cazul n care pregtirea probei dureaz prea mult, att de repede una dup dup alta
pe ct e posibil din punct de vedere experimental.
O analiz considerat suspect poate avea multiple cauze, printre care, fr a se limita la:
neomogenitatea probei
proba este insuficient de omogen
probleme n funcionarea aparatului
schimbri drastice n condiiile de mediu din imediata vecintate a aparatului de msur
operatorul nu are suficient experien de lucru cu metoda n cauz
standardele de calibrare expirate sau stocate n condiii improprii
substane folosite la prepararea probei expirate sau stocate n condiii improprii
erori de procedur sau mod de calculare a rezultatelor
Orice analiz cantitativ trebuie precedat de o etap de analiz calitativ n care se vor identifica
compuii care trebuie exceptai datorit punctului de fierbere i compuii care nu prezint risc toxic
semnificativ. Pentru cutarea datelor de toxicitate se vor folosi baze de date de toxicitate disponibile
cu acces liber pe internet.
1.9

Bibliografie

- Agilent 7890A gas chromatograph Advanced User Guide


- Agilent 5975 Series MSD Operation manual
- Agilent 7890A gas chromatograph Troubleshooting
- Agilent G1701EA GC/MSD Chemstation Getting Started
- Agilent 5975 series MSD Troubleshooting and Maintenance Manual
- Agilent 7890A Gas Chromatograph Operating Manual
-CYS EN ISO 11890-2:2006 Paints and varnishes Determination of volatile organic compound (VOC) content

1 Analiza nitrailor din ap prin metoda UV/VIS


1.1

Principiul metodei

Cnd o prob de ap ce conine ioni de nitrat este tratat cu brucin n mediu de acid sulfuric se
obine o soluie de culoare galben. Concentraia de ioni nitrat din soluie poate fi calculat pe baza
absorbanei la 410 nm.
1.2

Reactivi i aparatur

soluie standard de ioni nitrat (0,001 mg/mL)

soluie de clorur de sodiu (30% procente masice) (numai pentru cazul n care avem de-a
face cu probe de ap srat)
soluie de acid sulfuric 4:1 (4 pri acid sulfuric 1 parte ap distilat)
soluie brucin-acid sulfanilic
spectrometru UV-VIS
cuve de 10 mm drum optic

Pentru prepararea soluiei de acid sulfuric se va turna acidul n ap i nu invers.


Pentru soluia de brucin-acid sulfanilic, se vor cntri 0,5 g de brucin i 0,05 g de acid sulfanilic
n 3 ml de acid clorhidric concentrat. Se dilueaz pn la 50 de mL cu ap distilat.

1.3

Etaloane i procedura de lucru

Se vor prepara o serie de etaloane prin diluii succesive pornind de la un etalon mai concentrat. Nu
se va uita includerea unui punct de zero (un blanc, ap distilat, care s nu conin ioni de nitrat la
un nivel detectabil). n condiii normale de lucru 6 etaloane sunt de regul suficiente pentru a obine
o curb de calibrare.
Se va proceda la msurarea probelor cresctor, pornind de la concentraia cea mai mic, pn la
concentraia cea mai mare.
Pentru ca o curb de calibrare s fie considerat satisfctoare, o valoare minim a coeficientului de
corelare este de 0,99. n cazul n care criteriul minim nu este atins, se vor prepara din nou soluiile
de calibrare i se va repeta operaia de msurare.
1.4

Pregtirea probelor

Din orice prob se ia o cantitate (ntre 1 i 5 mL), aceeai de fiecare dat i se dilueaz pn la 10
mL cu soluie de acid sulfuric 4:1 cu agitare continu cu rcire (sub jet de ap rece sau cu baie de
ghea). Nu se va acoperi recipientul. Dac probele sunt saline se adaug la fiecare nainte de
diluia cu ap distilat 2 mL de solutie de clorur de sodiu.
Atenie! Acest pas al reaciei este puternic exoterm. Nu se va acoperi recipientul deoarece se poate
genera presiune i eventual explozia recipientului.
Se adaug 0,5 mL de soluie de brucin/acid sulfanilic i se agit prin rotire.
Se nclzete la 100C pe baie de ap.
Se rcete soluia sub jet de ap rece, se dilueaz pn la 25 ml cu ap distilat, se pune capacul i
se agit foarte bine.
Se introduc aproximativ 3 mL n cuva de msurare a aparatului i se nregistreaz absorbana.

2 Analiza nitriilor din ap prin metoda UV-VIS


2.1

Principiul metodei

O prob de ap este tratat cu reactiv Griess n mediu de acid acetic, n urma reaciei formndu-se
un complex rou cu absorban maxim n jurul valorii de 520 nm.

2.2

Reactivi i aparatur

Soluie etalon de ioni nitrit


Soluie de acid acetic 12% procente masice
Reactivi Griess (dup preparare se vor stoca n recipiente din sticl maro ferite de lumin)
Baloane cotate de 25 mL, 50 mL
acid sulfanilic
-naphtylamin
hrtie de filtru
plnie de sticl
pahare Berzelius de 50, 450 mL

Reactiv Griess I : Se dizolv 1,66 g de acid sulfanilic n soluie de acid acetic 12%. Se toarn soluia
prin filtru ntr-un balon cotat de 50 de ml. Acidul sulfanilic se cntrete pe balana tehnic (cu dou
zecimale). Se umple balonul cotat pn la semn cu soluie de acid acetic. Se pune dopul i se agit
energic. Se pstreaz n recipieni de sticl maro ferii de lumin. Alternativ se poate proteja
recipientul de lumin folosind folie de aluminiu.
Reactiv Griess II : Se cntresc 0,08 g de -naphtylamin pe balana tehnic. Se pun 20 de mL de
ap la fiert ntr-un pahar Berzelius de 50 mL. Se adaug cantitatea cntrit de -naphtylamin, se
toarn peste apa fierbinte i se mai las nc 5 minute, timp n care se agit uor recipientul. Dup se
filtreaz ntr-un balon cotat de 50 mL i se umple la semn cu soluie de acid acetic.
Soluie de ioni nitrit : Se dizolv 15 mg de nitrit de sodiu n 50 mL de ap distilat. Aceast soluie
conine 200 mg/L de ioni nitrat. Se agit soluia foarte bine nainte de folosire.
2.3

Etaloane i procedura de lucru

Se vor prepara o serie de etaloane prin diluii succesive pornind de la un etalon mai concentrat. Nu
se va uita includerea unui punct de zero (un blanc, soluie de acid acetic, care s nu conin ioni de
nitrat la un nivel detectabil). n condiii normale de lucru 6 etaloane sunt de regul suficiente pentru
a obine o curb de calibrare.
Se va proceda la msurarea probelor cresctor, pornind de la concentraia cea mai mic, pn la
concentraia cea mai mare.
Pentru ca o curb de calibrare s fie considerat satisfctoare, o valoare minim a coeficientului de
corelare este de 0,99. n cazul n care criteriul minim nu este atins, se vor prepara din nou soluiile

de calibrare i se va repeta operaia de msurare.


2.4

Pregtirea probelor

La 5 mL de prob limpede se adaug 5 mL de reactiv Griess I. Se agit puternic i se las la un loc


ferit de lumin timp de 10 minute. Se adaug 1 mL de reactiv Griess II, se agit puternic i se las
nc 10 minute. Probele pentru curba de etalonare se vor pregti n aceeai manier ca i probele de
lucru (la 5 mL de etalon, 5mL de reactiv Griess I, agitare, .a.m.d). Se va prepara i o prob de
referin care se va face cu ap distilat n loc de prob.
Se introduc aproximativ 3 mL n cuva de msurare a aparatului i se nregistreaz absorbana.

2.5

Bibliografie

https://www.google.ro/url?
sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=9&ved=0CIMBEBYwCA&url=http%3A%2F
%2Fpgepm.ovh.org%2Fdownload%2Ffood_quality%2Flab_old
%2Fex8_nitrates_and_nitrites.doc&ei=E0cSUYSRG4qL4AT5toDwAg&usg=AFQjCNEbE4xtm1H
SKzbPahZLqx7v48RqMw&sig2=hO2aavS3SuYuETRofqHIww

3 Pesticide din ap prin GC-MS


3.1

Materiale i sticlrie necesare

soluie stoc de amestec de pesticide


baloane cotate de 25 ml
plnii de separare de 1 L
cilindru gradat de 500 mL, 50 mL, 10 mL
pahare Berzelius de 250, 450 mL
baloane cu fund rotund de 250, 500 ml
hrtie de filtru
plnie de sticl
sulfat de sodiu anhidru
sticl de ceas
sistem de tip evaporator rotativ cu vacuum
seringi de plastic de 50 mL de unic folosin
silicagel 60-200 mesh puritate analitic
balan tehnic
dichlorometan, hexan, puritate analitic
fiole pentru autosampler GC (aprox 2 mL)
pipete Pasteur de unic folosin
vat de sticl
3.2

Principiul metodei

Un volum fix de ap (500-1000 mL) este supus unei extracii cu solvent (dichlorometan). Dup
separarea straturilor n plnia de separare, faza organic este colectat i uscat pe sulfat de sodiu
anhidru. Volumul de solvent este adus la aproximativ 10 mL la evaporatorul rotativ. Toate
transferurile se fac cantitativ. Volumul de prob adus la 10 mL se supune unui proces de purificare
pe coloan de silicagel, unde are loc i schimbarea de solvent la hexan. Fracia obinut dup
purificare este concentrat din nou la evaporatorul rotativ i adus la un volum de aproximativ 0,5
mL care este transferat ntr-o fiol de GC care este pus la aparat pentru a fi analizat. Dac analiza
nu are loc imediat se recomand stocarea la rece pentru a evita evaporarea solventului care poate
conduce la rezultate eronate.

3.3

Etaloane de lucru

Etaloanele de lucru se vor prepara prin diluie n diclorometan pornind de la un etalon mai
concentrat. Se va prepara un set de cel puin 5 etaloane de lucru. Se vor folosi 5 baloane cotate de
10 mL n care se va introduce o cantitate mic de solvent (aproximativ 2 ml). Se va introduce n
fiecare cantitatea de etalon concentrat rezultat din calcul dup care se va aduce la semn cu solvent.
Se pune dopul i se agit energic. Se preia o cantitate (aproximativ 2 mL) cu ajutorul unei pipete
Pasteur i se transfer ntr-o fiol de GC-MS dup care se introduce n caruselul autosampler-ului
pentru analiz.
3.4

Pregtirea probei

Se msoar cu cilindrul gradat o cantitate de prob de ap (500 mL). Se introduce n plnia de


separare. Se va verifica n prealabil ca robinetul plniei de separare s fie pe poziia nchis. Se
msoar 30 mL de dichlorometan i se introduc peste proba de ap n plnia de separare. Se agit
energic timp de minimum 10 minute. Se pune ntr-un stativ i se ateapt separarea straturilor. Se
colecteaz faza organic. Se introduc nc 30 mL de diclorometan i se repet de nc dou ori
extracia. Se arunc apa i se cltete plnia cu nc 30 ml de diclorometan care se adaug la faza
organic. Se adaug agent de uscare (sulfat de sodiu anhidru). Se agit cu bagheta pentru ca agentul
de uscare s acioneze mai bine. Se filtreaz soluia ntr-un balon cu fund rotund.
Se trece balonul la sistemul de evaporare. Se monteaz balonul i se fixeaz bine cu clema de
prindere. Se seteaz baia de ap la temperatura potrivit (60C). Se pornete apa de rcire de la
refrigerent. Se nchide robinetul de aerisire i se regleaz vacuum-ul pe aproximativ 600.
Se ia o sering de plastic de unic folosire de 50 mL i se ndeprteaz pistonul. Se introduce n
corpul seringii goale un dop din vat de sticl.
Atenie! Nu se va manipula vata de sticl fr mnui!
Se mpacheteaz seringa cu 10 g de silicagel, btnd uor corpul seringii, pentru a uura
mpachetarea silicagelului. La final se mai pune un strat de 2 g de sulfat de sodiu anhidru bine
mojarat i se bate din nou uor pentru a ajuta sedimentarea.
Se monteaz seringa ntr-un stativ cu un balon cu fund rotund de 250 mL plasat sub ea n suport.
Se face preeluia coloanei cu 40 de mL de hexan curat.
Se transfer cu grij coninutul balonului cu ajutorul unei pipete Pasteur. Se mai cltete balonul de
dou ori cu cte 2 mL de hexan i se adaug n sering. Se mai adaug n porii 40 mL de hexan i
se las s curg n balonul cu fund rotund de 250 de mL.
Atenie! Nu se va lsa nici un moment silicagelul s se usuce. Dac silicagelul s-a uscat i nu s-a
terminat procedura, se repet etapa de extracie.
Se transfer cantitativ coninutul paharului ntr-un balon cu fund rotund i se duce la evaporatorul
rotativ pentru concentrare la aproximativ 0,5 mL. Apoi coninutul balonului dup etapa de
concentrare se transfer cantitativ ntr-o fiol de GC i se mai folosesc dou porii de aproximativ
0,5 mL pentru cltirea balonului i recuperarea urmelor de analit eventual rmase pe balon.
Se pune fiola n autosamplerul de la GC-MS pentru analiz cantitativ.
3.5

Calcule

Pentru a se verifica puterea de separare cromatografic, pentru fiecare pereche de picuri se va


calcula rezolutia cromatografic.
R = 2 (tRb tRa)/(wb + wa)

R este rezoluia cromatografic a dou picuri a i b


tRb este timpul de retenie pentru compusul b

tRa este timpul de retenie pentru compusul a


wb este limea la baz a compusului b
wa este limea la baz a compusului a

Pentru ca o pereche de picuri s poat fi considerate bine separate din punct de vedere
cromatografic, rezoluia celor dou picuri trebuie s fie mai mare de 1,5.
Se va calcula de asemenea pentru cteva dintre picuri i numrul de talere teoretice.
Numrul de talere teoretice este o mrime care caracterizeaz eficiena coloanei cromatografice i
este un parametru adecvat pentru urmrirea n timp a gradului de uzur. Numrul de talere teoretice
scade n timp.
N = 16 (tR)2 / (w)2

N este numrul de talere teoretice


tR este timpul de retenie
w este limea la baz
3.6

Parametri de metod cromatografic

Parametri de injector:
Volum de injecie 3,0 L
Splri cu prob 0
Splri cu solvent A 10 nainte de injecie, 10 dup
Splri cu solvent B 10 nainte de injecie, 10 dup
Pompri n prob nainte de injecie 5
Introducere prob:
Temperatura: 280C
Mod de operare: SPLITLESS
Rat de purjare: 36,0 mL//min la 0,80 min
Coloan: 1,5 mL/min constant
Program de temperatur:
70C iniial timp de 3 minute
3C/min pn la 300C
300C timp de 30 de minute
Temperatura pe linia de transfer ctre MS: 250C
ntrziere pentru solvent: 5 minute
Mod de operare MS: Gain Factor 10 SIM (single ion monitoring)

Parametri SIM:

Timp pe
cromatogram

Ioni monitorizai

Dwell time

0-5 min

128

500

5-21 min

109

500

21-25 min

57,127,128,146

250

25-28,80 min

126,156

300

28,80-32,50 min

83,120,127,158

200

32,50-36,00 min

292,306

350

36,00-37,60 min

196,200,201,210,214

150

37,60-39,88 min

55,57,88,109,161,173

150

39,88-42,00 min

198

500

42,00-44,00 min

160,213,227,241

200

44,00-45,50 min

205,226

350

45,50-46,50 min

57,162

350

46,50-48,00 min

164,167

300

48,00-48,70 min

252,280

300

48,70-50,00 min

72,176,189,303,331

150

50,00-52,80 min

143,169,175,252

200

52,80-55,00 min

171,303

350

55,00-60,00 min

139

500

60,00-65,00 min

328

500

3.7

Analiza GC-MS

n caruselul autosamplerului se vor pune urmtoarele probe: o prob blanc, constituit din solventul
folosit pentru extracie, minim 5 probe de etalonare i proba rezultat n urma extraciei. Se vor nota
cu atenie numerele poziiilor din autosampler n secvena de lucru i se va salva secvena cu
numele grupei i numele masterului.
3.8

Bibliografie

- Agilent 7890A gas chromatograph Advanced User Guide


- Agilent 5975 Series MSD Operation manual
- Agilent 7890A gas chromatograph Troubleshooting
- Agilent G1701EA GC/MSD Chemstation Getting Started
- Agilent 5975 series MSD Troubleshooting and Maintenance Manual
- Agilent 7890A Gas Chromatograph Operating Manual
- EPA Method 508 Determination of Chlorinated Pesticides in water by gas
chromatography with an electron-capture detector Rev. 3.1
EPA Method 527 Determiantion of selected Pesticides and flame retardants in

drinking water by solid phase extraction and capillary column gas chromatography/mass
spectrometry (GC/MS)
EPA Method 608 Organochlorine pesticides and PCB's

4 Analiza compuilor aromatici polinucleari din ap prin GC-MS


4.1

Materiale i sticlrie necesare

soluie stoc de amestec de pesticide


baloane cotate de 25 ml
plnii de separare de 1 L
cilindru gradat de 500 mL, 50 mL, 10 mL
pahare Berzelius de 250, 450 mL
baloane cu fund rotund de 250, 500 ml
hrtie de filtru
plnie de sticl
sulfat de sodiu anhidru
sticl de ceas
sistem de tip evaporator rotativ cu vacuum
seringi de plastic de 50 mL de unic folosin
silicagel 60-200 mesh puritate analitic

balan tehnic
dichlorometan, hexan, puritate analitic
fiole pentru autosampler GC (aprox 2 mL)
pipete Pasteur de unic folosin
vat de sticl
4.2

Principiul metodei

Un volum fix de ap (500 mL) este supus unei extracii cu solvent (dichlorometan). Dup separarea
straturilor n plnia de separare, faza organic este colectat i uscat pe sulfat de sodiu anhidru.
Volumul de solvent este adus la aproximativ 10 mL la evaporatorul rotativ. Toate transferurile se fac
cantitativ. Volumul de prob adus la 10 mL se supune unui proces de purificare pe coloan de
silicagel, unde are loc i schimbarea de solvent la hexan. Fracia obinut dup purificare este
concentrat din nou la evaporatorul rotativ i adus la un volum de aproximativ 0,5 mL care este
transferat ntr-o fiol de GC care este pus la aparat pentru a fi analizat. Dac analiza nu are loc
imediat se recomand stocarea la rece pentru a evita evaporarea solventului care poate conduce la
rezultate eronate.

4.3

Etaloane de lucru

Etaloanele de lucru se vor prepara prin diluie n diclorometan pornind de la un etalon mai
concentrat. Se va prepara un set de cel puin 5 etaloane de lucru. Se vor folosi 5 baloane cotate de
10 mL n care se va introduce o cantitate mic de solvent (aproximativ 2 ml). Se va introduce n
fiecare cantitatea de etalon concentrat rezultat din calcul dup care se va aduce la semn cu solvent.
Se pune dopul i se agit energic. Se preia o cantitate (aproximativ 2 mL) cu ajutorul unei pipete
Pasteur i se transfer ntr-o fiol de GC-MS dup care se introduce n caruselul autosampler-ului
pentru analiz.
4.4

Pregtirea probei

Se msoar cu cilindrul gradat o cantitate de prob de ap (500 mL). Se introduce n plnia de


separare. Se va verifica n prealabil ca robinetul plniei de separare s fie pe poziia nchis. Se
msoar 30 mL de dichlorometan i se introduc peste proba de ap n plnia de separare. Se agit
energic timp de minimum 10 minute. Se pune ntr-un stativ i se ateapt separarea straturilor. Se
colecteaz faza organic. Se introduc nc 30 mL de diclorometan i se repet de nc dou ori
extracia. Se arunc apa i se cltete plnia cu nc 30 ml de diclorometan care se adaug la faza
organic. Se adaug agent de uscare (sulfat de sodiu anhidru). Se agit cu bagheta pentru ca agentul
de uscare s acioneze mai bine. Se mai cltete sulfatul de sodiu de dou ori cu cte 10 ml de
solvent curat pentru a se asigura eficiena transferului cantitativ. Se filtreaz soluia ntr-un balon cu
fund rotund.
Se trece balonul la sistemul de evaporare. Se monteaz balonul i se fixeaz bine cu clema de
prindere. Se seteaz baia de ap la temperatura potrivit (50C). Se pornete apa de rcire de la
refrigerent. Se nchide robinetul de aerisire i se regleaz vacuum-ul pe aproximativ 600.
Se ia o sering de plastic de unic folosire de 50 mL i se ndeprteaz pistonul. Se introduce n
corpul seringii goale un dop din vat de sticl.
Atenie! Nu se va manipula vata de sticl fr mnui!
Se mpacheteaz seringa cu 10 g de silicagel, btnd uor corpul seringii, pentru a uura
mpachetarea silicagelului. La final se mai pune un strat de 2 g de sulfat de sodiu anhidru bine
mojarat i se bate din nou uor pentru a ajuta sedimentarea.
Se monteaz seringa ntr-un stativ cu un balon cu fund rotund de 250 mL plasat sub ea n suport.
Se face preeluia coloanei cu 40 de mL de hexan curat.
Se transfer cu grij coninutul balonului cu ajutorul unei pipete Pasteur. Se mai cltete balonul de
dou ori cu cte 2 mL de hexan i se adaug n sering. Se mai adaug n porii 40 mL de hexan i
se las s curg n balonul cu fund rotund de 250 de mL.
Atenie! Nu se va lsa nici un moment silicagelul s se usuce. Dac silicagelul s-a uscat i nu s-a
terminat procedura, se repet etapa de extracie.
Se transfer cantitativ coninutul paharului ntr-un balon cu fund rotund i se duce la evaporatorul
rotativ pentru concentrare la aproximativ 0,5 mL. Apoi coninutul balonului dup etapa de
concentrare se transfer cantitativ ntr-o fiol de GC i se mai folosesc dou porii de aproximativ
0,5 mL pentru cltirea balonului i recuperarea urmelor de analit eventual rmase pe balon.
Se pune fiola n autosamplerul de la GC-MS pentru analiz cantitativ.
4.5

Parametri de metod cromatografic

Parametri de injector:
Volum de injecie 1,0 L
Splri cu prob 0
Splri cu solvent A 10 nainte de injecie, 10 dup
Splri cu solvent B 10 nainte de injecie, 10 dup

Pompri n prob nainte de injecie 5


Introducere prob:
Temperatura: 280C
Mod de operare: SPLITLESS
Rat de purjare: 36,0 mL//min la 0,80 min
Coloan: 1,5 mL/min constant
Program de temperatur:
70C iniial timp de 3 minute
3C/min pn la 300C
300C timp de 20 de minute
Temperatura pe linia de transfer ctre MS: 250C
ntrziere pentru solvent: 6 minute
Mod de operare MS: Gain Factor 3 SIM (single ion monitoring)
Parametri SIM:

Timp pe
cromatogram

Ioni monitorizai

Dwell time

0-23 min

128

500

23-26 min

152

500

26-29 min

153

500

29-36 min

166

500

36-44 min

178

500

44-54 min

202

500

54-64 min

228

500

64- 73 min

252

500

73- end time min

276

500

4.6

Calcule

Pentru a se verifica puterea de separare cromatografic, pentru fiecare pereche de picuri se va


calcula rezoluia cromatografic.
R = 2 (tRb tRa)/(wb + wa)

R este rezoluia cromatografic a dou picuri a i b


tRb este timpul de retenie pentru compusul b
tRa este timpul de retenie pentru compusul a
wb este limea la baz a compusului b
wa este limea la baz a compusului a

Pentru ca o pereche de picuri s poat fi considerate bine separate din punct de vedere
cromatografic, rezoluia celor dou picuri trebuie s fie mai mare de 1,5.
Se va calcula de asemenea pentru cteva dintre picuri i numrul de talere teoretice.
Numrul de talere teoretice este o mrime care caracterizeaz eficiena coloanei cromatografice i
este un parametru adecvat pentru urmrirea n timp a gradului de uzur. Numrul de talere teoretice
scade n timp.
N = 16 (tR)2 / (w)2

N este numrul de talere teoretice


tR este timpul de retenie
w este limea la baz
4.7

Analiza GC-MS

n caruselul autosamplerului se vor pune urmtoarele probe: o prob blanc, constituit din solventul
folosit pentru extracie, minim 5 probe de etalonare i proba rezultat n urma extraciei. Se vor nota
cu atenie numerele poziiilor din autosampler n secvena de lucru i se va salva secvena cu
numele grupei i numele masterului.
4.8

Bibliografie

- Agilent 7890A gas chromatograph Advanced User Guide


- Agilent 5975 Series MSD Operation manual
- Agilent 7890A gas chromatograph Troubleshooting
- Agilent G1701EA GC/MSD Chemstation Getting Started
- Agilent 5975 series MSD Troubleshooting and Maintenance Manual
- Agilent 7890A Gas Chromatograph Operating Manual
- EPA Method 8310 Polynuclear aromatic hidrocarbons
- EPA Method 550.1 Determination of polycyclic aromatic hidrocarbons in drinking water
by liquid-solid extraction and HPLC with coupled ultraviolet and fluorescence detector
- EPA Method 610 Polynuclear aromatic hydrocarbons

5 Hidrocarburi totale prin FT-IR


5.1

Principiul metodei

O prob de ap de 500 mL este supus unor operaii de extracie i concentrare, folosindu-se


tetraclorur de carbon i un sistem de tip FT-IR pentru analiza cantitativ.

5.2

Reactivi i aparatur

cilindru gradat de 500 mL, 50 mL


plnie de separare de 1 L
balon cu fund rotund de 500 mL
plnie de sticl
tetraclorur de carbon
sulfat de sodiu anhidru
filtru de hrtie pentru filtrare lent
baloane cotate de 10 mL
n-hexadecan
isooctan
clorobenzen
5.3

Etaloane i procedur de lucru

De obicei, o curb de calibrare este format dintr-un numr de 5-6 puncte de calibrare i un punct
de zero, reprezentat de solventul folosit pentru extracie, n cazul de fa de tetraclorura de carbon.
Pentru analiza spectral se vor folosi cuve cu ferestre din NaCl iar pentru introducerea probei se vor
folosi seringi din metal sticl (se prefer evitarea plasticului datorit posibilitii ridicate de a
contamina proba cu hidrocarburi coninute n plastic). Pentru calibrare se vor dilua cantiti
cunoscute de n-hexadecan, isooctan i clorobenzen n tetraclorur de carbon.
5.4

Pregtirea probei

O cantitate de 500 mL de ap msurat cu cilindrul gradat este introdus ntr-o plnie de separare de
1 L.
Atenie! Se va verifica robinetul plniei nainte pentru a se observa dac nchide etan sau dac
permite reglarea curgerii la viteza dorit.
Se vor introduce n plnie 30 de mL de tetraclorur de carbon i se va agita energic timp de minim
10 minute. Dup terminarea operaiei de agitare, plnia de separare se va fixa ntr-un stativ i se va
atepta separarea fazelor. Dup ce fazele s-au separat, se va colecta faza organic ntr-un pahar
Berzelius de 200 mL. Se introduc n plnie din nou nc 30 de mL i se repet procedura de agitareseparare-colectare a fazei organice de nc dou ori. Dup finalizarea a trei operaii de agitareseparare-colectare a fazei organice se va arunca apa din plnia de separare i se va clti plnia cu 30
de mL de tetraclorur de carbon care se adaug la celelalte trei precedente. Se adaug agent de
uscare pn la eliminarea complet a apei din tetraclorura de carbon. Se filtreaz ntr-un balon cu
fund rotund de 500 de mL cu ajutorul unei plnii de sticl i al unui filtru pentru filtrare lent. Se
trece la sistemul de evaporare rotativ pentru concentrare la aproximativ 5 mL. Sistemul de
evaporare rotativ se va seta pe un vacuum de aproximativ 400. Se transfer cantitativ n flacon de
15 mL i se aduce la un volum de 10 mL, care se va duce la spectrometru FT-IR pentru analiz
cantitativ.
Atenie! Nu se va porni sistemul de tip evaporator-rotativ fr deschiderea robinetului de ap de
rcire. Nu se va porni sistemul de vacuum fr nchiderea robinetului de etaneizare.
Atenie! Spectrometrul FT-IR este foarte sensibil la impuriti. Se vor spla cu atenie ferestrele
pentru prob cu solvent att nainte ct i dup fiecare folosire.
5.5

Analiza FT-IR

Pentru analiza tuturor probelor, att calibrare ct i msurare se va crea o metod care s fie unic
pentru toate probele. In acest scop se va folosi un gain-factor fix i nu se va lsa pe auto. Neglijarea
acestui aspect poate duce la diferene ntre probe care nu corespund cu realitatea, fiind doar un
rezultat al modificrii de factor multiplicativ. Toate achiziiile de spectre se vor face n intervalul
500-4000 cm-1. Lungimile de und folosite pentru calibrare sunt 2800-3000 cm-1 (hidrocarburi),
1600-1800 cm-1 (esteri).

Precauii speciale privitoare la substanele implicate:

Clorura de sodiu (NaCl)

Cile cunoscute de intrare n corp sunt prin ingerare, inhalare sau contact cu pielea.
Praful poate irita sau chiar arde mucoasele membranelor. Praful irit ochii.
Condiii de prim ajutor: se spal zona afectat cu ap din belug timp de minim 15 minute.
Dac persoana afectat a inhalat o cantitate mare se va muta persoana ntr-o zon bine ventilat i se
va contacta medicul. Dac persoana a ingerat cantiti mari i e contient i se vor da s bea cantiti
mari de ap, dup care se va contacta medicul.
n timpul utilizrii se vor evita contactele cu ochii, pielea i mbrcmintea. Se vor spla

minile dup folosire. Ct timp nu se folosete se va ine mereu nchis.


Se va evita stocarea n imediata vecintate a agenilor oxidani, litiu, halogenuri (Ex BF3).

Soluie standard de ioni nitrat

n general nepericuloas n manipulrile normale, cu condiia s se respecte normele de


protecie normale n laborator. Se va evita expunerea ndelungat pe piele sau prin inhalare.
Pentru prim ajutor, se va spla zona expus din abunden cu ap i spun. Dac iritaia
persist se va apela la ajutorul medical de specialitate.
n caz de contact cu ochii, se vor spla cu ap din abunden timp de minim 15 minute,
ridicnd pleoapele ocazional. Se va apela la ajutor medical.
n caz de inhalare, se va scoate persoana n cauz la aer curat. Dac nu respir, se va face
respiraie artificial. Dac respir greu, i se va administra oxigen.
n caz de ingerare, se va induce voma imediat dup ce se administreaz dou pahare de ap.
Nu se va da niciodat ceva s bea unei persoane incontiente.
Pentru limitarea expunerii se vor folosi nie potrivite i mnui din latex sau vinil. Se vor
folosi ochelari de protecie. Se vor folosi halate de laborator pentru limitarea expunerii pe piele.
n caz de expunere acut poate aprea o posibil iritaie a ochilor sau a stomacului.

Acid sulfuric

Foarte periculos n caz de contact cu pielea (coroziv, iritant, permeabil), cu ochii (iritant,
coroziv), n caz de ingerare sau inhalare. Lichidul sau ceaa pot produce daune la nivel de esut pe
membranele mucoase ale ochilor, gurii i sistemului respirator. Contactul cu pielea poate produce
arsuri. Inhalarea ceii poate produce iritarea sistemului respirator, caracterizat prin tuse, nnecare
sau scurtare a respiraiei. Supra-expunerea sever poate provoca moartea. Inflamarea ochilor este
caracterizat prin nroire, lcrimare i usturime. Inflamarea pielii este caracterizat prin usturime,
descuamare, nroire sau ocazional de bicare.
Are potenial cancerigen de clasa 1 conform clasificrii OSHA i IARC. Nu se cunosc
efectele mutagenice sau teratogenice. Substana poate fi toxic pentru rinichi, plmni, inim,
sistemul cardiovascular, sistemul respirator superior, ochi i dantur. Nu se cunosc date despre
limite. Expunerea repetat sau prelungit poate provoca distrugerea organelor int. Expunerea
repetat sau prelungit a ochilor cu ceaa poate produce iritarea sever a ochilor i a pielii.
Expunerea repetat sau prelungit poate cauza iritarea sistemului respirator urmat de infecii
bronice oportuniste. Expunerea repetat sau prelungit poate duce la o degenerare a sntii prin
acumularea n unul sau mai multe organe umane.
n caz de contact cu ochii se va spla imediat zona afectat cu ap timp de minim 15 minute
i se vor ndeprta hainele i papucii contaminai. Se va acoperi pielea iritat cu o substan cu
proprieti emoliente. Se poate folosi ap rece. Se va spla mbrcmintea nainte de a se refolosi.
Se vor spla foarte atent papucii nainte de folosire. Se va apela la ajutor medical imediat.
n caz de contact mai serios cu pielea, se va spla zona cu spun dezinfectant i se va acoperi
cu crem antibacterian. Se va apela imediat la ajutor medical de specialitate.
n caz de inhalare, se va scoate persoana n cauz la aer curat. Dac nu respir, i se va face
respiraie artificial. Dac respiraia este ngreunat, i se va da oxigen. Se va apela la ajutor medical
de urgen.
n caz de inhalare sever, se va evacua victima ntr-o arie sigur ct mai repede posibil. Se
vor relaxa hainele care pot provoca obstrucionri, cum ar fi colier, cravat, centur sau curea. Dac
respiraia este dificil, i se va da oxigen. Dac victima nu respir, i se va administra respiraie
artificial. Atenie! Este posibil ca respiraia artificial gur-la-gur s prezinte un pericol pentru
persoana care o administreaz n cazul n care substana inhalat este toxic, infecioas sau
coroziv. Se va apela la ajutor medical specializat.

n caz de ingerare, nu se va induce voma dect dac este cerut n mod expres de personalul
medical prezent. Nu se va administra nimic bucal unei persoane incontiente. Se va relaxa
mbrcmintea care poate obstruciona cum ar fi colier, cravat, centur sau curea. Se va apela la
ajutor medical n cazul n care apar simptome.
Produi de combustie: necunoscui ct vreme produsul este n general neinflamabil. Totui
produii de descompunere includ vapori i oxizi de sulf. Acetia reacioneaz cu apa sau cu vaporii
de ap i produc vapori corozivi i toxici. Reacioneaz cu carbonaii i genereaz dioxid de carbon
gazos. Reacioneaz cu cianurile i sulfiii i formeaz acid cianhidric i acid sulfhidric care sunt
otrvitoare.
Are potenial exploziv n prezena materialelor oxidante.
Acetilurile metalelor (monocesiu sau monorubidiu) i carburile iau foc mpreun cu acidul
sulfuric concentrat. Fosforul alb mpreun cu acidul sulfuric la fierbere sau cu vaporii de acid
sulfuric ia foc la contact. Poate incendia alte materiale inflamabile. Poate genera incendiu cnd este
amestecat mpreun cu ciclopentadiena, oxima de ciclopentanon, aminele de nitroaril, siliciura de
hexalitiu, oxidul de fosfor (III) i agenii oxidani cum ar fi : clorai, halogenii sau permanganai.
Amestecurile de acid sulfuric cu una dintre urmtoarele substane are potenial exploziv: pnitrotoluen,penta-argint-trihidroxi-diaminofosfat, perclorai, alcooli cu peroxid de hidrogen
concentrat, tetraperoxicromat de amoniu, nitritul de mercur, cloratul de potasiu, permanganatul de
potasiu cu clorura de potasiu, carburi, compui nitro, nitrai, fosfor, ioduri, picrai, fulminai, diene,
alcooli (la nclzire). Nitroamida se descompune exploziv la contactul cu acidul sulfuric concentrat.
Amestecul 1,3,5 trinitrozohexahidro-1,3,5-triazin i acid sulfuric duce la descompunere
exploziv.
n cazul unor deversri minore, se dilueaz cu ap, se adsoarbe cu ajutorul unui material
inert i se stocheaz ntr-un container potrivit n vederea eliminrii. Dac este necesar, se
neutralizeaz reziduul cu o soluie diluat de carbonat de sodiu.
n cazul unor deversri majore, se vor avea n vedere coroziunea, faptul c este otrvitor, i
se va ncerca stoparea curgerii dac nu implic riscuri. Se va absorbi cu pmnt uscat, pmnt
simplu sau alte materiale non-combustibile. Nu se va turna ap n container. Nu se va atinge
materialul contaminat. Pentru a se evacua vaporii de acid se va folosi o cortin de vapori de ap
pulverizat. Tot vapori de ap prin sprayere se vor folosi pentru a reduce vaporii. Se va evita
penetrarea n canalizare, pivnie sau spaii nchise. Se va cere asisten specializat de la companii
care se ocup cu deeurile. Se va neutraliza reziduul cu o soluie diluat de carbonat de sodiu.
Se vor menine recipientele nchise i uscate n permanen. A nu se ingera. Nu inhalai
vaporii, gazele sau ceaa. Nu adugai niciodat ap acestui produs. n caz de ventilare insuficient,
purtai echipament de respiraie adecvat. n caz de ingerare accidental, cerei imediat ajuot medical
specializat i artai medicului eticheta i recipientul. Se va evita permanent contactul cu pielea i
ochii. Se va menine distana fa de produsele incompatibile, cum ar fi agenii oxidani, ageni
reductori, materialele combustibile, materiale organice, metale, acizi, alcalii i umiditate. Poate
coroda suprafeele metalice.
Acidul sulfuric este foarte higroscopic. Reacioneaz violent cu apa. Se va menine
recipientul bine nchis, ntr-o zon rcoroas, bine ventilat. A nu se stoca la pese 23C.
Rutele cunoscute de intrare n organism sunt absorbie prin piele, contact dermic, contact
olfactiv, ingerare i inhalare.
Printre efectele poteniale asupra sntii:
Piele: Produce iritaii severe i arsuri. Contactul prelungit poate cauza necrozarea esuturilor.
Ochi: Cauzeaz iritaii severe i arsuri. Poate cauza daune ireparabile ale ochiului i esutului
nvecinat.
Ingerare: Duntor n caz de ingerare. Poate cauza perforarea stomacului, sngerare intern,
inflamarea esofagului, necrozare i cicatrizare i colaps circulator local. Poate cauza toxicitate
sistemic cu acidoz.
Inhalare: Poate cauza iritare sever a sistemului respirator i a membranelor mucoaselor cu senzaie
de gt uscat, tuse, scurtarea respiraiei i edem pulmonar ntrziat. Cauzeaz arsuri chimice la

nivelul sistemului respirator. Inhalarea poate fi fatal ca rezultat al spasmelor, inflamrii, edem la
nivelul laringelui i bronhiilor, pneumonie chimic i edem pulmonar. Are aciune coroziv asupra
mucoaselor. Poate afecta sistemul cardiovascular (hipotensiune, depresie cardiac, bradicardie).
Colapsul circulator se manifest prin colorarea pielii n roz, puls rapid i slab, respiraie slab i
insuficien urinar.

Brucina

Atenie, otrav! Poate avea efect asupra sistemului nervos central. Poate cauza tulburri de vedere.
Poate irita pielea i ochii. Poate cauza iritarea sistemului digestiv superior i a sistemului respirator.
Poate cauza tremurturi i convulsii. Poate fi fatal dac este inhalat sau ingerat.
Poate cauza o iritare moderat a ochilor.
Poate cauza iritarea pielii. Poate fi nociv dac se absoarbe prin piele.
Poate fi fatal dac este nghiit. Poate cauza iritarea sistemului digestiv. Ingerarea duce la otrvire.
Poate cauza tremurturi i convulsii. Poate cauza paralizarea sistemului respirator i oprirea btilor
inimii.
Poate fi fatal la inhalare. Poate cauza iritarea sistemului respirator. Poate cauza efecte similare cu
ingerarea.
Msuri de prim ajutor:
Ochi: Se spal ochii cu ap din abunden timp de minim 15 minute, ridicnd ocazional pleoapa
superioar i cea inferioar. Se va apela imediat la ajutor medical de specialitate.
Piele: Se apeleaz la ajutor medical specializat de urgen. Se spal zona cu ap din abunden timp
de minim 15 minute, ndeprtnd mbrcmintea i nclmintea contaminat.
Ingerare: Dac victima este contient i alert, i se dau s bea 2-4 cni pline cu lapte sau ap. Se va
apela la ajutor medical specializat imediat. Viteza este crucial! Un medic trebuie notificat imediat.
Inhalare: Se va apela la ajutor medical imediat. Se va scoate victima la aer curat n afara expunerii.
Dac nu respir i se va face respiraie artificial. Dac respiraia este dificil, i se va administra
oxigen. Viteza este esenial, apelai la ajutor medical imediat!
n caz de deversri accidentale, acestea se vor cura imediat cu material absorbant. Se va avea n
vedere ventilarea camerei.
Dup fiecare manipulare se vor spla minuios minile. Se va ndeprta pe loc mbrcmintea
contaminat i se va spla nainte de refolosire. Se va evita contactul cu ochii sau cu pielea,
ingerarea sau inhalarea. Se va manipula numai sub ni. Se va stoca n camera cu otrvuri sub cheie.
Nu se va folosi dac n dotarea laboratorului nu exist du ocular sau du de securitate. Se va folosi
o ventilare adecvat anti-ex pentru a limita expunerea la inhalare.
Compuii cancerigeni sunt marcai ca toxici i foarte toxici. Alchilii sulfai sunt cancerigeni. Luai
msuri speciale pentru a evita inhalarea sau contactul cu pielea. Pentru neutralizarea alchilsulfailor,
acetia se adaug n picturi (cu o plnie de picurare) n soluie concentrat de amoniac rcit cu
ghea agitnd puternic.
www.merckmillipore.com

Acidul sulfanilic

Provoac iritarea pielii. Poate provoca o reacie alergic a pielii. Provoac iritarea grav a ochilor.
Purtai mnui de protecie. n caz de contact cu pielea, splai zona din abunden cu ap i spun.
n caz de contact cu ochii, cltii cu atenie cu ap timp de mai multe minute. Scoatei lentilele de
contact, dac este cazul i dac acest lucru se poate face cu uurin. Continuai s cltii.
Iritant pentru ochi i piele. Poate cauza sensibilizarea pielii la contact.
A se evita contactul cu pielea! Se vor purta mnui de protecie adecvate.
LD50 pe oareci 12300 mg/kg.

www.merckmillipore.com

Nitrit de sodiu

Poate agrava un incendiu, oxidant. Toxic n caz de nghiire. Foarte toxic pentru mediul acvatic.
Evitai dispersarea n mediu. n caz de expunere sau dac nu v simii bine apelai la un centru
medical specializat.
Contactul cu materiale combustibile poate duce la incendii.
Este oxidant, toxic, periculos pentru mediu.
LD50 oral 85mg/kg.
www.merckmillipore.com

Acid acetic

Lichid i vapori inflamabili. Provoac arsuri grave ale pielii i lezarea ochilor.
Purtai mnui de protecie, mbrcminte de protecie, protecie pentru ochi i echipament de
protecie a feei!
n caz de inghiire, cltii gura, nu provocai voma.
n caz de nghiire sunai imediat la un centru pentru otrviri i apelai la ajutor medical specializat.
n caz de contact cu ochii, cltii atent cu ap timp de mai multe minute. Scoatei lentilele de contact
dac este cazul sau dac acest lucru se poate face cu uurin. Continuai s cltii.
Date toxicologice: LD 50 oral pe oareci 3310 mg/kg. LD 50 cutanat pe iepuri 1060 mg/kg.
www.merckmillipore.com

-naftilamin

Nociv n caz de nghiire. Poate provoca cancer. Toxic pentru mediul acvatic cu efect pe termen
lung.
Evitai dispersarea n mediu. n caz de expunere sau posibil expunere, consultai medicul.
LD 50 oral pe oareci 680 mg/kg.
www.merckmillipore.com

diclorometan

Susceptibil de a provoca cancer. Utilizai echipament de protecie conform cerinelor. n caz de


expunere sau posibil expunere, consultai medicul.
Necombustibil, toxicitate acut categoria 3/toxic sau substane cu efecte cronice.
Precauii: a nu se stoca deeurile n containere de aluminiu. De asemenea, n cazul solvenilor
clorurai cu urme de ap nu se va folosi recipient de stocare din oel inoxidabil (vasul se poate
coroda provocnd scurgerea lichidelor).
Exist dovezi limitate n ceea ce privete efectul carcinogen. Se va pstra n mediu rcoros. Se vor
purta mnui la manipulare i mbrcminte de protecie.
LD 50 oral pe oareci 1600 mg/kg. LD 50 dermal pe oareci >2000 mg/kg.
www.merckmillipore.com

Hexan

Lichid i vapori foarte inflamabili. Poate fi mortal n caz de nghiire sau de ptrundere n cile
respiratorii. Provoac iritarea pielii. Poate provoca somnolen sau ameeal. Susceptibil de a duna
fertilitii. Poate provoca leziuni ale organelor n caz de expunere prelungit sau repetat. Toxic
pentru mediul acvatic cu efecte pe termen lung.
A se pstra departe de surse de cldur/scntei/flcri deschise/suprafee ncinse. Fumatul interzis.
Legtur la pmnt/conexiune echipotenial cu recipientul i cu echipamentul de recepie. Evitai
dispersarea n mediu. n caz de nghiire accidental sunai imediat un centru de toxicologie sau un
medic de specialitate. n caz de contact cu pielea splai cu mult ap i spun.
Nu provocai voma!
A se depozita ntr-un loc rcoros i bine ventilat.
LD 50 oral pe oareci 25000 mg/kg. LD 50 dermic pe iepuri >2000 mg/kg.
www.merckmillipore.com

Silicagel 70-230 mesh ASTM

Nu inspirai praful.
Nu prezint pericol pentru ap.
Reziduurile cromatografice: substanele explozive (ex. peroxizii), agresive sau toxice din straturi
sau sorbeni trebuie eliminate prin metode adecvate (ex splare sau eluare) nainte de a fi colectate
i depozitate. Solvenii utilizai pentru eluie pot fi, n multe cazuri, reutilizai. Cantitile mai mari
de sorbeni (ex. din coloane) vor fi eliberate de solveni (filtrare sau uscare) i colectate n saci de
plastic rezisteni la rupere. Coloanele i fazele staionare TLC vor fi colectate mpreun cu
reziduurile corespunztoare (aluminiu, sticl, materiale plastice).
www.merckmillipore.com

Tetraclorur de carbon

Toxic n caz de nghiire, n contact cu pielea sau prin inhalare. Susceptibil de a provoca cancer.
Provoac leziuni ale organelor n caz de expunere prelungit sau repetat. Nociv pentru mediul
acvatic cu efecte pe termen lung. Duneaz sntii publice i mediului nconjurtor prin
distrugerea ozonului n atmosfera superioar.
Evitai dispersarea n mediu. Purtai mnui de protecie i mbrcminte de protecie. n caz de
contact cu pielea, splai din abunden cu ap i spun. n caz de inhalare, transportai victima la
aer curat i meninei-o n stare de repaus, ntr-o poziie confortabil pentru respiraie.
In caz de expunere sau n cazul n care nu v simii bine sunai imediat un centru de informare
toxicologic sau un medic.
Aruncai coninutul/recipientul numai la staii de deeuri aprobate.
Luai msuri speciale pentru a evita inhalarea sau contactul cu pielea.
LD 50 oral pe oareci 1770 mg/kg. LD 50 dermal pe oareci 5070 mg/kg.
www.merckmillipore.com

sulfat de sodiu anhidru

Slab contaminare a apei. LD 50 pe oareci oral >2000 mg/kg.


www.merckmillipore.com

n-hexadecan

Poate fi fatal n caz de nghiire sau de ptrundere n cile respiratorii. Expunerea repetat poate
provoca uscarea sau crparea pielii.
Nu inspirai vaporii. Evitai orice contact cu ochii, pielea sau mbrcmintea. n caz de nghiire
sunai imediat un centru de informare toxicologic sau un medic. Nu provocai voma.
Poluare puternic a apei.
www.merckmillipore.com

izooctan

Lichid i vapori foarte inflamabili. Poate fi mortal n caz de nghiire i ptrundere n cile
respiratorii. Provoac iritarea pielii. Poate provoca somnolen sau ameeal. Foarte toxic pentru
mediul acvatic cu consecine pe termen lung.
A se pstra departe de surse de cldur/scntei/flcri deschise/suprafee ncinse. Fumatul interzis.
Pstrai recipientul nchis etan.
Legtur la pmnt/conexiune echipotenial cu recipientul i cu echipamentul de recepie.
Evitai dispersarea n mediu.
n caz de nghiire sunai imediat la un centru de informare toxicologic sau la un medic.
n caz de contact cu pielea splai zona din abunden cu ap i spun.
n caz de inhalare transportai victima la aer liber si meninei-o n stare de repaus, ntr-o poziie
confortabil pentru respiraie.
Nu provocai voma.
A se depozita ntr-un spaiu bine ventilat. A se pstra la rece.
LD 50 pe oareci pe cale oral >2500 mg/kg.
www.merckmillipore.com

clorbenzen

Lichid i vapori inflamabili.


Nociv n caz de inhalare.
Toxic pentru mediul acvatic cu efecte pe termen lung.
A se pstra departe de cldur. Evitai dispersarea n mediu. n caz de inhalare transportai victima
la aer liber i meninei-o n stare de repaus, ntr-o poziie confortabil pentru respiraie.
LD 50 pe oareci pe cale oral 1100 mg/kg.