5.

Acizi nucleici
5.1. Caracteristici generale
Acizii nucleici sunt biomolecule de importan biologic fundamental, care dein un loc aparte n organizarea i funcionarea materiei vii. Alturi de proteine, acizii nucleici constituie cei mai importani biopolimeri care intr n alctuirea celulei vii. Rolul biologic al acizilor nucleici const n faptul c n ei este codificat informaia genetic i datorit lor, aceast informaie se transmite. Prin participarea nemijlocit a acizilor nucleici se realizeaz sinteza tuturor proteinelor, n consecin i a enzimelor existente n celula vie. Totodat, multe nucleotide elemente structurale ale acizilor nucleici au un rol important n metabolismul substanelor i energetic, ndeplinind funcii coenzimatice. Acizii nucleici sunt compui macromoleculari care posed o mas molecular gigantic (milioane de uniti); se dizolv n soluii alcaline i sunt precipitai prin acidularea acestora; posed proprieti acide puternice i la pH fiziologic poart o nalt sarcin negativ; conin aproximativ 15% azot i 10% fosfor. Acizii nucleici se pot mpri n dou clase: ribonucleici (ARN) care conin riboz i dezoxiribonucleici (ADN), n compoziia crora intr dezoxiriboza. Ambele tipuri reprezint polimeri liniari ai nucleotidelor care se formeaz cu ajutorul legturilor esterfosforice ntre 5fosfatul unui nucleotid i grupa 3-hidroxilic a pentozei nucleotidului vecin.

5.2. Componenii acizilor nucleici

Biochimia produselor alimentare Molecula unui acid nucleic reprezint un polinucleotid alctuit dintr-un numr mare de mononucleotide. Mononucleotidele, la rndul lor, sunt constituite din trei componente: o baz azotat (purinic sau pirimidininc) legat de un glucid (riboz sau dezoxiriboz) i fosfat care esterific glucidul la atomii C-2, C-3 sau C-5. Esterificarea la C-5 este cea mai rspndit.

5.2.1. Baze azotate

Bazele azotate care intr n constituia acizilor nucleici sunt de natur purinic i pirimidinic. Cele mai importante baze purinice sunt adenina (A) i guanina (G) derivai ai heterociclului purina.
NH2 N1
6 5 2 3 4

N H

N 7 9 8

N N N H

HN H2N N N H

Purina

Adenina (A) (6-aminopurina)

Guanina (G) (2-amino-6-oxipurina)

n procesele metabolice care au loc n organismele animale i vegetale, bazele azotate purinice formeaz o serie de produi, printre care deosebit de important este acidul uric; la om, acesta este produsul final al metabolismului purinic. n unele plante se acumuleaz n cantiti mari derivai metilai de natur purinic: cofeina din cafea i ceai, teobromina compusul activ al boabelor de cacao. Boabele de cafea conin pn la 1,5% cafein, iar n ceai, coninutul ei este mult mai mare (pn la 5%). Nivelul teobrominei n boabele de cacao ajunge pn la 1,8%.
O H3C N O N CH3 N N CH3
HN O N CH3 N O N CH3

Cofeina

Teobromina

n organismul animal apar ca produi intermediari de metabolism i alte baze azotate purinice care nu particip la structura acizilor nucleici:
O HN N N NH HN O NH O N NH HN O NH O NH NH O

Hipoxantina

Xantina

Acidul uric

131

Acizi nucleici Bazele azotate pirimidinice coninute n acizi nucleici sunt citozin (C), uracil (U) i timin (T) care reprezint derivai de la heterociclul pirimidin:
NH2 O HN N H O N H HN O N H O CH3

N1

6 5 2 3 4

N O

Pirimidina

Citozina (C) (2-oxi-6-aminopirimidina)

Uracilul (U) (2,6-dioxipirimidina)

Timina (T) (2,6-dioxi-5-metilpirimidina)

Uneori se ntlnesc 5-metilcitozina i 5-oximetilcitozina sau ali derivai ai pirimidinei:

NH2 N O N H CH3 O N N H NH2 CH2OH

5-metilcitozina

5-oximetilcitozina

5.2.2. Nucleozide
Combinarea unei baze azotate purinice sau pirimidinice cu o pentoz conduce la un nucleozid (prin analogie cu glicozidele). Adenina legat cu riboza se numete adenozin, guaninribonucleozidul guanozin i respectiv ribonucleozidele pirimidinice, citidin i uridin. Nucleozide analoge se formeaz i cu dezoxiriboza: adenindezoxiribonucleozid (sau dezoxiadenozin), dezoxicitidin etc.. Trebuie subliniat c dezoxiribonucleozidul timinei, care se gsete cu precdere n ADN se numete timidin i nu dezoxitimidin. Timina se mai ntlnete n unul din tipurile de ARN i anume ARN de transport. n acest caz se folosete denumirea de timinribonucleozid sau riboziltimin. Nucleozidele purinice obinute din ARN au o legtur -glicozidic ntre C-1 al ribozei i azotul din poziia 9 purinic. Nucleozidele pirimidinice sunt N-3-glicozide:
NH2 N1
2 5' 5 3 4 6 7N 9 8

NH2 N1
5' 6 5 2 3 4

N H
3'

N H
2'

O O H
3'

HO H2C
4'

O
1'

HO H2C
4'

1'

HO

OH

HO

OH

2'

Adenozina (9--D-ribofuranoziladenina)

Citidina (3--D-ribofuranozilcitozina)

132

Biochimia produselor alimentare Nucleozidele purinice se hidrolizeaz uor sub aciunea acizilor, n timp ce nucleozidele pirimidinice se hidrolizeaz numai dup o prelucrare destul de prelungit cu acid concentrat. Nucleozidele care conin dezoxiriboz posed acelai tip de legturi glicozidice i reprezint 9--D-2-dezoxiribofuranozide ale guaninei i adeninei i 3--D-2dezoxiribofuranozide ale citozinei i timinei.

5.2.3. Nucleotide
Prin esterificarea nucleozidelor cu o molecul de acid fosforic se obin substane mai complexe care poart denumirea de nucleotide i care joac un rol extrem de important n metabolismul celular. Importana deosebit a nucleotidelor const nu numai n faptul c din ele sunt construite moleculele gigant ale acizilor nucleici, ci i aceea c ele intr n structura unor enzime, iar unele din ele sunt compui n care se acumuleaz energie necesar pentru desfurarea proceselor vitale. Ca esteri fosforici ai nucleozidelor, nucleotidele reprezint nite acizi puternici. Ei se numesc, corespunztor, acizi adenilic, guanilic, timidilic, citidilic i uridilic. n ARN ,numai poziiile 1 i 4 nu sunt disponibile pentru esterificare i prin urmare vor exista nucleotide cu acidul fosforic n poziiile 2, 3 i 5. In schimb,fosforilarea restului de glucid al dezoxiribonucleozidului este posibil numai n poziia C-3 i C-5 deoarece atomii C-1 i C-4 sunt inclui n ciclul furanozic, iar atomul C-2 nu are grup hidroxil. Ambele tipuri de fosfai au fost identificate n dezoxiribonucleotide izolate dup hidroliza ADN. Structurile acizilor adenilic i dezoxiadenilic se prezint astfel:

NH2 N HO N N N

NH2 N HO N N N

O P O H2C O HO H H H H HO OH

O P O H2C O HO H H H H HO H

Acid 5'-adenilic (Adenozin-5'-monofosfat) 5' AMP

Acid 5'-dezoxiadenilic (Dezoxiadenozin-5'-monofosfat) 5'd AMP

Analog acidului adenilic sunt constituite i celelalte nucleotide ce intr n constituia acizilor nucleici:

133

Acizi nucleici
Baze azotate Purinice Adenina Guanina Pirimidinice Citozina Uracilul Timina 5-metilcitozina Nucleozide Adenozina Guanozina Citidina Uridina Timidina 5-metilcitidina Nucleotide Acidul adenilic (AMP) Acidul guanilic (GMP) Acidul citidilic (CMP) Acidul uridilic (UMP) Acidul timidilic (TMP) Acidul 5-metilcitidilic

Nucleotidele predominante n celul sub form liber sunt cele care au restul de acid fosforic n poziia 5, adic nucleozid-5-fosfaii; aceste nucleotide ndeplinesc roluri importante n metabolismul celular. Structura i nomenclatura celorlalte ribonucleotide (ribonucleozide-5-monofosfat) i dezoxiribonucleotide (dezoxiribonucleozide-5-monofosfat) sunt urmtoarele: Ribonucleotide:
O HN HO H2N N N N HO HN O N HO O O N N NH2

O P O H2C O HO H H H H HO OH

O P O H2C O HO H H H H HO OH

O P O H2C O HO H H H H HO OH

Acid guanilic (Guanozinmonofosfat) GMP

Acid uridilic (Uridinmonofosfat) UMP

Dezoxiribonucleotide:

Acid citidilic (Citdinmonofosfat) CMP

O HN HO H2N N N N HO HN O

O CH3 N HO O HN O N

NH2 N N

O P O H2C O HO H H H H HO H

O P O H2C O HO H H H H HO H

HO P O H2C N O N O HO O P O H2C H O H H H HO H H H H H HO HO Acid dezoxicitidilic (Dezoxicitidinmonofosfat) Acid inozinic d CMP (inozinmonofosfat) IMP OH

Acid dezoxiguanilic (dezoxiguanozinmonofosfat) d GMP

Acid timidilic (Timidinmonofosfat) TMP

134

Biochimia produselor alimentare Nucleozid-5-fosfaii (sau 5-nucleotidele) sunt substane care au proprietatea de a intensifica rspunsul organelor senzoriale la stimulii gustativi ai unui aliment, adic sunt poteniatori de arom. Ele acioneaz sinergic cu glutamatul i sunt utilizate pentru aromatizarea supelor pulbere, a sosurilor, a semiconservelor de carne etc.. Nucleotidul 3,5-AMP-ciclic (cAMP) este un nucleotid la care acidul fosforic esterific grupele OH din poziiile 3 i 5 ale aceleiai molecule de riboz, formndu-se o legtur di-ester intern (35). c-AMP este dotat cu proprieti regulatoare funcionnd NH2 n diverse procese biochimice ca un regulator al activitilor metabolice i fiziologice. La mamifere, N N aciunea c-AMP este corelat cu activitatea unor hormoni N N care activeaz enzima adenilatciclaza, responsabil pentru formarea sa n celul din ATP. La rndul sau, cO CH2 O AMP controleaz activitatea unor enzime i are un rol H H important n sinteza proteinelor. c-AMP se gsete i n H H esuturile vegetalelor ns funcia sa, n acest caz, nu OH O P O este clarificat. Nucleotide difosfat i trifosfat. Acidul adenilic poate lega la restul su de fosfat nc una sau dou resturi de acid fosforic cu formarea adenozindifosfatului (ADP) sau adenozintrifosfatului (ATP). n molecula de adenozintrifosfat, trei resturi de acid fosforic se leag succesiv una de alta, n urmtoarea structur:
HO

c-AMP

legturi m acroergice N OH OH OH HO P~O P~O P O CH2 O O O H H OH legtur esteric norm al

NH2 N N O H H OH Riboza N Adenina

Adenozina Adenozinm onofosfat (AMP) Adenozindifosfat (ADP)

Se observ c ADP i ATP Adenozintrifosfat (ATP) sunt compui ce conin legturi macroergice, adic posed o cantitate mare de energie pe care o elibereaz la descompunerea lor hidrolitic. Prin hidroliza unei legturi esterice obinuite se formeaz aproape 2-3 kcal, iar prin hidroliza unei legturi macroergice din ATP aproximativ 7 kcal. Aceast eliberare de energie are loc prin defosforilarea ATP-ului cu formare de ADP sau AMP, iar energia produs este utilizat n celule pentru diferite procese de sintez sau alte scopuri. La rndul su, ADP se fosforileaz n

135

Acizi nucleici ATP pe seama energiei care se elibereaz prin oxidarea compuilor organici. n celulele organismelor are loc permanent procesul de defosforilare a ATP i de fosforilare a ADP sau AMP. Reacia: ATP ADP + Pi reprezint baza bioenergeticii i reflect dinamica fluxului de energie n cadrul celulei; prin aceast reacie se asigur transferul energiei chimice utilizat n metabolismul celular al tuturor organismelor. Energetica sistemului ATP ADP + Pi implic dou aspecte fundamentale i anume: - conservarea energiei chimice rezultat din metabolizarea alimentelor: ADP + Pi ATP

eliberarea i utilizarea energiei stocate: ATP ADP + Pi

Sub aciunea unei enzime specifice adenilatciclaza, adenozintrifosfatul formeaz c-AMP dup urmtoarea reacie: ATP c AMP + PP Analog cu ADP i ATP, sunt alctuite uridindifosfatul (UDP) i uridintrifosfatul (UTP) care sunt necesari pentru activitatea unor enzime ce catalizeaz transformarea i sinteza multor zaharuri (glucoz, fructoz, galactoz, zaharoz, amidon, celuloz). Compuii macroergici ai acidului citidilic sunt citidindifosfatul (CDP) i citidintrifosfatul (CTP). Ultimul intr n constituia enzimelor ce iau parte la sinteza fosfatidelor. Ca rezultat al legrii unui rest de acid fosforic la acidul guanilic, se formeaz guanozindifosfat (GDP), iar dac la acesta se mai leag nc un rest de ortofosfat se obine guanozintrifosfat (GTP). Se prezint mai jos denumirea complet i prescurtat a celor mai importante nucleotide i derivailor lor fosforilai: Nucleotidul Adenozinmonofosfat (acid adenilic) Adenozindifosfat Adenozintrifosfat Guanozinmonofosfat (acid guanilic) Guanozindifosfat Guanozintrifosfat Citidinmonofosfat (acid citidilic) Denumirea prescurtat AMP ADP ATP GMP GDP GTP CMP

136

Biochimia produselor alimentare Citidindifosfat Citidintrifosfat Uridinmonofosfat (acid uridilic) Uridindifosfat Uridintrifosfat Timidinmonofosfat (acid timidilic) CDP CTP UMP UDP UTP TMP

Toi aceti compui, joac n organism un rol deosebit de important n metabolismul substanelor i n special, n biosinteza lipidelor i glucidelor. Un rol esenial n procesele metabolice l au, de asemenea, i alte nucleotide i derivaii lor. Nicotinamidadenindinucleotidul (NAD+) i nicotinamidadenindinucleotid fosfatul (NADP+), flavinmononucleotidul (FMN) i flavinadenindinucleotidul (FAD) sunt transportori de hidrogen n reaciile de oxidoreducere . Coenzima A (CoA), alctuit dup principiul nucleotidelor, joac un rol important n procesele de activare a transferului i metabolismului acizilor grai.

5.3. Structura acizilor nucleici

5.3.1. Structura primar
Acizii nucleici sunt polimeri ai nucleotidelor. Indiferent de tipul de care aparin (ARN sau ADN), molecula lor este constituit din lungi lanuri polinucleotidice, n care resturile de acid fosforic formeaz legturi diesterice cu cte dou molecule de pentoz la atomul C-3 din una i C-5 din cealalt. Astfel iau natere catene lungi n care resturile de acid fosforic alterneaz cu resturi pentozice la care, la atomii C-1 sunt legate baze azotate. Acest schelet este comun tuturor acizilor nucleici, cu deosebire c n ADN pentoza este dezoxiriboza, iar n ARN - riboza i a faptului c ADN conine adenin, guanin, citozin i timin, iar n ARN sunt prezente adenina, guanina, citozina i uracilul. ntr-un polinucleotid liniar exist legturi glicozidice care leag bazele azotate de pentoz, legturi esterice ntre pentoz i acidul fosforic i legturi diesterice ntre nucleotide. Toate aceste legturi simple, covalente, alctuiesc structura primar a acizilor nucleici, adic compoziia i secvena resturilor de nucleotide n lanul polinucleotidic al acizilor nucleici.

137

Acizi nucleici Cu alte cuvinte, nivelul primar de organizare structural a ADN i ARN indic natura, proporia i secvena bazelor azotate ale nucleotidelor care constituie macromolecula lor. Pentru reprezentarea schematic a structurii primare se procedeaz astfel: orizontal se redau lanurile atomilor de carbon ai glucidelor cu bazele azotate legate n C-1, iar n diagonal legturile fosfat diesterice dintre atomul C-3 (n apropierea mijlocului liniei orizontale) i atomul C-5 (la captul urmtoarei orizontale).(Fig. 5.1. )
5'-P P P 5' P 5' 3' 1' 3' 1' 1' T C G 5'-P T C G 3'-OH

Fig. 5.1. Reprezentarea schematic a structurii primare a unui fragment de ADN

3'-OH

pTpCpG

Pentru polinucleotidele lungi se utilizeaz i o schem cu litere. Cu literele A, G, C, U i T se reprezint nucleozidele, iar grupa fosfat se reprezint cu litera p. Cnd aceasta se gsete la dreapta, esterific la C-3, cnd se gsete la stnga, la C-5. Astfel, n ApUp grupa fosfat esterific n C-3 adenozina i n C-5 uridina. Totodat, uridina este fosforilat i n C -3. Toate mononucleotidele sunt dispuse n molecula acidului nucleic ntr-o ordine strict determinat, specific polinucleotidului respectiv. Nu exist nici o ramificare a lanului. Fragmente ale lanurilor de ADN i ARN au un aspect caracteristic :

138

Biochimia produselor alimentare

ADN
O HN O O H2C H H O O H H H N N N NH2 N N CH3

ARN
O HN O O H O H H NH2 N N N N

n lant

n lant
O H2C H

OH N

O P O H2C O HO H H H H O H HN O

O CH3 N

O P O H2C O HO H H H H O OH HN O

O P O H2C O HO H H H H O H HN

O N N N

O P O H2C O HO H H H H O OH HN

O N N N

H2N

H2N NH2 N O N

O P O H2C O HO H H H H O H

O P O H2C O HO H H H H O OH O N

NH2

O P O H2C O HO H H H H

n lant

O P O H2C O HO H H H H O OH

n lant

5.3.2. Structura secundar

Alturi de legturile simple, covalente, n moleculele acizilor nucleici exist legturi de hidrogen care joac un rol important n conformaia lor spaial. Structura secundar a fost propus iniial pentru ADN de ctre Watson i Crick n 1953, iar mai trziu (1963) i pentru ARN. La baza organizrii acestei structuri secundare stau urmtoarele reguli stabilite pe baza datelor experimentale privind compoziia chimic a ADN: 1) Coninutul molar de purine este egal cu coninutul molar de pirimidine, coninutul de adenin este egal cu coninutul de timin (A/T = 1), coninutul de guanin este egal cu cel de citozin (G/C = 1), iar suma cantitii de adenin i guanin este egal cu suma cantitii de citozin i timin: (A + G) = (C + T), sau (A + G) / (C + T) = 1;

139

Acizi nucleici 2) Cantitatea de grupe 6-aminice care intr n compoziia bazelor azotate ale ADN (adenin i citozin) este egal cu cantitatea de grupe 6-cetonice ce exist n aceste baze (guanin i timin), prin urmare (G + T) = (A + C), sau (G + T) / (A + C) = 1. Aceste date, asociate cu studiile efectuate prin analize, au permis elaborarea unui model spaial al structurii secundare a ADN. n conformitate cu modelul elaborat, macromolecula de ADN este alctuit din dou lanuri polinucleotidice antiparalele sub form de spir, rsucite unul cu altul. Fiecare lan reprezint n sine un polinucleotid n care o legtur diesteric leag mononucleotidele una cu alta. n lungul axei fiecrui lan, la fiecare 0,34 nm se gsete un mononucleotid. Unghiul dintre nucleotidele alturate n fiecare lan este 36o. n lan, mononucleotidele sunt astfel dispuse nct bazele azotate se gsesc n interior, iar pentoza i acidul fosforic n afar. Cele dou lanuri paralele sunt nfurate n jurul unei axe comune i sunt legate unul de altul prin bazele lor azotate de-a lungul ntregii molecule de ADN, cu ajutorul legturilor de hidrogen care menin i stabilizeaz o arhitectur spaial. Legturile de hidrogen sunt ndreptate de la grupa 6-NH2 a adeninei ctre grupa 6=O a timinei, de la grupa 2 -NH2 a guaninei la grupa 2 =O a citozinei i de la grupa 6-NH2 a citozinei la grupa 6 =O a guaninei. (Figura 5.2.)

Fig. 5.2. Legturile de hidrogen dintre bazele azotate complementare din ADN

140

Biochimia produselor alimentare n acelai timp se formeaz legturi de hidrogen i cu participarea grupelor NH existente n 9 la guanin i 3 la timin. Ca urmare, adenina unui lan polinucleotidic se va uni ntotdeauna prin dou legturi de hidrogen cu timina celuilalt lan (A= = = T) iar guanina va forma ntotdeauna trei legturi de hidrogen cu citozina (G C). Aceasta nsemn c succesiunea distribuiei (secvena) bazelor azotate n unul din cele dou lanuri poate fi oricare, dar succesiunea distribuiei bazelor azotate n cellalt lan trebuie s se gseasc n strns legtur cu succesiunea lor n primul lan. Perechile adenin- timin i guanin-citozin sunt complementare una fa de cealalt. Ca urmare, macromolecula de ADN este constituit din dou lanuri complementare ntre ele, adic este vorba de o deplin reflectare a secvenei nucleotidelor unui lan n secvena celuilalt. 5P 3OH Schematic, un fragment al celor dou lanuri ale ADN se poate reda astfel:

5'(P)
3' (OH)

AGTCAAGTGGCC
TCAGTTCACCGG

3' (OH)
5' (P)

Sensul lanurilor n raport cu legturile dintre nucleotide este diferit, adic lanurile sunt antiparalele. Dac, de exemplu, n lanul de deasupra, legturile fosfodiesterice ntre A i G, G i T, T i C .a.m.d. sunt de tipul 53, n lanul inferior legturile fosfodiesterice ntre T i C, C i A, A i G .a.m.d., sunt de tipul 35. Ambele lanuri sunt spirale de dreapta, nfurate n jurul aceleiasi axe (Figura 5.3.) 3OH 5P Diametrul helixului este de 2,0 nm, iar fiecare spir a acestuia conine 10 perechi de baze azotate.

Fig. 5.3. Modelul structurii spaiale dublu-elicoidale a moleculei de ADN

Orientarea antiparalel a celor dou catene reflect o polaritate opus datorit neidentitii grupelor terminale de la fiecare capt al dublului helix. Deoarece direcionarea unei catene este n sensul 35 i a celeilalte n sensul 53, grupele terminale ale celor dou catene vor fi 5(P) i 3(OH) spre un capt al lor i respectiv 3(OH) i 5(P) spre cellalt capt. Stabilitatea structurii spaiale a ADN este asigurat, pe lng legturile de hidrogen intercatenare, i prin caracterul polianionic al macromoleculei, caracter datorat disocierii grupelor OH ale radicalului acidului fosforic din fiecare mononucleotid.

141

Acizi nucleici Ca polianion, ADN poate stabili interaciuni electrostatice cu proteine bazice (histone) care conin aminoacizi ncrcai electropozitiv (n nucleoproteide). Spre deosebire de ADN, majoritatea tipurilor de ARN au o structur monocatenar (fac excepie ARN al unor microorganisme i virusuri), ns mperecherea bazelor azotate poate avea loc i n acest caz. Firul de ARN se nfoar singur, formnd legturi de hidrogen ntre adenin - uracil i guanin - citozin. Molecula de ARN este capabil s-i modifice reversibil forma, dimensiunea, numrul legturilor de hidrogen n funcie de puterea ionic, pH-ul, temperatura soluiei etc.. Denaturarea ADN. n anumite condiii de temperatur, pH etc., se produce o distrugere a structurii secundare, adic a structurii dublu elicoidale a ADN. Acest fenomen poart denumirea de denaturare. Este caracteristic pentru acizii nucleici ca i pentru proteine i este nsoit de modificarea proprietilor lor. Denaturarea polinucleotidelor poate fi un proces reversibil. Experimentele au demonstrat c prin denaturarea diferitelor ADN din bacterii urmat de renaturarea lor, pot s ia natere molecule hibride de ADN, alctuite din fragmente ale moleculelor iniiale de ADN. Acest fenomen poart denumirea de hibridare molecular i st la baza ingineriei genetice, domeniu care are drept scop construirea n afara organismului a unor molecule recombinate de ADN cu anumite nsuiri biologice (ADN recombinat).

5.4. Proprietile, localizarea i funciile acizilor nucleici

Structura acizilor nucleici determin proprietile lor fizico-chimice i funcionale. Acizii nucleici sunt substane de culoare alb, cu aspect filiform, care se dizolv greu n ap cnd sunt n stare liber dar bine atunci cnd sunt sub form de sruri cu metale alcaline. De asemenea, se dizolv n soluii de sruri: ARN - n diluate, iar ADN - n mult mai concentrate. ARN nu este stabil n mediu alcalin. Masa molecular a ADN variaz de la 5105 pn la 2107 i mai mult, iar molecula sa este alctuit din mii de mononucleotide. Masa molecular a ARN este cuprins ntre 3104 pn la 2106, iar mononucleotidele dintr-o molecul sunt pn la 4-6 mii. Soluiile acizilor nucleici posed o mare viscozitate. Avnd un numr mare de sarcini negative, moleculele lor se deplaseaz n cmpul electric. O caracteristic a acizilor nucleici o constituie capacitatea lor de a absorbi lumina n zona radiaiilor ultraviolete la 260 nm. Preparatele de ADN izolate din diferite organisme se caracterizeaz printr-un raport cantitativ diferit ntre bazele azotate purinice i pirimidinice. Compoziia nucleotidic a ADN este caracteristic pentru un anumit organism, pentru o anumit specie biologic. Altfel vorbind, ADN are o specificitate de specie. Pe aceste proprieti ale acizilor nucleici au fost elaborate principiile genosistemicii organismelor vii. n diferite celule i esuturi ale unuia i aceluiai organism, ADN are o compoziie nucleotidic identic sau ntr-o mare msur foarte apropiat care nu este

142

Biochimia produselor alimentare influenat nici de factorii fiziologici, nici de condiiile de mediu. Totui, la unele organisme coninutul diferitelor baze ce intr n ADN variaz n condiii largi. Indicele de variabilitate pentru o anumit specie se exprim prin raportul:

adenina + timina guanina + citozina

care a primit denumirea de coeficient de specificitate al acizilor nucleici. n limitele fiecrui tip de ADN exist o infinitate de posibiliti de variaie a gradului de predominare a uneia sau alteia din perechile de baze azotate (A + T i G + C). Aceasta creeaz posibilitatea existenei unei mari diversiti a ADN n lumea organismelor vii. Compoziia nucleotidic a ARN variaz cu mult mai puin dect cea a ADN. Specificitatea de specie a ARN const n diferita succesiune de distribuie a nucleotidelor n moleculele sale. ADN i ARN sunt localizai n diferite organite celulare. ADN se gsete preponderent n nucleul celular (n compoziia cromozomilor), ns un mic procent din cantitatea total de ADN din celul este concentrat n mitocondrii i cloroplastele vegetalelor. ARN se gsete att n nucleu ct i n citoplasm; deosebit de bogai n ARN sunt nucleolul i fraciunea ribozomal a microzomilor. n afar de aceasta, ARN se gsete n cromozomi i sub form solubil n lichidul citoplasmatic. n constituia virusurilor intr ARN (virusuri vegetale) i ADN (bacteriofagi, virusuri animale). Coninutul de ARN n celule nu se distinge nici prin uniformitate, nici prin stabilitate. n celulele acelor organe unde are loc o intens sintez a proteinelor, coninutul de ARN este de cteva ori mai mare dect cel de ADN. Particularitile funcionale ale ADN i ARN sunt strns legate de localizarea lor. ADN reprezint materialul de baz al genelor n care sub o form codificat, se pstreaz informaia genetic a organismului care se traduce prin biosinteza proteinelor. Dubla elice i complementaritatea structurii bicatenare constituie baza molecular a fenomenului de autoduplicare sau autoreplicare a ADN n momentul diviziunii celulare i explic faptul c ADN, prin structura sa, reprezint unicul substrat al ereditii. Prin mecanismul de replicare se asigur constana conservrii i transmiterii caracterelor ereditare, deoarece cele dou molecule fiice ale ADN nou sintetizate sunt perfect identice cu molecula mam de ADN. n felul acesta se asigur perpetuarea celulei prin procesul ADN ADN. ADN conine o vast cantitate de informaii i constituie baza molecular a conservrii i transmiterii din generaie n generaie a informaiei genetice. ARN are o alt funcie: de a informa citoplasma asupra caracteristicilor nscrise n codul genetic. Acest lucru se manifest, nainte de toate, n responsabilitatea ARN n sinteza proteinelor i specificitatea moleculelor ce se sintetizeaz. n celul exist trei specii moleculare distincte de ARN: mesager (m-ARN) sau informaional, ribozomal ( ARN) i de transfer ( t-ARN). Aceste trei tipuri de ARN rezult prin copierea integral sau parial a secvenei ADN, pe baza unui mecanism molecular denumit transcripie i particip la procesul de biosintez a proteinelor, avnd fiecare o funcie specific.

143

Acizi nucleici ARN mesager reprezint 5-10% din ARN celular. Este prezent n nucleu (unde se sintetizeaz) i n citoplasm. Reprezint o molecul monocatenar i conine patru baze azotate: adenin, guanin, citozin i uracil a cror secven este similar cu cea a uneia din cele dou catene ale ADN. Sinteza m-ARN are loc n nucleul celular i se efectueaz printr-un proces enzimatic de transcriere a secvenei nucleotidice de pe ADN, cu deosebire c timina din ADN este nlocuit cu uracil n m-ARN. Procesul de sintez a m-ARN poart denumirea de transcripie; prin acest proces, informaia genetic codificat n secvena de nucleotide a ADN este transcris n secvena de nucleotide a m-ARN prin participarea enzimei ARN-polimeraza ADNdependent. Dup terminarea transcripiei, m-ARN trece la ribozomi unde servete cu matrice (tipar) pentru sinteza proteinelor; fiecare protein sintetizat de celul este codificat de un m-ARN specific care transmite la nivelul ribozomilor mesajul preluat de la ADN. Acest mesaj se traduce n secvena aminoacizilor din structura proteinelor sintetizate. Transmiterea informaiei genetice se reprezint prescurtat sub forma urmtoare, numit dogma central a biologiei moleculare:

autoreplicare ADN

transcriptie

ARN

translatie

proteine

ARN de transfer reprezint 10 15% din ARN total al celulei, intr n constituia citoplasmei unde se gsete n stare solubil i neasociat cu proteinele. t-ARN conine 75-90 mononucleotide i prezint o structur monocatenar de tip ordonat cu conformaie pliat. Unele poriuni ale t-ARN, n care diversele zone ale monocatenei se apropie mai mult ntre ele i iau natere legturi de hidrogen ntre secvenele de baze azotate complementare (A-U, G-C) ajunse ntr-o juxtapunere spaial corespunztoare, au o structur dublu spiralat, dar intracatenar. n fiecare molecul de t-ARN se gsesc i zone ce nu conin legturi de hidrogen responsabile de legarea cu aminoacizii n timpul transferului acestora pe ribozomi. Alturi de bazele azotate principale, t-ARN conine i o cantitate de aa-numite baze azotate minore (atipice): dihidrouracil, tiouracil, metilguanin, timin, care au rolul de a conferi stabilitate conformaiei sale, favoriznd interaciunile ntre acele segmente ale catenei poliribonucleotidice care sunt complementare i care apar ca regiuni spiralate.

Fig. 5.4. Structura secundar a t-ARN

Funcia t-ARN const n transportul din citoplasm n ribozomi a aminoacizilor ce intr n constituia unei anumite proteine: prin aceasta t-ARN ndeplinete rol de adaptor molecular, care ordoneaz fiecare aminoacid ntr-o secven precis n

144

Biochimia produselor alimentare lanul polipeptidic, pe baza recunoaterii mesajului genetic coninut n m-ARN ataat la ribozomi i provenit de la ADN. Pentru fiecare aminoacid exist un t-ARN specific. ARN ribozomal se gsete n constituia ribozomilor (pn la 65% din masa lor) organite unde are loc sinteza proteinelor. Acest tip de ARN reprezint 75 80% din totalul ARN celular. n general, r-ARN reprezint molecule monocatenare liniare, dar se pot prezenta i ntr-o form elicoidal care rezult dintr-o retrospiralare a aceleiai catene polinucleotidice. Aceast spiralare apare numai n regiuni limitate i anume acolo unde este posibil stabilirea de legturi de hidrogen ntre bazele azotate ale aceleiai catene. r-ARN ndeplinete un rol structural: n combinaie cu proteinele corespunztoare formeaz structura ribozomilor.

145