Acizi nucleici

1. Caracteristici generale

Acizii nucleici sunt biomolecule de importanta biologica fundamentala , care detin un loc
aparte n organizarea s i functionarea materiei vii. Ala turi de proteine, acizii nucleici constituie
cei mai importanti biopolimeri care intra n alca tuirea celulei vii.
Rolul biologic al acizilor nucleici consta n faptul ca n ei este codificata informatia
genetica s i datorita lor, aceasta informatie se transmite. Prin participarea nemijlocita a acizilor
nucleici se realizeaza sinteza tuturor proteinelor, n consecinta s i a enzimelor existente n celula
vie. Totodata , multe nucleotide elemente structurale ale acizilor nucleici au un rol important
n metabolismul substantelor s i energetic, ndeplinind functii coenzimatice.
Acizii nucleici sunt compus i macromoleculari care poseda o masa moleculara gigantica
(milioane de unita ti); se dizolva n solutii alcaline s i sunt precipitati prin acidularea acestora;
poseda proprieta ti acide puternice s i la pH fiziologic poarta o nalta sarcina negativa ; contin
aproximativ 15% azot s i 10% fosfor.
Acizii nucleici se pot mpa rti n doua clase: ribonucleici (ARN) care contin riboza s i
dezoxiribonucleici (ADN), n compozitia ca rora intra dezoxiriboza. Ambele tipuri reprezinta
polimeri liniari ai nucleotidelor care se formeaza cu ajutorul lega turilor esterfosforice ntre 5
fosfatul unui nucleotid s i grupa 3-hidroxilica a pentozei nucleotidului vecin.

2. Componenii acizilor nucleici

Molecula unui acid nucleic reprezinta un polinucleotid alca tuit dintr-un numa r mare de
mononucleotide. Mononucleotidele, la ra ndul lor, sunt constituite din trei componente:
o baz azotat (purinica sau pirimidininca ) legata de un glucid (riboza sau dezoxiriboza ) s i
fosfat care esterifica glucidul la atomii C-2, C-3 sau C-5. Esterificarea la C-5 este cea mai
ra spa ndita .

2.1. Baze azotate

Bazele azotate care intra n constitutia acizilor nucleici sunt de natura purinica s i
pirimidinica . Cele mai importante baze purinice sunt adenina (A) s i guanina (G) derivati ai
heterociclului purina.
NH2 O
N1 6
5 7N N N HN N
2 3 4 9 8
N N N N H2N N N
H H H
Adenina (A) Guanina (G)
Purina (6-aminopurina) (2-amino-6-oxipurina)

n procesele metabolice care au loc n organismele animale s i vegetale, bazele azotate

purinice formeaza o serie de produs i, printre care deosebit de important este acidul uric; la om,
acesta este produsul final al metabolismului purinic. n unele plante se acumuleaza n cantita ti
mari derivati metilati de natura purinica : cofeina din cafea s i ceai, teobromina compusul activ
al boabelor de cacao. Boabele de cafea contin pa na la 1,5% cafeina , iar n ceai, continutul ei este
mult mai mare (pa na la 5%). Nivelul teobrominei n boabele de cacao ajunge pa na la 1,8%.

1
 O O

H3C N N CH3 HN N CH3

O N N O N N
CH3 CH3

Cofeina Teobromina

n organismul animal apar ca produs i intermediari de metabolism s i alte baze azotate purinice
care nu participa la structura acizilor nucleici:

O O O
HN N HN N HN NH

N NH O NH NH O NH NH O

Hipoxantina Xantina Acidul uric

Bazele azotate pirimidinice continute n acizi nucleici sunt citozin (C), uracil (U) s i timin (T)
care reprezinta derivati de la heterociclul pirimidina :
NH2 O O
N1 6 HN
5 N HN CH3
2 3 4
N O N O N O N
H H H
Citozina (C) Uracilul (U) Timina (T)
Pirimidina (2-oxi-6-aminopirimidina) (2,6-dioxipirimidina) (2,6-dioxi-5-metilpirimidina)

Uneori se nta lnesc 5-metilcitozina s i 5-oximetilcitozina sau alti derivati ai pirimidinei:

NH2 NH2

N CH3 N CH2OH

O N O N
H H
5-metilcitozina 5-oximetilcitozina

2.2. Nucleozide

Combinarea unei baze azotate purinice sau pirimidinice cu o pentoza conduce la un

nucleozid (prin analogie cu glicozidele). Adenina legata cu riboza se numes te adenozina ,
guaninribonucleozidul guanozina s i respectiv ribonucleozidele pirimidinice, citidina s i uridina .
Nucleozide analoge se formeaza s i cu dezoxiriboza: adenindezoxiribonucleozid (sau
dezoxiadenozina ), dezoxicitidina etc.. Trebuie subliniat ca dezoxiribonucleozidul timinei, care se
ga ses te cu preca dere n ADN se numes te timidina s i nu dezoxitimidina . Timina se mai nta lnes te
n unul din tipurile de ARN s i anume ARN de transport. n acest caz se foloses te denumirea de
timinribonucleozid sau riboziltimina .
Nucleozidele purinice obtinute din ARN au o lega tura -glicozidica ntre C-1 al ribozei s i
azotul din pozitia 9 purinica . Nucleozidele pirimidinice sunt N-3-glicozide:
NH2 NH2
N1 6
5 7N N1 6 5
2
3 4 9 8 2 3 4
N N O N
5' 5'
HO H2C O HO H2C O
4' 1'
H H 4'
H H 1'
H H H
3' 2' H
3' 2'
HO OH HO OH
Adenozina Citidina
2 (9--D-ribofuranoziladenina) (3--D-ribofuranozilcitozina)
 Nucleozidele purinice se hidrolizeaza us or sub actiunea acizilor, n timp ce nucleozidele
pirimidinice se hidrolizeaza numai dupa o prelucrare destul de prelungita cu acid
concentrat.Nucleozidele care contin dezoxiriboza poseda acelas i tip de lega turi glicozidice s i
reprezinta 9--D-2-dezoxiribofuranozide ale guaninei s i adeninei s i 3--D-2 -
dezoxiribofuranozide ale citozinei s i timinei.

2.3. Nucleotide

Prin esterificarea nucleozidelor cu o molecula de acid fosforic se obtin substante mai

complexe care poarta denumirea de nucleotide s i care joaca un rol extrem de important n
metabolismul celular. mportanta deosebita a nucleotidelor consta nu numai n faptul ca din ele
sunt construite moleculele gigant ale acizilor nucleici, ci s i aceea ca ele intra n structura unor
enzime, iar unele din ele sunt compus i n care se acumuleaza energie necesara pentru
desfa s urarea proceselor vitale.
Ca esteri fosforici ai nucleozidelor, nucleotidele reprezinta nis te acizi puternici. Ei se
numesc, corespunza tor, acizi adenilic, guanilic, timidilic, citidilic s i uridilic.
Se prezinta mai jos denumirea completa s i prescurtata a celor mai importante nucleotide s i
derivatilor lor fosforilati:

Nucleotidul Denumirea
prescurtata
Adenozinmonofosfat (acid adenilic) AMP
Adenozindifosfat ADP
Adenozintrifosfat ATP
Guanozinmonofosfat (acid guanilic) GMP
Guanozindifosfat GDP
Guanozintrifosfat GTP
Citidinmonofosfat (acid citidilic) CMP
Citidindifosfat CDP
Citidintrifosfat CTP
Uridinmonofosfat (acid uridilic) UMP
Uridindifosfat UDP
Uridintrifosfat UTP
Timidinmonofosfat (acid timidilic) TMP

Toti aces ti compus i, joaca n organism un rol deosebit de important n metabolismul

substantelor s i n special, n biosinteza lipidelor s i glucidelor.
Un rol esential n procesele metabolice l au, de asemenea, s i alte nucleotide s i derivatii lor.
Nicotinamidadenindinucleotidul (NAD+) s i nicotinamidadenindinucleotid fosfatul
(NADP ), flavinmononucleotidul (FMN) s i flavinadenindinucleotidul (FAD) sunt transportori de
+

hidrogen n reactiile de oxidoreducere

. Coenzima A (CoA), alca tuita dupa principiul nucleotidelor, joaca un rol important n procesele
de activare a transferului s i metabolismului acizilor gras i.

3. Structura acizilor nucleici

3.1. Structura primar

Acizii nucleici sunt polimeri ai nucleotidelor. ndiferent de tipul de care apartin (ARN sau
ADN), molecula lor este constituita din lungi lanturi polinucleotidice, n care resturile de acid
fosforic formeaza lega turi diesterice cu ca te doua molecule de pentoza la atomul C-3 din una s i
C-5 din cealalta . Astfel iau nas tere catene lungi n care resturile de acid fosforic alterneaza cu
resturi pentozice la care, la atomii C-1 sunt legate baze azotate.

3
 Acest schelet este comun tuturor acizilor nucleici, cu deosebire ca n ADN pentoza este
dezoxiriboza, iar n ARN - riboza s i a faptului ca ADN contine adenina , guanina , citozina s i
timina , iar n ARN sunt prezente adenina, guanina, citozina s i uracilul.
ntr-un polinucleotid liniar exista lega turi glicozidice care leaga bazele azotate de
pentoza , lega turi esterice ntre pentoza s i acidul fosforic s i lega turi diesterice ntre nucleotide.
Toate aceste lega turi simple, covalente, alca tuiesc structura primara a acizilor nucleici,
adica compozitia s i secventa resturilor de nucleotide n lantul polinucleotidic al acizilor nucleici.
Cu alte cuvinte, nivelul primar de organizare structurala a ADN s i ARN indica natura,
proportia s i secventa bazelor azotate ale nucleotidelor care constituie macromolecula lor.
Pentru reprezentarea schematica a structurii primare se procedeaza astfel: orizontal se
redau lanturile atomilor de carbon ai glucidelor cu bazele azotate legate n C-1, iar n diagonala
lega turile fosfat diesterice dintre atomul C-3 (n apropierea mijlocului liniei orizontale) s i
atomul C-5 (la capa tul urma toarei orizontale).(Fig. 1. )
5'-P 5'-P
P Fig. 1. Reprezentarea
3' 1' T T
schematic a structurii
P primare a unui fragment de
3' 1' C C
5'
ADN
P
1' G G
5'

3'-OH
3'-OH
Pentru polinucleotidele lungi se utilizeaza s i o schema
pTpCpG
cu litere. Cu literele A, G, C, U s i T se reprezinta nucleozidele, iar
grupa fosfat se reprezinta cu litera p. Ca nd aceasta se ga ses te la dreapta, esterifica la C-3, ca nd
se ga ses te la sta nga, la C-5. Astfel, n ApUp grupa fosfat esterifica n C-3 adenozina s i n C-5
uridina. Totodata , uridina este fosforilata s i n C -3.
Toate mononucleotidele sunt dispuse n molecula acidului nucleic ntr-o ordine strict
determinata , specifica polinucleotidului respectiv. Nu exista nici o ramificare a lantului.
Fragmente ale lanturilor de ADN s i ARN au un aspect caracteristic :
ADN ARN
O O

HN HN
CH3
n lant n lant
O O N
N
O H2C O
O H2C O
H H H
H H NH2
H H NH2 H

H N N O OH N N
O

N N N N

O P O H2C O O P O H2C O
HO HO H H O
H H
H O H H
H
O OH HN
O H HN CH3
O N
O N
O P O H2C O
O P O H2C O
HO H H
HO H H H H O
H H O
O OH
O H HN N HN N

H2N H2N N N
N N
O P O H2C O O P O H2C O

HO H NH2 HO H H
H H NH2
H H H
N
O OH N
O H
O N O N
O P O H2C O O P O H2C O
HO H H
H HO H H
H H
H
n lant O H
O OH

n lant

4
3.2. Structura secundar

Ala turi de lega turile simple, covalente, n moleculele acizilor nucleici exista lega turi de
hidrogen care joaca un rol important n conformatia lor spatiala . Structura secundara a fost
propusa initial pentru ADN de ca tre Watson s i Crick n 1953, iar mai ta rziu (1963) s i pentru
ARN.
La baza organiza rii acestei structuri secundare stau urma toarele reguli stabilite pe baza
datelor experimentale privind compozitia chimica a ADN:
1) Continutul molar de purine este egal cu continutul molar de pirimidine, continutul de
adenina este egal cu continutul de timina (A/T = 1), continutul de guanina este egal cu cel de
citozina (G/C = 1), iar suma cantita tii de adenina s i guanina este egala cu suma cantita tii de
citozina s i timina : (A + G) = (C + T), sau (A + G) / (C + T) = 1;
2) Cantitatea de grupe 6-aminice care intra n compozitia bazelor azotate ale ADN (adenina s i
citozina ) este egala cu cantitatea de grupe 6-cetonice ce exista n aceste baze (guanina s i timina ),
prin urmare (G + T) = (A + C), sau (G + T) / (A + C) = 1.
Aceste date, asociate cu studiile efectuate prin analize, au permis elaborarea unui model
spatial al structurii secundare a ADN. n conformitate cu modelul elaborat, macromolecula de
ADN este alca tuita din doua lanturi polinucleotidice antiparalele sub forma de spira , ra sucite
unul cu altul. Fiecare lant reprezinta n sine un polinucleotid n care o lega tura diesterica leaga
mononucleotidele una cu alta. n lungul axei fieca rui lant , la fiecare 0,34 nm se ga ses te un
mononucleotid. Unghiul dintre nucleotidele ala turate n fiecare lant este 36 o.
n lant , mononucleotidele sunt astfel dispuse nca t bazele azotate se ga sesc n interior,
iar pentoza s i acidul fosforic n afara . Cele doua lanturi paralele sunt nfa s urate n jurul unei axe
comune s i sunt legate unul de altul prin bazele lor azotate de-a lungul ntregii molecule de ADN,
cu ajutorul lega turilor de hidrogen care mentin s i stabilizeaza o arhitectura spatiala . Lega turile
de hidrogen sunt ndreptate de la grupa 6-NH 2 a adeninei ca tre grupa 6=O a timinei, de la grupa
2 -NH2 a guaninei la grupa 2 =O a citozinei s i de la grupa 6-NH 2 a citozinei la grupa 6 =O a
guaninei. (Figura 5.2.)

Fig. 2. Legturile de hidrogen

dintre bazele azotate
complementare din ADN

n acelas i timp se formeaza lega turi de hidrogen

s i cu participarea grupelor NH existente n 9 la
guanina s i 3 la timina .
Ca urmare, adenina unui lant polinucleotidic se
va uni ntotdeauna prin doua lega turi de
hidrogen cu timina celuilalt lant (AT) iar
guanina va forma ntotdeauna trei lega turi de
hidrogen cu citozina (GC).
Aceasta nsemna ca succesiunea distributiei (secventa) bazelor azotate n unul din cele
doua lanturi poate fi oricare, dar succesiunea distributiei bazelor azotate n cela lalt lant trebuie

5
sa se ga seasca n stra nsa lega tura cu succesiunea lor n primul lant . Perechile adenina - timina s i
guanina -citozina sunt complementare una fata de cealalta .
Ca urmare, macromolecula de ADN este constituita din doua lanturi complementare
ntre ele, adica este vorba de o deplina reflectare a secventei nucleotidelor unui lant n secventa
celuilalt.

Fig.3. Modelul structurii

spaiale dublu-elicoidale a
moleculei de ADN

Sensul lanturilor n raport cu lega turile dintre nucleotide este

diferit, adica lanturile sunt antiparalele.
Orientarea antiparalela a celor doua catene reflecta o polaritate
opusa datorita neidentita tii grupelor terminale de la fiecare capa t al
dublului helix. Deoarece directionarea unei catene este n sensul 35
s i a celeilalte n sensul 53, grupele terminale ale celor doua catene
vor fi 5(P) s i 3(OH) spre un capa t al lor s i respectiv 3(OH) s i 5(P) spre
cela lalt capa t.
Stabilitatea structurii spatiale a ADN este asigurata , pe la nga lega turile
de hidrogen intercatenare, s i prin caracterul polianionic al
macromoleculei, caracter datorat disocierii grupelor OH ale radicalului
acidului fosforic din fiecare mononucleotid.
Ca polianion, ADN poate stabili interactiuni electrostatice cu proteine bazice (histone) care
contin aminoacizi nca rcati electropozitiv (n nucleoproteide).
Spre deosebire de ADN, majoritatea tipurilor de ARN au o structura monocatenara (fac
exceptie ARN al unor microorganisme s i virusuri), nsa mperecherea bazelor azotate poate avea
loc s i n acest caz. Firul de ARN se nfa s oara singur, forma nd lega turi de hidrogen ntre adenina -
uracil s i guanina - citozina . Molecula de ARN este capabila sa -s i modifice reversibil forma,
dimensiunea, numa rul lega turilor de hidrogen n functie de puterea ionica , pH-ul, temperatura
solutiei etc..
Denaturarea ADN. n anumite conditii de temperatura , pH etc., se produce o distrugere a
structurii secundare, adica a structurii dublu elicoidale a ADN. Acest fenomen poarta denumirea
de denaturare. Este caracteristic pentru acizii nucleici ca s i pentru proteine s i este nsotit de
modificarea proprieta tilor lor. Denaturarea polinucleotidelor poate fi un proces reversibil.
Experimentele au demonstrat ca prin denaturarea diferitelor ADN din bacterii urmata de
renaturarea lor, pot sa ia nas tere molecule hibride de ADN, alca tuite din fragmente ale
moleculelor initiale de ADN. Acest fenomen poarta denumirea de hibridare molecular s i sta la
baza ingineriei genetice, domeniu care are drept scop construirea n afara organismului a unor
molecule recombinate de ADN cu anumite nsus iri biologice (ADN recombinat).

4. Proprietile, localizarea i funciile acizilor nucleici

Structura acizilor nucleici determina proprieta tile lor fizico-chimice s i functionale.

Acizii nucleici sunt substante de culoare alba , cu aspect filiform, care se dizolva greu n apa
ca nd sunt n stare libera dar bine atunci ca nd sunt sub forma de sa ruri cu metale alcaline. De
asemenea, se dizolva n solutii de sa ruri: ARN - n diluate, iar ADN - n mult mai concentrate.
ARN nu este stabil n mediu alcalin. Masa moleculara a ADN variaza de la 510 5 pa na la 2107 s i
mai mult, iar molecula sa este alca tuita din mii de mononucleotide. Masa moleculara a ARN este
cuprinsa ntre 3104 pa na la 2106, iar mononucleotidele dintr-o molecula sunt pa na la 4-6 mii.
Solutiile acizilor nucleici poseda o mare viscozitate. Ava nd un numa r mare de sarcini
negative, moleculele lor se deplaseaza n ca mpul electric. O caracteristica a acizilor nucleici o
constituie capacitatea lor de a absorbi lumina n zona radiatiilor ultraviolete la 260 nm.

6
 Preparatele de ADN izolate din diferite organisme se caracterizeaza printr-un raport
cantitativ diferit ntre bazele azotate purinice s i pirimidinice. Compozitia nucleotidica a ADN
este caracteristica pentru un anumit organism, pentru o anumita specie biologica . Altfel vorbind,
ADN are o specificitate de specie. Pe aceste proprieta ti ale acizilor nucleici au fost elaborate
principiile genosistemicii organismelor vii.
n diferite celule s i tesuturi ale unuia s i aceluias i organism, ADN are o compozitie
nucleotidica identica sau ntr-o mare ma sura foarte apropiata care nu este influentata nici de
factorii fiziologici, nici de conditiile de mediu. Totus i, la unele organisme continutul diferitelor
baze ce intra n ADN variaza n conditii largi. ndicele de variabilitate pentru o anumita specie se
exprima prin raportul:
adenina timina
guanina citozina
care a primit denumirea de coeficient de specificitate al acizilor nucleici. n limitele fieca rui tip
de ADN exista o infinitate de posibilita ti de variatie a gradului de predominare a uneia sau alteia
din perechile de baze azotate (A + T s i G + C). Aceasta creeaza posibilitatea existentei unei mari
diversita ti a ADN n lumea organismelor vii.
Compozitia nucleotidica a ARN variaza cu mult mai putin deca t cea a ADN. Specificitatea
de specie a ARN consta n diferita succesiune de distributie a nucleotidelor n moleculele sale.
ADN s i ARN sunt localizati n diferite organite celulare. ADN se ga ses te preponderent n
nucleul celular (n compozitia cromozomilor), nsa un mic procent din cantitatea totala de ADN
din celula este concentrat n mitocondrii s i cloroplastele vegetalelor. ARN se ga ses te ata t n
nucleu ca t s i n citoplasma ; deosebit de bogati n ARN sunt nucleolul s i fractiunea ribozomala a
microzomilor. n afara de aceasta, ARN se ga ses te n cromozomi s i sub forma solubila n lichidul
citoplasmatic. n constitutia virusurilor intra ARN (virusuri vegetale) s i ADN (bacteriofagi,
virusuri animale). Continutul de ARN n celule nu se distinge nici prin uniformitate, nici prin
stabilitate. n celulele acelor organe unde are loc o intensa sinteza a proteinelor, continutul de
ARN este de ca teva ori mai mare deca t cel de ADN.
Particularita tile functionale ale ADN s i ARN sunt stra ns legate de localizarea lor. ADN
reprezinta materialul de baza al genelor n care sub o forma codificata , se pa streaza informatia
genetica a organismului care se traduce prin biosinteza proteinelor. Dubla elice s i
complementaritatea structurii bicatenare constituie baza moleculara a fenomenului de
autoduplicare sau autoreplicare a ADN n momentul diviziunii celulare s i explica faptul ca ADN,
prin structura sa, reprezinta unicul substrat al eredita tii. Prin mecanismul de replicare se
asigura constanta conserva rii s i transmiterii caracterelor ereditare, deoarece cele doua molecule
fiice ale ADN nou sintetizate sunt perfect identice cu molecula mama de ADN. n felul acesta se
asigura perpetuarea celulei prin procesul ADN ADN. ADN contine o vasta cantitate de
informatii s i constituie baza moleculara a conserva rii s i transmiterii din generatie n generatie a
informatiei genetice.
ARN are o alta functie: de a informa citoplasma asupra caracteristicilor nscrise n codul
genetic. Acest lucru se manifesta , nainte de toate, n responsabilitatea ARN n sinteza
proteinelor s i specificitatea moleculelor ce se sintetizeaza . n celula exista trei specii moleculare
distincte de ARN: mesager (m-ARN) sau informational, ribozomal ( ARN) s i de transfer ( t-ARN).
Aceste trei tipuri de ARN rezulta prin copierea integrala sau partiala a secventei ADN, pe
baza unui mecanism molecular denumit transcripie s i participa la procesul de biosinteza a
proteinelor, ava nd fiecare o functie specifica .
ARN mesager reprezinta 5-10% din ARN celular. Este prezent n nucleu (unde se
sintetizeaza ) s i n citoplasma . Reprezinta o molecula monocatenara s i contine patru baze
azotate: adenina , guanina , citozina s i uracil a ca ror secventa este similara cu cea a uneia din cele
doua catene ale ADN. Sinteza m-ARN are loc n nucleul celular s i se efectueaza printr-un proces
enzimatic de transcriere a secventei nucleotidice de pe ADN, cu deosebire ca timina din ADN
este nlocuita cu uracil n m-ARN. Procesul de sinteza a m-ARN poarta denumirea de
transcriptie; prin acest proces, informatia genetica codificata n secventa de nucleotide a ADN

7
este transcrisa n secventa de nucleotide a m-ARN prin participarea enzimei ARN-polimeraza
ADN-dependenta .
Dupa terminarea transcriptiei, m-ARN trece la ribozomi unde serves te cu matrice
(tipar) pentru sinteza proteinelor; fiecare proteina sintetizata de celula este codificata de un m-
ARN specific care transmite la nivelul ribozomilor mesajul preluat de la ADN. Acest mesaj se
traduce n secventa aminoacizilor din structura proteinelor sintetizate.
Transmiterea informatiei genetice se reprezinta prescurtat sub forma urma toare, numita
dogma centrala a biologiei moleculare:

transcriptie translatie
autoreplicare ADN ARN proteine

ARN de transfer reprezinta 10 15% din ARN total al celulei, intra n constitutia
citoplasmei unde se ga ses te n stare solubila s i neasociat cu proteinele. t-ARN contine 75-90
mononucleotide s i prezinta o structura monocatenara de tip ordonat cu conformatie pliata .
Unele portiuni ale t-ARN, n care diversele zone ale monocatenei se apropie mai mult ntre ele s i
iau nas tere lega turi de hidrogen ntre secventele de baze azotate complementare (A-U, G-C)
ajunse ntr-o juxtapunere spatiala corespunza toare, au o structura dublu spiralata , dar
intracatenara . n fiecare molecula de t-ARN se ga sesc s i zone ce nu contin lega turi de hidrogen
responsabile de legarea cu aminoacizii n timpul transferului acestora pe ribozomi.
Ala turi de bazele azotate principale, t-ARN contine s i o cantitate de as a-numite baze azotate
minore (atipice): dihidrouracil, tiouracil, metilguanina , timina , care au rolul de a conferi
stabilitate conformatiei sale, favoriza nd interactiunile ntre acele segmente ale catenei
poliribonucleotidice care sunt complementare s i care apar ca regiuni spiralate.

Functia t-ARN consta n transportul din citoplasma n ribozomi a aminoacizilor ce intra

n constitutia unei anumite proteine: prin aceasta t-ARN ndeplines te rol de adaptor
molecular, care ordoneaza fiecare aminoacid ntr-o secventa precisa n lantul polipeptidic, pe
baza recunoas terii mesajului genetic continut n m-ARN atas at la ribozomi s i provenit de la ADN.
Pentru fiecare aminoacid exista un t-ARN specific.
ARN ribozomal se ga ses te n constitutia ribozomilor (pa na la 65% din masa lor)
organite unde are loc sinteza proteinelor. Acest tip de ARN reprezinta 75 80% din totalul ARN
celular. n general, r-ARN reprezinta molecule monocatenare liniare, dar se pot prezenta s i ntr-
o forma elicoidala care rezulta dintr-o retrospiralare a aceleias i catene polinucleotidice. Aceasta
spiralare apare numai n regiuni limitate s i anume acolo unde este posibila stabilirea de lega turi
de hidrogen ntre bazele azotate ale aceleias i catene. r-ARN ndeplines te un rol structural: n
combinatie cu proteinele corespunza toare formeaza structura ribozomilor.

5. Repicarea ADN-ulu
Genomul uman contine 3 miliarde de perechi de baze ale ADN - ului dublu catenar
divizat n 23 de cromozomi. Pe parcursul mai multor procese celulare, incluza nd replicarea ADN
- ului s i repararea, acest ADN dublu catenar trebuie sa fie separate (des irat). Aceasta activitate
este realizata de o clasa de enzime numite helicases ADN. Acestea sunt proteine cu motor care
utilizeaza energia derivata din hidroliza nucleozid trifosfati pentru separarea ADN
- ului. Codurile genomului uman pentru aproape 31 de helicases ADN - ului s i , precum s i
importanta lor n mentinerea stabilita tii genomului sunt subliniate de faptul ca diferite tipuri
de cancer si tulburari genetice umane ( de exemplu ,Werner, Bloom, Rothmund-Thomson, Baller-
Gerold, sindroame Rapadilino, Fanconi Anemie, xeroderma pigmentosum, sindromul Cockayne,
diskeratoza congenitala, trichothiodystrophy sau sindrom de rupere Vars ovia) sunt asociate cu
mutatii genetice. n timpul fazei S a ciclului celular ntreg genomul celulei este duplicat. Acest
proces se bazeaza pe activarea precis controlata a mii de origini de replicare distribuite de-
a lungul cromozomilor. Cu toate acestea, replicarea prin regiuni cromozomiale , care sunt n mod

8
inerent este dificil de duplicat, provoaca stabilitatea furcii de replicare. n cazul n care celulele
nu pot stabiliza n mod corespunza tor au ncetinit s i / sau au stagnat, acestea provoaca
deteriorarea ADN - ului, ava nd un impact negativ asupra integrita tii genomului. Provoca rile care
sunt impuse masinilor de replicare in timpul duplicarii geomului sunt definite "stres
replicativ". Pentru a contracara efectul advers al agentilor endogeni s i exogeni asupra ADN - ului
fidel celulei de replicare activa caile de raspuns sunt replicative. Acestea permit un ra spuns
coordonat s i puternic reglementat care permite echipamentului de replicare sa mentina
stabilitatea s i functionalitatea furci de replicare perturbate. Fundamentala pentru acest ra spuns
este ADN-ul care promoveaza remodelarea furcii de replicare contestate. Din moment ce stresul
de replicare este un factor major de progresie a tumorii , este important din punct de vedere
terapeutic , sa se determine modul n care divers i factori, inclusiv ADN, pentru a contracara
efectul negativ al progresiei perturbate secventei de replicare. Astfel de cunos tinte poate duce la
dezvoltarea de noi abordari terapeutice anti-cancer.
Pa na de cura nd, replicarea ADN-ului n conditii neperturbate, precum s i ra spunsul la
stres replicativ au ramas slab definite. Acest lucru sa datorat n principal lipsei de instrumente
experimentale pentru a analiza cantitativa . Abordarea principala pentru a determina procesul
de replicare complex, bazat pe ma surarea ratelor globale ale sintezei ADN-ului cu impulsuri prin
flux citometric sau analiza de imunofluorescenta. Totus i, aceasta abordare nu permite analizarea
calitativa a impactului unei gene de interes are influenta asupra programului-spatio temporala a
replica rii ADN-ului.
n timp ce fibra de ADN utilizeaza , de asemenea , ncorporarea de nucleotide marcate n
AND-ul nou sintetizat, o diferenta esentiala este aceea ca aceasta tehnica permite vizualizarea
directa a nucleotidelor ncorporate la nivelul moleculelor de ADN unice, spre deosebire de nivel
celular. Dezvoltarea acestei tehnici a permis cercetatorilor pentru a obtine o perspectiva noua in
dinamica de replicare a ADN - ului n eucariote pe o baza la nivel genomului ata t o maniera
cantitativa s i calitativa .
Aceasta tehnica permite replicarea in vivo s i ncorporarea succesiva a celor doua
nucleotide n ADN - ul n curs de formare, furnizeaza informatii despre directionalitate
de replicare. Dupa ce diferitele seturi de nucleotide sunt incorporate, celulele sunt lizate s i
fibrele ADN individuale sunt ntinse pe o lama de microscop. Ulterior, etichetate tracturilor
de replicare a ADN - ului sunt colorate cu anticorpi ndreptati mpotriva nucleotidele halogenate
s i vizualizate prin microscopie cu fluorescenta s i . Prin urmare, o furca n curs de desfa s urare
este reprezentata cu semnale ros ii s i verzi adiacente. Foarte important, utilizarea consecutiva a
doi analogi de nucleotide diferite , nu numai ca furnizeaza informatii cu privire la
directionalitatea secventei de replicare , dar , de asemenea , prezinta o imagine a modului n
care este replicat ADN - ul. Aceasta abordare a fost utilizata cu succes pentru a monitoriza
replicarea ADN -ului, utilizarea originii s i recuperarea secventelor de replicare ntr - o varietate
de organisme, inclusiv celule de pui, Xenopus s i mamifere ( de exemplu celule umane s i de
s oarece).

9
 n ultimii ani, s - au dezvoltat diverse tehnici care utilizeaza principiile de baza ale fibrei
ADN. Ele folosesc platforme microfluidice sau a ADN - ului pentru a captura fibrele de ADN
pe o lama ntinsa de microscop. Atunci ca nd sunt combinate cu fluorescenta de hibridizare
(FSH) , aceste tehnici au potentialul de a oferi perspective mai cuprinza toare n programul
de replicare a ADN -ului la anumite locusuri genomice. Cu toate acestea, ele sunt din punct
de vedere tehnic mai dificile s i necesita echipamente foarte specializate s i relativ scumpe.

Tehnica de fluorografie la fibra de ADN poate fi implementata cu succes n majoritatea

laboratoarelor cu acces la instalatiile de microscopie. Un element-cheie n asigurarea de
reproductibilitate a datelor este de a obtine cel mai bun rezultat posibil de ra spa ndire a
fibrelor de ADN pe o lama de microscop. Etapa critica pentru a realiza acest lucru este
timpul de incubare a suspensiei de celule pe diapozitiv s i timpul de analiza. Aces ti
parametri sunt variabili in functie de temperatura si umiditatea din fiecare mediu de
laborator s i poate necesita ajustare. Numa rul de celule pot necesita, de asemenea, de
optimizare pentru fiecare linie celulara .

n concluzie, tehnica de fibre permite vizualizarea progresiei secventelor de replicare

individuale in interiorul celulelor vii, oferind astfel informatii cantitative s i calitative cu
privire la diverse aspecte ale sintezei ADN-ului.

Bibliografie

10
 1. www.sciencedirect.com
2. www.scribd.com
3. http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1046202316300913
J. Nieminuszczy, R. A. Schwab, W. Niedwied , The DNA fibre technique, 2016.

11