NUMARAREA LEUCOCITELOR

Principiu
Numararea leucocitelor consta in numararea acestora cu ajutorul microscopului intrun volum cunoscut de lichid, diluat intr-o proportie cunoscuta.
Diluarea sangelui are loc folosind o solutie izotona cu leucocitele care se numara, dar
litica cu celelalte elemente figurate ale sangelui.
Material necesar
- lichid de dilutie hipoton pentru hemoliza eritrocitelor cu urmatoarea compozitie:
acid acetic (1 mL);
albastru de metilen 1% (2-3 picaturi);
apa distilata (100 mL)
Se mai numeste si solutie Turk.
Fixarea nucleilor este realizata de acidul acetic, iar colorarea nucleilor de catre
albastrul de metilen.
- pipeta pentru dilutia leucocitelor similara cu cea folosita la numararea eritrocitelor,
compusa din tub capilar gradat si o bula de dilutie cu o perla mobila de culoare alba.
Tubul capilar este gradat; se citesc notatiile 0,5 si 1, iar spatiul dintre ele este divizat
in 10 segmente egale. Deasupra bilei de dilutie se citeste notatia 11. Dilutiile se
realizeaza similar ca la numararea eritrocitelor;
- camera de numarare: se folosesc camere Burker, Burker Turk sau Goreaev;
- microscop identic cu cel folosit la numararea eritrocitelor;
- ace pentru punctie, vata, alcool, eter;
- lamele identice cu cele folosite la numararea eritrocitelor.
Dilutia sangelui
Se aspira sange pana la diviziunea 0,5 (1) apoi lichid de dilutie pana la diviziunea 11
in pipeta Potain cu bila alba. Se realizeaza astfel o dilutie: 1/20 (1/10).
Umplerea camerei de numarat
Se omogenizeaza sangele diluat prin agitarea pipetei. Se arunca primele 2-3 picaturi.
Se umple cu grija camera de numarat (sa nu se prelinga lichid pe santurile laterale si sa nu
patrunda bule de aer).
Se asteapta sedimentarea elementelor figurate (12 minute pentru eritrocite si
leucocite).
Tehnica de numarare
Numararea leucocitelor se face pe minimum 25 patrate mari cu latura de 1/5 mm, ce
insumeaza o suprafata totala, de 1 mm2, identic ca la numararea eritrocitelor.
Se numara intai leucocitele de pe latura, din stanga si sus si apoi cele din interiorul
patratului.
Calcul
Se va face corectia, de suprafata, inaltime, dilutie.
Nr. leucocite/mm3 = nr. leucocite numarate x 10 x 20 = nr. leucocite numarate x 200
Nr. leucocite/mm3 = nr. leucocite numarate x 10 x 10 = nr. leucocite numarate x 100,
dupa cum dilutia a fost 1/10 sau 1/20.
Observatie: in cazul in care apar eritroblasti in sangele periferic, acestia se numara cu
leucocitele, deoarece nu sunt lizati de solutia Turk.
Pentru aflarea numarului real de leucocite se face diferenta dintre numarul total de
elemente nucleate (leucocite + eritroblasti) si numarul absolut de eritroblasti prin calcul
(aplicam regula de 3 simpla la procentul eritroblastilor urmariti pe frotiu fata de leucocite).
Exemplu
Nr. kariocite (K) = 18 000 mm3 (leucocite + eritroblasti)
Nr. eritroblasti (E) pe frotiu = 20 la 100 leucocite

120 K (100 leucocite + 20 eritroblasti) ... 20 E

18 000 K ... X
X = 3000 E
Deci numarul real de leucocite va fi 18000 3000 = 15000/mm3.
FORMULA LEUCOCITARA
Este data de raportul procentual al diferitelor tipuri de leucocite pe frotiul sangelui
periferic, dupa numararea a cel putin 200 de elemente.
Material necesar
- vata, alcool, eter;
- ac seringa de unica folosinta;
- lama de microscop;
- coloratie May Grunwald Giemsa.
Acest colorant va determina urmatoarele coloratii:
- granulocite neutrofile granulatii brune;
- granulocite eozinofile granulatii portocalii;
- granulocite bazofile granulatii albastra inchis negru;
- nuclei: violaceu;
- citoplasma:
neutrofile roz;
limfocite, monocite albastra.
- hematii roz rosiatic.
Tehnica de lucru
Se realizeaza un frotiu de sange cu o picatura de sange proaspat recoltata si se
coloreaza cu May - Grunwald Giemsa.
Se parcurge frotiul, pe sare s-a pus o picatura ulei de cedru, cu obiectivul de imersie
deplasand preparatul in zig-zag intr-un singur sens, pentru a surprinde atat elementele
marginale, cat si pe cele din mijlocul lamei, aceasta deoarece limfocitele au tendinta de a se
grupa spre centru, iar neutrofilele si monocitele se disperseaza spre margine si in franjuri.
Pe masura ce se intalnesc leucocitele in campul microscopic, se noteaza.
Exactitatea rezultatelor creste cu cat numarul de leucocite examinate este mai mare.
Examinarea a mai putin de 100 de elemente are o eroare atat de mare incat analiza
este lipsita de valoare.
Numarul absolut de tip de leucocit exprima numarul continut in 1 mm3 sange.
Se calculeaza cunoscand distributia procentuala si numarul absolut total de leueocite /
mm 3 .
Se aplica regula de trei simpla.
Exemplu
Nr. leucocite = 6 000 /mm3
Nr. limfocite = 25 %
Nr. absolut de limfocite = 25 x 6 000 : 100 = 1 500 / mm3