TEHNICI DE LABORATOR - HEMATOLOGIE CLINICA

SANGELE -este un tesut lichid alcatuit din elemente figurate : eritrocite, leucocite, trombocite si plasma . Hematopoieza este procesul prin care iau nastere celulele sanguine mature prin diferentieri successive de la nivelul celulelor stem pluripotente.La adult hematopoieza este preponderent medulara ( la nivelul maduvei rosii osoase ) cu potential de rezerva extramedular la nivelul ficatului si splinei. Hematiile ( eritrocite,globule rosii ) -sunt eliberate din maduva ca celule mature , fara nucleu,de forma discoidala,7-8 ce contin hemoglobina; au o durata de viata de 120 zile. -seria eritrocitara incepe cu eritroblastul care se diferentiaza trecand prin mai multe faze pana la reticulocit ,care se transforma in 1-2 zile in eritrocit matur. -reticulocitul se poate gasi in sangele periferic in cantitate mica (0.5-1.5 %) sunt celule mai mari decat eritrocitul matur si se pot evidentia prin coloratia supravitala cu albastru-crezil-briliant. -rolul eritrocitelor este de a asigura tranportul de gaze ( CO2,O2) prin intermediul hemoglobinei;aceasta este o cromoproteina formata din hem (contine ioni de fier ) si globina- o proteina din grupa histonelor. Leucocite (globule albe ) -sunt celule differentiate in 3 tipuri de populatii celulare distincte cu forma si rol diferit. 1.seria granulocitelor : cu mieloblastul ca celula cap de serie ce se diferentiaza pana la nivelul granulocitelor mature :

2 -neutrofile (segmentate si nesegmentate diferentierea este data de nucleu care poate fi sau nu lobat) cu citoplasma cu granulatii fine ce contin fosfataza alcalina ,au rol in apararea nespecifica fiind fagocite; -eozinofile cu nucleu cu 2 lobi si granulatii citoplasmatice mari,bogate in peroxidaza ce fixeaza eozina se coloreaza portocaliu,sunt fagocite dar intervin si in distrugerea mediate prin Ac a metazoarelor. -bazofile -cu granulatii albastre (ce contin heparina si histamina)dispuse peste nucleu cu rol in hipersensibilitatea imediata (tip I)(contin receptori Ig E). 2.seria monocite-macrofage : isi au originea tot in maduva osoasa ,in celula stem comuna cu granulocitele, structura acestor celule este dependenta de organul sau tesutul unde se gasesc ,astfel in sange sunt monocite iar in tesuturi macrofage.Monocitele sunt celule de 15 cu nucleu reniform si citoplasma cenusie cu granulatii azurofile;macrofagele sunt celule de 50-200 .Aceste celule au rol in apararea nespecifica (fagocite) si specifica imuna. 3.seria limfocitelor T si B ,sunt celule nucleate cu granulatii putine ,fine rosii purpurii, cu rol in raspunsul imun . Trombocite (plachete sanguine ) -sunt fragmente citoplasmatice de megacariocit cu rol in hemostaza. Plasma reprezinta partea lichida a sangelui ce contine apa 90% si substante organice ( exemplu : proteinele albumine,globuline,fibrinogen;glucide ,enzyme etc)si anorganice(Na,K,Ca,etc) ;are rol in mentinerea presiunii coloidosmotice,in transport,echilibrul acido-bazic,hemostaza,aparare,nutritiv,etc. -prin recoltarea pe anticoagulant se inhiba coagularea sangelui si in eprubeta se va gasi plasma si elemente figurate in suspensie ;daca nu se foloseste anticoagulant se va produce coagularea sangelui si in eprubeta se va gasi cheag si ser(necesar in determinarile biochimice si imunologice).

3 HEMOLEUCOGRAMA -este un examen complet al sangelui recoltat pe EDTA ,in sensul ca da informatii despre numarul elementelor figurate ale sangelui,dozeaza hemoglobina,exprima hematocritul ,o serie de indici celulari si leucograma . -se executa cu ajutorul aparatelor semiautomate sau automate de hemograme. -rolul tehnicianului consta in : -verifica eprubeta daca a fost bine recoltata (nu contine cheaguri,este recoltat in cantitatea ceruta de tub) -verifica daca corespunde etichetarea (numele pacientului sau codul acestuia )cu biletul de trimitere -la inceperea lucrului verifica reactivii, face controlul aparatului pe 2 nivele de control ( solicita calibrari). Principiul de lucru al aparatelor de hemograma se bazeaza si pe metodele clasice de numarare de elemente figurate : -numararea eritrocitelor si a leucocitelor se facea cu ajutorul unor pipette speciale cu care se realiza o dilutie a sangelui pentru eritrocite se folosea solutie Hayem(cu clorura de sodium) care distrugea leucocitele iar pentru leucocite se folosea solutie Turck (cu acid acetic) care liza eritrocitele;prin incarcarea separata a fiecarei pipete cu sange si diluant specific,apoi agitare se obtinea un amestec cu care se incarca o camera de numarat si se trecea la numararea la microscop pe camera a fiecarui tip de celula.Metoda necesita mult timp ,multa indemanare si nu dadea informatii decat despre numarul unui tip de celule. -analiza cu aparatul de hemograma da informatii despre numarul de eritrocite(RBC),leucocite (WBC)trombocite (PLT), cantitatea de hemoglobina (Hgb),dozeaza hematocritul (HCT)-exprimarea procentuala a masei eritrocitare

4 din sangele integral,formula leucocitara : limfocite(LY),granulocyte(GR),monocite(MO) cantitativ si procentual,constante si indici eritrocitari ca :VEM-volum mediu eritrocitar,MCH-hemoglobina crepusculara medie,CHEM concentratia medie de hemoglobina pe eritrocit,etc. FROTIUL DE SANGE -se poate executa cu sange recoltat direct din pulpa degetului (frotiu din sange periferic) sau din sange venos recoltat pe EDTA. -un frotiu bine executat trebuie :-sa fie mai ingust decat lama;sa aibe 2 margini drepte si franjuri in partea terminala,celulele sa fie raspandite uniform,sa nu fie distruse sau deformate. -coloratia cea mai uzitata este coloratia May Grunwald- Giemsa ,care permite o analiza cromatica si observarea tuturor detaliilor structurale necesare identificarii celulelor. Tehnica : -pe o lama curata si degresata se pune o picatura de sange la un capat al ei;cu o alta lama cu colturi rotunjite se intinde sangele pe toata lama (lama slefuita se tine inclinata la unghi de 30 ) printr-o miscare dreapta,egala nu prea rapida ,catre capatul opus picaturii ,terminandu-se cu franjuri. -imediat se usuca lama prin agitare in aer. -se trece la colorarea propriu zisa dupa tehnica recomandata de furnizorul de reactivi; in principiu se foloseste mai intai colorantul May Grunwald care continand methanol face si fixarea frotiului (cam 3 min.)apoi prin diluare cu apa distilata ( se pune acelasi numar de picaturi ca solutia de colorant si se lasa cam 2 min)se coloreaza hematiile si citoplasma leucocitelor. -se scurge colorantul prin inclinare si se acopera cu solutie Giemsa diluata (coloreaza citoplasma si nucleul eozinofilelor si bazofilelor) ; se lasa cam 20 min apoi se spala cu apa robinet si se lasa la uscat in stativ.

5 FROTIUL MEDULAR -se executa in cazul multor hemopatii ;se mai numeste si studiul morphologic al maduvei osoase sau mielograma. -punctia medulara se executa de catre medic ,rolul tehnicianului consta in executarea frotiului si colorarea sa ca si in cazul frotiului sanguin. -se exacuta frotiuri subtiri din suc medular sau frotiuri din grunji prin strivire. -furnizeaza date despre precursorii fiecarei linii celulare sanguine.

V.S.H. (Viteza de sedimentare a hematiilor ) -sange venos recoltat pe anticoagulant-citrat de Na- (dop negru) -se verifica daca a fost omogenizat sangele cu anticoagulantul si proba nu prezinta cheaguri,daca s-a recoltat cantitatea corespunzatoare tubului,daca corespund datele de identificare a probei. -eprubeta se omogenizeaza usor prin rasturnare de 2-3 ori si se aseaza vertical in stativul corespunzator (exista stativ special fiecarui tip de tub; este important pentru citire si interpretare de rezultat) -dupa 30 min se citeste pe scala stativului nivelul plasmei ,valoarea se exprima in mm/ ora -valori crescute fiziologic apar in sarcina si la menstruatie ;viteza cu care sedimenteaza eritrocitele depinde si de tendinta lor de agregare datorata naturii proteinelor ce se fixeaza de eritrocit: in general alfa ,beta globulinele maresc tendinta de agregare eritrocitara ,asa se explica cresterea VSH-ului in stari de boala;viteza creste in anemii datorita numarului si marimii eritrocitelor. -valori de referinta : barbati= 1-10 mm/h, femei =7-15 mm/h.