Salvia nemorosa L.

(Lamiaceae)

1
 Cuprins

INTRODUCERE.................................................................................................................4
I. PARTEA GENERAL.....................................................................................................6
I.1. Date generale privind specia Salvia nemorosa L. (Lamiaceae)....................................6
I.1.1. Etimologie i istoric....................................................................................................6
I.1.2. ncadrarea sistematic a speciei productoare............................................................7
I.1.3. Generaliti privind familia Lamiaceae......................................................................8
I.1.4. Generaliti privind genul Salvia................................................................................8
I.1.5. Descrierea speciei Salvia nemorosa L........................................................................9
I.1.6. Variabilitatea i arealul speciei.................................................................................11
I.2. Cercetri farmacochimice anterioare...........................................................................24
I.3. Cercetri farmacologice anterioare..............................................................................26
II. PARTEA PRACTIC...................................................................................................32
ANALIZA FARMACOGNOSTIC A PRODUSULUI VEGETAL................................32
Salviae nemorosae folium..................................................................................................32
2.1. Obinerea produsului Salviae nemorosae folium........................................................32
2.2. Verificarea identitii...................................................................................................33
2.2.1. Examenul macroscopic............................................................................................33
2.2.2. Examenul chimic.....................................................................................................34
2.2.2.1. Analiza soluiei extractive eterice.........................................................................36
2.2.2.1.1. Identificarea uleiului volatil...............................................................................36
2.2.2.1.2. Identificarea sterolilor i triterpenelor...............................................................37
2.2.2.1.3. Identificarea carotenoidelor...............................................................................38
2.2.2.1.4. Identificarea agliconilor flavonici......................................................................39
2.2.2.1.5. Identificarea cumarinelor...................................................................................42
2.2.2.2. Analiza soluiei extractive alcoolice.....................................................................46
2.2.2.2.1. Identificarea taninurilor.....................................................................................46
2.2.2.2.2. Identificarea compuilor reductori...................................................................49
2.2.2.2.3. Identificarea flavonozidelor...............................................................................50
2.2.2.3. Analiza soluiei extractive apoase.........................................................................50

2
2.2.2.3.1. Identificarea poliuronidelor...............................................................................50
(mucilagii, pectine i gume)...............................................................................................50
2.2.2.3.2. Identificarea compuilor reductori...................................................................52
2.2.2.3.3. Identificarea unor glucide (oze i polioze)........................................................52
2.2.2.3.4. Identificarea taninurilor.....................................................................................55
2.2.2.4. Rezultate i discuii...............................................................................................55
2.2.2.5. Concluzii...............................................................................................................59
2.3. Determinarea calitii produselor vegetale.................................................................59
2.3.1. Determinri pleliminare...........................................................................................59
2.3.1.1. Determinarea pierderii prin uscare.......................................................................59
2.3.1.2. Determinarea substanelor solubile.......................................................................61
2.3.1.3. Rezultatele determinrilor preliminare.................................................................62
2.3.2. Dozarea uleiului volatil extras din funzele speciei Salvia nemorosa L...................62
2.3.3. Analiza HPLC a compuilor fenolici.......................................................................63
III. REZULTATE I DISCUII GENERALE...................................................................71
IV. CONCLUZII GENERALE..........................................................................................72
V. BIBLIOGRAFIE...........................................................................................................73

3
 INTRODUCERE

Lucrarea intitulat Contribuii la studiul farmacognostic al speciei Salvia

nemorosa L. (Lamiaceae) face parte din tema de cercetare a disciplinei ce urmrete
valorificarea terapeutic a florei Dobogene.
Ideea acestei lucrri a venit din faptul c specia de salvie Salvia nemorosa L. este
comercializat n pieele dobrogene, Piaa Griviei, Piaa Brick ca i plant medicinal.
Obiectivul principal al lucrrii a fost analiza chimic a prii aeriene a speciei
Salvia nemorosa L.., pentru stabilirea compoziiei chimice i n special pentru
identificarea unor compui cu aciune antiseptic i coleretic colagog ce ar fundamenta
tiinific utilizarea tradiional a produsului vegetal.

4
 Figura 1. Salvia nemorosa L. (Lamiaceae)1

5
I. PARTEA GENERAL

I.1. Date generale privind specia Salvia nemorosa L. (Lamiaceae)2

I.1.1. Etimologie i istoric

Denumirea genului Salvia provine din latinescul salvare = a vindeca, deoarece unele
specii ale acestor plante aveau ntrebuinri medicale, etimologie unanim admis;

Dorinta salviei este sa-i faca pe oameni nemuritori", se spunea in Evul Mediu.

Medicii greci si romani - Galen, Plinius, Dioscoride - elogiaza si ei salvia,

considerand-o o regina a ierburilor tamaduitoare, cu efecte protectoare magice. In Roma
antica, salvia era considerata o planta sacra, fiind adunata cu un intreg ritual. Cel care
oficia ceremonialul aducea drept jertfa paine si vin, imbracat intr-o tunica alba. Romanii
interziceau folosirea obiectelor de metal, considerand ca devin otravitoare in contact cu
salvia. Mai ales la trecerea dintre iarna si vara, salvia era un remediu nelipsit, fiind
folosita ca detoxifiant, protector impotriva diverselor infectii care apar in aceasta
perioada, tonic nervos si psihic, reintineritor. Se credea ca acela care va consuma salvie
inca de la inceputul primaverii va intineri si el odata cu natura. Exista multe mituri
terapeutice legate de aceasta planta sacra, mituri pe care stiinta moderna se straduieste sa
le inteleaga si sa le dea o utilitate practica.

2
www.jardinsdemmarocalles.com

6
I.1.2. ncadrarea sistematic a speciei productoare

3
http://en.wikipedia.org/wiki/Salvia_nemorosa

7
I.1.3. Generaliti privind familia Lamiaceae

Familia Lamiaceae este o familie de plante ce cuprinde n jur de 210 genuri i

3500 de specii. A fost considerat ca fiind apropiat de Verbenaceae, dar unele studii
filogenetice recente au artat c numeroase genuri clasificate n Verbenaceae aparin i
Lamiaceelor, cu toate c unele genuri de Verbenaceae nu sunt foarte apropiate de
Lamiaceae.
Speciile din aceast familie sunt frecvent aromatice i cuprinde multe plante
culinare cum ar fi busuiocul, menta, rosmarinul, lavanda, oregano, cimbrul. Multe sunt
ierboase i foarte rar sunt arborescente4.
Numele originar al familiei este Labiatae, deoarecepiesele florare au o orientare
specific, petalele fiind afundate intr-o petala mai ridicat i o alt petal mai joas.
Cu toate c este nc o alternativ acceptat a acestui nume, muli botaniti folosesc
numele de Lamiaceae cnd se refer la aceast familie. Frunzele sunt dispuse opus pe
tulpin, fiecare pereche la unghiul potrivit fa de cele dinainte i se mai numesc i
decusate. Florile sunt simetric bilaterale cu 5 petale unite i 5 sepale unite. De regul sunt
bisexuale i verticilate.

I.1.4. Generaliti privind genul Salvia

Genul Salvia are numai 2 stamine, i anume cele anterioare. Acestea au o structur
cu totul particular. Fiecare stamin prezint 2 brae mobile: unul este lung i iese afar
din tub sub buza superioar, purtnd la capt antere; al doilea bra, scurt i lit, este
ndoit de la locul de inserie, rmne n tub i este fr anter. Braele scurte i lite
nchid accesul spre glandele cu nectar. Insecta care caut nectarul, aezat pe buza
inferioar, mpinge braul lit al staminei, care, funcionnd ca o prghie, coboar braul
lung i, atingnd cu antena spatele insectei, o umple de polen. Florile sunt protandre.
Stigmatul bifurcat se las mai trziu n jos, pentru polenizare5.

4
Svulescu Tr. i colaboratori - Flora Republicii Socialiste Romnia Editura Academiei 1950, vol. XII
(pag. 613 619, 631, 632, 637).
5
http://www.eukarya.ro/enciclopedie/regnul-plantae/genul-salvia-jales

8
I.1.5. Descrierea speciei Salvia nemorosa L.

Salvia nemorosa L. este o plant peren, semilemnoas.

Partea subteran este reprezentat printr-un rizom ramificat, lignificat, pivotant,

dezvoltat n sol pn la adncimea de 1,5 m.

Tulpina este lemnoas la baz, erect, muchiat n partea superioar, nalt de 30- 100
cm, pubescent i foarte ramificat.

Frunzele sunt opuse, lanceolate sau ovate, fin zimate, uniform reticulate, cu nervuri
proeminente pe partea inferioar. Frunzele sunt pubescente, de culoare alb-cenuie sau
verde-argintie. Nervurile sunt acoperite de periori mai dei.

Florile sunt labiate, cu caliciul format din 3 sepale superioare, brune-violacee. Corola
este albastr-violacee, uneori alb sau roz. Florile sunt grupate n pseudoverticile, cte 6-
10 situate n vrful tulpinilor, unde formeaz inflorescene spiciforme, simple sau
ramificate.

Fructul conine 4 nucule maronii sau negre, de form ovoid.

9
Figura 2. Salvia nemorosa L.

10
I.1.6. Variabilitatea i arealul speciei
Se cunosc urmtoarele specii ale genului Salvia:
Salvia acetabulosa
Salvia acinos
Salvia acuminata Ruiz & Pav.
Salvia acutifolia Ruiz & Pav.
Salvia adenoclada Briq. = Salvia striata Benth.
Salvia aegyptiaca
Salvia aegyptiaca
Salvia aethiopis L.
Salvia alata Epling
Salvia albimaculata
Salvia albo-caerulea
Salvia alborosea Epling & Jativa
Salvia amarissima
Salvia amethystina
Salvia amplexicaulis
Salvia apiana
Salvia arabica
Salvia areysiana
Salvia argentea L.
Salvia arisanensis
Salvia arizonica Arizona sage
Salvia aspera
Salvia atrocalyx Epling
Salvia aucheri

11
 Salvia austriaca Jacq.
Salvia axillaris
Salvia ayavacensis Kunth [Syn. Salvia ayavacensis Epling]
Salvia aytachii
Salvia azurea Azure Sage
Salvia azurea var. grandiflora
Salvia ballotaeflora
Salvia ballotiflora
Salvia bariensis
Salvia biflora Ruiz & Pav. = Salvia tubiflora Ruiz & Pav.
Salvia biflora var. glabrata Benth. = Salvia tubiflora Ruiz & Pav.
Salvia blancoana
Salvia blodgettii
Salvia bodinieri Vaniot
Salvia bogotensis
Salvia booleana
Salvia bowleyana Dunn
Salvia brandegei
Salvia breviflora
Salvia broussonettii
Salvia bucharica
Salvia bullulata Benth. [Syn: Salvia bullulata Benth.]
Salvia breviflora
Salvia broussonettii
Salvia bucharica
Salvia bullulata Benth. [Syn: Salvia bullulata Benth.]
Salvia cadmica

12
 Salvia caespitosa Montbret et Aucher ex Benth.
Salvia calocalicina Briq. = Salvia pauciserrata subsp. calocalicina (Briq.)
Salvia calycina
Salvia camporum Epling
Salvia canariensis L.
Salvia candelabrum Spanish Sage
Salvia candica
Salvia candicans
Salvia candidissima
Salvia cardiophylla
Salvia carduacea
Salvia carnea
Salvia carnosa
Salvia cavalerici
Salvia chapmanii
Salvia chia
Salvia chicamochae
Salvia chinensis
Salvia claytoni
Salvia clevelandii (Gray) Greene Blue Sage
Salvia clevelandii Fragrant Sage
Salvia coccinea Blood Sage, Tropical Sage
Salvia coccinea Buc'hoz ex Etlinger
Salvia coccinea var. pseudococcinea (Jacq.) A. Gray
Salvia columbariae Benth. California sage
Salvia columbariae Chia, Golden Chia
Salvia compressa

13
 Salvia confertiflora
Salvia consobrina Epling
Salvia corrugata Vahl
Salvia cruikshanksii Benth.
Salvia cryptantha Montbret et Aucher ex Benth
Salvia cupheifolia Kunth = Salvia oppositiflora Ruiz & Pav.
Salvia cuspidata Ruiz & Pav.
Salvia cyanicalyx Epling
Salvia cylindriflora Epling
Salvia cypria Cyprus Sage
Salvia dazlyi
Salvia deserta
Salvia desoleana
Salvia digitaloides Diels
Salvia discolor Kunth
Salvia divaricata
Salvia divinorum Epling et Jativa Mexican Mint, Pipilzintzintli, Holy Sage
Salvia dombeyi Epling [Syn: Salvia dombeyi R. & P.]
Salvia dominica
Salvia dorisiana
Salvia dorrii Gray Ball Sage
Salvia dorrii ssp. argentea
Salvia dorrii ssp. carnosa
Salvia dorrii ssp. dorrii Gray Ball Sage
Salvia dorrii ssp. gilmanii
Salvia dorrii var. carnosa
Salvia dracocephaloides

14
 Salvia elegans Pineapple Sage
Salvia eremostachya
Salvia ermenekensis
Salvia esquirolii Lvl.
Salvia euphratica
Salvia excisa Ruiz & Pav. = Salvia tubiflora Ruiz & Pav.
Salvia falcata
Salvia farinacea Mealy-Cup Sage
Salvia flava
Salvia flocculosa Epling & Mathias = Scutellaria flocculosa Epling & Mathias
Salvia florida Benth.
Salvia fluviatilis
Salvia formosa L'Heritier [Syn: Salvia formosa Gloxin]
Salvia formosa L'Heritier [Syn. Salvia formosa Ruiz & Pav.]
Salvia forskahlei
Salvia fruticosa Miller
Salvia fruticulosa
Salvia fulgens Mexican Red Sage
Salvia funerea Death Valley Sage
Salvia garedzhi
Salvia gilliessi or gilliesii
Salvia glabricaulis
Salvia glutinosa Hardy Sage
Salvia glutinosa Jupiter's Distaff
Salvia glutinosa Yellow Sage, Hardy Sage
Salvia glutinosa L.
Salvia grahamii

15
 Salvia grandiflora Balsamic Sage, Broad-leafed Sage
Salvia grata M. Vahl = Salvia oppositiflora Ruiz & Pav.
Salvia gravida
Salvia greatae
Salvia greggii Autumn Sage
Salvia grisea Epling & Mathias
Salvia griseifolia Epling [Syn: Salvia griseifolia C. Presl ex Benth.]
Salvia guaranitica
Salvia haenkei Benth.
Salvia hapalophylla Epling
Salvia hastaefolia Epling = Salvia rhodostephana Epling
Salvia hayatana
Salvia heerii Regel
Salvia henryi Crimson Sage
Salvia herrerae Epling
Salvia hians
Salvia hidalgensis
Salvia hirta Kunth
Salvia hispanica L. Chia
Salvia horminum Red Topped Sage
Salvia hualiensis
Salvia hypargeia
Salvia hypoleuca
Salvia hyptoides
Salvia incurvata Ruiz & Pav.
Salvia indica
Salvia innoxia Epling & Mathias

16
 Salvia integrifolia Ruiz & Pav.
Salvia jaimehintoniana = Salvia azura var. mexicana
Salvia japonica
Salvia jorgehintoniana
Salvia jurisicii Kosanin
Salvia keerlii
Salvia kietaoensis
Salvia korolkovii
Salvia lachnostoma Epling
Salvia lanata
Salvia lanceolata
Salvia lanicaulis Epling & Jativa
Salvia lanigera
Salvia lavandulae
Salvia lavandulifolia Spanish Sage
Salvia lavanduloides
Salvia lemmonii Lemmon's sage
Salvia leonuroides Gloxin = Salvia formosa L'Heritier
Salvia leucantha Mexican Bush Sage
Salvia leucoclada Benth. = Salvia cruikshanksii Benth.
Salvia leucophylla Greene
Salvia limbata
Salvia lobbii Epling
Salvia longiflora R. & P. = Salvia dombeyi Epling
Salvia longipedicellata
Salvia longispicata
Salvia longistyla

17
 Salvia lupulina
Salvia lycioides Canyon sage
Salvia lyrata Lyre-leaf sage, Wild Sage, Cancerweed,
Lyre Leaf Sage, Kasvaa Pohjois-Amerikassa
Salvia macbridei Epling = Salvia revoluta Ruiz & Pav.
Salvia macrophylla Benth. [Syn: Salvia macrophylla Benth.]
Salvia macrophylla var. malacophylla Benth.
Salvia macrosiphon
Salvia madrensis
Salvia major
Salvia malacophylla Benth.
Salvia mathewsii Benth. = Salvia speciosa C. Presl ex Benth.
Salvia medusa Epling & Jativa
Salvia melaleuca
Salvia mellifera Black Sage
Salvia mellifera Greene California Black Sage
Salvia merjamie
Salvia mexicana
Salvia micrantha
Salvia microphylla
Salvia microstegia
Salvia miltiorrhiza Bunge Danchen, Danshen, Tan Shen, Tan Zhen,
Astral Sage
Salvia miltiorrhiza Bunge [Syn. Salvia tanshen Max.]
Salvia miltiorrhiza Bunge [Syn. Salvia pogonocalyx Hance]
Salvia mirzayani
Salvia misella Kunth [Syn: Salvia misella Kunth]

18
 Salvia mitis Ruiz & Pav. = Salvia punctata Ruiz & Pav.
Salvia mohavensis
Salvia montebrettii
Salvia moorcroftiana
Salvia moschata
Salvia mucidistachys Epling = Salvia ayavacensis Kunth
Salvia munzii
Salvia myuzii or mynzii
Salvia nemorosa Woodland sage
Salvia nemorosa L.
Salvia neurepia
Salvia nicolsoniana
Salvia nipponica
Salvia nodosa Ruiz & Pav. = Salvia formosa L'Heritier
Salvia nubigena
Salvia nutans L.
Salvia obumbrata Epling [Syn: Salvia obumbrata Epling]
Salvia occidentalis West Indian sage
Salvia occidentalis Sw. [Syn: Salvia occidentalis Ruiz & Pav.]
Salvia ochrantha Epling
Salvia officinalis L. Sage, Salvia, Broadleaf Sage, Common Sage, Dalmatian
Sage, Garden Sage, Ryytisalvia
Salvia officinalis var. rubia Broad-Leafed Sage, Dalmatian Sage, Garden Sage,
Red Sage, Sawge, True Sage
Salvia oppositiflora Ruiz & Pav. [Syn. Salvia oppositiflora Kunth]
Salvia oppositiflora Ruiz & Pav. [Syn. Salvia oppositiflora M. Vahl]
Salvia oppositiflora Ruiz & Pav. [Syn: Salvia oppositiflora Hooker]
Salvia oxyodon

19
 Salvia pachyphylla Rose Sage
Salvia palaefolia
Salvia palaestina
Salvia paposana Philippi [Syn. Salvia paposana Benth.]
Salvia paryskii
Salvia patens Gentian Sage
Salvia patens Cav.
Salvia pauciserrata Benth.
Salvia pauciserrata subsp. calocalicina (Briq.) J.R.I. Wood & Harley
[Syn: Salvia pauciserrata calocalicina Briq.]
Salvia pauciserrata var. pauciserrata
Salvia pavonii Benth.
Salvia penduliflora Epling
Salvia perlucida Epling
Salvia persipolitana
Salvia petiolaris Kunth = Salvia scutellarioides Kunth
Salvia phlomoides
Salvia pichinchensis
Salvia pilosa M. Vahl = Salvia rhombifolia Ruiz & Pav.
Salvia pinguifolia Rock Sage
Salvia pinnata
Salvia pisidica
Salvia pitcheri
Salvia plebeia R. Brown
Salvia plumosa Ruiz & Pav.
Salvia pogonocalyx Hance [Syn. Salvia miltiorrhiza]
Salvia pomifera Apple-bearing Sage

20
 Salvia potentillifolia
Salvia praeclara Epling
Salvia pratensis Prairie-Meadow Sage, Meadow Clary, Meadow Sage
Salvia pratensis L.
Salvia prionitis
Salvia procumbens Ruiz & Pav. = Salvia occidentalis Sw.
Salvia przewalskii Maxim.
Salvia pseudococcinea Jacq.
Salvia pseudorosmarinus Epling
Salvia psilantha Epling
Salvia psilostachya Epling
Salvia puberula
Salvia punctata Ruiz & Pav. [Syn. Salvia punctata Ruiz & Pav.]
Salvia punctata Ruiz & Pav. [Syn: Salvia punctata Epling]
Salvia punctata var. glabra Epling = Salvia punctata Ruiz & Pav.
Salvia pustulata Benth. = Salvia bullulata Benth.
Salvia radula Epling = Salvia styphelus Epling
Salvia reflexa Lance-Leaved Sage
Salvia reflexa Rocky Mountain Sage
Salvia regeliana
Salvia regla Mountain Sage
Salvia repens
Salvia revoluta Ruiz & Pav. [Syn. Salvia revoluta Epling]
Salvia rhodostephana Epling [Syn. Salvia rhodostephana Epling]
Salvia rhombifolia Ruiz & Pav. [Syn: Salvia rhombifolia M. Vahl]
Salvia rhombifolia var. glabrior Benth.
= Salvia paposana Philippi

21
 Salvia rhyacophila
Salvia rigosa (rugosa?)
Salvia riparia Kunth = Salvia misella Kunth
Salvia rivularis Gardner
Salvia roemeriana Cedar Sage
Salvia rubescens Kunth
Salvia rubrifaux Epling
Salvia rufula
Salvia rugosa
Salvia runcinata
Salvia rusbyi Britton
Salvia sagittata Ruiz & Pav.
Salvia saheudica
Salvia salvatrix Narrow-leaved White Sage, Sage the Saviour
Salvia salviaphilos
Salvia santolinifolia
Salvia sapinae
Salvia sarmentosa Epling
Salvia scabiosifolia
Salvia scandens Epling
Salvia sclarea Clary, Cleareye, Salvia, Clarry, Christs Eye, Clary Sage, Clear
Eye, Common Clary, Eyebright, Garden Clary, Orvale, See Bright,
Muskatellisalvia, Muscatel Sage, Tout-bonne, Clary Wort, Horminum,
Gallitricum, Muskateller Salbei.
Salvia sclarea L.
Salvia sclareoides
Salvia sclareopsis
Salvia scrobiculata Meyen ex Bentham

22
 = Salvia tubiflora Ruiz & Pav.
Salvia scutellarioides Kunth [Syn: Salvia scutellarioides Kunth]
Salvia serotina
Salvia sideritidis C. Presl ex Benth. = Salvia griseifolia Epling
Salvia silvarum Epling
Salvia sisymbrifolia
Salvia smyrnaea
Salvia somaliensis
Salvia sonomensis
Salvia spathacea Pitcher Sage
Salvia speciosa C. Presl ex Benth. [Syn. Salvia speciosa Benth.]
Salvia sphaceloides
Salvia spinosa
Salvia splendens Scarlet Sage
Salvia splendens Ker-Gawler
Salvia splendens Sellow ex Roem. & Schult.
Salvia squalens Kunth
Salvia stachydifolia Benth.
Salvia stenophylla
Salvia stepposa
Salvia striata Benth. [Syn. Salvia striata Briq.]
Salvia strictiflora Hooker = Salvia oppositiflora Ruiz & Pav.
Salvia styphelus Epling [Syn: Salvia styphelus Epling]
Salvia subincisa Saw-Tooth Sage
Salvia subscandens Epling & Jativa
Salvia summa Great Sage
Salvia syriaca

23
 Salvia tafallae Benth.
Salvia tanshen Max. [Syn. Salvia miltiorrhiza]
Salvia tenella
Salvia tesquicola
Salvia texana
Salvia tianschanica
Salvia tiliaefolia
Salvia tiliifolia Vahl
Salvia tingitana
Salvia tomentosa Mill.
Salvia tortuosa
Salvia trichoclada
Salvia trifilis Epling
Salvia triloba Spanish Sage
Salvia tubiflora Ruiz & Pav. [Syn. Salvia tubiflora Meyen ex Bentham]
Salvia tubiflora Ruiz & Pav. [Syn: Salvia tubiflora Benth.]
Salvia tubulosa Epling
Salvia tuerckheimii
Salvia umbratica Epling = Salvia obumbrata Epling
Salvia uribei
Salvia urticifolia Nettle-Leaf Sage
Salvia urticifolia kasvaa Pohjois-Amerikassa
Salvia uruapana
Salvia vargasii Epling
Salvia vaseyi
Salvia verbenaca L. Oculus Christi, Vervain Sage,
Wild English Clary, Wild Clary

24
 Salvia verbenacea
Salvia verticillata Lilac Sage
Salvia vestita Benth.
Salvia virgata Jacq.
Salvia viridis Painted Sage
Salvia viridis Red-topped Sage
Salvia viridis Salvia Bluebeard
Salvia weberbaueri Epling
Salvia willeana
Salvia xanthocheila
Salvia xanthophylla Epling & Jativa
Salvia yunnanensis C.H. Wright6.
Salvia nemorosa L. este rspndit n Europa de Est, Asia de Nord, Romnia,
Bulgaria, Serbia, Turcia7.

I.2. Cercetri farmacochimice anterioare

n Salvia officinalis L. principiul activ de baz este uleiul volatil, coninutul cruia, n
dependen de diferii factori, constituie 0,38-2,5%. Componentul principal al uleiului
volatil este cineolul (pn la 15%); terpenelc biciclice sunt prezente prin tuion, pinen,
borneol.

Alte pricipii active din Salvia officinalis L. sunt: flavone, ODP-uri (acid cafeic, acid
clorogenic, acid rosmarinic), taninuri catehice, principii amare (picrosalvina), triterpene
pentaciclice (acid ursolic, acid oleanolic), vitamina C, vitamina B1, enzime.

6
Flora Hainanica Tomus IV, 1977. Peking: Science Press pp.42-43.
7
http://www.floridata.com/ref/s/Salvia_nemorosa.cfm.

25
 O

OH
HO

OH
acid cafeic

OH

O
H

HO
acid ursolic

OH HO
HO

O OH
O
acid ascorbic

Din literatura de specialitate se cunoate pentru Salvia nemorosa L. urmtoarea

compoziie chimic:

ODP-uri (acid rosmarinic, acid cafeic)8;

Ulei volatil;

8
Janicsk, Gbor, et al. "Comparative studies of the rosmarinic and caffeic acid contents of Lamiaceae
species." Biochemical systematics and ecology 27.7 (1999): 733-738.

26
 Flavonozide (salvigenol, eupatilinol, apigenol, luteol)9;

Iridoide: glicoside megastigmane, salvionozide A-C, dintre care, (6S,9R)- i

(6S,9S)-roseozide, (6R,9R)- i (6R,9S)-3-oxo--ionol glucozide i blumeol C
glucozide10;

Diterpene (nemorosin)11;

nemorosin

Tritrpene (salvinemorol);

Saponozide (acid ursolic, acid oleanolic)12.

I.3. Cercetri farmacologice anterioare

Frunzele de Salvia officinalis L. se folosesc sub form de infuzie, dccoct sau extract
fluid, ca antinevralgic, hipoglicemiant i coleretic. Se mai folosete de asemenea, ca
antisudorific. Sub form de gargarisme se obin rezultate foarte bune n tratamentul
anginei tonsilare i tonsilita cataral, ca antiinflamator bucal i faringian (tinctura,
preparatul Salvina - extracie acetonic dens)13.

9
http://en.wikipedia.org/wiki/Salvia_nemorosa
10
Takeda, Yoshio, et al. "Megastigmane glycosides from< i> Salvia nemorosa</i>."Phytochemistry 44.1
(1997): 117-120.

11
Ulubelen, A., et al. "Terpenoids from< i> Salvia nemorosa</i>." Phytochemistry 35.4 (1994): 1065-1067.

12
Janicsk, Gbor, et al. "Study of the oleanolic and ursolic acid contents of some species of the
Lamiaceae." Biochemical systematics and ecology 34.5 (2006): 392-396.

13
Nistreanu Anatolie, Farmacognozie, Chiinu, 2000, p. 174.

27
 Pentru splturi vaginale, ca antiinflamator, poate fi recomandat infuzia obinut din
frunze de salvie i flori de mueel.

Frunzele intr n componena speciilor expectorante, emoliente, stomachice etc.

Un grup de cercettori de turcia a demonstrat c totalul polifenolic din Salvia

nemorosa L. a prezentat aciune antioxidant14.

Activitatea antioxidant a fost determinat prin mai multe metode i de cercettori din
Serbia15.

Activitatea antimicrobian a unor extracte din Salvia nemorosa L. a fost demonstrat

pe tylpini de Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli16.

Salviae aetheroleum

Uleiurile volatile sunt produi ai metabolismului secundar vegetal, secretai de

celule specializate n acest scop, reprezentate de diferite organe i depozitate n vacuole,
pungi secretoare i n canale secretoare sau n peri glandulari sub form de lichide
uleioase cu miros aromat plcut. Sunt amestecuri de diveri constituieni chimici
nzestrai cu interesante proprieti farmacologice.
Ca i n cazul altor produse vegetale i la uleiurile volatile aciunea este dat de
anumii constituieni chimici sau de ansamblul lor. De aici s-a dedus c aromaterapia este
de fapt o chimioterapie natural ,o biochimioterapie.
ntre structura chimic, conformitate spaial i influenele electronice ale
constituienilor uleiurilor volatile , pe de-o parte i activitatea lor biologic, pe de alt
parte, exist o strns legatur, cunoaterea acestora este de o deosebit importan
14
SENGUL, MURAT TOSUN1 SEZAI ERCISLI2 MEMNUNE, et al. "Antioxidant properties and total
phenolic content of eight Salvia species from Turkey." Biol res 42 (2009): 175-181.

15
Malencic, D. J., et al. "Screening for antioxidant properties of Salvia nemorosa L. and Salvia glutinosa
L." Oxidation communications 25.4 (2002): 613-619.

16
Sonboli, Ali, Babak Babakhani, and Ahmad Reza Mehrabian. "Antimicrobial activity of six constituents
of essential oil from Salvia." Zeitschrift fur Naturforschung C-Journal of Biosciences 61.3-4 (2006): 160-
164.

28
practic deoarece permite explicarea,confirmarea i prevederea activitii farmacologice a
acestor subsubstane naturale.
Prima ncercare de corelare a activitii uleiurilor volatile cu structura chimic a
constituienilor o ntlnim la R. M. Gattefosse, fondatorul aromaterapiei.
Descriind rezultatele sale experimentale Aromatherapie 1931 , el clasific
uleiurile volatile n antiseptice, antitoxice, calmante tonifiante, stimulante.
Dei ulterior au existat numeroase preocupri n acest domeniu, timp de mai multe
decenii, aromaterapia a nregistrat progrese prea mari, majoritatea cercettorilor
mulumindu-se n a consemna rezultatele practice i n a le populariza; recent n 1990 ali
reprezentani ai colii franceze: Franchomme, Jollois i Pensel justific activitatea
terapeutic prin interrelaia: materie-energie-informatie. Prin acest nou concept, lucrarea
lor Laromatherapie exactement ridic aromaterapia la rangul de stiin medical.
Structura chimic a constituienilor activi din uleiul volatil acioneaz prin:
numrul atomilor de carbon;
dispoziia atomilor;
configuraia spaial;
locul de formare al funciunilor chimice pe schelet;
ncrcarea electric;
orientarea n spaiu a funciilor oxigenate,eventual sulfurate sau azotate.
n conformitate cu comportamentul electronic, cu popularitatea constituienilor
uleiurilor volatile, R-Jollois i colaboratorii i distribuie ntr-un cadru grafic pe care l
numete referenialul electric.
Acesta este alctuit din ntreptrunderea a dou drepte perpendiculare:pe abscis
se arnjaz pe grupe chimice n funcie de polaritate, toi constituienii uleiului volatil de
la apolar la polar i pe ordonat se ncadreaz toi constituienii, n funcie de energia
electric, de la negativ la pozitiv. Dup intensitatea potenialului electric se deosebesc trei
nivele energetice:slab, mediu i intens.
n raport cu acest referenial elctric sunt prezentate apoi proprietaile biologice
absorbia, transportul seric, receptia celular i cele farmacoterapeutice generale i
particulare.

29
 Activitatea general const n captarea de electroni (negativare) sau n cedarea de
electroni (pozitivare) precum i n cedarea de protoni sau (acidifiere). Moleculele puin
oxidate - hidrocarburi i terpene saturate, alcooli, fenoli, oxizi, eter-oxizi sunt pozitive.
Ele pot capta electronii. Compuii mai oxidai: cetonele, aldehidele, esterii, terpenele
polinesaturate sunt negativi. Ei au exces de electroni, pe care i pot ceda altor
constituienii.
Uleiul volatil de salvie este uleiul obinut prin antrenarea cu vapori de ap a frunzelor
i vrfurilor nflorite, proaspt recoltate de la specia Salvia officinalis L., jale
(Lamiaceae).
Proprieti: lichid galben sau galben verzui, cu miros caracteristic i gust aromat,
arztor i amrui.
Compoziie chimic: cetone monoterpenice (tuiona, camfora), eucaliptol, esteri
(acetat de linalil).
Aciune: mucolitic, puternic expectorant, lipolitic, cicatrizant, antispastic,
antimicrobian.
ntrebuinri: afeciuni respiratorii i ORL (rinite, sinuzite, bronite), afeciuni uro-
genitale (infecii genitale, leucoree), afeciuni endocrine (amenoree premenopauz)
afeciuni digestive (enterite, infecii biliare).
Contraindicaii: femeilor gravide i copiilor (neurotoxice i avortive).
n uleiul volatil din Salvia nemorosa L. s-au identificat urmtorii compui1718:
Tabel 1. Compoziia chimic a uleiului volatil din Salvia nemorosa L.
Nr. Componente R.I.a %
Hidrocarburi monoterpenice 16.52
1 -Tuien 932 1.53
2 -Pinen 938 0.42
3 Fenhan 951 0.24
4 Camfen 953 0.11
5 Sabinen 974 7.69
7 -Pinen 978 0.43
8 -Myrcen 992 0.29
9 -Terpinen 1017 0.40
17
Mirza, M., and F. Sefidkon. "Essential oil composition of two Salvia species from Iran, Salvia nemorosa
L. and Salvia reuterana Boiss." Flavour and fragrance journal 14.4 (1999): 230-232.
18
Sonboli, A., Babakhani, B., & Mehrabian, A. R. (2006). Antimicrobial activity of six constituents of
essential oil from Salvia. Zeitschrift fur Naturforschung C-Journal of Biosciences, 61(3-4), 160-164.

30
 11 Limonen 1035 3.07
12 -Terpinen 1063 1.06
13 Terpinolen 1088 0.38
Monoterpene aromatice 0.90
Hidrocarburi
10 p-Cimen 1026 0.90
Monoterpene oxigenate 5.12
14 Z-Sabinen hidrat 1067 0.42
15 -Tuion 1104 0.36
16 - Tuion 1114 0.13
17 Camfora 1144 0.49
18 Menton 1156 0.72
19 Mentofuran 1164 0.15
20 Borneol 1167 0.14
21 Menthol 1173 0.47
22 Terpinen-4-ol 1178 1.21
24 Pulegon 1236 0.09
25 Acetat de bornil 1288 0.19
27 Acetat de Citronelil 1354 0.28
31 Z-Jasmon 1395 0.19
Compui aromatici oxigenai 0.14
Monoterpene
23 p-Cimen-8-ol 1182 0.14
36 Geranil aceton 1453 0.14
Hidrocarburi sesquiterpenice 39.19
26 -Cubeben 1352 0.81
28 -Copaen 1375 0.80
29 -Bourbonen 1383 1.03
30 -Cubeben 1389 2.22
32 Longifolen 1403 0.24
33 E-Cariophillen 1417 22.95
34 -Elemen 1432 0.53
35 Aromadendren 1440 0.34
37 -Humulen 1454 2.17
38 -Muurolen 1475 5.23
39 -Zingiberen 1496 0.40
40 -Cadinen 1514 1.01
41 -Cadinen 1524 1.46
Sesquiterpene aromate 26.15
42 Cariophilenol 1567 2.97
43 Spathulenol 1576 3.39
44 Caryiofilen oxide 1584 17.98
45 Viridiflorol 1593 1.53
46 Vidrol 1597 0.28
Compui alifatici 1.39

31
 6 3-Octenol 976 1.00
47 Nonadecan 1900 0.16
48 Eicosan 2001 0.23
Total identificai 88.37

32
 II. PARTEA PRACTIC
ANALIZA FARMACOGNOSTIC A PRODUSULUI VEGETAL
Salviae nemorosae folium

Analiza farmacognostic i fitochimic urmrete stabilirea identitii produselor

folosite n fitoterapie ca atare sau ca materie prim, a puritii i calitii lor.
Metodele de analiz cuprinse n aceast metodologie, dup natura lor, pot fi
grupate n calitative i cantitative.
Cu ajutorul metodelor calitative se urmrete determinarea identitii produselor
vegetale analizate, cu ajutorul caracterelor macroscopice i microscopice precum i prin
decelarea principalelor grupe de principii active.
Prin metodele de analiz cantitativ se urmrete stabilirea puritii produselor
vegetale i determinarea calitaii acestora, prin determinri preliminare (pierdere prin
uscare, substane solubile, cenua etc) i determinarea coninutului n principii active.
Metodele de analiz menionate se aplic n mod difereniat, n funcie de
produsele vegetale cunoscute (verificarea indentitii) sau necunoscute, adic
produsevegetale noi (stabilirea identitii).
In cazul unui produsului vegetal puin studiat se efectueaz determinrile enunate
mai sus, ca fiind necesare pentru verificarea identitii, stabilirea puritii i determinarea
calitii acestuia.

2.1. Obinerea produsului Salviae nemorosae folium

Obinerea produsului de cercetat s-a fcut prin recoltatul manual a prii

supraterestre a speciei din zona Movila Verde, judeul Constana, n perioada 2-10 Iunie
2011.
Frunzele s-au desprins dup tulpini i s-au sortat. Materialul vegetal sortat a fost
supus uscrii la umbr, timp de 3 - 4 sptmni, pn cnd a devenit friabil, dup care a
fost ambalat n pungi de hrtie i conservat ntr-un spaiu aerisit.

33
 Un exemplar din planta recoltat se afl n custodia laboratorului de farmacogozie
al Universitii ,,Ovidius Constana n colecia exsiccata.
n vederea verificrii identitii i stabilirii calitii produsului recoltat s-a aplicat
analiza farmacognostic.

2.2. Verificarea identitii

2.2.1. Examenul macroscopic

Material i metod

Acest examen este prima etap n investigarea produselor vegetale cunoscute sau
nc nestudiate.
Se efectueaz prin examinarea cu ochiul liber a ntregii plante (tulpin, rdcin,
frunz, floare, fruct, smn) sau cu o lup observnd aspectul, fractura, dimensiunile,
culoarea, gustul i mirosul lor.

Rezultate

Examenul macroscopic a permis observarea urmtoarelor caractere:

frunze opuse, lanceolate fin zimate, pubescente;
culoare alb-cenuie sau verde-argintie;
nervuri proeminente pe partea inferioar;

Concluzii

Produsul vegetal analizat Salviae nemorosae folium corespunde celor descrise n

flora R.P.R. pentru frunzele speciei Salvia nemorosa L. Astfel, putem afirma c produsul
vegetal a fost identificat din punct de vedere macroscopic.

34
2.2.2. Examenul chimic

Analiza chimic calitativ presupune extracia succesiv a produselor vegetale, cu

solveni de polariti diferite i separarea cu ajutorul metodelor chimice, urmate de
efectuarea unor reacii specifice cu ajutorul crora s poat fi identificate diferite grupe de
principii active sau anumii constituieni chimici.

Material i metod

n scopul efecturii analizei chimice globale se realizeaz mai nti extracia

principiilor active din produsul vegetal pulverizat cu un solvent nepolar (eter etilic, eter
de petrol, benzen, hexan, cloroform etc.), apoi cu un solvent polar (etanol, metanol) i n
cele din urm apa. Se obin urmtoarele fraciuni:

1. sol. extractiv eteric (A)

2. sol. extractiv alcoolic (B)
3. sol. extractiv apoas (C)
n extractul eteric se gsesc compuii chimici lipofili, iar n celelalte dou
compuii chimici hidrofili.
Pentru identificarea compuilor chimici din cele trei extracte acestea sunt
analizate separat, folosind metode corespunztoare propietilor fizico-chimice ale
fiecrui grup de principii active.

Materiale necesare:
produsul vegetal pulverizat: Saturej coeruleae herba

vesel de laborator: pahare Erlenmayer; eprubete, pahare Berzelius, plnii de diferite

dimensiuni, baghete de sticl, hrtii de filtru, baloane cu fund rotund, cilindrii gradai,
pipete, plnii de separare, capsule de porelan, spatule, baloane cotate,

solveni: ap distilat, alcool metilic, eter etilic, eter de petrol, aceton, cloroform;

35
 reactivi de analiz: acid sulfuric concentrat (R), acid sulfuric 1N, acid sulfuric 0,05 N,
acid clorhidric 10 % (R), acid clorhidric 5 % (R), acid clorhidric 1N (R), acid clorhidric
0,5 N (R), acid clorhidric 10% (R), acid clorhidric 5% (R), acid clorhidric 2% (R), acid
nitric 10% (R), acid acetic glacial (R), alcool etilic concentrat (R), metanol 50% (R),
anhidrid acetic acid sulfuric concentrat (R), amoniac concentrat (R), amoniac 10%
(R), amoniac 2% (R), hidroxid de sodiu 30% (R), hidroxid de sodiu 10% (R), hidroxid de
sodiu 1 N (R), hidroxid de sodiu 0,5 N (R), hidroxid de potasiu 10% (R), soluie alcoolic
0,5 N de hidroxid de potasiu (R), hidroxid de potasiu 1N (R), hidroxid de potasiu 10% n
soluie alcoolic (R)soluie alcoolic de hidroxid de potasiu 1N (R), reactiv Tollens
(azotat de argint amoniacal) (R), reactiv Carr-Price (clorur de stibiu (III) soluie
cloroformic) (R), acetat de sodiu 10%, clorur de stibiu (III) n acid acetic glacial i
metanol, sulfat de sodiu anhidru, reactiv Mayer (tetraiodomercuriat de potasiu) (R),
reactiv Marquis (R), reactiv Bertrand (acid silico-wolframic soluie) (R), reactiv Deniges
(reactiv sulfomercuric) (R), pan de magneziu, clorur feric 1% (R), soluie Fehling (I +
II) (R), clorur de sodiu, soluie acetonic de ninhidrin 1% (R), soluie clorhidrat de
hidroxil amin 0,5 N (R), clorur feric 3% (R), sulfat de cupru (II) 5%, soluie 1% de
acid 3,5-dinitrobenzoic (R), Sudan III (R), soluie alcoolic 1% de timol (R), reactiv
Lugol (iod n iodur de potasiu) (R), acetat bazic de plumb (R), acetat de plumb 5% (R),
clorur de fier (III) 25% (R), clorur de stibiu (III) 0,4% (R), hexacianoferat (III) de
potasiu 5% (R), , reactiv Arnow (R), reactiv Bouchardat (R), reactiv CarrPrice (R),
reactiv DragendorfMunier (R), reactiv Fehling (R), reactiv Styassny (R), sulfat de cupru
(II) 5% (R), vanilin sulfuric (R), clorur de psulfonbenzen diazoniu (acid sulfanilic
diazotat) (R)

Indicatori: albastru de toluidin (R), ap de amidon, metilorange,

36
2.2.2.1. Analiza soluiei extractive eterice

Modul de lucru

S-au cntrit 20g de produs vegetal proaspt pulverizat, care s-au extras mai nti
cu eter etilic (2 x 50mL), prin agitare la rece timp de 15 minute (baia electric gradaia 2).
Dup decantare i filtrare soluiile se reunesc i se concentreaz pe baia de ap pn la 50
ml. S-a obinut soluia A. Aceasta a fost folosit pentru efectuarea reaciilor caracteristice
compuilor lipofili ( schema I)19. Produsul vegetal epuizat cu eter s-a pstrat pentru
extraciile ulterioare cu ali solveni.
Din extractul eteric se pot identifica compui chimici lipofili ca: uleiuri volatile,
substane grase, acizi grai i rezinici, alcaloizi baze, agliconi flavonici, antrachinonici i
cumarinici, steroli, triterpene i carotenoide.

2.2.2.1.1. Identificarea uleiului volatil

Uleiurile volatile sunt compui ai metabolismului secundar vegetal secretai de

celule specializate n acest scop, repartizai n diferite organe i depozitai n vacuole,
pungi sau canale secretorii, ori peri glandulari, sub form de lichide uleioase, volatile, cu
miros plcut, aromat. Ele sunt amestecuri de diveri constituieni chimici dotai cu
interesante propieti terapeutice.
Uleiurile volatile sunt amestecuri complexe (5000 7000 constituieni chimici) n
care predomin constituienii mono- i sesquiterpenici, dar conin i compui aroamatici,
frecvent derivai fenil-propanici; foarte rar se ntlnesc diterpene (sclareol n Salvia
sclarea L.). Compuii terpenici pot fi hidrocarburi sau derivai oxigenai (oxizi, alcooli,
aldehide, cetone, acizi) sau produi de reacie ai acestora (eteri, esteri).

19
Ciulei I., Istudor V., Palade M., Albulescu D., Grd C. E. Analiza farmacognostic i fitochimic a
produselor vegetale Tehnoplast Company, Bucureti 1995, vol. II, (pag. 409 418);

37
 Mod de lucru
Se evapor pn la sec un volum de 20 mL extract eteric. Reziduul se reia cu
cantiti mici de alcool. Dac dup evaporarea alcoolului se percepe un miros plcut
aromat se poate spune c produsul vegetal conine ulei volatil.n prezena a 1 2 picturi
tinctur Alkanna sau Sudan III (R) uleiul volatil se coloreaz n rou.

2.2.2.1.2. Identificarea sterolilor i triterpenelor

Fitosterolii liberi (stigmasteroli i ergosteroli) sunt steroli care la C 17 au o caten

de 8-10 atomi de carbon iar la C10 i C13 cte un metil. Tot n grupa sterolilor intr
sapogenoli saponozidelor sterolice i glicoalcaloizii (derivai sterolici de tip spirosolan).
Aceste clase reprezint principalele surse vegetale pentru semisinteza industrial a
hormonilor steroizi.
O CH3

H
O

HO sarsapogenol
H (25S, H-5
Figura 3 - Sapogenol sterolic

Triterpenele sunt agliconi ai saponozidelor triterpenice, de obicei pentaciclici, mai

rar tetraciclici i n mod excepional triciclici, alctuii din 30 de atomi de carbon.

COOH COOH COOH

HO HO HO

Figura 4 - Tipuri de acizi triterpenici (de la stnga la dreapta: ac. ursolic, ac.
oleanolic, ac. betulinic)

38
 Ele pot avea structur -, - amirinic, lupeolic (cele pentaciclice) sau
damaranic (cele tetraciclice).
Structura nucleului sterolic se identific cu ajutorul reaciei Liebermann-Burchard
conform reaciei urmtoare.

R1 R1 R1
CH3 CH3 CH3
H2SO4conc
R R R
-4 H 2O
OH
HO
genol dimer verde
Figura 5 - Reacia Liebermann-Burchard

Mod de lucru.
3 mL extract eteric (E) se evapor ntr-o capsul de porelan pe baia de ap (la ni) dup
care se dizolv apoi reziduul obinut n 5 mL cloroform i se adug 0,5 mL anhidrid
acetic. Se trece soluia rezultat ntr-o eprubet, dup care cu ajutorul unei pipete se
aduce la fundul unei eprubete, 2 mL acid sulfuric concentrat (R). La zona de contact a
celor dou lichide apare un inel rou brun iar dup cteva minute stratul superior se
coloreaz n verde intens, dac exist steroli sau violet dac exist triterpene.

2.2.2.1.3. Identificarea carotenoidelor

Carotenoidele sunt substane de natur terpenoidic, cu un numr de 40 atomi de

carbon n molecula lor, de culoare galben, portocalie sau roie datorit unui sistem de
duble legturi conjugate i care fiind n general insaponificabile, sunt dotate cu propieti
puternic lipofile.
Structura caracteristic carotenoidelor provine, n primul rnd, din nsuirile
moleculei format din cei 40 atomi de carbon i coninnd un numr considerabil de
duble legturi conjugate. De regul, capetele moleculei pot fi diferite structural i aceasta
constituie i caracterul diferenial ntre diferitele specimene carotenoidice, dar marea lor

39
majoritate conin alctuit din 18 atomi de carbon i 4 grupri metilice laterale, simetric
plasate.

(1)

(2)

Figura 6 - Structura carotenoidelor -iononice, (1) caroten, (2) caroten.

n aceast zon se afl plasate dublele legturi conjugate i care constituie

sistemul cromofor al moleculei. Prin nchiderea captului catenei polienice, datorit
structurii pseudociclice i ca urmare unui proces de ciclizare, se formeaz structura -
iononoc, tipic pentru grupa carotenoidelor.

Mod de lucru.
Se evapor 3 mL extract eteric (E) pe baia de ap (la ni) apoi se trateaz
rezidduul cu 3 picturi reactiv Carr-Price (R). Pigmeni carotenoidici dau cu acest reactiv
o culoare albastr care trece n rou. La adugare de acid sulfuric concentrat,
carotenoidele se coloreaz n albastru intens sau n verde-albastru.

2.2.2.1.4. Identificarea agliconilor flavonici

Flavonele, n sens larg, sunt substane fenolice naturale, de tip C6-C3-C6, derivai
ai 2-fenilbenzopiranului (flavanului) sau 3-fenilbenzopiranului (izoflavanului), substituii
cu diferii radicali: OH, OCH3, CH3, C2H5, isopentenil etc.

40
 1 3I
8
7 O 2
B 4I
A
6 3 5I
5 4
FLAVAN

O O

R R
O O
R R

flavon H flavanon H
flavonol OH flavanolol OH
Figura 7 - Structura chimic a flavonelor

n funcie de gradul de nesaturare a segmentului C 2-C3 i de prezena gruprii OH

la C3, se deosebesc: flavone, flavonoli, flavanone, flavanololi.
Pn n prezent se cunosc aproximativ 3000 de astfel de compui, dintre care circa
500 se gsesc n stare liber, n plantele superioare (criptogame vasculare, gimnosperme,
angiosperme); foarte rar se ntlnesc la alge (ex. peonidolul n specii de Chlamidomonas).
Au fost semnalate n insecte i la fluturi unde provin din polenul sau nectarul florilor cu
care acetia se hrnesc. Cele mai rspndite sunt flavonozidele, antocianozidele i
catecholii.
Flavonoidele se gsesc att sub form de agliconi, ct i sub form glicolizat.
Partea glucidic poate fi alctuit din una sau mai multe oze legate C-O-C la oricare OH
de pe nucleu sau C-C.
Agliconii flavonozidelor sunt solubili n alcool, acetat de etil, solveni apolari,
insolubili n ap. Datorit hidroxizilor fenolici sunt solubili i n soluii alaline.
Heterozidele sunt solubile n ap, alcool concentrat i diluat, solubile specific n acetat de
etil, aceton, insolubile n solveni polari.

41
 Heterozidele se gsesc dizolvate n sucul celular, iar agliconii predomin n
esuturile lignificate (vase de lemn, fibre, ideoblaste, cuticul etc.)

Identificarea flavonozidelor poate fi efectuat datorit:

reducerii gruprii ceto de la C4 (reacia cianidolului sau Shibata);
formrii chelailor ntre gruparea ceto de la C4 i oxidrilii vicinali, n poziiile
,,orto i ,,para sau ntre dou grupri OH fenolice, de pe nucleul B (poziia
para);
transformrii fenolilor n fenoxizi, cu itensificarea culorii galbene .

OH OH
OH - OH
Cl
HO O +
+ HO O
H

OH Mg + HCl
OH
OH O OH
Figura 8 - Reacia Shibata

O Me
O
O
O
O

O
O O
O Me Me O
(I) (II) (III)
Figura 9 - Structura chelailor

Mod de lucru
S-a evaporat 3 mL extract eteric ntr-o capsul de porelan pe baia de ap (la ni).
S-a dizolvat apoi reziduul n 2 mL metanol 500C la cald (pe baia de ap). Soluia care a
devenit de culoare galben, s-a adus ntr-o eprubet i s-au adugat apoi 2-3 buci de

42
pan de magneziu i 10 picturi de acid clorhidric concentrat (R). Apariia unei coloraii
roii-portocalii indic prezena agliconilor flavonici (reacia Shibata sau reacia
cianidolului).

2.2.2.1.5. Identificarea cumarinelor

Cumarinele sunt substane lactonice naturale, cu structur -benzopironic, rezultate

prin deshidratarea acizilor o-hidroxi-Z-cinamici, glicozidate sau neglicozidate. n funcie
de structura lor chimic, cumarinele se pot clasifica n:
- cumarine simple i dimeri;
- furanocumarine;
- piranocumarine;
- izocumarine;
- cumestani.
Cu excepia cumarinei, majoritatea acestor compui sunt derivai de substituie ai -
benzopironei cu grupri hidroxil, metoxil, izoprenil, fenil etc. Cumarinele pot prezentao
structur simpl, uneori dimerizat, sau o structur mai complex, rezultat prin sudarea
la nucleul benzenic a unui heterociclu (furan sau piran).

O O O O O O O

cumarin furanocumarin piranocumarin

Figura 10 - Structura chimic a diferitelor tipuri de cumarine

Furanocumarinele sunt compui triciclici lactonici naturali n urma sudrii unui

ciclu furanic poziiile (1, 5) sau (2, 3) la un benzopiren poziiile, (6,7) pentru a
forma stucturi lineare (psoralen, bergapten, xantotoxin) i n poziiile (7,8) pentru a
forma structuri unghiulare (izopsoralen sau angelicin, izobergapten).
Dup modul de nchidere al ciclului furanic se cunosc trei tipuri de structuri
furanocumarinice i anume:
Seria normal (6,7-furanocumarina = psoralen);

43
 Seria izo (7,8-fuanocumarina = izopsoralen);
Seria allo (5,6-furanocumarina = allopsoralen)
Substituia se face de obicei la C5, C8, dar i la C3 sau pe nucleul furanic cu
hidroxil, metoxi, dimetialil sau alte terpene.
Cumarinele n general sunt substane solide, cristalizate, sublimabile, cu miros
caracteristic, aromat care emit radiaii caracteristice n UV (fluoresce verzuie, albastr
sau violet, mai intens dup alcalinizare).
Furanocumarinele (psoralen, bergapten, xantotoxin, imperatorin,
izopimpinelin) fiind compui hidroxilai i neglicozidai sunt solubili n solveni apolari.
Nucleul benzenic le confer ns i un grad redus de hidrofilie fiind deci solubili i n
alcool. Toate cumarinele, propriu zise prezint spectre de absorbie n UV caracterizate
printr-o larg band n zona lungimii de und de 320 nm, pe cnd furanocumarinele
prezint o deplasare a benzii caracteristice ctre 300-310 nm n IR benzile de absorbie
caracteristice sunt plasate la 1740 i 1620 cm 1.

44
 O O O O O O

psoralen izopsoralen
(angelicina)

OCH 3
O O O O

O O
allopsoralen
bergapten

OCH 3
O O O
O O O

OCH 3
OCH 3
xantotoxina
isopimpinelina
Figura 11 - Structura unor furanocumarine

Extracia cumarinelor glicozidate se efectueaz cu ap sau alcool diluat. Soluia

extractiv se concentraz pn la reziduu.
Cumarinele nehetozidice pot fi extrase cu eter, cloroform, benzen, alcool sau
NaOH soluie 1N (R) la cald. n acest caz se purific prin precipitare cu HCl (pH-4 , 5) i
dizolvarea precipitatului n eter sau alcool.
Identificarea cumarinelor se poate face prin determinarea fluorescenei n UV prin
reacia Feigl-Anger-Frehden sau prin cuplare cu compui aromatici diazotai.

Determinarea fluorescenei n UV.

Prin alcalinizare (pH=9-10) datorit scindrii lactonei, cumarinele genereaz
sruri ale hidroxiacizilor aromatici solubile n ap intens fluorescente n UV.

45
 + 2 KOH
sau R-COOK
- H 2O COOK
O O OK
cumarin sare a acidului hidroxamic
Figura 12 - Transformarea cumarinei n sare a acidului hidroxamic

Mod de lucru
Soluia extractiv eteric, se aduce la sec pe baia de ap (la ni). Reziduul
rezultat se dizolv n 2-3 ml de ap fierbinte. Dup rcire se aduce cte 1 ml de soluie n
2 eprubete. Una din eprubete servete ca prob martor. n cealalt eprubet se adaug 0,5
ml hidroxid de sodiu 1N (R). Apariia unei puternice fluorescene violet confirm
prezena derivaiillor cumarinici.

1. Reacia Feigl-Anger-Frehden
Hidroxiacizii formeaz cu hidroxilamina n prezena clorurii ferice acizi
hidroxamici colorai n violet.

O O

C NH2-OH C OH H2O
R OH R N
H
Figura 13 - Reacia Feigl-Anger-Frehden

Mod de lucru
nr-o capsul, la 4-5 mL soluie extractiv metanolic se adaug 4,5 picturi
hidroxilamin clorhidric (R) i 4-5 mL potas alcoolic (R) (pH= 9-10). Se evapor la
sec pe baia de ap (la ni). Se rcete i se aciduleaz cu acid clorhidric soluie 1N (R)
(pH= 3-4). La adugarea a 2-3 picturi de clorur feric (R) se obine o coloraie violet
ceea ce denot prezena derivailor cumarinici n planta luat n studiu.

2. Cuplarea cu compuii aromatici diazotai:

Cumarinele se mai pot identifica i prin cuplare cu compuii diazoici aromatici
(clorur de p-nitrobenzen-diazoniu sau clorur de p-sulfobenzen-diazoniu) cnd rezult
compui colorai n rou.

46
 n lucrarea de fa a fost ales ca reactiv de cuplare clorura de p-sulfobenzen-
diazoniu).

Modul de lucru
La 1-2 mL soluie obinut n urma dizolvrii n ap cald a reziduului soluiei
eterice, se adaug 2-3 picturi de clorur de p-sulfobenzen-diazoniu (R) i 0,5 mL
hidroxid de sodiu 1N (R).
Se obine o coloraie roie n cazul reaciei pozitive.

2.2.2.2. Analiza soluiei extractive alcoolice

Modul de lucru

S-a folosit produsul vegetal epuizat cu eter care s-a adus pe baia de ap pentru
ndeprtarea urmelor de eter. Produsul vegetal a fost extras cu metanol (2 x 100 mL) prin
refluxare timp de jumtate de or (baia electric gradaia 3).
Soluia metanolic reunit se concentreaz la 50 mL prin distilarea solventului i
se imparte n 2 pri. O parte folosete la identificarea principiilor active pe soluia
nehidrolizat (25 mL) iar a doua parte se supune hidrolizei cu 15 mL HCl 10% pe cuibul
electric gradaia 3, timp de 30 minute. Produsul vegetal epuizat cu metanol se pstreaz
pentru extracia ulterioar (schema II).
Reacii efectuate n extractul alcoolic nehidrolizat

2.2.2.2.1. Identificarea taninurilor

Taninurile sunt substane organice polifenolice (derivai ai 3-hidroxiflavanului,

poliesteri sau glicozide ale acidului galic), cu o mas molecular cuprins ntre 500 i
5000 de daltoni.
n funie de structura chimic i originea lor biosintetic se disting:
- taninuri catcehice;

47
- taninuri galice;
- taninuri mixte.
Taninurile catechice sunt derivai flavanici, mono- sau polimeri, constituii din
entiti flavan-3-ol legate C-C.
Dup orientarea oxidrilului de la C3 se deosebesc dou serii de compui:
seria 2-R, 3-S (cu OH-ul de la C3 orientat ) care cuprinde afzelecholul,
catecholul i galocatecholul;
seria 2-R, 3-R (cu OH-ul de al C3 orientat ) sau epi, incluznd epiafzelecholul,
epicatecholul i epigalocatecholul.
Dintre acetia, catecholul i epigalocatecholul, galocatecholul i epigalocatecholul
sunt uniti structurale de baz ale oligo- i polimerilor, care se formeaz prin
condensarea succesiv a monomerilor. Legtura interflavanic este, n majoritatea
cazurilor, de tip C4-C8 i aproape ntotdeauna trans n raport cu hidroxilul de la C3 (12).

R
R
HO O
OH HO O
OH
H
R1 H
OH R1
OH OH
OH
R R1 R R1

catechol OH H epicatechol OH H
galocatechol OH OH epigalocatechol OH OH
Figura 14 - Structura chimic a taninurilor catechice

Taninurile galice sunt esteri ai acizilor galic i hexahidroxidifenic de configuraie

(R) (acid elagic, acid luteolic), sau (S) (eugenin, pedunculagin, geraniin), cu oze
(glucoz, hamameloz).

48
 OH
COOH
HO COOH
HO OH
COOH
COOH

HO

HO OH
OH
COOH
HO OH
OH HO OH

OH
OH

acid galic acid (R)/hexahidroxidifenic acid (S)-hexahidroxidifenic

OH
HO

HO
HO O OH

O O OH
HO O O
O O
OH
O O
HO
OH O OH
O

OH OH

HO
OH
Pentagaloilglucoza
Figura 15 - Structura galotaninurilor

Taninurile mixte sunt esteri ai acidului galic cu catecholul, epicatecholul,

galocatecholul i epigalocatecholul (galatul de catechol sau de epicatechol i galatul de
galocatechol sau de epigalocatechol). Monomerii flavanici se pot lega i cu acidul cafeic,
cu formare de lactone.
Taninurile se gsesc localizate n toate organele plantei; se acumuleaz n cantiti
foarte mari n scoare (Cinchona sp., Quercus sp., Salix sp., Castanea sp.), organe
subterane (Krameria triandra Ruiz et Pav.), lemn (Acacia catechu Willd.), frunze
(Hamamelis virgiana L.), flori (Rosa centifolia L., Rosa galica L.), fructe imature (Sobus

49
acuparia L., Rhamnus catharthica L.), semine (Cola nitida Schott et Endl., Cola
acuminata Schott et Endl.), formaiuni patologice (Gallae). Sunt dizolvate n sucul
celular (vacuolar), libere sau combinate cu proteine, alcaloizi, mucilagii.
Taninurile sunt substane solide amorfe. Combinaiile cu mas molecular mic
pot cristaliza, fiind incolore. Taninurile se dizolv n ap la cald (mai greu la rece,
formnd soluii coloidale, solubilitatea variind cu gradul de condensare), n alcool,
aceton, acetat de etil; sunt insolubile n eter, cloroform, benzen, eter de petrol, sulfur de
carbon i n ali solveni organici apolari. Fiind fenoli, au caracter reductor (reduc
reactivii Tollens, Fehling, KMnO4, H2O2, etc.) i dau coloraii cu srurile de fer (III):
verde negricioas taninurile catechice, albastr negricioas taninurile galice.
Caracterul acid se datoreaz gruprilor COOH i OH fenolice libere .

Reacia cu clorura feric:

Mod de lucru
Se dilueaz 1ml extract alcoolic cu 2 ml de ap distilat i se adug apoi trei
picturi de clorur feric 1% (R) diluat 1:10. Apariia unei coloraii albastre-nericioase
indic prezena taninurilor galice, iar o coloraie verde atest prezena taninurilor catehice
(13).

2.2.2.2.2. Identificarea compuilor reductori

Compuii reductori sunt reprezentai de heterozidele fenolice de tip C6-C3 i C6-C3-C6.

Mod de lucru
Se dilueaz 1 mL extract alcoolic cu 2 mL ap distilat i se adaug 1 mL soluie
Fehling (I + II) (R). Se nclzete la fierbere timp de 30 minute. La fundul eprubetei se
observat apariia unui precipitat rou-crmiziu (oxidul cupros) care indic prezena
compuilor reductori.

50
Reacii efectuate n extractul alcoolic hidrolizat

1) Extractul eteric (40 mL). n acesta se pot identifica urmtoarele grupe de

principii active: antracenozide, cumarine, glicozide sterolice i triterpenice (prin reacii
caracteristice agliconilor obinui n urma hidrolizei).
2) Soluia apoas acid. n acesta fraciune se pot identifica antocianozidele

2.2.2.2.3. Identificarea flavonozidelor

Mod de lucru
Se evapor 5 ml extract eteric ntr-o capsul pe baia de ap. Se dizolv apoi
reziduul n 2 mL metanol 50% la cald. Soluia se aduce ntr-o eprubet i se adug pan
de magneziu i 10 picturi acid clorhidric concentrat.
Apariia unei coloraii roii sau portocalii indic prezena agliconilor
flavonozidelor.

2.2.2.3. Analiza soluiei extractive apoase

Modul de lucru

S-a folosit produsul vegetal rmas de la extracia cu alcool care a fost uscat i apoi
extras cu 50 mL ap, pe baia de ap la 600 C timp de 30 de minute (schema III).

2.2.2.3.1. Identificarea poliuronidelor

(mucilagii, pectine i gume)

Poliuronidele sunt compui naturali macromoleculari, ozidici, alctuii din

pentoze sau hexoze i acizi uronici. n contact cu apa poliuronidele formeaz soluii

51
coloidale sau geluri, din care cauz mai sunt numite i hidrocoloizi vegetali sau
polizaharide vegetale.
Poliholozidele sunt amestecuri neomogene care se formeaz prin condensarea
oxidrilului glicozidic al unei oze cu un oxidril alcoolic, mai rar glicozidic, al altei oze sau
al unui acid uronic, n poziiile 1-3, 1-4 sau 1-6, - sau -glicozidic.
n funcie de locul i modul de formare al acestor derivai, ct i de propietile lor
fizico-chimice, poliholozidele mixte (heteroglicanii) pot fii: pectine, mucilagii i gume.
Identificarea pliholozidelor mixte se poate face prin precipitarea mucilagiilor n
alcool concentrat i colorare cu hematoxilin.

HO OH HO O

- H2

OH
HO O HO O
OH OH
hematoxilin hematein
Figura 16 - Oxidarea hematoxilinei la hematein (violet)

Mod de lucru
ntr-o eprubet ce conine 5 mL etanol s-a turnat n fir subire i sub agitare
continu soluia de mucilag concentrat. Dup un repaus de 10 minute se constat apariia
unui precipitat voluminos. Se adug apoi 2-3 picturi albastru de toluidin (R), i se
filtreaz prin hrtie. Pe filtru se obine un precipitat colorat n albastru. Ali reactivi
pentru colorare sunt: hematoxilina (R), rou de ruteniu (R), tu de China, albastru de
metilen etc. Hematoxilina, substana incolor se extrage din Hematoxylon campechianum
L. (lemnul de bacan), familia Leguminoase transformndu-se n hematein, compus
colorat n rou. Acesta coloreaz mucilagiile n violet.

52
2.2.2.3.2. Identificarea compuilor reductori

La compuii reductori din soluia alcoolic se adaug i ozele.

Mod de lucru
ntr-o eprubet se aduce 1 ml soluie extractiv apoas i se adug 5 picturi
reactiv Fehling (I + II). Se nclzete la fierbere. n cazul reaciei pozitve se constat
apariia unui precipitat rou cramiziu.

2.2.2.3.3. Identificarea unor glucide (oze i polioze)

Glucidele simple, cunoscute i sub numele de oze simple sau monozaharide, sunt
compui de oxidare a poliolilor alifatici simpli n care gruparea alcoolic primar este
oxidat la aldehid (aldoze) sau gruparea alcoolic secundar, la ceton (cetoze).
Gruparea carbonilic formeaz cu una din grupurile din molecul un semiacetal ciclic
(lactol) prin adiie intramolecular, transformndu-se n hidroxil glicozidic.
Acesta confer ozelor proprieti deosebite: structura furanozic i piranozic,
izomerie (anomerie), mutarotaie, proprieti reductoare, reactivitate. Dup
numrulde atomi de carbon din molecul se cunosc trioze, tetroze, pentoze, hexoze etc.
Datorit carbonilor asimetrici se formeaz izomeri optic activi. n funcie de orientarea
gruprii hidroxilie de la penultimul atom de carbon (la dreapta sau la stnga) rezult oze
aparinnd seriei D sau seriei L.
Ozele frecvent ntlnite n structura compuilor naturali sunt:
aldopentoze: D-xiloz, L-arabinoz;
6 desoxipentoze: 2 dezoxiriboza (intr n constituia ADN);
aldohexoze: D-glucoza, D-alloza, D-guloza, D-galactoza, D-manoza;
cetohexoze: D-fructoza;
6-dezoxihexoze: L-ramnoza, L-fucoza;
6-dezoxihexoze-3-metoxilate: D-digitaloz, L-tevetoz (sunt specifice
heterozidelor cardiotonice);

53
 2,6-dezoxihexoze: D-digitoxoz, dintre care unele sunt 3-metoxilate ca de
exemplu L-oleandroz, D-cimaroz (specifice heterozidelor cardiotonice);
aminoze (aminozaharide), de obicei constituieni ai poliholozidelor bacteriene sau
ai glicoproteinelor animale: D-glucozamina (chitozamina), 2-dezoxi-2-
metilamino--L-glucopiranoza (ntlnit n strucura streptomicinei), L-
glucozamina, desozamina i 3-dimetil-amino-3-dezoxi-D-digitopiranoza (intr n
strucura eritromicinei), neosamina B i C (din neomicina B) .a.

OH CH2OH
HOH2C OH
O
O OH HO
HO O OH OH
HO CH2OH
OH H
OH
OH OH
D-glucopiranoza D-glucopiranoza D-fructofuranoza
OH
CH3
O O
OH HO O
OH HO HO
HO OH
OH

HO OH OH

L-arabinofuranoza D-xilopiranoza D-fucoza

OH
CH3 OH
HO O
O
H3C O
OH H3 C
HO HO
OH HO OH
OCH3

D-digioxoza L-ramnoza L-oleandroza

Figura 17 - Structura chimic a unor oze (1)

Ozele sunt substane solide incolore cristalizate, inodore, de obicei cu gust dulce,
uor solubile n ap, metanol, piridin, dioxan mai puin solubile n etanol insolubile n
eter, cloroform i benzen i n ali solveni organici.
Prin reducere, se transform n alcoolii corespunztori, iar prin oxidare, n funcie
de agent, se obine acizi uronici (cnd se oxideaz gruparea alcool primar), acizi aldonici
(oxidarea are loc la gruparea carbonilic) sau acizi zaharici (acizi bibazici, cnd se
oxideaz ambele grupri) n acest ultim caz fiind necesar prezena oxidanilor puternici;

54
din cetoze se obin acizi cu un numr mai mic de atomi de carbon. Acizii aldonici prin
tratare cu baze organice, la cald, se epimerizeaz. Astfel, acidul D-gulonic se transform
n acid D-manonic.
Acizii uronici sunt uniti structurale ale poliholozidelor mixte (poliuronide,
heteroglicani). Ca i ozele din care provin, prezint izomerie (anomerie), au caracter
reductor, pot forma glicozide i ali derivai ai funciei hidroxil glicozidice, iar datorit
gruprii carboxilice formeaz sruri, esteri, lactame.

CHO COOH COOH COOH

H C OH H C OH H C OH H C OH

HO C H HO C H HO C H HO C H

H C OH H C OH H C OH HO C H

H C OH H C OH H C OH H C OH

COOH CH2OH COOH COOH

ac. D-glucuronic ac. D-gluconic ac. zaharic ac. mucic

Figura 18 Structura unor acizi uronici

n mediul slab alcalin se izomerizeaz, iar sub aciunea bazelor puternice,

hexozele se pot scinda n trioze.
n prezena acizilor minerali concentrai se deshidrateaz i formeaz furfural sau
hidroximetil-furfural care ulterior poate fi cuplat cu fenoli forme cetonice (timol,
rezorcinol, orcinol) cnd se obin compui colorai.
Majoritatea hexozelor (D-glucoza, D-manoza, D-fructoza) sunt fermentesceibile,
D-galactoza este greu fermentesceibil, iar pentozele nu sunt fermentesceibile.
La identificarea ozelor se folosesc propietile reductoare ale acestora (reacia
Fehling, Tollens), transformarea lor n furfural sau n hidroximetilfurfural i cuplarea cu
antron sau fenoli forme cetonice, precum i condensarea cu amine aromatice.

55
 O O
+ R1
R CH OH
O CHO R O
HO

R = H rezorcin (form cetonic) produs de condensare

R = CH3 orcin
Figura 19 - Reacia de cuplare a furfuralului sau hidroximetilfurfuralului cu fenoli
forme cetonice

Reacia Molish
Mod de lucru
Se evapor 2 ml soluie extractiv apoas ntr-o capsul. Reziduul obinut se
trateaz cu 3 picturi acid sulfuric concentrat. Dup 3 minute se adug 3 picturi soluie
alcoolic 1% de timol (R). Apariia unei coloraii roii indic prezena ozelor sau
poliozelor (reacia Molish) (5).
Pentru identificarea amidonului, se trateaz 1 mL soluie extractiv apoas cu 2
picturi reactiv Lugol (R). Apariia unei coloraii albastre atest prezena amidonului.

2.2.2.3.4. Identificarea taninurilor

Mod de lucru
Se trateaz 1 mL soluie extractiv apoas cu 2 picturi clorur feric 1% (R)
diluat 1:10. Apariia unei culori albastre indic prezena taninurilor galice, iar apariia
unei coloraii verde nchis confirm prezena taninurilor catehice.

2.2.2.4. Rezultate i discuii

n urma efecturii reaciilor de identificare discutate mai sus, s-au obinut

urmtoarele rezultate:
n soluia eteric s-au identificat: ulei volatil, steroli sau triterpene, carotenoide.

56
Schema I Analiza chimic calitativ a soluiei extractive eteric

57
n soluia alcoolic s-au identificat: tannin catehic, compui reductori in fraciunea nehidrolizat (schema II).

Schema II Analiza chimic calitativ a soluiei extractive alcoolice

58
n soluia extractiv apoas s-au identificat: poliuronide, compui reductori, oze i polioze, tannin catehic.

Schema III - Analiza chimic calitativ a soluiei extractive apoase

59
Datele analizei chimice generale sunt centralizate n tabelul 2.
Tablel. 2 Analiza chimic general
Nr. Soluia Reacia practicat Intensitate Principii active identificate
cercetat
1. Eteric Miros + ulei volatil
Shibata + agliconi flavonici
H2SO4 conc. + carotenoide
Libermann + steroli
Burchardt

FeCl3 + tanin catehic

2. Alcoolic Fehling + compui reducatori
Fehling + compui reducatori
3. Apoas Molish + oze i polioze
precipitare n alcool + Poliuronide

2.2.2.5. Concluzii

n urma rezultatelor obinute la efectuarea reaciilor de identificare pe extractele

eterice alcoolice i apoase din frunzele speciei Salvia nemorosa se poate afirma c sunt
prezente urmtoarele grupe de compui naturali (principii active): ulei volatil, flavone
(agliconi flavonici), carotenoide, steroli i triterpene, oze, poliholozide i tanin catehic.

2.3. Determinarea calitii produselor vegetale

Const n determinarea coninutului de ap, a substanelor volatile (pierdute prin
uscare), a substanelor solubile, a uleiului volatil precum i n dozarea principiilor active.

2.3.1. Determinri pleliminare

2.3.1.1. Determinarea pierderii prin uscare

Prin procedeele prevzute n monografia Pierdere prin uscare din Farmacopeea

Romn-ediia a-X-a, se stabilete masa compuilor volatili de orice natur din

59
substanele farmaceutice, produse vegetale sau preparate farmaceutice, pierdut n
anumite condiii de temperatur, presiune i timp, specificate n monografiile respective.

Material i metod
Principiul metodei const n determinarea masei de produs vegetal nainte i dup
uscarea la etuv la 1050 C, pn la pondere uscat. Pierderea nregistrat se raporteaz la
100g produs vegetal.
Materialele necesare:
Proba de analizat: Salviae nemorosae folium;
foarfeci;
rjni pentru marunirea produsului vegetal;
fiole de cntrire;
spatule;
etuv, exicator;

Modul de lucru

Primul pas n efectuarea acestei determinri a fost aducerea la greutatea constant

a fiolelor de cntrire. Aceast operaie s-a realizat prin uscarea la etuv (105 0 C), a
fiolelor timp de trei ore. Dup ce s-au scos fiolele din etuv s-au rcit la exicator timp de
30 de minute. S-au cntrit din nou la balana analitic, notnd datele obinute apoi s-au
inut din nou n etuv la 1050 C, timp de 30 de minute s-au rcit i cntrit. Aceaste
operaii s-au repetat (uscare n etuv , rcire n exicator, cntrire) pn cnd greutatea a
rmas constant.
Dup mrunirea produsului vegetal cu ajutorul rjniei electrice s-a cntrit n
cele trei fiole de cntrire cca. 5,0000 g de produs vegetal. Cantitatea de produs vegetal a
fost aleas de aa manier nct coloana de pulvere s nu depeasc 1 cm nlime.
Fiolele de cntrire cu cele trei probe de produs vegetal s-au inut n etuv la
1050C, timp de trei ore, dup care s-au rcit n exicator (30 minute) i s-au cntrit la
balana analitic.S-au notat datele obinute.

60
 Operaiile de uscare n etuv i rcire n exicator s-au repetat de mai multe ori
pn cnd s-au obinut valori constante ale masei probelor.

2.3.1.2. Determinarea substanelor solubile

Material i metod
Prin dozarea substanelor solubile din produsele vegetale se nelege dozarea
acelor substane care se pot extrage, n anumite condiii, cu solveni prevzui n
monografia respectiv.
n lucrarea de fa am determinat substanele solubile folosind extracia la rece,
iar ca solvent apa.
Materiale necesare:
Proba de analizat: Salviae nemorosae folium;
foarfeci;
rjni pentru marunirea produsului vegetal;
flacoane cu dop rodat;
pahare Erlenmayer;
plnii;
baghete, spatule;
hrtie de filtru;
fiole de cntrire;
produsul vegetal pulverizat;
etuv, exicator;

Modul de lucru
S-au cntrit la balana analitic cte 5,0000 g de produs vegetal pulverizat care s-
au adus cu 100 g de ap n trei flacoane cu dop rodat. S-a agitat coninutul flacoanelor de

61
cteva ori i s-a lsat la macerat timp de 23 de ore. Dup acest timp s-a agitat din nou i
s-a filtrat, ndeprtnd apoi primele poriuni din filtrat.
S-au introdus apoi cte 20 g de filtrat n cele trei fiole de cntrire, n prealabil
aduse la mas constant. S-a evaporat la sicitate pe baia de ap, dup care s-au uscat cele
trei fiole cu reziduu la etuv, la 1050 C, timp de trei ore. S-au rcit la exicator i apoi s-au
cntrit.
Cantitatea de substan extractiv s-a raportat la 100 g produs vegetal.

2.3.1.3. Rezultatele determinrilor preliminare

Rezultatele determinrilor preliminare au fost centralizate n tabelul 3.
Tabel 3. Rezultatele determinrilor preliminare
Determinarea preliminar Cantitate % g/g produs vegetal
Perdere prin uscare 8,68%-9,71%
Substane solubile n ap 2,23%-2,66%

Concluzie
Produsul cercetat conine n medie 8,68%-9,71%compui volatili.
Substanele solubile n ap se ncadreaz n intervalul 2,23%-2,66% ceea ce
denot c nu exist n produsul vegetal principii active hidrofile n cantitate mare.

2.3.2. Dozarea uleiului volatil extras din funzele speciei Salvia nemorosa
L.

Material i metod
Distilarea n circuit nchis (aparat Neo-Clevenger) const n fierberea prodului
vegetal mrunit (sita II-IV) cu ap i distilarea uleiului volatil mpreun cu aceasta. Acest
procedeu permite obinerea direct a uleiului volatil. n cazul uleiurilor volatile vscoase
sau mai dense ca apa, colectarea acestora se poate realiza ntr-un solvent apolar nevolatil,
cu densitate mic (xilen, toluen).

62
 Pentru extragerea uleiului volatil din funzele speciei Salvia nemorosa L., s-a ales
un procedeu de distilare n circuit nchis la aparatul Neo-Clevenger, dealtfel procedeu
oficinal n FR X ct i n farmacopeele mai multor state.
Materile necesare:
aparat Neo-Clevenger;
produs vegetal mrunit;
manta electric
surs de ap curent.
Modul de lucru. n balonul ataat aparatului Neo-Clevenger s-a introdus 40g
produs vegetal ctrit la balana tehnic i o cantitate de ap de 10 ori mai mare (400 ml).
Dup 3-6 ore n medie de distilare se obine uleiul volatil. Pentu aflarea substanei uscate,
din masa probei de analizat se scade pierderea prin uscare.

Rezultate i discuii
n urma dozrii s-a obinut o cantitate de 0,20% mL ulei volatil la 100 g produs
vegetal (V/m).

2.3.3. Analiza HPLC a compuilor fenolici

Pentru separarea, identificarea i cuantificarea compuilor fenolici s-a adaptat o

metod HPLC standardizat de determinare a polifenolilor totali, descris de monografia
USP 30-NF2520.

Materiale i metod

Aparatur: HPLC Agilent 1200, cu pomp cuaternar, DAD, termostat, sistem de

degazare, autosampler.
Condiii de lucru:

20
*** United States Pharmacopeia and National Formulary (USP 30-NF 25). vol 28 (4), Rockville, MD:
United States Pharmacopeia Convention; 2007, p. 914.

63
 coloan cromatografic tip C18, 250 mm 4,6 mm; 5 m (Zorbax XDB sau
echivalent);
faz mobil:
- soluia A acid fosforic 0,1%,
- soluia B acetonitril;
eluie n gradient conform tabelului 4.

Tabel 4. Gradient de lucru HPLC

Nr. Timp, Soluia A, Soluia B,

crt. Min. % %
0-13 90 10
13 78 22
13 78 22
14 60 40
17 60 40
17,5 90 10
22 90 10

temperatur: 350C;
debit: 1,5 mL/min;
detecie: UV 310 nm;
volum de injecie: 20 L;
timpul de analiz: 22 minute.

Proba de analizat este un extract metanolic obinut din rizomul uscat de

Holoschoenus vulgaris Link. i a fost preparat astfel: 10 g de produs vegetal (cu
umiditatea 4,2678) s-au extras cu 100 mL metanol 70%. Soluia extractiv obinut s-a
filtrat i s-a completat la balon cotat de 100 mL, cu metanol 70%.
Substane de referin (soluii n metanol 70%): E-resveratrol = 37 mg/mL, Z
resveratrol = 0,22 mg/mL (obinut prin expunerea soluiei de trans resveratrol radiailor UV la
=254 nm, timp de 12 ore), acid cafeic = 0,36 mg/mL, acid clorogenic = 0,37 mg/mL, acid

64
cinamic = 0,58 mg/mL, vanilin = 0,42 mg/mL, acid galic = 0,39 mg/mL, acid ferulic =
0,50mg/mL, Substanele de referin au fost injectate de 6 ori (20 L).
Timpii de retenie corespunztori substanelor de referin sunt redai n tabelul 5. Pentru
simplificarea determinrilor s-a lucrat cu amestecul acestora.

Tabelul 5. Timpii de retenie ai compuilor fenolici, substane de referin

Nr.
Compus fenolic Timp de retenie DS
crt.
1. E - resveratrol 14,467 0,017
2. Z - resveratrol 15,751 0,058
3. acid cafeic 4,598 0,036
4. acid clorogenic 3,501 0,015
5. acid cinamic 15,867 0,007
6. vanilin 6,919 0,051
7. acid galic 0,990 0,025
8. acid ferulic 8,565 0,058
9. acid elagic 15,303 0,027
10.
acid p-cumaric 7,187 0,019

11. acid 3 -metil

2,606 0,008
galic
Deviaia standard s-a obinut n urma prelucrrii statistice a celor 6 injecii (soft
SPSS 10).
Identificarea i determinarea cantitativ a principiilor active din soluia de analizat s-a
efectuat prin compararea cromatogramelor amestecului de standarde (fig. 21-25) i a soluiei de
analizat. Reproductibilitatea metodei s-a apreciat prin ptratul coeficienilor de corelare (tabel
6).

65
 15.793
m
22A
5U
0
2000
1750
1500 cisresveratrol
1250
1000 transresveratrol

14.457
750
500
250
0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 m
in
Figura 20. Cromatograma HPLC trans resveratrolului dup expunere la UV

D
AD1A
,S
ig=310,4R
ef=360,100(FE
R
ULIC
15M
C
L.D
)
8.578

mA U
1600
1400 acidferulic
1200
1000
800
600
400
200
0
0 2.5 Figura521. Cromatograma
7.5 10 HPLC12.5a acidului
15ferulic17.5 20 m
in

66
AUD
AD1A
,S
ig=310,4R
ef=360,100(A
C
IDPC
U
MARIC20M
C
L.D
)

7.187
m
35
30
25
20
15
10
5
2

8.310
0..2
1 76
99

0
0 2Figura 4 6 8HPLC 1a0acidului12p cumaric
22. Cromatograma 14 16 m
in

AUD
AD1A
,S
ig=310,4R
ef=360,100(A
C
IDE
LA
GIC20M
C
L.D
)

15.303
m
14
12
10
8
6
4
1.289

2
0
0 2 Figura 4 23. Cromatograma
6 8 HPLC
10 a acidului
12 elagic
14 16 18m
in

67
 2.606
AUD
m AD
1A
,S
ig=310,4R
ef=360,100(M
E
TILG
A
LA
T25.D
)
6
5 m
etilgalatul
4
3
2
1
0 2
.2 24. Cromatograma
Figura 2.4 2.6 HPLC a 2acidului
.8 3 galic 3.2
3 metil m
in

DAD
1A,Sig=310,4R
ef=360,100(AM
ESTECSTAN
DAR
DE2.D
)
6.898

m
A U
700
600
500
14.409
4.578

400
15.844

300
3.475

8.608

200
2.610

100
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 m
in

Figura 25. Cromatograma HPLC a amestecului de standarde

68
 Tabel 6. Ptratul coeficientului de corelare al curbelor de calibrare

Nr. Crt. Compus fenolic r2

1. trans resveratrol 0.99965
2. cis resveratrol 0.99729
3. acid clorogenic 0.99999
4. acid cafeic 0.99619
5. acid cinamic 0.99845
6. vanilin 0.99691
7. acid galic 0.99537
8. acid ferulic 0.99863
9. acidul elagic 0.99885
10. acidul p cumaric 0.99798
11. acid 3 - metil galic 0.99563

Rezultate i discuii

Dintre substanele identificate n urma analizei HPLC, au fost cuantificate doar

cteva substane (tabel 7).

Tabelul 7. Compuii identificai i concentraiile lor n mg/100 g produs

Acid metil Acid acid Acid Acid Acid Acid p

galic clorogenic cafeic galic mg ferulic cinami cumaric
mg% mg% % mg% c mg%
mg%
26,431 13,908 13,767 179,069 38,461 94,202 47,587

69
Fig. 26. Cromatograma HPLC a soluiei extractive 10% n alcool 50% din frunze
de Salvia nemorosa L.

70
 III. REZULTATE I DISCUII GENERALE

n urma studiului preliminar efectuat asupra speciei Salvia nemorosa L. se pot

desprinde urmatoarele aspecte:
pentru verificarea identitii i a calitii materiei prime s-a aplicat analiza
farmacognostic;
examenul macroscopic a permis verificarea caracterelor din Flora RPR;
analiza chimic global a evideniat prezena se poate afirma c sunt prezente
urmtoarele grupe de compui naturali (principii active): ulei volatil, flavone
(agliconi flavonici), carotenoide, steroli i triterpene, oze, poliholozide i tanin
catehic;
produsul cercetat conine n medie 8,68%-9,71% compui volatili i 2,23%-2,66%
substanele solubile n ap;
in urma dozrii s-a obinut o cantitate de 0,20 % mL ulei volatil la 100 g produs
vegetal (V/m);
Prin analiz HPLC s-au cuantificat urmtoarele principii active: acid clorogenic
13,908 mg%, acid cafeic 13,767 mg%, acid galic 179,069 mg%, acid p cumaric mg%
47,587 mg%, acid cinamic 94,202 mg%, acid metil galic 26,431mg%, acid ferulic mg%
38,461.

71
 IV. CONCLUZII GENERALE

Numeroase studii de specialitate confirm prezena principiilor active, unele

dintre ele menionate i n Salvia officinalis L. De asemenea literatura de specialitate
prezint numeroase studii farmacologice pentru Salvia nemorosa L.
Continutul n ulei volatil al produsului vegetal uscat este de 0,20% (V/m).
Prin HPLC s-au cuantificat urmtoarele principii active: acid clorogenic 13,908 mg%,
acid cafeic 13,767 mg%, acid galic 179,069 mg%, acid p cumaric mg% 47,587 mg%,
acid cinamic 94,202 mg%, acid metil galic 26,431mg%, acid ferulic mg% 38,461.

72
 V. BIBLIOGRAFIE

1. - Borundel C. Manual de medicin intern Editura All, Bucureti 2002, (pag.

511 552);
2. - Borza A., Baldic A., Butur A. i colab. Dicionar etnobotanic Editura
Academiei R.S. Romnia, Bucureti 1968, (pag. 84);
3. - Bruneton I. Pharmacognosie, Phytochimie, Plantes Medicinales, Technique et
Documentation Ed. Lavoisier, Paris 1993, (pag 218, 249, 258, 498, 690);
4. - Chiril P. Medicin naturist Editura Medical, Bucureti 1987, (pag. 5, 12
13, 472 473);
5. - Ciulei I., Grigorescu E., Stnescu U. Plante medicinale. Fitochimie i
fitoterapie Editura Medical, Bucureti 1993, vol. I, (pag. 346 348, 406 443, 557
579, 630 650);
6. - Ciulei I., Grigorescu E., Stnescu U. Plante medicinale. Fitochimie i
fitoterapie Editura Medical, Bucureti 1993, vol. II, (pag. 413 - 414);
7. - Ciulei I., Istudor V., Palade M., Albulescu D., Grd C. E. Analiza
farmacognostic i fitochimic a produselor vegetale Tehnoplast Company, Bucureti
1995, vol. I., (pag. 4 22, 78 82, 83 86, 96 100, 141 146, 221 227);
8. - Ciulei I., Istudor V., Palade M., Albulescu D., Grd C. E. Analiza
farmacognostic i fitochimic a produselor vegetale Tehnoplast Company, Bucureti
1995, vol. II, (pag. 409 418);
12. - Palade M. Botanica farmaceutic Editura Tehnic, Bucureti 1999, vol II
(pag. 371 373, 393 394);
13. - Popovici L., Moruzi C., Toma I. Atlas Botanic Editura Didactic i
Pedagogic, Bucureti 1994, (pag. 188 195)
14. - Prodan I. Flora nisipurilor din Romnia sub raportul fixrii i ameliorrii
(conspect sistematic al speciilior) Institutul de Arte Grafice Bucovina, Bucureti
1925, (pag. 52-53);

73
15. - Prodan I., Buia Al. Flora mic ilustrat a Romniei (ed. a V-a) Ed. Agro-
Silvic, Bucureti 1966, (pag. 584 587);
16. - Svulescu Tr. i colaboratori - Flora Republicii Socialiste Romnia Editura
Academiei 1950, vol. XII (pag. 613 619, 631, 632, 637);
17. - *** - Farmacopeea Romn (ediia X) Editura Medical, Bucureti 2000, (pag.
1035 1038, 1043 1046, 1053 1055, 1057 1058, 1063);
18. *** United States Pharmacopeia and National Formulary (USP 30-NF 25). vol 28
(4), Rockville, MD: United States Pharmacopeia Convention; 2007, p. 914.
19. ***Flora Hainanica Tomus IV, 1977. Peking: Science Press pp.42-43.
20. http://www.eukarya.ro/enciclopedie/regnul-plantae/genul-salvia-jales
21. Janicsk, Gbor, et al. "Comparative studies of the rosmarinic and caffeic acid
contents of Lamiaceae species." Biochemical systematics and ecology 27.7 (1999): 733-
738.
22. Janicsk, Gbor, et al. "Study of the oleanolic and ursolic acid contents of some
species of the Lamiaceae." Biochemical systematics and ecology 34.5 (2006): 392-396.
23. Malencic, D. J., et al. "Screening for antioxidant properties of Salvia nemorosa L.
and Salvia glutinosa L." Oxidation communications 25.4 (2002): 613-619.
24. Mirza, M., and F. Sefidkon. "Essential oil composition of two Salvia species from
Iran, Salvia nemorosa L. and Salvia reuterana Boiss." Flavour and fragrance journal
14.4 (1999): 230-232.
25. Moa C., Rou A., Cmpeanu Gh. - Compui bioactivi de origine vegetal.
Abordri biotehnologice - Universitatea de tiine Agronomice i Medicin Veterinar
Bucureti, Facultatea de Biotehnologii (pag. 1);
26. Nistreanu Anatolie, Farmacognozie, Chiinu, 2000, p. 174.
27. Palade M. Botanica farmaceutic Editura Tehnic, Bucureti 1999, vol I (pag.
292 293, 303 311);
28. SENGUL, MURAT TOSUN1 SEZAI ERCISLI2 MEMNUNE, et al. "Antioxidant
properties and total phenolic content of eight Salvia species from Turkey." Biol res 42
(2009): 175-181.

74
29. Sonboli, A., Babakhani, B., & Mehrabian, A. R. (2006). Antimicrobial activity of
six constituents of essential oil from Salvia. Zeitschrift fur Naturforschung C-Journal of
Biosciences, 61(3-4), 160-164.
30. Sonboli, Ali, Babak Babakhani, and Ahmad Reza Mehrabian. "Antimicrobial
activity of six constituents of essential oil from Salvia." Zeitschrift fur Naturforschung C-
Journal of Biosciences 61.3-4 (2006): 160-164.
31. Takeda, Yoshio, et al. "Megastigmane glycosides from< i> Salvia
nemorosa</i>."Phytochemistry 44.1 (1997): 117-120.
32. Ulubelen, A., et al. "Terpenoids from< i> Salvia nemorosa</i>." Phytochemistry
35.4 (1994): 1065-1067.
33. www.jardinsdemmarocalles.com

75