Identificare virala

REACTIA DE
SERONEUTRALIZARE
Titrarea infectivitatii virale
Identificarea
enterovirusurilor
RSN
 RSN:
IDENTIFICAREA VIRUSURILOR = VIRUSNEUTRALIZARE
TITRAREA ANTICORPILOR = SERONEUTRALIZARE

• VIRUSNEUTRALIZARE
VIRUS NECUNOSCUT
ANTICORPI CUNOSCUTI=SER IMUN DE REFERINTA
• SERONEUTRALIZARE
TITRU DE ANTICORPI NECUNOSCUT
VIRUS CUNOSCUT = TULPINA DE REFERINTA

ETAPE RSN
1. TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE

2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE

3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII INFECTIVITATII VIRALE

1. TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE
– metoda plajelor

Dilutii seriale
ale virusului

Insamantare pe celule
susceptibile
dupa adsorbtie, 1h la 37,
se acopera cu agar

Restrictia raspandirii
virusului determina liza
focalizata a monostratului
celular vizibila sub forma
plajelor, PFU
Metoda plajelor
Nr PFU = nr plaje / Vol x dil
2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE
3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII
INFECTIVITATII VIRALE

= Repetarea etapei 1 cu amestecurile

antigen-anticorp
1. SUSPICIUNEA CLINICA

Definitie de caz – Meningita virala

• Febra ≥ 38.5 C asociata cu minim un simptom

dintre:
– Cefalee severa şi persistenta;
– Redoare de ceafa
• Durere de ceafa asociata cu minim 2 din
urmatoarele:
– Fotofobie
– Greata
– Varsaturi
– Faringita exudativa
– Dureri abdominale

La sugari si copiii mici semnele principale sunt febra ≥

38.5 C asociata cu iritabilitate si pulsarea fontanelei
 ETIOLOGIE POSIBILA

SINDROM ETIOLOGIE
POSIBILA

80%-90%
Enterovirusuri
Polio
MENINGITA Cocsackie A si B
ASEPTICA E.C.H.O.

10 - 20%
alte virusuri:
VZV
V. URLIAN
HSV
CMV
V. PARAGRIPALE
 Algoritm de diagnostic virusologic
meningite virale

ETIOLOGIE Produs IZOLARE Dg. DIRECT Dg. INDIRECT

POSIBILA Patolog =detectie =serologie
directa

De electie NU DA
80%-90%
MF •Culturi celulare (PCR)
Enterovirusuri SNF •Animal de
• Polio LCR laborator

• Cocsackie A si B
• E.C.H.O.
 Produse patologice
Materiile fecale(MF)
• Recoltare. Materiile fecale pot fi recoltate ca atare in cantitate de 4-8
grame sau corespunzator volumului extremitatii falangei distale a
indexului de adult. De asemenea, se pot recolta intr-o solutie 1 M de
Mg SO4 in suspensie 20% (stabilizeaza infectivitatea
enterovirusurilor)
• Precizari. Este important de notat ca enterovirusurile se excreta
saptamani la rand , dar sansele de izolare scad. Se recomanda
recoltarea a 2 - 3 probe de la pacient la interval de 24-48 ore.
• Stocare si transport. Produsele patologice sunt transportate si
stocate la 2-4 C.
• Prelucrare. In vederea izolarii de virus suspensia de materii fecale se
prepara amestecand proba recoltata cu 15 ml de solutie Hanks si bile
de sticla sterile intr-un tub de centrifuga inchis. Se agita puternic, se
centrifugheaza , si se recolteaza supernatantul.
 Produse patologice
Lichid cefalorahidian (LCR)
• Recoltare. Se realizeaza prin punctie la nivelul L4-L5,
cat mai rapid posibil de la debutul simptomatologiei,
inainte de inceperea tratamentului antibiotic, respectind
strict masurile de asepsie.
• 1 ml de LCR este suficient pentru investigatii virusologice.
Cantitatea recoltata nu trebuie sa depaseasca 5-6 ml in 3
tuburi sterile. Se determina numarul de celule, proteine
totale, glicorahia si presiunea LCR. Sansa de izolare din
acest produs creste când participarea meningiana este
evidenta. Acest lucru se traduce prin pleiocitoza
(cresterea numarului de celule limfo-monocitare in LCR).
• Stocarea. Se pastreaza la 2-4 C, fara adaos de mediu de
transport viral.
• Transportul. Se realizeaza cat mai rapid posibil. Daca se
depaseste 1 ora de la recoltare transportul se face
obligatoriu pe gheata sau la -70 C.
Exsudat faringian/SNF
IZOLAREA ENTEROVIRUSURILOR IN CULTURI
DE CELULE
ECP PICNOTIC LITIC
ECP picnotic litic
Identificarea
enterovirusurilor
RSN
Identificarea enterovirusurilor dupa metoda “Tabla de sah”

Lim - Benyesh – Melnick

 Animalul de
laborator

Utilizat pentru:
-Vir pretentioase nutritiv
-(v. Coxsackie A - pe şoarece nou
născut; VHB - pe cimpanzeu
-Studiul patogenezei virale,
mecanismelor oncogenezei,
Răspuns imun specific=>folosit la
BALB/c nude
obţinerea ser hiperimune de referinta,
ser antiglobuline specifice

Biobaza
IVC - individual ventilated cage
Lipsa reproductibilităţii în
rezultatele experimentale
se datoreaza
A - factori genetici
B - factor condiţionat de mediu,
hrană, suprainfectii
C - factori random

Cadru stereotaxic