Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
1.1.Sisteme de dispersie
1
perioadei de vegetaţie a plantelor. Este starea normală a citoplasmei, stare în care activitatea
fiziologică decurge în condiţii optime.
Durata experienţei: 5 minute.
C. Dispersii grosiere
La nivel celular, constituie sisteme disperse grosiere, incluziunile ergastice (incluziuni de
substanţe relativ pure, adesea în plastide sau vacuole): cristalele de oxalat de calciu în vacuole;
taninuri; granule de amidon etc. Conţin în mediul dispersat particule mai mari de 1000 Å, fiind
reprezentate la nivel celular prin: organitele citoplasmatice şi unele macromolecule proteice.
Materiale necesare: nisip fin, apă distilată, eprubete, stativ pentru eprubete.
Mod de lucru. Se adaugă într-o eprubetă cu 5 ml apă şi puţin nisip fin, iar după agitare se
obţine o suspensie în care, treptat, se separă cele două faze. Particulele dispersate sunt vizibile
chiar cu ochiul liber.
Tensiunea superficială este forţa care se exercită la limita suprafeţelor de contact între două
sau mai multe faze (solid-lichid, lichid-gaz, lichid-lichid).
Energia de suprafaţă ia naştere datorită coeziunii asimetrice a moleculelor ce se găsesc la
suprafeţele celor două medii.
1.3 Adsorbţia
Apa poate fi fixată la suprafaţa diverselor particule (ioni sau molecule) prin forţe de adsorbţie,
care sunt mai ales forţe electrostatice, datorită stării dipolare a apei. Această fracţiune a apei (apa
de adsorbţie sau de hidratare) determină fenomenul de solvatare a particulelor coloidale şi de
electrostricţie a ionilor minerali, prin formarea în jurul lor a unui înveliş dens de molecule de apă
nedisociate.
Numeroase substanţe din celule conferă suprafeţe enorme de adsorbţie a apei (1 gram de
celuloză oferă o suprafaţă de 16 cm2; 100 molecule proteice adsorb aproximativ 4-56 molecule de
apă). În cazul ionilor, învelişul lor apos este cu atât mai gros cu cât este mai mică raza şi
încărcătura electrică a ionului respectiv (figura1.1).
1.3.2.Adsorbţia solului
Principiu. Fenomenele de adsorbţie şi eluţiune au loc şi în sol. Complexul adsorbant,
organic şi anorganic al solului fixează prin adsorbţie şi eliberează prin eluţiune (fenomen de trecere
a particulelor din stare adsorbită în stare liberă) moleculele şi ionii minerali.
Materiale necesare: argilă fină sau sol, soluţii diluate de fuxină, albastru de metilen, roşu
de Congo, (toate 0,1%), pahar Berzelius, pâlnie de sticlă, hârtie de filtru.
Mod de lucru. Se introduc într-un pahar 3-5 grame de argilă fină sau sol, peste care se
adaugă 5 ml soluţie de colorant. Conţinutul se agită câteva minute şi apoi se filtrează. Se constată
că filtratele obţinute sunt incolore.
Interpretare. Moleculele de substanţe colorate au fost adsorbite pe suprafaţa particulelor
de sol.
Durata experienţei: 10 minute.
1.4.Imbibiţia
3
1.4.2 Determinarea gradului de imbibiţie a seminţelor
Principiu: Imbibiţia seminţelor depinde de natura chimică a substanţelor de rezervă
depozitate în endosperm, la diferite grupe de plante (cereale, leguminoase, oleaginoase etc.)
Materiale necesare:
¾ seminţe de cereale: Avena sativa (ovăz), Triticum aestivum (grâu), Zea mays (porumb);
¾ seminţe de leguminoase: Pisum sativum (mazăre), Phaseolus vulgaris (fasole);
¾ cilindri gradaţi, plăci Petri, balanţă tehnică, hârtie de filtru.
Mod de lucru:Se cântăresc câte 10 grame seminţe din diferite grupe de plante: porumb (la
care predomină substanţele amidonoase) şi mazăre (cu conţinut ridicat de substanţe proteice). Se
determină volumul acestor seminţe astfel: se introduce apă într-un cilindru gradat, până la o
anumită diviziune şi se introduc pe rând seminţele de porumb, respectiv de mazăre. Se notează
nivelul apei după adăugarea fiecărui tip de seminţe. Făcând diferenţa dintre acest nivel şi nivelul
iniţial, obţinem volumul seminţelor (separat, pentru fiecare lot de lucru).Seminţele scoase din
cilindru se pun la îmbibat în vase cu apă, unde se ţin 24 ore.
După etapa de îmbibare, se scot apoi din apă, se tamponează cu hârtie de filtru, pentru a
îndepărta apa adezivă şi li se redetermină greutatea şi volumul, după procedeul descris anterior.
Prin raportarea datelor finale la cele iniţiale, se calculează gradul de imbibiţie a seminţelor,
exprimând, în procente, apa de imbibiţie măsurată gravimetric şi volumetric.
Pentru fiecare tip de seminţe se aplică următoarele formule:
Iv =
Vf − Vi x100 Ig =
Gf − Gi x100
Vi Gi
Valorile obţinute practic arată că în cazul seminţelor cu amidon de rezervă (porumb, grâu, ovăz etc.),
gradul de imbibiţie este aproximativ 30-40%, în timp ce la seminţele leguminoaselor (mazăre, fasole, soia etc.),
care au un conţinut mare de substanţe proteice, gradul de imbibiţie este foarte ridicat, până la 90-120%,
raportat la greutatea şi volumul iniţial.
4
LUCRARE PRACTICĂ NR. 2
1.5.Osmoza şi difuziunea
►Osmoza este fenomenul fizic de trecere a unui solvent printr-o membrană semipermeabilă,
care separă două soluţii de concentraţii diferite, sau o soluţie de solventul pur. Sensul mişcării
este de la soluţia mai diluată către cea mai concentrată, datorită energiei cinetice mai mari a
particulelor de solvent, care impulsionează astfel trecerea acestora prin membrană.
Denumirea fenomenului vine din limba greacă, de la cuvântul „osmos”, care înseamnă
impulsie, îndemn.
Trecerea solventului prin membrana despărţitoare are loc până la stabilirea unui echilibru de
concentraţii între cele două compartimente.
Fiecare lichid are un potenţial osmotic care se datorează loviturilor aplicate de particulele
sale pe pereţii vasului, în mişcarea lor browniană.
Fenomenul de osmoză reprezintă o cale fundamentală de pătrundere apei în celulă. El
stă la baza conducerii şi distribuţiei apei în organismele vii, deşi nu toate mişcările de pătrundere
sau de ieşire a apei din celulă se datorează forţelor osmotice.
Osmoza poate fi studiată folosind membrane permeabile şi, în special, membrane
semipermeabile.
Membranele permeabile (dializante) opresc particulele coloidale, însă pot fi străbătute de apă
şi de cea mai mare parte dintre moleculele cristaloide (cu diametrul mai mic de 1 milimicron).
Această trecere se realizează, în cazul apei, prin osmoză, iar în cazul cristaloidelor prin
difuziune, care reprezintă, de fapt, o dializă. Membranele permeabile se pot obţine din:
pergament, colodiu, celofan, vezică sau intestine de porc, branhii de peşte etc.
►Difuziunea
Este fenomenul fizic prin care două sau mai multe specii de particule (ioni sau molecule)
se amestecă în cazul când vin în contact, datorită mişcărilor lor cinetice.
Sensul mişcării este întotdeauna de la substanţa mai concentrată către cea mai diluată,
chiar contra gravitaţiei, deoarece energia cinetică este mai mare în cazul particulelor mai apropiate
(mai dense).
Viteza de difuziune depinde de natura substanţelor care difuzează (mărimea moleculelor,
concentraţia soluţiilor, vâscozitatea mediului) şi de unii factori externi (temperatura).
Difuziunea este un fenomen care se manifestă frecvent în materia celulară. Pe acest
principiu are loc uniformizarea continuă a conţinutului hialoplasmei şi a vacuolei din fiecare
celulă.
A.Difuziunea descendentă
Materiale necesare: soluţie de zaharoză 10 %, decoct din frunze de stejar, eprubete,
stativ.
Mod de lucru: Într-o eprubetă se toarnă o soluţie de zaharoză 10 %, peste care se adaugă,
cu atenţie, prelingând pe peretele eprubetei, un decoct din frunze de Quercus sp. (stejar), care
conţine tanoide de culoare brună. Se obţin astfel două straturi distincte, de culori diferite, a căror
limită se marchează cu un creion dermatograf sau o hârtie gumată. Eprubeta se lasă în repaus
într-un stativ şi, cu timpul, se va putea constata că cele două soluţii se amestecă (figura.1.2).
B.Difuziunea ascendentă
Fig. nr.1.2. Difuziunea Materiale necesare: eprubetă cu
descendentă rezervor lateral, cristale de
după gradientul de concentraţie:
permanganat de potasiu, stativ.
1-soluţie de tanin; 2-soluţie de
zaharoză (după Boldor şi colab., Mod de lucru: Se ia o eprubetă
1983) ce se prelungeşte cu un rezervor
lateral, se umple cu apă, se dă
drumul în apa din ea unui cristal
5
de permanganat de potasiu (KMnO4) şi se lasă în repaus, fixată la un stativ. Cristalul de KMnO4 se
dizolvă, iar moleculele sale se intercalează în toată masa apei, difuzând ascendent (figura1.3).
Fig. nr. 1.3. Difuziunea C.Difuziunea ritmică
ascendentă a
permanganatului de Materiale necesare: sol coloidal de gelatină cu
potasiu, împotriva forţei de bicromat de potasiu, soluţie de AgNO3 20 %, cutie Petri,
gravitaţie (după Boldor şi pipete.
colab., 1983) Mod de lucru: Se prepară un sol coloidal de
gelatină cu bicromat de potasiu şi se toarnă într-o cutie
Petri, într-un strat de 2-3 cm grosime. După gelificare se adaugă cu pipeta, în porţiunea centrală a
suprafeţei acesteia, 2-3 picături dintr-o soluţie de AgNO3 20%. În urma adăugării acesteia apare
imediat o coloraţie roşie datorită formării bicromatului de argint (Ag2Cr2 O7).
Se acoperă cutia Petri cu capacul, căptuşit în prealabil cu hârtie de filtru umectată şi se
aşează la întuneric, pentru a evita reducerea argintului la lumină. După un timp se constată
modificarea culorii picăturilor adăugate, din roşu în galben, datorită trecerii bicromatului de argint în
cromat de argint (Ag2CrO4).Cromatul de argint, difuzând, formează cu gelatina un precipitat alb ce
se depune succesiv, sub formă de inele concentrice, vizibile chiar cu ochiul liber .
6
aminici, etc.), care având dimensiuni mici, măresc concentraţia soluţiei şi ca urmare „atrag” apa.
Acestea sunt substanţe osmotic active. Substanţele organice cu moleculă mare, precum
amidonul şi proteinele, contribuie puţin la concentrarea soluţiei şi nu „atrag” apa. Acestea sunt
substanţe osmotic inactive.
Materiale necesare: rădăcini tuberizate de Beta vulgaris (sfeclă roşie) sau Daucus carota
(morcov), substanţe osmotic active (organice: zaharoză, glucoză, fructoză, acid citric; minerale:
clorură de sodiu, clorură de potasiu, azotat de potasiu), substanţe osmotic inactive (amidon).
Mod de lucru:Se decapitează două rădăcini tuberizate de sfeclă sau de morcov, se
excavează pe o adâncime de circa 3 cm de la nivelul suprafeţei de secţiune rezultată în urma
decapitării, după care într-una din excavaţii se introduce amidon, iar în cealaltă o substanţă
osmotic activă. Se aşează rădăcinile în poziţie verticală în câte un pahar Berzelius şi se acoperă
cu un clopot de sticlă, pentru a le menţine într-o atmosferă izolată timp de 24 ore (figura2.1.).
2.2.Evidenţierea turgescenţei
7
desprinderea plasmalemei de peretele celular (mai rigid), fenomen care se manifestă prin treptele
plasmolizei (incipientă, concavă şi convexă).
¾ Plasmoliza se produce mai repede atunci când se utilizează un plasmolitic mai puternic.
De asemenea, durata de timp de la începutul plasmolizei şi până la plasmoliza convexă este
determinată de însuşirile fizice ale protoplasmei: vâscozitate, elasticitate etc.
¾ Trebuie reţinute câteva aspecte importante în legătură cu fenomenul plasmolizei: în
natură, nu se întâlnesc celule plasmolizate, decât în cazuri cu totul excepţionale; plasmoliza se
produce numai la celulele vii, deoarece protoplasma acestora joacă rolul membranei
semipermeabile.
Materiale necesare: bulb de Allium cepa (ceapă), lame, lamele, baghete, ac spatulat, brici,
bisturiu, soluţie 1M de azotat de potasiu, hârtie de filtru, microscop.
Mod de lucru: Se efectuează o secţiune prin epiderma inferioară a frunzei bulbului de ceapă
roşie (albă).
1. Secţiunea se aşează pe o lamă într-o picătură de apă distilată. Preparatul se acoperă cu lamela
şi se examinează la microscop cu obiectivul mic.
2. Se aşează de o parte a lamelei o fâşie de hârtie de filtru iar concomitent, pe partea opusă, se
picură cu o baghetă, soluţie 1M de azotat de potasiu.
8
LUCRARE PRACTICĂ NR. 3
În pătrunderea apei în celulă, prin fenomenul osmotic, o pondere deosebită revine presiunii
osmotice a sucului celular numită şi potenţial osmotic celular, presiune a cărei valoare trebuie
să fie mai ridicată decât a mediului, pentru a se produce curentul endosmotic.
Presiunea osmotică (π) reprezintă forţa cu care moleculele substanţei dizolvate apasă
asupra solventului sau diferenţa dintre presiunea de difuziune a apei pure şi presiunea de
difuziune a apei dintr-o soluţie.
Cunoaşterea valorii presiunii osmotice are nu numai o importanţă teoretică, ci şi o importanţă
practică întrucât oferă indicii asupra gradului de aprovizionare cu apă a plantelor, a cărui
cunoaştere este deosebit de importantă în cazul plantelor agricole cultivate în condiţii de irigare.
Pentru calculul presiunii osmotice se foloseşte formula:
π = presiunea osmotică a soluţiei care se determină; π ═CxRxT
C = concentraţia soluţiei a cărei presiune osmotică se determină;
R = constantă ( 0,082);
T = temperatura absolută + temperatura la care se lucrează;
Materiale necesare: refractrometru, presă, mojar cu pistil, cuţit, planşetă de lemn, baghetă,
pisetă cu apă, cutii Petri, sticlă de ceas, tifon, vată,organe vegetale la care se face determinarea (
tuberculi de Solanum tuberosum (cartof); fruct de Malus pumila (măr); rădăcină tuberizată de
Daucus carota (morcov).
Mod de lucru:Se extrage sucul celular, prin presare cu un cleşte special sau prin
mărunţire, mojarare şi apoi presare.
2.6
2.5
2.4
Fig nr. 2.4. - 2.6.: 4. Refractometru Abbe în poziţie de lucru. 5. Poziţia „peste cap” a refractometrului Abbe
pentru depunerea lichidului de cercetat pe prisma de măsurare. 6. Câmpul lunetei la citirea rezultatului.
1. prisma de iluminare, 2. prismă de măsurare, 3. fereastra prismei de iluminare, 4. olivă pentru racordare la
ultratermostat, 5. tub de cauciuc care uneşte cele două olive, 6. butonul compensatorului de dispersie, 7. luneta, 8.
lupa, 9. butonul de mişcare a blocului de prisme, 10 oglinda, 11 pipetă (după Boldor şi colab., 1983)
9
Sucul celular astfel extras se colectează pe o sticlă de ceas şi apoi se pune o picătură pe prisma
refractometrului (figurile 2.4 -2.6). În funcţie de refractometru, pe acesta se poate citi direct
concentraţia sucului celular sau numai indicele de refracţie. Cunoscând concentraţia, valoarea
acesteia se introduce în formulă şi se calculează presiunea osmotică a sucului celular. Durata
experienţei: 40 min.
Forţa de sucţiune (S) este forţa reală cu care celula absoarbe apă din mediul înconjurător la un
moment dat. Forţa de sucţiune (S) este determinată de diferenţa existentă la un moment dat între
presiunea osmotică π şi presiunea de turgescenţă T:
S=π–T
Principiul acestui procedeu constă în stabilirea variaţiilor concentraţiei unor soluţii în care a
stat materialul cercetat: dacă materialul pierde apă în contact cu soluţia, concentraţia şi indicele de
refracţie al soluţiei respective se diminuează, iar în caz contrar creşte. Procedeul constă deci în a
găsi soluţia care, în contact cu materialul vegetal, nu şi-a modificat valoarea indicelui de refracţie
sau a concentraţiei. Concentraţia ei este practic egală cu cea sucului vacuolar din celulele
ţesutului. Cunoscând aceasta se poate calcula, în atmosfere, deficitul presiunii de difuziune.
Materiale necesare: soluţie de zaharoză 1M, eprubete, pipete, stativ, rădăcini tuberizate de
Daucus carota (morcov), frunze de Pelargonium sp., perforator de dopuri.
Mod de lucru:Pentru determinare se introduc în 6 eprubete câte 10 ml dintr-unul din
următoarele lichide: în prima apă distilată, iar în celelalte soluţii de zaharoză de 0; 0,2; 0,4; 0,6;
0,8; 1M, după modelul prezentat în tabelul 2. 1.
Se agită conţinutul fiecărei eprubete din şirul I de eprubete; se iau câte 2 ml de soluţie din
fiecare eprubetă şi se trec în alte 6 eprubete, obţinându-se astfel a doua serie de diluţii (şirul II).
Se introduce apoi în fiecare eprubetă din şirul II aceeaşi cantitate de material vegetal (câte
10 rondele scoase cu un perforator de dopuri din frunze de Pelargonium zonale sau aparţinând
altor specii de plante), materialul fiind lăsat în contact cu respectivele soluţii timp de o oră. Între
timp se determină, cu ajutorul unui refractometru, concentraţia în zaharoză, exprimată în procente
de zaharoză, pentru fiecare soluţie din şirul I de eprubete. Modul de preparare a soluţiilor şi
rezultatele se notează într-un tabel întocmit după modelul prezentat în tabelul 2. 1.
După o oră se determină, în acelaşi mod, concentraţiile soluţiilor din şirul II de eprubete,
notându-le de asemenea în tabel. Se va constata că unele concentraţii se diluează deoarece au
fost hipertonice, iar altele se măresc pentru că au fost hipotonice; soluţia în care nu se
înregistrează nici o variaţie de concentraţie este considerată izotonică cu concentraţia sucurilor
vacuolare ale celulelor ţesutului foliar.
Tabelul nr. 2.1. Modul de preparare a soluţiilor de zaharoză
10
B. Determinarea forţei de sucţiune prin procedeul curenţilor (ŞARDAKOV)
11
LUCRARE PRACTICĂ NR. 4
3. Regimul de apă al plantelor
3.1. Absorbţia apei de către plante
În cursul întregii lor vieţi plantele absorb continuu apă din substrat, mai ales cu ajutorul
sistemului lor radicular şi apă în timpul precipitaţiilor, din rouă sau din ceaţă cu ajutorul organelor
lor supraterane, apă ce este eliminată în proporţie de circa 99% în procesul transpiraţiei şi, în
anumite condiţii, prin gutaţie.
Existenţa curentului continuu de apă între sistemul radicular şi organele supraterane
reprezintă o condiţie esenţială a activităţii metabolice şi deci a supravieţuirii plantelor.
La plantele nevasculare de talie mică (criptogame unicelulare, talofite terestre, briofite etc.)
aparatul vegetativ absoarbe apa prin întreaga sa suprafaţă, uneori prin rizoizi, sau prin hialociste -
celule acvifere moarte, ca la Sphagnum palustre).
La plantele vasculare apar rădăcinile, organe de fixare şi de absorbţie, prevăzute cu ţesuturi
conducătoare specializate.
Materiale necesare: potometru (dispozitiv sub forma unui tub curbat cu aspectul literei U,
din sticlă sau plastic), dop de cauciuc, plantă cu rădăcină, parafină, ulei.
Mod de lucru: Potometrul (denumirea vine din limba greacă de la cuvântul “potos” care
înseamnă „a bea”) se umple cu apă (fiartă şi răcită pentru eliminarea gazelor) până la refuz. Se
alege o plantă viguroasă şi cu rădăcinile intacte, care se introduc în potometru prin intermediul
unui dop cu tăietură laterală. Se fixează potometrul la un stativ, se parafinează dopul şi se
introduce o picătură de ulei în tubul gradat al potometrului pentru a împiedica evaporarea lichidului.
Se notează nivelul iniţial al apei în tubul gradat şi după o oră se citeşte pe tubul gradat cantitatea
de apă absorbită de plantă, exprimată
Fig.nr. 3.1. Determinarea intensităţii în ml (figura 3.1).
absorbţiei apei la o plantă crescută în
cultură hidroponică: 1- potometru; 2-dop
3.1.2. Evidenţierea zonei de
de cauciuc perforat şi tăiat pe o parte
pentru fixarea tulpinii plantei; 3- clema absorbţie radiculară a apei
stativului; n- nivelul la care se retrage apa
A. Materiale necesare: plantule,
în tubul gradat al potometrului, în urma
absorbţiei ei de către plantă prin sistemul
eprubete, ulei.
radicular (după Boldor şi colab., 1983).
Mod de lucru: Pentru evidenţierea
rolului diferitelor zone ale rădăcinii în
absorbţia apei, se aşează plantule ce
prezintă o rădăciniţă seminală lungă, în câte o eprubetă în următoarele poziţii ca în figurile de mai
jos (figura 3.2.).
1- apă; 2 –ulei.
Fig. nr. 3.2. Evidenţierea zonei de absorbţie radiculară a apei (după Boldor şi colab., 1983)
a. o plantulă martor se plasează, fixând-o, prin intermediul unui capac de carton prevăzut cu un orificiu
corespunzător şi cu tăietură laterală, astfel ca să fie cu toată rădăcina în apă;
b. o altă plantulă se fixează cu rădăciniţa, astfel ca vârful ei şi zona perilor absorbanţi să fie în apă, iar celelalte zone
în ulei;
c. a treia se aşează cu vârful rădăcinii în apă şi cu zona perilor absorbanţi şi cea situată deasupra ei în ulei;
12
d. o plantulă se aşează cu rădăcina curbată astfel ca vârful şi partea ei superioară să stea în ulei, iar zona perilor
absorbanţi în apă;
e. a cincea plantulă se aşează astfel ca vârful rădăcinii şi zona perilor absorbanţi să stea în ulei, iar restul rădăciniţei
în apă;
Plantulele cu care se lucrează trebuie să fie puţin ofilite, pentru a fi înlăturată rigiditatea
ţesuturilor datorită turgescenţei celulelor, fapt ce permite realizarea poziţiilor rădăcinii, cerute de
experiment.
Interpretare. După un interval de timp se va constata că plantula martor şi cele la care zona perilor absorbanţi s-a
aflat în apă trăiesc, păstrându-şi aspectul normal, iar celelalte, care au avut zona piliferă în ulei, se ofilesc şi pier.
Acest experiment nu trebuie să ducă la concluzia că absorbţia apei este nulă în afara
zonei pilifere, ci doar că este insuficientă pentru a asigura supravieţuirea plantelor.
În vârful rădăcinii (la nivelul zonei meristematice şi zonei netede) absorbţia apei este slabă
deoarece la acest nivel nu există ţesuturi conducătoare capabile să vehiculeze apa. La acest nivel
este absorbită doar apa necesară local, care serveşte la hidratarea coloizilor neoformaţi şi la
sporirea volumului vacuolar în timpul alungirii celulelor.
În zona aspră pătrunderea apei este foarte slabă, deoarece suberul sau suberoidul izolează
ţesuturile periferice vii de apa din sol. Suberul prezintă crăpături ce pot juca rolul unor veritabile
lenticele, permeabile pentru apă şi gaze.
B. Materiale necesare: plantule de Zea mays (porumb) sau de Triticum aestivum (grâu),
microscop, lame, lamele, soluţie de roşu neutru 0,1 % sau albastru de metilen, pahare Berzelius.
Mod de lucru: Plantulele de porumb sau de grâu, cu sistem radicular intact, se introduc cu
rădăcinile în pahare Berzelius care conţin soluţii diluate de roşu neutru sau albastru de metilen.
După o oră se spală rădăcinile cu apă şi se observă macroscopic, colorarea rădăcinilor
numai în zona perilor absorbanţi şi mai puţin în zona aspră.
Prin secţiunile longitudinale ale rădăcinii în zona piliferă şi observarea la microscop cu
obiectivul mic, se poate analiza structura perilor absorbanţi şi zona de pătrundere în rădăcină a
coloranţilor absorbiţi din soluţie.
Interpretare. Experimentul demonstrează că absorbţia apei de către rădăcinile plantelor superioare este localizată în
zona piliferă şi parţial în zona aspră, unde suberul izolează ţesuturile externe ale rădăcinii. Absorbţia nu are loc prin
zona netedă şi piloriză deoarece lipsesc ţesuturile conducătoare capilare de vehiculare a apei.
3.1.3 Evidenţierea influenţei soluţiei externe asupra absorbţiei apei prin rădăcini
Plantele pot absorbi apa din sol numai când soluţia solului este hipotonică faţă de
sucul vacuolar al celulelor rădăcinii.
Materiale necesare: plantule de Pisum Axa epicotilară
sativum (mazăre) sau Phaseolus vulgaris (fasole),
eprubete, stativ. soluţie saturată de clorură de sodiu, Rădăcină principală
Interpretare Se constată că rădăcina ţinută în apă este rigidă, turgescentă, în timp ce rădăcina ţinută în soluţia
concentrată de NaCl este flască, pentru că şi-a pierdut turgescenţa. În primul caz, apa fiind hipotonică faţă de sucul
vacuolar pătrunde în celule printr-un curent de endosmoză. În al doilea caz, soluţia de clorură de sodiu este
hipertonică faţă de sucul vacuolar şi determină ieşirea apei din celule printr-un curent de exosmoză.
13
3.1.4.Evidenţierea absorbţiei foliare
Frunzele sunt capabile să absoarbă o parte din apa căzută pe ele în timpul ploilor, apa de
condensare (din rouă), apa din ceaţă, ba chiar şi vaporii de apă din aer. Absorbţia are loc mai ales
la nivelul cuticulei (deci mai intens decât prin stomate), datorită forţei de sucţiune a celulelor
epidermice. Această absorbţie este rapidă când cuticula este subţire şi discontinuă şi lentă în cazul
când cuticula este groasă.
Materiale necesare: frunze de Hibiscus, Pelargonium, cristalizor cu apă, balanţă analitică
sau de torsiune, vaselină (parafină), hârtie de filtru, baghetă de sticlă.
Mod de lucru:Se detaşează de plantă o frunză cu cuticula subţire (de Hibiscus sau de altă
specie) care se lasă câteva ore să se ofilească puţin, pentru a crea un deficit de apă în ea şi a
favoriza absorbţia.
Se parafinează apoi baza peţiolului, scufundându-l în parafină topită şi apoi se cântăreşte
frunza la o balanţă analitică sau de torsiune .
După cântărire se scufundă frunza într-un cristalizor cu apă şi după o oră se cântăreşte din
nou, după ce apa de pe limb a fost îndepărtată printr-o tamponare uşoară cu hârtie sugativă.
Prin diferenţă se află cantitatea de apă absorbită, care se raportează fie la 100 g de
substanţă proaspătă, fie la unitatea de suprafaţă (1dm2):
1. Pentru raportarea apei absorbite la 100 g substanţă proaspătă se utilizează relaţia :
a x 100
Apa absorbită (g apă % s.pr.) = -----------
în care: m
a = cantitatea de apă absorbită [g];
m = masa iniţială a frunzei [g];
100 = coeficient pentru exprimarea rezultatului în procente.
Plantele submerse, chiar şi cele care au rădăcini, absorb apa prin toată suprafaţa cormului
lor, care este totdeauna lipsită de cuticulă. La speciile lipsite de rădăcini absorbţia apei se face prin
tulpini şi frunze. Întrucât la speciile submerse apa absorbită nu este eliminată deloc prin
transpiraţie, care nu se poate desfăşura în mediul acvatic, ea suferă o distribuire activă în întreaga
plantă, distribuire ce se manifestă prin absorbţia ei predominant pe la părţile bazale ale tulpinii şi
ramurilor şi eliminarea ei la nivelul zonelor mai apicale ale acestora.
Materiale necesare: cristalizor cu apă, ramură a unei plante acvatice submerse (Elodea
canadensis, Myrriophyllum sp., etc.), balanţă analitică, parafină, hârtie de filtru, baghetă de sticlă.
14
Modul de lucru. Se detaşează de plantă o ramură a unei plante acvatice submerse care se
lasă în aer 15 - 20 de minute să se ofilească puţin, pentru a crea un deficit de apă în ea şi a
favoriza absorbţia.
Se parafinează apoi baza ramurii, scufundându-o în parafină topită şi apoi se cântăreşte
ramura la o balanţă analitică.
După cântărire se scufundă ramura într-un cristalizor cu apă şi după o oră (două ore) se
cântăreşte din nou, după ce apa de pe suprafaţa ramurii a fost îndepărtată printr-o tamponare
uşoară cu hârtie sugativă.
Prin diferenţă se află cantitatea de apă absorbită, care se raportează la 100 g de substanţă
proaspătă.
Pentru raportarea apei absorbite la 100 g substanţă proaspătă se utilizează relaţia :
a x 100
Apa absorbită (g apă % s.pr.) = -------
în care: m
a = cantitatea de apă absorbită [g];
m = masa iniţială a ramurii [g];
100 = coeficient pentru exprimarea rezultatului în procente.
15
LUCRAREA PRACTICĂ NR. 5
Apa absorbită din mediu este condusă în întreaga plantă, prin fiecare celulă şi prin fiecare
organ. Dacă plantele se află în condiţii normale, pe măsură ce apa absorbită este eliminată din
corpul lor (în proporţie de până la 90%), noi cantităţi de apă absorbită îi iau locul, astfel încât, în
stare de vegetaţie, prin organismul vegetal trece un curent continuu de apă (figura 3.4).
La cormofite conducerea apei poate avea loc pe cale combinată, intraprotoplasmatică (prin
interiorul celulelor) şi extraprotoplasmatică (prin imbibiţie - pe suprafaţa sau prin pereţii celulozici
şi prin difuziune prin spaţiul liber apos - prin meaturile existente între celule). În afara acestor căi,
au apărut elemente specializate în conducerea apei pe distanţe mari - vasele de lemn, care, fiind
lipsite de un conţinut viu, permit conducerea unui volum mare de apă şi cu viteză sporită. Este
vorba de translocaţia sevei brute, care se interpune între conducerea orizontală a apei în
parenchimurile radiculare şi conducerea ei în sens orizontal în parenchimurile organelor
supraterane.
xilem
xilem
ţesut
stomată lacunos
floem
xilem
vase de lemn
Rădăcină secundară
peri absorbanţi
cortex
Apă şi săruri minerale Sistem radicular
xilem
floem
Fig. nr.3.4 Schema conducerii sevei brute în corpul plantei
A. Materiale necesare: flori albe de Galanthus sp. (ghiocel) sau Convallaria majalis
(lăcrămioară) ori tulpini de plantule etiolate de Phaseolus vulgaris (fasole), Lupinus sp. (lupin),
soluţii colorate (eosină 0,1% sau fucsină 0,1%), cristalizoare, bisturiu.
Mod de lucru: Se secţionează sub o soluţie colorată (eosină sau fucsină) pedunculul unei
flori albe şi, lăsându-l cu baza în colorant, se constată după un timp, că nervurile petalelor se
colorează în roşu, ceea ce demonstrează că apa colorată circulă prin xilem.
B. Materiale necesare: frunza de la o specie de Liliaceae sau de Gramineae, vas cu apă,
bisturiu.
Mod de lucru: Se taie dintr-o frunză de liliacee (Aspidistra) sau de graminee (Zea mays),
două segmente dreptunghiulare, cu laturile de 6/4 cm, astfel ca, la un segment nervurile să fie
paralele cu latura mare, iar la celălalt cu latura mică. Se introduc cu una din laturile mici într-un vas
care conţine un strat subţire de apă şi se lasă în repaus. După un interval de timp, se va constata
că segmentul care nu are nervurile împlântate cu un capăt în apă se ofileşte la extremitatea situată
16
în aer, în timp ce celălalt rămâne turgescent. Acest fapt demonstrează că apa poate fi condusă la
distanţe mari prin vasele de lemn, în timp ce conducerea ei de la celulă la celulă se face
anevoios.
3.2.2.Mecanismele care contribuie la ascensiunea sevei brute
Urcarea apei prin ţesutul conducător lemnos este rezultanta unui ansamblu de forţe
interne (presiunea radiculară, forţa de aspiraţie a frunzelor, coeziunea, capilaritatea şi
imbibiţia) care acţionează diferenţiat, în funcţie de faza de vegetaţie a plantelor şi de evoluţia
factorilor externi. Mecanismele principale care intervin în mişcarea sevei brute sunt forţa de
sucţiune a celulelor din frunze sau apelul foliar (aspiraţia foliară) şi forţa de împingere a
celulelor rădăcinii sau presiunea radiculară.
Principiu. După apariţia frunzelor, rolul principal în urcarea apei revine forţei de aspiraţie a
frunzelor, ca forţă motrice superioară care funcţionează permanent zi şi noapte, din primăvară
până în toamnă, datorită procesului de transpiraţie la nivelul foliar. Transpiraţia intensă duce la
crearea unui deficit de presiune în vasele de lemn. Acest deficit de presiune se transmite prin
vasele de lemn din nervurile frunzelor, în lungul plantei, până la nivelul ramificaţiilor sistemului
radicular.
Materiale necesare: tub de sticlă cu lungimea de 50-60 cm lărgit la un capăt (asemănător cu
cel utilizat la confecţionarea osmometrului de tip Dutrochet), stativ metalic, cristalizor cu mercur,
ramuri de conifere cu frunziş bogat (Thuja, Taxus).
Mod de lucru: Printr-un dop de cauciuc cu orificiu corespunzător şi cu tăietură laterală se
trece o ramură de conifere în aşa fel ca frunzele să fie în partea superioară şi se fixează dopul la
capătul lărgit al tubului de sticlă. Prin capătul opus se umple tubul cu apă fiartă şi răcită (pentru
eliminarea gazelor dizolvate în ea). După umplerea tubului până la refuz, se astupă capătul îngust
al acestuia cu un deget şi se introduce într-o cuvă cu mercur, după care se fixează tubul la un
stativ metalic. După un timp se constată că mercurul începe să se ridice în porţiunea îngustă a
tubului (figura 3.5), ca urmare a faptului că apa eliminată prin transpiraţia ramurii este înlocuită cu
apa din tub. În tubul îngust, omolog cu un vas de lemn, se crează un deficit de presiune (transmis
de la nivelul frunzelor prin ramură), care fiind mai mică decât presiunea atmosferică, determină
urcarea în tub a mercurului.
17
Coeziunea moleculelor de apă este indispensabilă pentru menţinerea intactă a coloanei de apă atunci când deficitul de
presiune depăşeşte 1 atmosferă şi în lipsa ei, coloana de apă s-ar rupe.
18
Principiu. La frunze detaşate de plantă procesul fiziologic de transpiraţie continuă normal
încă 5 - 10 minute după care urmează o deshidratare lentă a ţesuturilor. Pentru a determina ritmul
transpiraţiei la diferite specii vegetale se foloseşte o metodă gravimetrică, de mare precizie şi
rapid de executat.
Materiale necesare: balanţă de torsiune, cronometru, bisturiu, plante.
Mod de lucru:Se detaşează frunza de pe plantă. Imediat se aşează frunza pe platanul
balanţei de torsiune, se notează masa frunzei şi se repetă cântăririle la intervale scurte de timp (1-
2 -3 minute). Concomitent se poate lucra cu balanţa de torsiune la mai multe specii vegetale,
funcţie de rapiditatea efectuării cântăririlor. Rezultatele obţinute se notează într-un tabel.
Interpretare. Prima cântărire reprezintă masa iniţială a frunzei (mi), iar celelalte cântăriri (mf) dau prin diferenţă
cantităţile de apă eliminate de frunze prin transpiraţie în intervalul de timp respectiv.
Gutaţia este procesul fiziologic de eliminare a apei sub formă de picături, într-o
atmosferă încărcată cu vapori de apă. Gutaţia are loc când transpiraţia este redusă sau nulă, în
timp ce absorbţia radiculară a apei este intensă. Gutaţia suplineşte transpiraţia, permiţând urcarea
sevei în plantă, intervenind ca o ,,supapă de siguranţă ,, care limitează turgescenţa ţesuturilor, fără
ca să se întrerupă absorbţia apei. Eliminarea apei are loc prin hidatode sau stomate acvifere, în
preajma cărora se află terminaţiile vaselor lemnoase. Este un fenomen răspândit în natură, fiind
evidenţiat la peste 300 genuri de plante. Este foarte intensă la plantele ecuatoriale şi tropicale de
pădure. În regiunile noastre gutaţia este redusă şi are loc mai ales în timpul nopţilor umede de
vară.
►Evidenţierea fenomenului de gutaţie
Materiale necesare: ghiveci cu plante tinere: Triticum aestivum (grâu), Hordeum vulgare
(orz), sau Zea mays (porumb) de 8-10 zile; clopot de sticlă, cristalizor cu apă.
Mod de lucru: Se udă bine solul dintr-un ghiveci în care cresc plante tinere, după care se
acoperă etanş ghiveciul cu un clopot de sticlă, sub care se pune şi un cristalizor cu apă, pentru a
realiza o atmosferă internă bogată în vapori de apă. Se ţine ansamblul într-un loc întunecos şi
călduros şi se constată după câteva ore, apariţia în vârful fiecărei frunze a unei picături de apă,
care, mărindu-se, lunecă în lungul frunzei, în locul ei apărând alta (fotografia 1). Apa gutată conţine
diferite substanţe dizolvate în ea, în special săruri minerale. Dacă se evaporă câteva picături de
apă de gutaţie, luate pe o lamă de microscopie, se obţine un reziduu albicios.
3.Enumeraţi procesele prin care se elimină apa din plante şi indicaţi 4 deosebiri dintre ele.
4.Precizaţi traseul urmat de apă după absorbţie până la eliminare.
19
LUCRARE PRACTICĂ NR. 6
4.Nutriţia minerală a plantelor
4.1. Compoziţia chimică a plantelor
Evidenţierea elementelor minerale care intră în compoziţia plantelor se poate face prin analize
chimice din cenuşă (utilizând reacţii de culoare, de precipitare, sub formă de cristale specifice
observabile la microscop - cristaloscopice); metode histochimice sau prin alte procedee.
Pentru a evidenţia elementele minerale din cenuşa plantelor se pregătesc trei extracte
de cenuşă, după cum urmează:
1.într-un pahar Erlenmeyer se amestecă 3g cenuşă cu 100ml apă distilată, se
încălzeşte 2-3 minute la flacăra unui bec de gaz, apoi se filtrează conţinutul prin hârtie de filtru.
Din extractul obţinut se identifică clorul şi potasiul;
2.într-un pahar Erlenmeyer se amestecă 3g cenuşă cu 100ml soluţie de acid clorhidric 5%,
se încălzeşte 5 minute la flacăra unui bec de gaz, apoi se filtrează conţinutul prin hârtie de
filtru. Din extractul obţinut se identifică fierul, calciu, sulfaţii precum şi carbonaţii;
3.într-un pahar Erlenmeyer se amestecă 3g cenuşă cu 100ml soluţie de acid azotic 5 %, se
încălzeşte 5 minute la flacăra unui bec de gaz, apoi se filtrează conţinutul prin hârtie de filtru.
Din extractul obţinut se identifică fosforul.
A. Evidenţierea chimică a clorului
Materiale necesare: extract apos de cenuşă, eprubete, pipete, soluţie de acid azotic 5%
(concentrat), soluţie de azotat de argint 3 %.
Mod de lucru:Într-o eprubetă se tratează 3-5 ml extract apos de cenuşă cu câteva picături
de acid azotic 5 % şi câteva picături de soluţie de azotat de argint 3 %. În prezenţa clorului se
formează un precipitat alb de clorură de argint, conform reacţiei:
KCl + Ag NO3 → Ag Cl + KNO3
Durata experienţei: 10 minute
20
C. Evidenţierea fierului
Materiale necesare: extract clorhidric de cenuşă, soluţie de ferocianură de potasiu 10%,
soluţie de sulfocianură de amoniu ( NH4 SCN) 5%, eprubete, pipete.
Mod de lucru:
a) Într-o eprubetă se introduc 2-3 ml extract clorhidric de cenuşă care se tratează cu câteva
picături dintr-o soluţie de ferocianură de potasiu 10%. Se obţine un precipitat de culoare albastră
de ferocianură ferică (albastru de Berlin), conform reacţiei:
D. Evidenţierea calciului
Materiale necesare: extract clorhidric de cenuşă, soluţie de acid sulfuric 10 %, soluţie de
oxalat de amoniu 5 %, pipete, eprubete.
Mod de lucru: Într-o eprubetă se introduc 5 ml extract clorhidric şi se tratează cu 1-2 ml
soluţie acid sulfuric 10 %. Se formează cristale aciculare de ghips, conform reacţiei:
Ca Cl2 + H2 SO4 → Ca SO4 + 2HCl
Durata experienţei: 10 minute
E. Evidenţierea carbonaţilor
Materiale necesare: cenuşă, soluţie de acid clorhidric 10 %, soluţie hidroxid de bariu 2‰,
balon Erlenmeyer, dop de cauciuc găurit, tub de sticlă îndoit, eprubete, pipete, bec de gaz.
Mod de lucru: Se cântăresc 2-3 grame de cenuşă, se introduc într-un balon Erlenmeyer şi
se adaugă 10-15 ml acid clorhidric 10%. Se etanşează cu dop de cauciuc prin care trece un tub de
sticlă îndoit astfel încât capătul lui liber să poată fi introdus într-o eprubetă cu hidroxid de bariu. Se
încălzeşte uşor balonul la flacăra unui bec de gaz timp de 1-2 minute. În urma reacţiei carbonaţilor
din cenuşă cu acidul clorhidric se produce în balon o efervescenţă, datorită punerii în libertate a
dioxidului de carbon (figura 4.2.). Reacţiile care au loc sunt următoarele:
Dacă în soluţia de hidroxid de bariu se barbotează o cantitate mai mare de dioxid de carbon,
precipitatul de carbonat de bariu format se va dizolva, rezultând bicarbonatul de bariu solubil
după reacţia: BaCO3 + H2O ⇄ Ba(HCO3)2
F. Evidenţierea sulfaţilor
Materiale necesare: extract clorhidric de cenuşă, soluţie de clorură de bariu 5 %, soluţie de
acetat de plumb 5 %, eprubete, pipete.
21
Mod de lucru: Se introduc într-o eprubetă 2-3 ml extract clorhidric peste care se adaugă
câteva picături dintr-o soluţie de acetat de plumb 5 %. Se constată formarea unui precipitat alb,
cristalin, de sulfat de plumb, conform reacţiei:
K2 SO4 + (CH3- COO)2 Pb → Pb SO4 + 2 CH3—COOK
Durata experienţei: 10 minute
G. Evidenţierea fosforului
Materiale necesare: extract azotic de cenuşă, soluţie de molibdat de amoniu 10%, acid
azotic concentrat, eprubete, pipete.
Mod de lucru: Se pune o picătură de extract azotic de cenuşă pe o lamă de microscopie, iar
alături de ea se pune o picătură de molibdat de amoniu 10% amestecat cu o picătură de acid
azotic concentrat. Se unesc cele două picături cu un capilar de sticlă şi după o uşoară încălzire
(50-60˚C ) la linia de unire dintre picături apar cristale galbene romboedrice de fosfomolibdat
de amoniu (figura 4.3), care se observă la microscop.
Materiale necesare: plante cu conţinut ridicat de nitraţi (Begonia sp., Urtica dioica,
Tradescanţia virginica, Pelargonium sp.) soluţie de difenilamină, soluţie de brucină, acid sulfuric
concentrat, sticle de ceas, brici, pahare Erlenmeyer, pipete.
Mod de lucru:Secţiunile prin tulpini sunt tratate cu picături din soluţia de difenilamină. Se
constată apariţia instantanee a coloraţiei albastru intens.
Durata experienţei: 10 minute
Interpretare. În prezenţa nitraţilor din ţesuturi, difenilamina (incoloră) se oxidează şi trece în tetrafenil hidrazină
(albastră). Intensitatea coloraţiei în albastru depinde de conţinutul de anioni NO3. Treptat, culoarea albastră trece
în negru datorită acidului sulfuric din compoziţia reactivului care carbonizează ţesuturile. Acest test colorimetric
se mai poate aplica la determinarea azotului nitric din peţiolul frunzei de la specii legumicole şi viţa de vie.
Interpretare. Cu cât conţinutul de nitriţi este mai mare, cu atât culoarea albastră apare mai repede. La un conţinut
sărac în nitriţi, coloraţia albastră se obţine după 15- 30 minute. Eliberarea iodului din iodura de potasiu amidonată se
realizează conform reacţiilor: 2KNO2 + H2 SO4 → K2 SO4 + 2HNO2
2KI + H2SO4 → K2SO4 +2HI
2HNO2 + 2HI → 2NO + 2H2O + I2
22
4.1.2.3.Evidenţierea azotului amoniacal
Materiale necesare: rădăcini tuberizate de Beta vulgaris (sfeclă) sau bulb de Allium cepa
(ceapă), soluţie de KOH sau NaOH 10 %, soluţie de fenolftaleină 1 %, reactiv Nessler, pahare
Erlenmeyer cu dop de cauciuc şi tub recurbat, pipete, eprubete, bec de gaz.
Mod de lucru:
a) Într-un pahar Erlenmeyer se introduc 5 - 10 g fragmente de rădăcină de sfeclă sau bulb
de ceapă, tăiate mărunt. Se adaugă 25 - 30 ml soluţie de KOH sau NaOH 10%; se astupă balonul
cu un dop de cauciuc străbătut de un tub de sticlă al cărui capăt extern este introdus într-o
eprubetă care conţine 10 -15 ml de apă distilată şi 1- 2 picături de fenolftaleină 1 % ca indicator.
Se încălzeşte uşor conţinutul paharului la flacăra unui bec de gaz. În urma degajării amoniacului
pe seama sărurilor de amoniu din celule, fenolftaleina se colorează în roşu, mai mult sau mai
puţin intens, în funcţie de cantitatea de amoniac ce se degajă.
b) Dacă în locul eprubetei cu fenolftaleină se aşează o eprubetă cu reactiv Nessler diluat
cu apă distilată se obţine un precipitat galben- portocaliu, a cărui cantitate este în funcţie de
cantitatea de amoniac degajat.
Durata experienţei: 40 minute
4.2 Solul
Solul constituie un suport mecanic ce permite fixarea plantelor, dar în acelaşi timp
este o sursă de săruri minerale, gaze şi apă pentru ele.Solul, natural sau modificat de om, se
caracterizează printr-o compoziţie organo-minerală complexă. El apare constituit din trei categorii
de substanţe, corespunzătoare celor trei stări de agregare ale materiei:
- substanţe solide, care constituie faza solidă sau materia solidă a solului;
- apa încărcată cu substanţe solubilizate şi coloidal dispersate, care reprezintă faza lichidă
solului;
- aerul (cu conţinut de azot, oxigen, dioxid de carbon, alte gaze, vapori de apă), care
formează faza gazoasă a solului.
Din cuprinsul acestui complex natural mai face parte şi lumea vie (a mezofaunei şi
microorganismelor), care este agentul principal al transformărilor ce au loc în sol.
Analizele chimice ale solului pot fi efectuate pe probe proaspete, adică cu umiditatea ce o
au în momentul recoltării, sau pe probe uscate la aer. Prin uscarea solului se produc însă
modificări care afectează rezultatul analizelor cantitative pentru unele substanţe din compoziţia lui.
Materiale necesare: sol uscat la aer, sită de 2mm, eprubete, balanţă tehnică, spatulă, bec
de gaz.
Mod de lucru: Se ia din proba de sol cernută printr-o sită de 2mm, o cantitate de 2-3 g şi se
introduce într-o eprubetă. Se încălzeşte conţinutul eprubetei la flacăra mică a unui bec de gaz,
ţinând eprubeta în poziţie înclinată. După 1-2 minute se va observa în apropierea gurii eprubetei
(unde pereţii rămân mai reci), apariţia unor picături de apă care provin din sol.
Evidenţierea aerului din sol
Materiale necesare: sol uscat la aer, cilindru gradat, spatulă, baghetă de sticlă.
Mod de lucru: Se introduce într-un cilindru gradat de 100 ml, sol uscat la aer şi cernut prin
sita de 2 mm, până la diviziunea de 50 ml. Se toarnă peste solul din cilindru 50 ml apă distilată,
amestecând în acest timp solul cu o baghetă de sticlă. Apa va dezlocui aerul din sol, fapt ce duce
la scăderea nivelului ei în cilindrul gradat. Cantitatea de aer din solul cercetat va fi egală cu
diferenţa (în ml) dintre diviziunea 100 de pe cilindru şi diviziunea la care se află meniscul apei la
sfârşitul experimentului. Prin permeabilitate se înţelege proprietatea pe care o are solul de a
lăsa apa să se infiltreze în profunzime.
23
Materiale necesare: tub Wolff, cilindru gradat, spatulă, baghetă de sticlă, nisip, pietriş.
Mod de lucru: Se introduce puţină vată în porţiunea în formă de pâlnie a tubului; se umple
apoi această porţiune cu nisip sau pietriş şi se introduce peste acest strat sol pe o înălţime de 16
cm. După efectuarea acestor operaţii se fixează tubul la un stativ şi se toarnă apă peste solul din
el. Coloana de apă din tub trebuie să aibă permanent o înălţime de 8 cm, ceea ce impune
menţinerea ei, pe cât posibil, la un nivel constant. După ce spaţiile lacunare din sol s-au umplut cu
apă şi aceasta începe să picure din tub, se colectează această apă într-un cilindru de 50 ml. Se
notează timpul în care se colectează 50 ml de apă şi se calculează prin regula de trei simplă,
gradul de permeabilitate, care se exprimă în ml apă pe oră. Tubul Wolff poate fi înlocuit cu un
tub de sticlă cu diametrul de 3-4 cm, terminat la un capăt cu o pâlnie.
Soluţia solului conţine apă, substanţe dizolvate şi menţinute în soluţie împotriva forţei
gravitaţionale. Compoziţia soluţiei solului variază considerabil în funcţie de speciile de plante,
natura rocii mamă, textura solului.
Reacţia solului este dată de raportul existent între ionii de hidrogen ( H+) şi cei de
oxidril (OH-) aflaţi în soluţia solului. În funcţie de raportul existent între aceşti ioni, soluţia solului
poate avea o reacţie acidă, neutră sau alcalină. Această reacţie se exprimă convenţional prin
valorile de pH, ce reprezintă cologaritmul concentraţiei ionilor de hidrogen. Valorile de pH
cuprinse între 1-7 indică o reacţie acidă, între 7-14 o reacţie alcalină, iar valoarea 7 corespunde
unei reacţii neutre.
Evidenţierea elementelor chimice din sol se face prin procedeele şi cu reactivii menţionaţi la
analiza cenuşii vegetale. Pentru a evidenţia elementele minerale din sol se pregătesc trei extracte
de sol, după procedeul, descris la analiza cenuşii.
24
LUCRARE PRACTICĂ NR. 7
5. Fotosinteza
25
Interpretare. Se va constata că limbul se colorează în albastru doar în acele zone (b în figura 5.2) ale sale care au
prezentat pigmenţi asimilatori, ceea ce demonstrează faptul că substanţele organice (dintre care amidonul care se
evidenţiază cel mai uşor) se sintetizează la lumină, doar în prezenţa pigmenţilor asimilatori.
Interpretare. Limbul frunzei se colorează în albastru doar în zonele (3 în figura 5.3) în care lumina a ajuns
pe suprafaţa lui (zonele neacoperite de hârtie neagră), zone în care, în timpul fotosintezei, s-au sintetizat substanţe
organice (amidon + soluţia Lugol dă coloraţia albastră).
Materiale necesare: plante acvatice superioare submerse (de preferinţă Elodea canadensis,
în lipsa acesteia se poate utiliza Ceratophyllum sau Myriophyllum), pâlnie de sticlă, două baghete
de sticlă, bec electric, băţ de chibrit.
Mod de lucru:
1. se secţionează oblic câteva ramuri de Elodea canadensis care se introduc într-o pâlnie de
sticlă, cu partea secţionată orientată spre gâtul pâlniei;
2. se introduce pâlnia într-un vas umplut cu apă, aşezând-o pe două baghete de sticlă, astfel
ca nivelul apei din vas să depăşească extremitatea gâtului pâlniei;
3. se aşează pe gâtul pâlniei o eprubetă umplută cu apă, aşa încât să nu rămână în ea aer; în
acest scop se umple eprubeta cu apă până la refuz, se astupă cu degetul mare, se întoarce
cu gura în jos şi, după ce se ia degetul de pe gura eprubetei se aşează pe gâtul pâlniei fără
a o ridica deasupra nivelului apei din vas;
4. se lasă instalaţia astfel pregătită la lumină naturală sau la cea furnizată de un bec electric.
26
După ce eprubeta s-a umplut cu gazul acumulat, ea se ridică de pe gâtul pâlniei fără a o scoate din apă, i se
astupă gura cu degetul mare, se scoate din vasul cu apă, se întoarce cu gura în sus şi se introduce repede în
interiorul ei un băţ de chibrit care în urma unei arderi întrerupte are jăratic. Se va constata că băţul de chibrit va
reîncepe să ardă cu flacără vie, fapt ce demonstrează că gazul degajat de plante în cursul desfăşurării
fotosintezei este oxigenul, deoarece acesta este singurul gaz capabil să întreţină arderea.
Cu excepţia pigmenţilor ficobilini, care sunt ataşaţi de proteine solubile şi pot fi extraşi prin
introducerea în apă distilată a organismelor în care se găsesc, ceilalţi pigmenţi asimilatori
(clorofilieni şi cei carotenoizi) pot fi extraşi din organismele vegetale cu ajutorul unor
solvenţi organici.
Extragerea acestor pigmenţi se poate face la cald (cu alcool etilic sau metilic) şi la rece
(cu acetonă).
5.2.1.1.Extragerea pigmenţilor asimilatori la cald
Materiale necesare: frunze proaspete, pahar Erlenmeyer, alcool etilic 96% (alcool metilic
96%), bec de gaz, sticlă de ceas.
Mod de lucru:
1. 2-4 g frunze proaspete se mărunţesc şi se introduc într-un pahar Erlenmeyer;
2. se adaugă alcool etilic 96 % (alcool metilic 96%) până se acoperă complet frunzele;
3. se fierbe conţinutul paharului (paharul să fie acoperit cu o sticlă de ceas) la flacără mică
până ce materialul vegetal devine incolor;
4. extractul obţinut se filtrează şi poate fi utilizat la evidenţierea proprietăţilor pigmenţilor
asimilatori.
cealaltă la întuneric. După câteva zile se va putea constata că extractul care a fost ţinut la
lumină se brunifică, iar cel din eprubeta ţinută la întuneric îşi păstrează culoarea galbenă.
Brunificarea se datorează oxidării pigmenţilor asimilatori sub acţiunea luminii.
În frunzele bine aprovizionate cu apă, cu săruri minerale şi cu dioxid de carbon,
decolorarea pigmenţilor la lumină nu are loc, ei fiind protejaţi de pigmenţii carotenoizi şi de
substanţele proteice din cloroplaste.
28
a. se introduc câte 1 ml soluţie de KI în NaOH şi 1 ml soluţie de MnCl2 având grijă ca
vârful pipetei să ajungă până aproape de fundul flaconului.
b. se adaugă dopurile la flacoanele respective; se lasă în repaus pentru ca hidroxidul
manganos format (precipitat de culoare albă) să vină în contact cu oxigenul dizolvat în
apă;
c. se lasă în repaus până se depune precipitatul brun de hidroxid manganic ;
d. după depunerea precipitatului, introducem în fiecare flacon câte 3 ml HCl concentrat
cu ajutorul unei pipete, în aşa fel încât să ajungă deasupra precipitatului, punându-se în
acest timp iodul în libertate;
e. iodul pus în libertate se titrează cu o soluţie de tiosulfat de sodiu 0,01N astfel:
f. se trece conţinutul flaconului în care a fost planta într-un balon Erlenmayer, se spală
flaconul cu apă distilată, pe care o adăugăm tot în balon;
g. se titrează agitând mereu lichidul, până când se ajunge la culoarea galben deschis;
h. se adaugă câteva picături de clei de amidon 0,2%; lichidul se colorează în albastru;
i. se continuă titrarea până la incolor;
j. se notează volumul soluţiei de tiosulfat de sodiu folosit la titrare;
k. se procedează la fel cu flaconul fără plantă.
Calculul rezultatelor
Cantitatea de oxigen dizolvat în apa din cele două flacoane se calculează astfel:
în care:
n x F x 1000 x 0,056
n = volumul soluţiei de tiosulfat folosit la titrare;
F = factorul soluţiei de tiosulfat de sodiu; V-2
V = volumul flaconului;
2 = volumul de apă dezlocuit prin introducerea soluţiilor de MnCl2 şi KI în NaOH;
0,056 = cantitatea de oxigen care corespunde la 1 ml tiosulfat de sodiu 0,01 N în cm3.
Dacă dorim să exprimăm cantitatea de oxigen în mg se înlocuieşte 0,056 cm3 cu 0,08 mg.
Cantitatea de oxigen produsă de plantă în timpul determinării se face prin diferenţa între
cantitatea de oxigen din proba de experienţă şi cea din proba martor.
Pentru a calcula cantitatea de oxigen eliminat de 1g de plantă într-un litru de apă timp
de o oră, se cântăreşte planta, după ce în prealabil s-a îndepărtat apa de
pe ea cu o hârtie de filtru. (A-B) x 60
IF =
în care: mxt
A = cantitatea de oxigen dizolvat în vasul cu material vegetal [g]
B = cantitatea de oxigen dizolvat în vasul cu material martor [g]
60 = coeficient pentru raportarea IF la unitatea de timp (1h)
m = masa de material vegetal [g]
t = timpul de expunere [h]
29
LUCRARE PRACTICĂ NR. 8
Fotosinteza este influenţată de un număr mare de factori ai mediului extern, dintre care unii
au o acţiune permanent sau periodic limitativă. Dintre factorii mediului extern, fotosinteza este
influenţată puternic de lumină care intervine asupra acestui proces fiziologic atât prin intensitatea
ei cât şi prin compoziţia sa spectrală, de concentraţia dioxidului de carbon şi de temperatură.
Distanţa faţă de sursa de lumină Intensitatea fotosintezei (număr bule de gaz / minut)
10 cm
20 cm
40 cm
60 cm
80 cm
Interpretare. În cazul frunzei situată în apropierea sursei de lumină, se înregistrează un maxim al intensităţii
fotosintezei, în timp ce la intensitate luminoasă redusă, rata fotosintezei este scăzută.
30
2. în timpul determinărilor se fixează eprubeta cu ramura la un stativ şi se urmăreşte
temperatura apei din eprubetă, controlând-o periodic cu un termometru până când aceasta a
luat temperatura de lucru. În acest moment se numără bulele de gaz degajate de ramură /
minut;
3. rezultatele se trec într-un tabel (tabelul 5.2) şi se reprezintă grafic.
Atenţie: Dacă pe parcursul determinărilor se constată dereglări în degajarea de bule de către ramură, întreaga serie de
determinări trebuie reluată cu o ramură nouă. Continuarea determinărilor cu o altă ramură nu este permisă deoarece se
obţin rezultate eronate.
1. Enumeraţi factorii externi care influenţează fotosinteza, studiaţi în cadrul lucrărilor practice şi indicaţi pentru fiecare
factor studiat efectele constatate.
2. Cum influenţează factorii studiaţi intensitatea fotosintezei?
3. Indicaţi materialul vegetal utilizat pentru studiul influenţei factorilor externi asupra intensităţii fotosintezei? Motivaţi
răspunsul!
4.Cum a-ţi apreciaţi intensitatea fotosintezei în cazurile studiate.
31
LUCRARE PRACTICĂ NR. 9
Numite şi zaharuri sau hidraţi de carbon, glucidele sunt substanţe organice foarte răspândite
(80 - 90 % din substanţa uscată a ţesuturilor vegetale), atât libere (pentozele şi hexozele) cât şi
sub formă de combinaţii (glicoproteide, glicolipide, glicozide, etc.).
Rolul lor fundamental este cel energetic, dar pot îndeplini şi alte roluri:
- plastic (celuloza, hemicelulozele, glicoproteinele, substanţele pectice, caloza);
- de rezervă (glucoza, amidonul, inulina, hemicelulozele);
- protector (gumele).
Riboza şi dezoxiriboza sunt constituente esenţiale ale celor două nucleoproteide (ADN şi
ARN) – substanţe care dirijează întregul metabolism. După structura lor chimică, glucidele se pot
grupa în: monoglucide, oligoglucide şi poliglucide.
A. Evidenţierea pentozelor
În frunzele plantelor se găsesc cantităţi mici de pentoze libere; în schimb în proporţie mare se
întâlnesc sub formă de pentozani (poliglucide ce însoţesc celuloza), glicozizi, esteri şi ca unităţi
structurale ale acizilor nucleici, cât şi ale unor enzime şi vitamine. Cele mai importante sunt
următoarele: arabinoza, xiloza, riboza, ribuloza, dezoxiriboza.
Principiul metodei. Sub acţiunea acizilor minerali concentraţi şi a căldurii, pentozanii trec în
pentoze care pierd 3 molecule de apă şi trec în furfurol. Acesta, fiind volatil, dă cu fenolii coloraţii
caracteristice, datorită formării unor complecşi coloraţi.
Materiale necesare: rumeguş de Fagus sp. (fag), HCl 25 %, acetat de anilină (anilină şi
acid acetic glacial 1:1), fluoroglucină, eprubete, pipete, bec de gaz, hârtie de filtru.
Mod de lucru:
A. Se ia într-o eprubetă puţin rumeguş de fag peste care se adaugă HCl 25 % (2 volume
HCl : 1 volum rumeguş). Se introduce în gura eprubetei o fâşie de hârtie de filtru îmbibată în acetat
de anilină şi se fierbe la flacără. Hârtia de filtru se colorează în roşu-vişiniu.
Durata experienţei. 10 minute.
Interpretare. Pe parcursul reacţiei se degajă vapori de furfurol care se fixează pe hârtia de filtru
colorând-o în roşu- vişiniu.
B. Peste rumeguş de lemn se adaugă HCl 25% (2 volume HCl : 1 volum rumeguş), se
încălzeşte, obţinându-se un extract de pentoze. Peste câţiva ml de extract se adaugă un vârf
32
spatulă de floroglucină şi se fierbe la flacără. Apare în curând o coloraţie roz ce trece în galben-
roz, apoi în roşu aprins şi se stabilizează la o culoare maroniu închis.
Durata experienţei: 10 minute.
Interpretare. Apariţia culorii maroniu închis dovedeşte reacţia caracteristică dintre pentoze şi
floroglucină. Hexozele dau cu floroglucina o coloraţie caramel, fără etape intermediare.
B. Evidenţierea hexozelor
Hexozele se găsesc în plante atât libere, cât şi sub formă de oligoglucide, poliglucide,
glicozizi, esteri şi alţi derivaţi. În natură se întâlnesc în primul rând aldohexoze (glucoza,
galactoza, manoza) şi cetohexoze (fructoza). Mai răspândite şi mai importante sunt glucoza şi
fructoza. Monoglucidele fiind oxidabile, posedă proprietăţi reducătoare.
Modul de extragere: Glucoza şi fructoza pot fi puse în evidenţă în: diferite fructe de: Malus
sp. (măr), Pirus sp. (păr), Vitis sp. (viţă de vie), Prunus sp. (prun), Citrus aurantium (portocal), etc.;
în bulbi de Allium cepa (ceapă), Allium sativum (usturoi), etc.; în rădăcini tuberizate de Dahlia sp.,
Daucus carota (morcov), etc.; în seminţe de graminee germinate (în vârstă de 5-6 zile),etc.
Materialul vegetal, bine mărunţit, se fierbe câteva minute cu apă (circa 100 ml de apă la 20g de
material vegetal). Extractul se decantează / se filtrează şi se foloseşte la identificarea hexozelor.
♦ Reacţii comune aldozelor şi cetozelor
a) REACŢIA FEHLING
Principiul metodei: grupările carbonilice (aldehidică, respectiv cetonică) reduc Cu2+ din
complexul cupric al reactivului Fehling la Cu (din oxidul cupros), în timp ce ele se oxidează la
acizi gluconici. !!! Reacţia Fehling este pozitivă pentru toate glucidele reducătoare.
Oxidul cupros format se prezintă sub forma unui precipitat roşu – cărămiziu
Materiale necesare: extract vegetal şi / sau soluţie pură, bulb de Allium cepa (ceapă),
reactiv Fehling, eprubete, pipete, stative pentru eprubete, bec de gaz.
Mod de lucru: 1. Se iau într-o eprubetă câţiva ml (5 ml) din soluţia de analizat şi se
adaugă 1-2 ml de reactiv Fehling. Se fierbe la flacără, agitând continuu. În funcţie de proporţia
monoglucidelor existente în soluţia analizată, se formează un precipitat de oxid cupros (roşu
trecând prin galben) ce se depune pe fundul eprubetei.
2. Reacţia Fehling se poate obţine şi pe preparate histochimice, fiind utilizată pentru
identificarea glucidelor reducătoare la acest nivel.
Durata experienţei: 10 minute.
b) REACŢIA MOLISCH
Principiul metodei: sub acţiunea acidului sulfuric concentrat, hexozele trec în
hidroximetilfurfurol, care dă cu fenolii (timol şi alfa – naftol) compuşi coloraţi.
Materiale necesare: extract vegetal şi / sau soluţie pură, H2SO4 concentrat, soluţie
alcoolică de alfa – naftol 10 %, timol, eprubete, pipete, stative pentru eprubete.
Mod de lucru: Se iau într-o eprubetă câţiva ml de extract vegetal (soluţie pură), peste
care se adaugă 5-6 picături alfa – naftol 10 % şi se agită. Se înclină eprubeta şi se preling încet
pe pereţi 1–2 ml. H2SO4 concentrat. La limita de separare se formează un inel violet care cu
timpul devine roşu; utilizând timol şi procedând în acelaşi mod se formează un inel roşu –
rubiniu. !!! Reacţia Molish este o reacţie generală pentru glucide.
Durata experienţei: 10 minute.
33
d) REDUCEREA AZOTATULUI DE BISMUT ÎN BISMUT METALIC
Principiul metodei: se bazează pe proprietatea monoglucidelor de a reduce azotatul
de bismut la bismut metalic.
Materiale necesare: extract vegetal şi/sau soluţie pură, azotat de bismut cristalizat,
soluţie NaOH 20 %, spatulă, eprubete, pipete, stative, bec de gaz.
Mod de lucru: Se introduc într-o eprubetă 4-5 ml soluţie de analizat, şi 3-4 picături soluţie
NaOH 20% şi un vârf de spatulă de cristale de azotat de bismut. Se fierbe conţinutul eprubetei
la flacăra unui bec de gaz.
Se observă că azotatul de bismut este redus la bismut metalic de culoare neagră ce se
depune pe fundul eprubetei.
Durata experienţei: 10 minute.
e) REACŢIA DE CARAMELIZARE
Principiul metodei: sub acţiunea bazelor slabe şi la temperaturi ridicate, monoglucidele
formează produşi de condensare de tipul răşinilor aldehidice.
Materiale necesare: extract vegetal şi/sau soluţie pură, soluţie NaOH 20% sau KOH 20
%, eprubete, pipete, stative, bec de gaz.
Mod de lucru: Se iau într-o eprubetă câţiva ml soluţie de analizat, peste care se adaugă
1-2 ml soluţie NaOH 20% sau KOH 20 % şi se încălzeşte conţinutul eprubetei la flacăra unui
bec de gaz.
Se observă că, în funcţie de concentraţia glucidelor din soluţia analizată se dezvoltă o
culoare brună, brună-gălbuie sau galbenă.
Prin acidularea soluţiei se degajă un puternic miros caracteristic de caramel.
Durata experienţei: 10 minute.
f) REACŢIA BARFOED
Principiul metodei: în mediu aproape neutru (pH = 5 – 7) şi sub acţiunea căldurii,
monoglucidele reduc ionul Cu2+ din reactivul Barfoed la Cu+, ce se depune sub forma Cu2O (oxid
cupros) precipitat roşu- cărămiziu.
Materiale necesare: extract vegetal şi/sau soluţie pură, reactiv Barfoed, eprubete, pipete,
stative, bec de gaz.
Mod de lucru: Se iau într-o eprubetă 4 -5 ml soluţie de analizat, la care se adaugă aceiaşi
cantitate de reactiv Barfoed. Se fierbe conţinutul eprubetei la flacăra unui bec de gaz şi se
observă apariţia unui precipitat roşu- cărămiziu de oxid cupros (Cu2 O) ce se depune pe
fundul eprubetei. Reacţia Barfoed este specifică pentru monoglucide;
Durata experienţei: 10 minute.
Interpretare: reactivul Barfoed nu intră în reacţie cu diglucidele reducătoare care conţin o
legătură glicozidică de tip 1-4 alfa (ca maltoza,) dar este redus energic de către monoglucide şi
de către diglucidele ce conţin o legătură glicozidică 1-6 alfa ( ca melibioza).
34
LUCRARE PRACTICĂ NR . 10
Celuloza este cea mai răspândită poliglucidă şi totodată substanţa organică care apare în
cantitatea cea mai mare în natură. Celuloza este un poliglucid compus din molecule de beta -
glucoză, mai precis din unităţi de celobioză. Component principal al pereţilor celulari, celuloza se
găseşte în amestec cu alte substanţe precum lignine, hemiceluloze, pectine, răşini, lipide, săruri,
etc. Vata, hârtia de filtru şi pânza purificată pot fi considerate ca celuloză pură.
Principiul metodei: celuloza fixează printr-un proces de adsorbţie polară coloranţii acizi;
cu iodul are loc un proces de adsorbţie fizică. Acizii tari determină gonflarea fibrelor de celuloză,
proces urmat de hidroliza acestora.
Materiale necesare: vata obişnuită (perii seminţelor de Gossypium sp. (bumbac), soluţie
diluată de roşu de Congo, soluţie Lugol, soluţie de H2SO4 75%, reactiv Fehling, reactiv Barfoed,
H2SO4 conc., soluţie alcoolică de alfa naftol, soluţie de HCl 25%, soluţie de rezorcină 10% , soluţie
NaOH 20%, pahare Erlenmeyer, eprubete, hârtie indicatoare de pH, bec de gaz, microscop.
Mod de lucru:
A. Pe o sticlă de ceas cu soluţie foarte diluată de roşu de Congo se plasează puţină vată.
După 5-10 minute de umectare firele de vată se colorează în roşu, culoare ce se menţine şi după
spălare cu apă datorită procesului de adsorbţie polară.
B. Într-o sticlă de ceas cu soluţie Lugol se introduce puţină vată. După câteva minute de
umectare se obţine o coloraţie brună care dispare repede în urma unei spălări cu apă.
C. Câteva fire de vată colorată în brun cu soluţie Lugol se aşează pe o lamă de sticlă şi se
adaugă o picătură de soluţie de H2SO4 75% pe o parte a lor. Se observă la microscop umflarea şi
colorarea în albastru a fibrelor de celuloză ca urmare a degradării celulozei în amiloid (prima
etapă a descompunerii) (figura 6.1).
Durata experienţei : 10 minute.
B. Evidenţierea ligninei
Fig.nr. 6.1. Umflarea fibrelor de
celuloză. a-fire de vată tratate cu Lignina este răspândită, îndeosebi,
Lugol; b- fire tratate cu Lugol şi acid
sulfuric (după Boldor şi colab., 1983). în pereţii îngroşaţi ai vaselor şi ai
parenchimurilor lemnoase, precum şi în
fibrele lemnoase, în sclerenchimuri şi
uneori, în pereţii celulelor ţesuturilor protectoare.
Compoziţia ei chimică diferă după specie şi este însoţită întotdeauna de poliglucide.
Principiul metodei: Lignina se colorează caracteristic cu numeroşi reactivi organici şi
anorganici.
Materiale necesare: lemn secundar (aşchie) din tulpina de Abies sp. (brad), hârtie de
calitate inferioară, soluţie alcoolică 1% de floroglucină, soluţie clorhidrat de anilină (1cm3 anilină
+1cm3 HCl conc.+ 8 cm3 apă distilată), soluţie alcoolică 5% de resorcină, HCl conc., soluţie 25 %
H2SO4, pipete.
A. Reacţia cu floroglucina ( R. Weisner – Hohnel)
Se picură câteva picături de floroglucină pe o aşchie de brad sau pe o bucată de hârtie de
calitate inferioară, peste care se adaugă imediat 1-2 picături de HCl conc. sau H2SO4. Apare
imediat o coloraţie roşu- violet ( roşu-vişiniu).
B. Reacţia cu clorhidratul de anilină ( R. Runge)
Pe o aşchie de brad (hârtie de calitate inferioară) se lasă să cadă o picătură de soluţie de
clorhidrat de anilină. După câteva secunde apare o coloraţie galbenă- aurie. Hârtia de scris de
bună calitate (lipsită de lemn secundar) sau hârtia de filtru nu dau această reacţie.
Durata experienţelor: 30 minute.
35
C. Evidenţierea amidonului
♦ Hidroliza amidonului
Principiul metodei: sub acţiunea acizilor minerali diluaţi şi a enzimelor specifice, molecula
mare a amidonului se scindează în fragmente din ce în ce mai mici – dextrine - care dau coloraţii
diferite cu apa iodată (reactivul Lugol).
36
Tabelul nr. 4.1. Coloraţii corespunzătoare Când coloraţia nu mai variază, deci când s-a
diferitelor faze de hidroliză acidă a amidonului terminat hidroliza, se efectuează reacţia Fehling;
când reacţia devine pozitive, aceasta indică faptul
Albastru amidon că fostul clei de amidon este hidrolizat într-o soluţie de
Violet amiloid glucoză.
Violet-roşu amilodextrină
Durata experienţei: o oră.
Roşu eritrodextrină
Culoarea iodului acrodextrină
Culoarea iodului maltodextrină ● Hidroliza enzimatică a amidonului
Culoarea iodului maltoză Este realizată de complexul enzimatic – amilaza
Culoarea iodului alfa- D- glucoză (diastaza) - care catalizează hidroliza legăturilor alfa 1,4
glicozidice din poliglucide.
Amilaza are mare răspândire în regnul vegetal, găsindu-se în special în seminţele germinate
ale cerealelor, în tuberculii de cartof, în drojdii, în ciuperci, bacterii. Complexul este format din două
tipuri de amilaze: alfa- amilaza şi beta amilaza.
Sub acţiunea complexului amilază asupra amidonului rezultă maltoză şi puţină glucoză.
Principiul metodei: prin activitatea amilazei din endospermul seminţelor de cereale, începe
corodarea granulelor de amidon, care prin adâncire treptată fragmentează granula în dextrine.
Materiale necesare: seminţe germinate de Triticum aestivum (grâu), ac spatulat, lamă de
sticlă, lamelă, microscop.
Mod de lucru: Cu un ac spatulat se scoate o cantitate mică de endosperm din sămânţa de
grâu germinată, cât mai aproape de embrion şi se face un preparat microscopic pe lama de sticlă,
într-o picătură de apă.
Se constată că o parte din granulele de amidon prezintă coroziuni la exterior, de forme
diferite ( X, Y, T, I).
Durata experienţei: 10 minute
Interpretare: Corodările externe care apar pe granula de amidon sunt rezultatul activităţii hidrolitice a
amilazei. Prin adâncirea treptată a acestor coroziuni are loc ruperea granulei de amidon în dextrine, procesul de
degradare continuând până la nivelul moleculelor de diglucide (maltoză) şi monoglucide (glucoză).
D. Evidenţierea inulinei
37
cursul fotosintezei. Inulina nu este un fructozan pur, ea conţinând cca. 3 % glucoză; este uşor
solubilă în apă fierbinte şi precipită la rece.
Mod de lucru
A. Se mărunţesc rădăcini tuberizate de Dahlia sau de Taraxacum, care se fierb în apă 10
minute; se decantează, obţinându-se o soluţie de inulină. Cu această soluţie se efectuează
următoarele reacţii:
a) Fehling şi Barfoed care fiind negative, arată că inulina este un zahăr complex,
nereducător;
b) Se iau într-o eprubetă 3 cm3 din soluţia de inulină peste care se adaugă 1cm3 de alcool
etilic 96 % ; poliglucidul precipită încet sub formă de fulgi albi;
c) Molish este pozitivă.
Durata experienţei: 20 minute.
Aceste două glucide sunt înrudite structural fiind alcătuite din câteva monoglucide (hexoze,
pentoze, după natura gumei) între care se mai pot găsi unul sau doi acizi uronici.
Mucilagiile sunt hetero - şi homoglucide neutre cu structură mai simplă decât gumele.
Gumele sunt secreţii vâscoase, care apar, sub forma unei mase sticloase prin vătămarea
suberului de la multe plante lemnoase. Mucilagiile sunt produse ale metabolismului normal, servind
ca substanţe de rezervă şi ca substrat ce reţine apa, mai ales în ţesuturile plantelor suculente.
Gumele şi mucilagiile se îmbibă puternic cu apa, dând soluţii vâscoase.
♦ Evidenţierea gumelor
A. Se face de obicei, prin proba furfurolului care pune în evidenţă prezenţa pentozelor:
peste puţin clei de copac, luat într-o eprubetă, se adaugă HCl 18 % şi se fierbe;- se introduce în
gura eprubetei o fâşie de hârtie de filtru îmbibată în acetat de anilină care se colorează în roşu.
B. pentru evidenţierea hexozelor din gume: se introduce puţin clei de copac într-o eprubetă,
se adaugă câţiva cm3 H2O şi 1 cm3 HCl concentrat. Se fierbe amestecul, se decantează, iar cu
soluţia obţinută se execută reacţiile Fehling, Barfoed (după neutralizare prealabilă) şi Selivanov.
Primele două reacţii sunt pozitive, iar a treia este negativă.
Durata experienţei: 30 minute.
♦ Evidenţierea mucilagiilor
Mucilagiile se colorează prin adsorbţie polară cu coloranţi bazici (electropozitivi).
Se iau în două eprubete seminţe de Linum sp. (in), a căror testă este bogată în mucilagii, şi
în una, se adaugă soluţie de roşu de Congo, iar în cealaltă soluţie de albastru de metilen. După
aproximativ o oră, seminţele se spală, dar colorantul rămâne în stare de adsorbţie.
1. Enumeraţi poliglucidele studiate în cadrul lucrării de laborator şi exemplificaţi fiecare caz cu denumiri de specii a
căror organe prezintă astfel de substanţe.
2. Enumeraţi produşii obţinuţi prin hidroliza acidă a poliglucidelor studiate.
3. Asociaţi corect următorii termeni:
Celuloză Reacţia cu clorhidratul de anilină
Amidon Reacţia Molish
Inulina Reacţia cu floroglucina
Lignina Reacţia cu soluţia Lugol
4. Indicaţi părţile componente ale granulei de amidon şi precizaţi caracteristicile acestora.
5.Ce este amilaza? Unde este răspândită ? Ce rol fiziologic îndeplineşte?
6. Indicaţi două caracteristici prin care gumele şi mucilagiile se aseamănă / se deosebesc.
38
LUCRARE PRACTICĂ NR. 11
39
REACŢIA XANTOPROTEICĂ
Principiul metodei. Această reacţie este caracteristică pentru aminoacizii aromatici
(fenilalanina, tirozina). Aceştia se găsesc în aproape toate proteinele. Sub acţiunea HNO3 conc.
se formează nitroderivaţii nucleelor aromatice din aminoacizii respectivi care sunt de culoare
galbenă ( xantos = galben).
Mod de lucru: Se iau într-o eprubetă câţiva ml soluţie proteică, peste care se adaugă câteva
picături de HNO3 conc. Se încălzeşte uşor. Apare o coloraţie galbenă; adăugând după răcire
NaOH 20 % ( KOH 20 %) coloraţia trece în portocaliu.
Reacţia se poate face şi cu cotiledoane de mazăre, fasole, lupin îmbibate şi mărunţite.
Acestea devin galbene prin fierbere în HNO3 concentrat.
Durata experienţei: 15 minute.
REACŢIA SULFULUI
Principiul metodei. este pozitivă în cazul aminoacizilor cu sulf (cisteina, cistina,
metionina), care în mediu alcalin şi la căldură, eliberează sulful sub formă de H2S; acesta cu o
sare de plumb, formează un precipitat negru de sulfură de plumb.
Mod de lucru:Într-o eprubetă se iau câţiva ml de soluţie proteică, peste care se adaugă
câteva picături de acetat de plumb 0,5 % şi câteva picături de NaOH 20 %. Se fierbe la flacără.
Apare un precipitat negru de PbS.
Reacţia este pozitivă şi în cazul în care soluţia proteică este înlocuită cu seminţe de fasole
îmbibate şi mărunţite. În acest caz se procedează astfel: într-o eprubetă peste 1 ml acetat de
plumb 0,5%, se adaugă picătură cu picătură NaOH 20 % până când precipitatul alb de hidroxid
de plumb format se redizolvă în excesul de bază. Se adaugă seminţe de fasole îmbibate şi
mărunţite. Conţinutul eprubetei se fierbe. Apare un precipitat negru de sulfură de plumb.(PbS).
Durata experienţei: 20 minute.
REACŢIA MOLISH
Evidenţiază glicoproteinele.
Mod de lucru:Într-o eprubetă se iau câţiva ml soluţie proteică peste care se adaugă 5-6
picături de alfa –naftol. Se agită conţinutul eprubetei. Se înclină eprubeta şi se prelinge încet pe
pereţi 1-2 ml H2SO4 concentrat. La limita de separare se formează un inel de culoare violet.
Durata experienţei: 10 minute.
Proteinele simple sunt formate numai din aminoacizi şi funcţie de solubilitatea lor în diferiţi
solvenţi se împart în : albumine; globuline; gluteline; prolamine.
40
- în a doua se picură alcool în exces, constatându-se că gliadina precipită;
- în a treia se adaugă apă, când gliadina de asemenea precipită.
Ceea ce rămâne în eprubetă după decantarea soluţiei alcoolice de gliadină, reprezintă glutenina.
Se introduce peste ea soluţie de NaOH 2 %, se agită bine şi se lasă să se limpezească. Soluţia
obţinută se împarte în două:
- cu o parte se execută reacţia biuretului care este pozitivă;
- peste cealaltă parte se adaugă acid acetic 1%, picătură cu picătură, până la punctul
izoelectric, când glutenina precipită.
Durata experienţei: 60 minute.
41
6.1.4. Evidenţierea vitaminelor
Vitamina C sau acidul L (+) ascorbic este cea mai răspândită vitamină din natură.
Se găseşte în toate plantele, iar în cantitate mai mare se află în fructele citricelor (lămâi,
portocale), cătină albă, măceşe, coarne, mere, frunze, legume proaspete, etc. Se găseşte atât în
stare liberă cât şi asociată cu proteinele, formând un complex proteină - acid ascorbic, numit
ascorbinogen.
Este o substanţă cristalină albă, solubilă în apă şi are un gust acrişor. În stare solidă este
destul de stabilă, în soluţii apoase în schimb este foarte sensibilă la oxidare şi încălzire.
Principiul metodei: Evidenţierea şi dozarea vitaminei C se bazează pe proprietatea ei
reducătoare.
Materiale necesare: frunze de conifere (frunze de pătrunjel, lobodă, urzici, fructe de măceş,
de ardei, etc), soluţie de HCl 2%, soluţie de acid tricloracetic 2-5%, soluţie saturată de fericianură
de potasiu proaspăt preparată (33/100ml), soluţie de clorură ferică 5%, nisip de cuarţ, mojar,
eprubete, pipete, hârtie de filtru, răzătoare de sticlă, cuţit inoxidabil
Mod de lucru: Pentru extragerea vitaminei C din plante se folosesc acizi diluaţi deoarece
stabilitatea vitaminei C în soluţiile acide este relativ mare.
Materialul de examinat mărunţit (mărunţirea materialului se face utilizând o răzătoare de
sticlă sau un cuţit inoxidabil) se mojarează cu o soluţie de HCl 2% şi nisip de cuarţ. Se filtrează
printr-un filtru cutat sau prin vată. Se introduc într-o eprubetă 4-5 ml de filtrat la care se adaugă o
picătură soluţie saturată de fericianură de potasiu proaspăt preparată şi o picătură de soluţie de
clorură ferică 5%. Se constată apariţia unei coloraţii albastre sau verzuie.
42
LUCRARE PRACTICĂ NR. 12
Alcaloizii sunt substanţe organice azotate, în general cu structuri ciclice, unde azotul
este încorporat, adesea, într-un nucleu heterociclic; alcaloizii cu proprietăţi bazice foarte
pronunţate de unde şi numele; sunt precipitaţi de reactivi caracteristici (taninuri, apă iodată, clorură
mercurică, etc,). Alcaloizii nu sunt sintetizaţi în organismul animal şi nici de către alge sau muşchi;
ei se găsesc rar în ciuperci, ferigi şi gimnosperme. În cantităţi mari se găsesc în plantele
superioare; cum ar fi familiile alcaloidifere (Solanaceae, Papaveraceae, Rubiaceae, etc.). Rareori
o specie conţine un singur alcaloid; de obicei se întâlnesc mai mulţi cu o structură asemănătoare.
În mod obişnuit ei sunt dizolvaţi în vacuole, unde datorită proprietăţilor lor bazice, formează
săruri cu diverşi acizi, dar pot fi prezente în toate organele plantei. Deşi alcaloizii apar înainte de
toate ca deşeuri li se pot atribui şi următoarele roluri: stimularea fotosintezei;acţiune
hormonală;funcţie protectoare contra agenţilor patogeni şi organismelor fitofage.
6.2.1.1.Evidenţierea nicotinei
Nicotina face parte din clasa alcalozilor pirolidinici şi este biosintetizată în rădăcini şi
transportată, mai ales prin xilem, în frunze, unde se acumulează sub formă de săruri cu acizii citric,
malic, reprezentând până la 2 % din greutatea uscată la Nicotiana tabacum şi circa 8% la
Nicotiana rustica. Este un lichid uleios, incolor, cu miros pătrunzător şi foarte toxic; oxidat capătă
culoare brună.
Materiale necesare: frunză de tutun, (tutun dintr-o ţigară), reactiv Wagner, pahar
Erlenmeyer, pâlnie, fârtie de filtru, pipete, apă distilată, bec de gaz.
Modul de lucru: tutunul dintr-o ţigară se încălzeşte cu 10-15 cm apă distilată; se filtrează.
Peste câţiva ml de filtrat se adaugă 1-2 ml reactiv Wagner (iod în iodură de potasiu) şi se
omogenizează conţinutul vasului. Se formează un precipitat brun- roşcat, care se dizolvă prin
încălzire.
6.2.1.2 Evidenţierea solaninei
Solanina face parte din grupa alcalozilor sterolici şi se găseşte în plantele tinere de
Solanum tuberosum (cartof), în lăstari şi în tuberculii încolţiţi (mai ales în vârfurile lăstarilor şi în
jurul ochiurilor). Molecula prezintă scheletul colesterolului, astfel că solanina este înrudită cu
steriodele.
Materiale necesare: tuberculi de cartof „încolţiţi”, acid sulfuric concentrat, pipete.
Modul de lucru: Pe o felie de cartof se aşează câteva picături de acid sulfuric concentrat.
Apare o coloraţie roşie, mai ales la periferie (aproape de suber). După câteva minute culoarea
devine violetă.
La hidroliză, heterozidele cianogenetice eliberează acid cianhidric (de unde şi numele). Cel
mai răspândit este amigdalozidul, care se găseşte în sâmburii prunoaselor, din care se extrage cu
eter. Prin hidroliză cu acizi diluaţi se formează două molecule de D- glucoză, una de benzaldehidă
şi una de acid cianhidric.
Aceeaşi produşi de hidroliză se obţin şi cu beta - glucozidază (din complexul proteic
enzimatic numit emulsină, care însoţeşte întotdeauna amigdalozidul din sâmburii de prunoase). La
o acţiune blândă, beta glucozidaza scindează numai un rest de glucoză şi formează heterozida –
prunasina (identificată în coaja cireşului sălbatic).
Materiale necesare: sâmburi de prunoase, mojar, hârtie periodată, Na2 CO3 10%,
eprubete, dop de cauciuc, stativ pentru eprubete.
Modul de lucru: Se sparg într-un mojar sâmburi de prunoase. Se adaugă câteva picături
de apă peste seminţele mărunţite; se amestecă bine, se modelează amestecul sub formă rotundă
şi se introduce într-o eprubetă.
Se introduce apoi în eprubetă o hârtie de filtru periiodată (hârtia se îmbibă cu acid picric
1%, se usucă şi se păstrează într-un plic; la întrebuinţare se tamponează cu vată îmbibată într-o
soluţie de Na2 CO3 10 % şi se introduce umedă în eprubetă).
Se acoperă cu un dop şi se lasă în repaus; emulsina vine în contact cu glucozidul şi
anionul cian (CN- ) eliberat fiind volatil, ajunge la hârtie şi modifică culoarea acidului picric, din
galben în cărămiziu.
Sunt heterozidele cele mai importante prin frecvenţa şi abundenţa lor în plante. Numeroase
plante îşi datoresc culoarea frunzelor (varietăţi de Fagus sp. (fag), Coryllus sp. (alun) etc. cu
frunze roşu-închis), a fructelor (bacele de Ligustrum vulgare (lemn câinesc), a rădăcinilor (Beta sp.
(sfecla roşie) şi mai ales a florilor, acestor heterozide, care sunt localizate în vacuolele celulelor
epidermice sau a parenchimurilor; de aceea heterozidele se mai numesc pigmenţi flavonici şi
pigmenţi antocianici. Coloraţiile lor nu trebuie confundate cu cele datorate pigmenţilor
carotenoizi, insolubili în vacuole şi localizaţi, cel mai adesea în cromoplaste.
44
săruri cu flavonozidele din sucurile celulare. Trecând aceste petale într-o atmosferă cu acid ele se
decolorează.
Materiale necesare: flori albe, petale galbene, rădăcini şi frunze de Taraxacum officinalis,
mere galbene, frunze verzi de Viola odorata, mojar, acetonă, acid tricloracetic 8 %, eprubete, bec
de gaz, pâlnie, fârtie de filtru, pipete, NaOH conc., HCl, FeCl3, FeSO4 1-5%, acetat de plumb 10%,
reactiv Fehling, stativ pentru eprubete.
Modul de lucru: din materialul vegetal se prepară un extract la cald (prin fierbere în apă,
sau acid tricloracetic, timp de 5 -10 minute). Extractul se filtrează iar filtratul obţinut este utilizat
pentru efectuarea unor reacţii chimice de evidenţiere a pigmenţilor flavonici.
a) peste 3 - 4 ml extract se adaugă câteva picături de NaOH conc.; apare o coloraţie
galbenă, sau galben - portocalie; neutralizând cu HCl soluţia se decolorează.
b) peste 3 - 4 ml extract se adaugă câteva picături de FeCl3 sau FeSO4 1-5 % ; apare o
coloraţie verde, verde - oliv, arătând caracterul fenolic al flavonilor;
c) peste 3 - 4 ml extract se adaugă câteva picături de acetat de plumb 10% ; se obţine un
precipitat floconos galben sau galben - portocaliu. Această reacţie este foarte
caracteristică pentru pigmenţii flavonici;
d) prin fierbere cu acid clorhidric 5 % se eliberează glucidul, încât reacţia Fehling devine
pozitivă după neutralizarea soluţiei.
Pigmenţii antocianici sunt pigmenţi albaştri, roşii, violeţi, abundenţi mai ales în flori.
Agliconul este antocianidina, care are o structură foarte apropiată de flavonoli, din care
derivă prin reducere. Există foarte numeroase antocianidine, cele mai răspândite fiind
pelargonidinele din Pelargonium sp., cianidinele din corolele de Centaurea cyanus şi
delfinidinele din corolele de Delphinium sp. Antocianidinele variază în privinţa culorii, funcţie de
pH-ul sucului vacuolar: albastru la pH alcalin, roşu la pH acid şi violet la pH neutru.
Schimbarea culorii după pH-ul mediului:
Materiale necesare: rădăcină de Beta sp. (sfeclă roşie), Brassica sp. (varză roşie), flori cu
petale roşii, flori cu petale albastre, acid acetic diluat, NH4OH diluat, acetat de plumb 10%,
FeCl310%, eprubete, pipete, plăci Petri, bec de gaz.
Modul de lucru:
1. într-o atmosferă cu vapori de HCl se introduc câteva petale roşii şi albastre; cele roşii
rămân roşii iar cele albastre devin roşii;
2. într-o atmosferă cu vapori de amoniac petalele roşii devin albastre, cele albastre devin
verzi şi cu timpul se îngălbenesc, datorită pigmenţilor flavonici supranumerari;
3. se prepară un extract din sfeclă roşie şi unul din varză roşie, prin fierbere în apă: cel din
sfeclă este roşu, cel din varză este albastru - violet;
4. se iau în două eprubete câţiva ml din extractele apoase; se adaugă câteva picături de
acetat de plumb 10 %; se obţin precipitate colorate în albastru, verde, roşu sau violet;
5. se iau într-o eprubetă câţiva ml de extract apos; se adaugă 1-2 picături de FeCl310 %; se
obţine o coloraţie închisă ca şi în cazul taninurilor, fapt ce arată o înrudire cu acestea prin
caracterul fenolic.
45
baghete. Peste 5-10 minute, suprafaţa pensulată se colorează în roşu - violet, culoare
caracteristică salicinei.
B. Evidenţierea coniferinei
Descoperită la conifere şi apoi la sparanghel, coniferina a fost identificată ulterior şi la alte
specii. Este glicozida alcoolului coniferilic, fiind prezentă în toate ţesuturile lignificate; prezenţa ei
indică indirect prezenţa ligninei.
Modul de lucru: Pe o aşchie de brad se adaugă 1- 2 picături de reactiv Hohnel (fenol +
KClO3) şi 1 – 2 picături de HCl conc.; apare o coloraţie verde - albăstruie
C. Evidenţierea siringinei
Siringina se găseşte în suberul ramurilor de liliac, în tulpina de iasomie, având ca grupare
agliconică alcoolul siringenina. Suprafaţa internă a suberului de la o ramură de liliac se tratează cu
1-2 picături de H2SO4 70%; apare o coloraţie verde.
Taninurile sunt substanţe fenolice de natură variată, cu foarte numeroşi hidroxili, ceea ce
le conferă proprietăţi reducătoare remarcabile.
Nu conţin azot în molecula lor. Sunt formate din glucoză şi acid galic.
Cu sărurile de fier dau precipitate închise la culoare (negre, brune, albastru închis), iar cu
proteinele dau combinaţii complexe insolubile, imputrescibile şi foarte rezistente.
Taninurile se întâlnesc în majoritatea plantelor (frunze, scoarţă, fruct) în cantităţi variabile.
Se extrag din ritidoma de stejar.
În celule se găsesc în stare coloidală (în sucul vacuolar) sau sub formă de granule (în
citoplasmă); adesea reprezintă agliconul unor heterozide sau se combină cu mucilagiile, gumele
sau celuloza. Uneori sunt localizate în celule speciale (idioblaste, tanifere), prezente în
parenchimuri, cum este cazul la Rosa canina (măceş).
Materiale necesare: ritidom de stejar, nuc, castane sălbatice, FeCl3 10%, acetat de plumb
10 %, K2Cr2O7 - soluţie diluată, eprubete, pipete, stativ pentru eprubete.
Modul de lucru: Se prepară un extract apos (prin fierbere timp de 10 minute) folosind unul
din materialele biologice mai sus enumerate. Cu extractul obţinut se efectuează reacţii de culoare
(vezi tabelul 5.1).
Tabelul nr.5.1 Reacţii de evidenţiere a taninurilor
Nr. Volumul de extract Volumul de reactiv Coloraţia obţinută
eprubetă
1. Câţiva ml (3-4 ml) Câteva picături FeCl3 10 % Verde - brun,
2. Câţiva ml (3-4 ml) Câteva picături acetat de plumb 10 % Precipitat alb
3. Câţiva ml (3-4 ml) Câteva picături K2Cr2O7 - soluţie diluată Precipitat brun
7. Respiraţia plantelor
Respiraţia este procesul fiziologic de degradare oxidativă a substanţelor organice
sintetizate în fotosinteză, în care se eliberează energia necesară desfăşurării proceselor vitale.
Respiraţia se realizează în fiecare celulă la nivelul hialoplasmei şi a condriozomilor, iar la
exterior se manifestă sub forma unui schimb de gaze: absorbţie de oxigen molecular din aer şi
eliminare de dioxid de carbon :
7.1.1.METODA MOLLIARD
Principiul metodei constă în crearea unui deficit de presiune într-un recipient închis, ca
urmare a schimbului de gaze implicate în procesul respirator, în care oxigenul este absorbit de
seminţele în curs de germinaţie iar dioxidul de carbon degajat este captat de un hidroxid.
46
Materiale necesare: tub din sticlă alungit şi lărgit la un capăt ( tip „osmometru “ Dutrochet),
stativ, vas cu mercur, capsulă sau fiolă de sticlă, dop de cauciuc prevăzut cu orificiu, tub de
cauciuc cu clemă, seminţe germinate, soluţie de KOH 30%.
Modul de lucru. Se introduc într-un osmometru Dutrochet seminţe germinate, se acoperă
cu un dop străbătut de un tub de cauciuc prevăzut cu o clemă.
Se fixează osmometrul pe un stativ , astfel ca tubul lui să fie scufundat într-un vas cu
mercur. După fixare se deschide clema de la capătul tubului de cauciuc, se atârnă de cârligul de
pe partea inferioară a dopului un vas mic în care se află o soluţie de KOH 30 %.
Se acoperă osmometrul cu un dop, lăsând clema deschisă pentru a uniformiza presiunea
din interior cu cea externă.
Se închide apoi clema şi după un interval de timp, dependent de intensitatea respiraţiei
materialului vegetal de analizat, se va constata că mercurul urcă în tubul osmometrului.
Interpretare. Mercurul urcă în tub deoarece dioxidul de carbon degajat de seminţe fiind fixat de către
hidroxid, nu mai compensează sub raportul presiunii oxigenul absorbit în respiraţie, astfel că presiunea internă scade
comparativ cu exteriorul .
AH2 + B → A + BH2
A. Evidenţerea peroxidazei
47
AH2 + H2O2 → 2H2O + O2
B. Evidenţierea catalazei
Catalaza descompune apa oxigenată rezultată în celulele vii sub acţiunea enzimelor
flavinice în apă şi oxigen.
Rolul ei este foarte important, deoarece apa oxigenată este un oxidant puternic, dăunător
structurilor vii, care trebuie transformat rapid în oxigen gazos mai puţin reactiv şi molecule de apă.
C. Evidenţierea catecoloxidazei
48
LUCRARE PRACTICĂ NR. 13
8. Fermentaţiile
Fermentaţiile sunt realizate de anumite grupe de microorganisme şi reprezintă ansambluri
de procese prin care are loc degradarea unor substanţe organice, cu producere de energie care
este necesară pentru desfăşurarea vieţii lor. La plantele superioare procesul de fermentaţie se
produce în condiţii de insuficienţă sau lipsă de oxigen.
8.1.Fermentaţiile la microorganisme
Aceste fermentaţii constau într-o serie de procese biochimice, cu ajutorul cărora unele
microorganisme îşi procură energia de care au nevoie.
49
hârtia de filtru, deoarece eliberează Ag metalic. Această reacţie denumită reacţia Tollens este
caracteristică aldehidelor.
Materiale necesare: rădăcini tuberizate de Beta sp. (sfeclă), Daucus carota (morcov) sau
alte organe bogate în glucide, vas de sticlă, dop de cauciuc cu două orificii străbătut de două
tuburi de sticlă, clemă, soluţie colorată ( albastru de metilen).
Mod de lucru: Se introduc rădăcini de morcov, sfeclă sau alte organe bogate în glucide
(fructe) într-un vas care se închide cu un dop străbătut de două tuburi: un tub manometric în care
se introduce în prealabil puţină soluţie colorată ce serveşte ca lichid manometric şi un tub de sticlă
scurt, prelungit la exterior cu un tub de cauciuc prevăzut cu o clemă, care serveşte la echilibrarea
presiunii interne cu cea externă în momentul închiderii borcanului.
Se închide clema şi, urmărind nivelul lichidului manometric, se va constata în scurt timp că
are loc o rarefiere a atmosferei interne, evidenţiată printr-o ridicare uşoară a lichidului manometric
în ramura dinspre borcan (figura 8.2).
După ce concentraţia oxigenului din atmosfera internă scade sub 5%, ţesuturile încep să
fermenteze şi presiunea din vas creşte puternic, stabilindu-se după un timp la o valoare cu mult
deasupra presiunii atmosferice.Aceasta se datorează faptului că ţesuturile s-au saturat cu CO2 şi elimină
în cursul fermentaţiei cantităţi mari din acest gaz. În cursul procesului, în materialul vegetal, se
acumulează alcool etilic, a cărui prezenţă poate fi sesizată după mirosul său caracteristic.
50
9.1.1 Evidenţierea necesităţii prezenţei în mediu a apei, aerului şi a unei temperaturi
convenabile pentru germinaţia seminţelor
Necesitatea prezenţei în mediu a celor trei factori menţionaţi mai sus poate fi evidenţiată prin
proba celor trei seminţe de Phaseolus vulgaris (fasole), imaginată de către I. Small.
Materiale necesare: seminţe de fasole, pahare Berzelius, suporturi de lemn sau baghete de
sticlă.
Mod de lucru: Pe un suport din lemn sau o baghetă din sticlă, cu lungimea de 20 cm se
fixează trei seminţe de fasole astfel: câte o sămânţă la capetele suportului şi una la mijlocul
acestuia. Se aşează suportul într-un pahar Berzelius, în care se introduce apă fiartă şi răcită (deci
degazată) astfel ca sămânţa din mijloc să fie scufundată pe jumătate în apă.
Experimentul se montează în două variante; una se păstrează, timp de două săptămâni, într-
un loc cald şi luminos, iar cealaltă într-un loc rece (eventual la frigider).
Fig. nr.9.1. Proba celor trei Interpretare. Se va constata că la varianta ţinută la
seminţe de Phaseolus căldură, sămânţa din aer nu germinează, deşi a dispus de aer şi
vulgaris (fasole). 1. suport de o temperatură convenabilă, pentru că i-a lipsit apa.
de lemn; 2. pahar Berzelius Sămânţa din apă, care s - a aflat în condiţii de umiditate şi
cu apă fiartă şi răcită; 3. temperatură suficiente, s-a îmbibat, însă după consumarea
inel de cauciuc (după rezervelor de aer, germinaţia nu are loc datorită lipsei oxigenului.
Boldor şi colab., 1983).
Sămânţa din mijloc, care a avut la dispoziţie toate condiţiile externe necesare germinează şi formează o
plantulă. La varianta ţinută la rece, se constată că nu germinează nici una din seminţe, datorită lipsei unei
temperaturi convenabile pentru desfăşurarea acestui proces (figura 9.1).
Materiale necesare: seminţe Brassica elongata (muştar) sau de Medicago sativa (lucernă),
fructe (măr, pară, roşie, lămâie), plăci Petri, hârtie de filtru.
Mod de lucru: Se pun la germinat în două cutii Petri câte 30 de seminţe în două variante:
- V1 – pe hârtie de filtru umedă;
- V2 - pe o felie de fruct aşezat peste hârtie de filtru.
51
Se acoperă cutiile Petri şi se lasă la cald, menţinându-se pe cât posibil umiditatea constantă
timp de 14 zile, după care se numără şi se calculează procentajul seminţelor germinate în fiecare
variantă. Rezultatele obţinute se consemnează într-un tabel întocmit după modelul prezentat în
tabelul 9.1.
Tabelul nr.9.1 Influenţa substanţelor inhibitoare din fructele cărnoase asupra germinaţiei seminţelor
Condiţii de germinare Numărul seminţelor Numărul seminţelor Procentul seminţelor
puse la germinat germinate germinate
Pe hârtie de filtru umectată cu apă
Pe felii de fruct
Se prepară suc de fructe căruia i se determină pH-ul cu hârtie indicator universal. După
această operaţie se pun la germinat în trei cutii Petri seminţe aparţinând speciilor mai sus
menţionate, în următoarele variante
- V1 – pe hârtie de filtru umectată cu apă de conductă;
- V2 - pe hârtie de filtru umectată cu apă de conductă căreia i s-a adăugat o
cantitatea corespunzătoare de H2SO4 diluat, pentru a corecta pH-ul până la valoarea
celui înregistrat la sucul de fructe;
- V3 – pe hârtie de filtru umectată cu suc de fructe.
Urmărind numărul de seminţe germinate, după 7- 14 zile se va constata inhibarea
germinaţiei seminţelor plasate pe hârtie de filtru îmbibată cu suc de fructe, datorită
prezenţei în el a acizilor organici (malic, tartric, citric).
52
9.3.1Evidenţierea procesului de regenerare
Regenerarea are o importanţă deosebită în practica horticolă – înmulţirea prin butaşi a unor
plante decorative.Butăşirea se bazează pe însuşirea pe care o au diferite organe sau fragmente de
organe ale unor plante de a emite rădăcini şi de a forma o nouă plantă atunci când sunt puse în
contact cu solul.Factorii care determină înrădăcinarea butaşilor sunt: solul, apa, aerul, lumina şi
temperatura.
B) Regenerarea la frunze
Frunzele unor specii decorative de apartament sunt capabile să formeze rădăcini adventive
la baza peţiolului (ex. Begonia rex, Saintpaulia sp., Gloxinia sp., Peperomia sp., Sansevieria
sp.,etc.).Înrădăcinarea butaşilor se realizează în condiţii asemănătoare cu cele prezentate anterior.
Excitabilitatea şi mişcarea, care sunt însuşiri esenţiale ale materiei vii, se manifestă
şi la plante. Mişcările plantelor se împart în mişcări pasive şi mişcări active.
1. Mişcările pasive sunt favorizate de prezenţa unor adaptări care permit plantelor întregi,
sau anumitor organe ale acestora, să fie deplasate de agenţi fizici sau biologici dintr-un loc în altul.
2. Mişcările active sunt efectuate de plante cu propria lor energie. Indiferent de nivelul
structurilor la care se manifestă (în interiorul celulelor sau la organele plantelor), mişcările active
pot fi autonome (sunt efectuate sub influenţa unor factori interni, proprii organismelor) sau induse
(sunt produse de direcţia de acţiune sau de variaţiile de intensitate ale unor factori ai mediului
extern).
53
10.1 Mişcările intracelulare
La nivel celular se manifestă atât mişcări autonome cât şi mişcări induse. Dintre aceste
mişcări, cel mai uşor se pot pune în evidenţă mişcările de cicloză, dineză sau curenţii
citoplasmatici şi mişcările cloroplastelor.
10.2.1. Tropismele
A.Evidenţierea fototropismului
Atunci când plantele sunt iluminate unilateral, organele lor supraterane execută mişcări,
realizate prin variaţii de creştere, orientându-se în mod specific în raport cu direcţia din care vine
lumina.
Fig.nr.10.2.
Materiale necesare: ghivece cu plante de
Reacţia Pelargonium sp. (muşcată).
fototropică la Mod de lucru: Se aşează o plantă tânără de
Pelargonium muşcată, cultivată într-un ghiveci, în dreptul unei ferestre.
sp.: săgeţile După un timp se va putea constata că vârful tulpinii ei se
indică direcţia din
care vine lumina îndreaptă, printr-o mişcare de curbură, spre direcţia din
(după Boldor şi care vine lumina, iar limbul frunzelor se orientează astfel
colab., 1983). încât suprafaţa lor să fie perpendiculară pe direcţia razelor
de lumină (figura 10.2).
B. Evidenţierea geotropismului
Prin geotropism se înţeleg mişcările de curbură ale organelor plantelor, determinate
de acţiunea forţei de gravitaţie.
Materiale necesare: plantule de Vicia faba (bob) sau de Zea mays (porumb), dopuri de
plută, ace cu gămălie, cristalizoare, clopot de sticlă.
54
Mod de lucru: Se fixează pe un dop din plută, cu ajutorul unor ace cu gămălie, două
plantule de bob sau porumb, astfel ca una să fie cu rădăciniţa orientată vertical în jos şi tulpiniţa
vertical în sus, iar cealaltă să fie cu aceste organe în poziţie orizontală. Se aşează dopul într-un
cristalizor cu apă. Se acoperă cu un clopot de sticlă, pentru a asigura plantulelor o atmosferă
umedă şi se lasă plantulele la întuneric. După 1-2 zile se constată că în cazul plantulei care a
fost aşezată cu organele axilare în poziţie orizontală, acestea au început să se curbeze,
printr-o mişcare de creştere, rădăciniţa în jos şi tulpiniţa în sus.
Interpretare. Această mişcare, pozitiv ortogeotropă la rădăciniţă şi negativ ortogeotropă la tulpiniţă, se realizează
sub efectul forţei de gravitaţie: faţa dinspre pământ a rădăciniţei se alungeşte mai puţin decât partea opusă şi, ca
rezultat, vârful ei se îndreaptă în jos; la tulpiniţă are loc o creştere mai intensă a laturii sale dinspre pământ şi, ca
urmare, vârful ei se îndreaptă în sus.
10.2.2. Nastiile
Nastiile sunt mişcări realizate prin variaţii de creştere sau de turgescenţă, provocate de
modificarea intensităţii sau valorii unor factori ai mediului extern, care acţionează însă uniform pe
toate feţele organelor plantelor. La unele plante se produc şi mişcări nastice provocate de şocuri
mecanice. Ele se clasifică în : termonastii, fotonastii, nictinastii, seismonastii.
A. Evidenţierea termonastiilor
Mişcările termonastice se datoresc variaţiilor de temperatură ale mediului înconjurător.
Materiale necesare: flori de Tulipa sp. (lalea), Crocus sp (brânduşă), pahare Erlenmeyer cu
apă rece şi caldă, termometru.
Mod de lucru: Se ia o floare închisă şi se introduce într-un vas cu apă la temperatura de 25-
30 0 C; se va constata că ea se deschide într-un interval de timp de 5-10 minute. Dacă se trece
apoi această floare într-un vas cu apă rece (la temperatura de 5-8 0C) ea se va închide .
Interpretare. Aceste mişcări se datoresc unor variaţii de creştere. Piesele învelişurilor florale cresc mai repede pe faţa
internă în cazul când condiţiile favorizează deschiderea florilor, iar la închidere cresc mai intens pe faţa lor externă.
B. Evidenţierea fotonastiilor
Sunt mişcări nastice provocate de variaţia intensităţii luminii .
Materiale necesare: ghivece cu plante de Bellis perenis şi Taraxacum officinale.
Mod de lucru: Dacă se cultivă aceste plante în ghivece şi se ţin la lumină, se va constata că
inflorescenţele lor se deschid. Dacă se trec ghivecele la întuneric, inflorescenţele lor se închid.
Interpretare. Aceste mişcări se realizează, ca şi cele termonastice prin variaţii de creştere a celulelor pe cele două
feţe ale învelişurilor florale.
C. Evidenţierea seismonastiilor
Sunt mişcări neorientate, provocate de excitaţii mecanice externe care determină
modificări în turgescenţa celulelor.Ele se manifestă la Mimosa pudica, Oxalis acetosella şi la
Berberis vulgaris.
Materiale necesare: plante de Oxalis acetosella
Mod de lucru: La Oxalis acetosella, prin lovirea plantei, frunzele îşi schimbă poziţia. Pentru
evidenţierea acestei mişcări, se sădesc câteva plante în ghivece sau pahare Berzelius, umplute cu
pământ şi se păstrează la lumină difuză. În aceste condiţii foliolele plantelor sunt aşezate în acelaşi
plan. Dacă se loveşte de mai multe ori, cu un băţ, o plantă în porţiunea de la baza foliolelor, unde
sunt situate şi pulvinulele, se va constata că foliolele ei se îndoaie pe nervura mediană şi se
apleacă.
TEMĂ DE VERIFICARE A CUNOŞTINŢELOR
1.Indicaţi deosebirile dintre respiraţia aerobă şi fermentaţie.
2.Enumeraţi tipurile de fermentaţii studiate şi indicaţi pentru fiecare caz grupa de organisme care-l realizează,
produsul obţinut şi importanţa practică.
3.Definiţi procesul de germinaţie şi enumeraţi factorii externi necesari acestui proces.
4.Enumeraţi factorii interni care influenţează procesul de germinaţie.
5.Explicaţi noţiunile: regenerare, polaritate, butaşi.
6.Ce importantă prezintă pentru organismul vegetal regenerarea şi polaritatea?
7.Enumeraţi tipurile de mişcări prezente la plante şi caracterizaţi-le pe scurt.Exemplificaţi fiecare caz.
55