CITOSCHELETUL

Reea complex de filamente proteice

rspndite n toat citoplasma:
microfilamentele de actin (MFA), filamentele
intermediare (FI) i microtubulii (MT)
Structur dinamic care rspunde mediului
nconjurtor celulei
Ofer posibilitatea deplasrii organitelor
citoplasmatice
Favorizeaz segregarea cromozomilor
Responsabil de contracia muscular
CITOSCHELETUL
DEFINIIE
CELULA EUCARIOT I PROCARIOT
CITOSCHELETUL ASPECT GENERAL
Provin din polimerizarea actinei G
Exist trei tipuri de actin: n fibrele
musculare striate i netede, i n celulele
non-musculare
Forma de stocaj este forma G, protein cu GM
42 kDa, cu un acid aminat rar, 3-metil-histidina
Polimerizerea actinei G formeaz actina F, un
filament cu diametrul de 7 nm
MICROFILAMENTELE DE ACTIN (MFA)
Polimerizarea depinde de prezena i
concentraia ionilor de Mg++ i K+, de ATP i
de actina G
Debutul se produce printr-o faz de nucleaie,
cnd trei molecule de actin se asambleaz
pentru a forma un trimer
Urmeaz asocierea reversibil a moleculelor de
actin G
Nucleaia, polimerizarea, poziia i lungimea
filamentelor de actin depind de o serie de
proteine de legtur i de hidroliza ATP-ului
Polimerizarea i depolimerizarea actinei F
numai n celulele non-musculare

Citochalasinele, extracte de ciuperci
microscopice, sunt inhibitori ai polimerizrii
actinei G
Phaloidele (Amanita phalloides) sunt inhibitori
ai depolimerizrii i provoac intoxicaii
mortale
Microfilamentele au o extremitate pozitiv a
crei cretere este mai rapid dect
extremitatea negativ.
Diferena vitezei de cretere depinde de
schimbarea conformaiei moleculei de actin G
MICROFILAMENTELE DE ACTIN (MFA)
MFA FORMA CELULAR I
FAGOCITOZ
MFA
Instabilitate dinamic i durat scurt de via
Actina G - polimerizare i depolimerizare
Actina F - reticulare i de dereticulare,
fasciculat i defasciculat
Cea mai bine reprezentat protein (5% din
totalul proteinelor) n celulele eucariote
Repartizat n ntreaga citoplasm, mai ales
perinuclear, dispoziie sub form de co
La periferia celulei animale, sub membrana
plasmatic, dispunere n fascicole sau n reele
tridimensionale, formnd cortexul celular
MFA CELULELOR NON-MUSCULARE
ABP - actin binding protein - se asociaz
actinei G sau MFA
Intervenind n polimerizarea/depolimerizarea
MFA, n stabilizare, organizare n
fascicole/reea, fragmentare, fixare la faa
intern a membranei plasmatice
n asociere cu MFA, constituie un citoschelet
cortical (forma celulei )
PROTEINELE DE LEGTUR ALE ACTINEI
Proteine de sechestrare de monomeri (profilin,
depactin) regleaz polimerizarea actinei G
Proteine de blocaj ale extremitilor -
controleaz lungimea MFA
Proteine de stabilizare (tropomiozin) care
menin structura MFA
Tropomiozina are numeroase situsuri de fixare
la actin
PROTEINELE DE LEGTUR ALE ACTINEI
CITOSCHELETUL I
INTERACIUNILE SUBCELULARE
CITOSCHELETUL I
INTERACIUNILE SUBCELULARE
CITOSCHELETUL I ADAPTRI ALE
SUPRAFEEI CELULARE
CITOSCHELETUL I FORMA
CELULAR
FASCICULE CONTRACTILE
Sunt constituite din MFA asociate cu molecule de
miozin II
Se inser de membrana plasmatic n puncte focale de
contact (plac de adezivitate, plac de aderen) conin
integrine
Constituie inele contractile
Se asociaz cu jonciuni intermediare (centuri de
adezivitate)
n fasciculele contractile, miofilamentele de actin se
gsesc la distan de 30-60 nm unele de altele
Molecule de miozin II au o coad i dou capete
globulare
Favorizeaz glisarea celor doua filamente de actin,
determinnd contracie fr modificarea lungimii
MFA I PUNCTELE FOCALE DE CONTACT
- ancorarea celulelor la substrat
- controlul locomoiei celulare
- controlul formei celulare
- stabilitatea legturii intercelulare
- rspunsul citoplasmatic la factorii de cretere
sau la ali stimuli.
Fasciculele contractile se pot organiza n inele
contractile sau centuri de adezivitate
FASCICULELE STRNSE
MFA paralele, legate prin proteine de asociere
(fimbrina sau vilina), la distan de 10-20 nm
unele de altele
Aceste fascicule nu sunt contractile
Expansiunile filiforme (filopode, lamelipode) -
n deplasarea fibroblatilor sau n
microviloziti
MFA I MIOZINA I
DEPLASAREA ORGANITELOR
Miozina I care are un singur cap i o
coad, este responsabil de micarea de
deplasare de-a lungul MFA
Miozina se fixeaz prin coada sa pe
organit i prin capul su de un MFA care
este ancorat la membrana plasmatic
Migrarea de la extremitatea negativ la
extremitatea pozitiv a MFA
REELE DE MICROFILAMENTE
Microfilamentele controleaz vscozitatea
citoplasmei organizndu-se n reele
Filamina, un dimer din 2 subuniti de 270
kDa, este un factor gelificator al citoplasmei
Gelsolina, n prezena calciului, fragmenteaz
microfilamentele i transform un gel
citoplasmatic ntr-un sol (rol fundamental n
exocitoz sau endocitoz)
MICROFILAMENTELE I FORMA CELULAR
Hematia - celul rotund cu 2 fee biconcave
Interaciunea dintre spectrin i microfilamente,
proteinele de legtur sau proteinele membranare
Proteina de banda 4.1 conecteaz complexele
joncionale cu domeniile transmembranare ale
glicoforinelor
Ankrina, care este principala protein de
legtur a eritrocitelor, leag tetramerii spectrinei
de proteina membranar de band 3
MFA I MIOZINA CELULELOR MUSCULARE
STRIATE

n FMS actina F se gsete sub form stabil
n structuri contractile, miofibrilele
Miofibrilele - structuri difereniate, asocierea
MFA i miozin
Formate din filamente de titin care menin
miofilamentele de miozin pe loc i din
filamente de nebulin care regleaz
asamblarea miofilamentelor de actin
SARCOMERELE
FMS are mai multe mii de miofibrile cu
diametrul ntre 1 i 2 m, care parcurg
longitudinal fibra muscular de la un
capt la altul, desprite de o cantitate
sczut de sarcoplasm
Miofibrilele constituie partea esenial a
muchiului, aproximativ 100 de milioane
/cm de muchi uman
SARCOMERE N FIBRA MUSCULAR STRIAT -
SCHEM
SARCOMERELE
Structur heterogen (alternane de zone sau discuri)
- discurile A (anizotrope n lumin polarizat) ntunecate, cu o
lungime de 1,5 m: ele sunt mprite n dou semidiscuri printr-
o zon clar H (Hensen) care prezint n mijloc o linie
ntunecat, linia M (Mittelmembran)
- discurile I (Isotrope), cu o grosime de 0,8 m, prezentnd pe
mijloc o striaie Z (Zwichenscheibe) - desmin
Fiecare segment de miofibril cuprins ntre dou striaii Z
constituie un sarcomer.
Un sarcomer are dou semidiscuri I i un disc A.
Repetarea acestor uniti dispuse cap la cap constituie o
miofibril.
Sarcomerele tuturor miofibrilelor unei fibre sunt situate la
acelai nivel -aspect striat miocitelor
SARCOMERE N FIBRA MUSCULAR STRIAT, ME
ORGANIZAREA MIOFILAMENTELOR
N MIOFIBRILE
Miofibrilele asocierea a dou tipuri principale de
microfilamente
Filamentele de miozin (miozina II) au un
diametru de 10 nm i o lungime de 1,5 m i
extremiti conice
MFA au un diametru de 5-7 nm i n jur de 1
lungime i se inser pe striaiile Z
Aceste dou tipuri principale de miofilamente se
asociaz cu titina care este una dintre cele mai
voluminoase molecule fibrilare cunoscute astzi
(3000 kDa) i cu filamente de nebulin
ORGANIZAREA MIOFILAMENTELOR
N MIOFIBRILE
Filamentele de miozin i MFA sunt paralele ntre ele i
longitudinale
Filamentele de miozin ocup n totalitate discul A
MFA din fiecare sarcomer pleac de la striaia Z, la marginea
discului H.
Semidiscurile I ale fiecrui sarcomer nu conin dect MFA
Semidiscurile A situate de o parte i de alta a discului H
conine att microfilamente de actin ct i filamente de
miozin.
Discul H are n partea median filament de miozin, uor
umflat la mijloc.
Linia M corespunde ansamblului tuturor acestor umflturi
ale miozinei.
Dou specii moleculare ale miozinei: miozina de tip I, absent
n celulele musculare i care are rol n motilitatea celular i
miozina II
FILAMENTELE DE MIOZIN II
Sunt bipolare, GM de 450 kDa i este alctuit
din 6 lanuri polipeptidice : 2 lanuri grele i 2
perechi de lanuri uoare
Lanurile grele sunt identice o regiune
helicoidal cu o lungime de 30 nm, numit
coad i o regiune globular carboxi-terminal,
cu diametrul de 4 nm numit cap.
Miozina poate fi scindat la nivelul punctelor
de flexiune sub aciunea unor enzime
proteolitice
INTERACIUNEA MFA MIOZIN 2
FILAMENTELE DE MIOZIN II
Chimiotripsina scindeaz miozina n dou
domenii
Primul domeniu, meromiozina grea (HMM),
conine capul bilobat i un segment din coada
lanurilor grele,
Al doilea domeniu, meromiozina uoar
(LMM), cuprinde segmentul aminoterminal al
cozii
Prin tratarea domeniului HMM cu papain,
segmentul de coad este eliberat i rezult
fragmentele S1, ce conin cte un cap globular
i perechea de lanuri asociate acestuia.
Fragmentele S1 prezint activitate ATP-azic
FILAMENTELE INTERMEDIARE (FI)
Molecule fibrilare stabile, cu un diametru de 8-10 nm,
intermediar ntre cel al MFA i cel al MT, n
nucleoplasma i citoplasma tuturor celulelor animale
n celulele epiteliale se dispun n jurul nucleului i sub
membrana plasmatic.
Se inser de proteinele membranare cu ajutorul
proteinelor extrinseci citoplasmatice
n celulele epiteliale se fixeaz de placa citoplasmatic a
desmozomilor i au rol mecanic
n axonii celulelor nervoase formeaz o armtur
In FMS unific faa intern a membranei cu
miofibrilele - transmiterea forei n cursul contraciei
FILAMENTELE INTERMEDIARE (FI)
FI (polimeri stabili) pot fi:
Homopolimeri : vimentina, desmina, GFA sau GFAP,
periferina
Heteropolimeri: citocheratinele, neurofilamentele.
Unitatea de baz - un monomer cu o parte central
(identic pentru mai multe tipuri) i dou extremiti
carboxy- i amino-terminale diferite
Partea central cuprinde 310 resturi de acizi aminai
dispui n dublu helix cu trei regiuni n care dispoziia
acestor reziduuri nu este helicoidal
FILAMENTELE INTERMEDIARE
Tipul I i tipul II - cheratinele
Tipul I - cheratinelor acide
Tipul II familiile de cheratine neutre i bazice
Proteine fibrilare produse de cheratinocite sau celule
epiteliale
MARKER EPITELIAL CITOPLASMATIC
n cheratinocite sub form de fascicule ancorate n plcile
dense desmozomale
Citocheratinele CK5 i CK14 - stratul bazal
CK1, CK6, CK10, CK16, - corpul mucos Malpighi
CK9 - stratul granular.
n epiderm CK unesc desmozomii ntre ei
CK se inser de molecule de pacoglobulin - o plac dens
vecin i paralel cu membrana plasmatic
Moleculele de pacoglobulin se lipesc de caderinele
desmozomale transmembranare
FI CITOCHERATINA
IMUNOFLUORESCEN
FI CITOCHERATINA
IMUNOHISTOCHIMIE (IHC)
FILAMENTELE INTERMEDIARE
Tipul III - Vimentina, Desmina, GFAP i Periferina
Vimentina (54 kDa) - MARKER al celulelor
mezenchimatoase
Seroasa pleural, pericardic, peritoneal
n celulele endoteliale vasculare
n fibroblati, fibrocite, condrocite
n cursul embriogenezei, neuroblatii (neuroni imaturi)
conin VIM
Absena vimentinei n citoscheletul celulelor su
vimentin modific morfologia nucleului
n adipocite VIM formeaz un fel de cuc n jurul
grsimii
Menine pe loc nucleul i ansamblul organitelor celulare
VIMENTINA - IHC
FILAMENTELE INTERMEDIARE
Tipul III - Vimentina, Desmina, GFAP i Periferina
Desmina (53 kDa) MARKER al FMN sau FMS
FMS cursul miogenezei sau n cursul regenerrii conin o
mare cantitate de DES
n FMS adulte DES leag striaiile Z vecine unele de
altele i de membrana plasmatic
GFAP (50 kDa) MARKER al celulelor de origine
neuroectodermic -nevroglia sistemului nervos central
(astrocite i microglie) i a sistemului nervos periferic
(celule Schwann ale fibrelor amielinice)
Periferina (57 kDa) MARKER al neuronilor n cursul
dezvoltrii embrionare i n cursul regenerrii
PER este indispensabil regenerrii neuronale
FI DESMINA IMUNOFLUORESCEN I IHC
GFAP - IMUNOFLURESCEN
GFAP - IHC
FILAMENTELE INTERMEDIARE
Tipul IV - neurofilamentele

NF - localizate n neuroni i se asociaz MT axonilor
3 tipuri: NF-L (light), NF-M (medium), NF-H (heavy)
Reprezint 25% dintre proteinele axonului i intervin
mpreun cu neurotubulii n transportul intra-axonal
(flux axonal)
Menin rigiditii i rezistenei axonului precum
Prin fosforilarea NF-H i a NF-M se adaug la
microfilamente grupri fosfat (sarcina negativ)
Forele de respingere, generate prin creterea sarcinilor
negative, asigur un diametru axonal constant.
NF - IMUNOFLUORESCEN
NF Schem i IHC
FILAMENTELE INTERMEDIARE
Tipul V - laminine nucleare

Lamininele constituie citoscheletul nucleului
Se cunosc 2 tipuri: laminine de tip I (cu subtipurile A i C),
laminine de tip II (cu subtipurile B1, B2)
Formeaz o reea tridimensional care acoper complet, cu
excepia porilor, faa intern a nveliului nuclear
Microfilamentele de tip A i C menin forma nucleului i
servesc drept loc de ancorare pentru moleculele de ADN
Laminina B nu are afinitate pentru nucleotide
Intervin n mitoz - lamininele A i C se fixeaz pe siturile
specifice de legtur ale cromozomilor mitotici
Lamininele intervin n momentul reconstruciei nucleului i al
nveliului nuclear
MICROTUBULII (MT)
MT sunt polimeri instabili lungi i rigizi de
heterodimeri - de tubulin
Au o extremitate pozitiv distal (apropiat de
membrana celular) i o extremitate negativ aproape
de centrul celular
Au forma unor tubi cu diametrul n jur de 25 nm, a
cror polimerizare i depolimerizare depind de
hidroliza GTP
Se gsesc la vertebratele superioare, n toate tipurile
celulare (cu excepia hematiei)
Sunt mai numeroi n neuronii cerebrali unde
reprezint n jur de 20 % dintre proteinele solubile.
MICROTUBULI
Microtubuli - Ultrastructura cilului
CENTROZOMUL - MTOC

MT se dispun radiar n jurul centrosomului - MTOC
(microtubule organizing center)
MTOC - doi centrioli i o mas granulo-filamentoas
pericentriolar
MT cresc plecnd din centrozom - extremitatea lor negativ
ptrunde n masa pericentriolar, dar nu intr niciodat n
contact cu centriolii .
Organizare molecular a MT
MT au un diametru extern uniform, perete dens, ngroat, de
5 nm i o cavitate axial de 14 nm lrgime
Lungimea de mai muli microni
MT nu se ramific
Peretele are 13 protofilamente, alternan de tubuline i
de 5 nm diametru, paralele i avnd aceeai polaritate, legate
lateral unele de altele
CICLUL CELULAR MTOC FUSUL DE
DIVIZIUNE
FUNCIILE MICROTUBULILOR
Dinamica mediului extracelular
Deplasarea celulelor
Morfogeneza celulei i meninerea formei celulare
Polaritatea celular
Meninerea structurii membranei celulare
Migrarea vacuolelor de endocitoz
Eliberarea granulelor de secreie
Integritatea aparatului Golgi
Micarea cromozomilor n cursul mitozei i a meiozei
Transportul dirijat al ARN-m n citoplasm
Transportul substanelor i al materialului intracelular
CITOSCHELETUL IMUNOFLUORESCEN
CITOSCHELETUL I MEMBRANA
PLASMATIC
CITOSCHELETUL I TRANSPORTUL
TRANSMEMBRANAR
CITOSCHELETUL