1 INTRODUCERE Organizarea celular la eucariote, adoptarea unei geometrii variabile i micrile executate depind de CITOSCHELET - o reea intricat de proteine

filamentoase care se extinde n ntreaga citoplasm. n celulele animale o funcie de o importan deosebit este meninerea volumului celular n limite normale, n absena peretelui celular. Dei nu demult citoscheletul era comparat, la scar, cu scheletul osos uman, astzi concepia include proprietile dinamice ale citoscheletului, astfel nct comparaia se extinde la sistemul osteo-muscular uman. Interiorul unei celule se afl ntr-o continu micare iar elementele citoscheletului reprezint suportul acestor micri: pentru schimbarea poziiei organitelor n celul, segregarea cromosomial n timpul mitozei, separarea celulelor fiice prin apariia anului de diviziune. Citoscheletul pare a fi o noutate la nivelul eucariotelor; lipsete la procariote iar la eucariote joac un rol crucial. Celula eucariot este asemenea unei companii care realizeaz o mare varietate de produse i care posed o nalt compartimentare i specializare i n acelai timp interconexiuni deosebite prin sisteme de transport. Citoscheletul controleaz att localizarea organitelor ct i translocarea acestora. Citoscheletul este o reea format din trei tipuri de proteine filamentoase: - filamente de actin - microtubi - filamente intermediare Fiecare tip de filament este format din tipuri diferite de subuniti proteice: filamentele de actin au la baz actina, microtubii au la baz tubulina iar filamentele intermediare sunt formate de o familie de proteine fibroase.

2 MICROFILAMENTELE DE ACTIN Actina exist n celul sub dou forme: actina G forma globular i actina F, forma fibrilar organizat n microfilamente. Actina este una din cele mai abundente proteine n celulele eucariote. La psri i mamifere s-au descris 6 tipuri diferite de actin: - 3 tipuri de -actine, fiecare din ele fiind caracteristic unui anumit tip de muchi; - 2 tipuri de actine nemusculare denumite -actin i -actin, gsindu-se n aproape toate celulele nemusculare; - un tip de -actin, specific muchiului neted intestinal. Actina globular este format dintr-un singur polipeptid cu greutate molecular de 45000 Da, de form globular, cu lungime de 6 nm i lime de 4 mn. Actina G are locuri de cuplare pentru mai multe substane: pentru profilin (o protein care inhib polimerizarea), pentru ioni cum sunt Ca sau Mg care controleaz polimerizarea, pentru ATP (care furnizeaz energia pentru polimerizare) i pentru miozin (mai exact pentru capul moleculei de miozin). Actina fibrilar (actina F sau microfilamentele de actin) este format prin polimerizarea actinei G, n prezena actinei G, datorit energiei determinate de hidroliza ATP. Polimerizarea actinei G pentru a forma actina F are loc n dou etape: 1. faza iniial, denumit faza de lag, n care polimerizarea are loc cu o vitez sczut 2. faza de cretere rapid, n care, prin energia furnizat de hidroliza ATP, monomerii de actin G se adaug la filamentul de actin n cretere. Procesul de polimerizare se oprete n momentul n care concentraia monomerilor din filament o egaleaz pe cea a monomerilor din soluia rmas. 3. un filament de actin poate fi distrus prin procese inverse de depolimerizare. Filamentele de actin interacioneaz cu cele de miozin n celulele musculare. n celulele nemusculare filamentele de actin interacioneaz cu molecule izolate de miozin. n celulele nemusculare, microfilamentele de actin intr n compoziia specializrilor plasmalemei cum ar fi microvilii i stereocilii, sau particip la formarea jonciunilor nemusculare. Fenomenul de polimerizare este influenat de medicamente cum ar fi citochalazinele care inhib procesul. Alte substane cum ar fi faloidina inhib depolimerizarea.

3 Miozina Miozina reprezint una din proteinele asociate filamentelor de actin fie n celulele musculare fie n cele nemusculare.

4 MICROTUBII A doua categorie de structuri implicate n motilitatea celular i subcelular i determinismul formei celulare este reprezentat de microtubi. Microtubii sunt polimeri alctuii din subuniti de tubulin i care, alturi de filamentele intermediare umplu citosolul cuprins ntre nucleu i citoplasm. Dei se completeaz morfologic, microtubii i filamentele intermediare au funcii diferite n celul. Microtubii sunt reponsabili de o multitudine de micri celulare, ca de exemplu, micrile cililor i flagelilor, transportul vezicular intracelular, creterea la nivelul conului de cretere neuronal, iar la unele protiste, de capturarea hranei din mediul extern.

Microtubi. Microscopie electronic

Toate micrile rezult din polimerizarea i depolimerizarea microtubilor i din aciunea proteinelor motrice asociate microtubilor, kinezina i dineina. n unele cazuri, microtubii au funcii pur structurale, jucnd un rol important n determinismul plasticitii eritrocitare. Microtubii sunt polimeri formai din subuniti globulare de tubulin. Aceste subuniti sunt dispuse n forma unui cilindru de 24 nm diametru, de 2 ori mai mare dect cel al filamentelor intermediare i de 3 ori mai mare dect cel al microfilamentelor. Avnd lungimi variabile, microtubii sunt structuri mult mai rigide dect alte elemente citoscheletale, datorit arhitecturii lor tubulare, mult mai complex dect a microfilamentelor. Tubulinele. Microtubii sunt alctuii din subuniti dimerice de monomeri de -tubulin i tubulin.

Microtub. Schem. Tubulinele dispuse n heterodimeri. Tubulinele din heterodimerii adiaceni sunt puin decalate, inducnd aparena de spirale de monomeri i . Peretele microtubilor are aspect de tabl de ah

Fiecare monomer tubulinic are form globular, cu un diametru de 4 nm. Heterodimerul are o lungime de 8 nm. Fiecare heterodimer leag 2 molecule de GTP. Primul situs de legare situat la nivelul -tubulinei, leag GTP ireversibil i nu l hidrolizeaz n timp ce al doilea situs, situat pe -tubulin, leag GTP reversibil i l poate hidroliza la GDP. Acest al doilea situs de cuplare al GTP este denumit situs de schimb, deoarece GDP poate fi nlocuit de GTP. Hidroliza GTP legat la -tubulin este legat de fenomenul de polimerizare, de adiie a subunitilor tubulinice la capetele microtubilor. Un microtub este compus din 13 protofilamente dar pot exista i variaii, la diferite specii, ntre 11-15 protofilamente. Adesea, protofilamentele se asociaz n structuri de tip dublet sau triplet, cum ar fi cazul cililor vibratili i flagelilor (dublete) sau centriolilor (triplete). Un dublet de microtubi este format din microtubii A i B. Microtubul A este complet, format din 13 protofilamente, n timp ce microtubul B const din 10 protofilamente care formeaz un tub prin fuzionarea cu peretele tubului A. Un triplet de microtubi are n plus 10 protofilamente adugate la un microtub B dintr-un dublet. Asamblarea i dezasamblarea microtubilor. Microtubii se asambleaz prin procese de polimerizare ale dimerilor tubulinici . Dup asamblare, stabilitatea microtubilor depinde de temperatur: la 4C, microtubii depolimerizeaz n dimeri stabili iar la 37C, n prezena GTP, dimerii tubulinici

6 polimerizeaz. Asamblarea microtubilor este asemntoare cu cea a filamentelor de actin. Asamblarea microtubilor este dependent de concentraie: la concentraii ale dimerilor de tubulin peste Cc se produce polimerizarea iar la concentraii ale dimerilor sub Cc se produce depolimerizarea. Centrii de organizare ai microtubilor (MTOC).(centrozomii) Structura MTOC. O analiz atent arat c reeaua de organizare a microtubilor este radiar, cu punct de plecare perinuclear. Acest punct de plecare este reprezentat de centrozom, denumit i centru de organizare al microtubilor (MTOC MicroTube Organizing Center). MTOC apare pe electronofotografii ca un material amorf, electronodens situat n citosol. Termenul de MTOC descrie structurile utilizate de celulele interfazice pentru a organiza microtubii. n cele mai multe cazuri MTOC este un centrozom. n schimb, unele celule epiteliale au MTOC care nu seamn cu centrozomii. Rolul major al MTOC este de suport de nucleere pentru majoritatea microtubilor, reprezentnd i un situs de control al asamblrii. La nivelul MTOC, microtubii se prezint cu captul (-), ceea ce le permite creterea radiar ctre plasmalem. MTOC conin o pereche de centrioli nglobai ntr-o substan amorf. Centrozomii sunt situai n centrul MTOC dar nu iau contact direct cu capetele microtubilor citosolici. Funciile microtubilor. Implicarea n transportul vezicular dintre diverse compartimente Microtubii sunt structuri dinamice implicate n transportul proteic i n determinarea polaritii unor tipuri de celule. Microtubii au dispoziii diferite n celulele epiteliale polarizate n interfaz. O reea dens de microtubi scuri i dispui aleator este localizat ntre membrana apical i aparatul Golgi. n fibroblaste, de exemplu, complexul Golgi este concentrat n apropierea MTOC. n timpul mitozei, complexul Golgi se disperseaz n multiple vezicule n citosol. Cnd microtubii citosolici se reorganizeaz, veziculele Golgi se deplaseaz de-a lungul microtubilor ctre MTOC, unde se reagreg pentru a determina complexe largi membranare. Microtubii sunt asociai i reticulului endoplasmatic. Alt mnunchiuri de microtubi sunt dispuse longitudinal n axul apico-bazolateral. Microtubii sunt orientai cu capetele (-) spre membrana apical i cu cele (+) spre membrana bazolateral. Organizarea spaial neobinuit a microtubilor are implicaii importante n transportul vezicular ghidat ntre compartimentele celulare membranare. Filamentele intermediare. Filamentele intermediare (FI) formeaz a treia component fibrilar a citoscheletului celular. Numele lor deriv din observaia c diametrul lor (de circa 10 nm) este intermediar ntre al microfilamentelor (cca. 7 nm) i cel al microtubilor (24 nm). FI se gsesc n aproape toate celulele eucariote, cu preponderen n celulele epiteliale i

7 neuroni, unde sunt de 10 ori mai abundente dect n alte tipuri celulare. Modul lor de organizare ntr-o reea ce strbate ntreaga citoplasm, mod de organizare oarecum asemntor celui al microtubilor sugereaz c funcia FI este de a fortifica structurarea intracelular precum i a celulelor n esuturi. Rolul suportiv jucat de FI este evideniat n cazurile extreme cum sunt ghearele sau firele de pr, vestigii ale celulelor epidermice. FI sunt importante mai ales n vecintatea membranei, acolo unde particip la medierea contactului intercelular sau celule-matrice extracelular (MEC). Exist o serie de caracteristici fizice i biochimice care deosebesc FI de microtubi i microfilamente:

FI sunt extrem de stabile; chiar la concentraii saline mari sau dup extracie cu
detergeni, filamentele rmn polimerizate; n consecin metodele de purificare, care utilizeaz ca agent ureea, vor extrage FI dintre proteinele deja solubilizate. ca i structur, FI sunt structuri fibrilare -helicale care vor asambla filamente.

din punct de vedere al asamblrii, FI nu pot cupla nucleotide, deci polimerizarea lor va
fi independent de ATP sau GTP. Cu toate deosebirile prezentate, exist o serie de puncte comune care se vor observa n termeni de structur i funcie n descrierea de mai jos. Clasificarea filamentelor intermediare. FI reprezint o superfamilie de proteine -helicale care, pe baza similitudinilor de secven pot fi grupate n 5 clase (vezi tabelul alturat) FI TIPUL I keratine acide TIPUL II keratine bazice TIPUL III Desmin Protein fibrilar glial acid Vimentin Periferin TIPUL IV NF-L NF-M NF-H Internexin Nestin PM Nr. polipeptide Distribuie tisular epitelii epitelii muchi celule gliale astrocite mezenchim neuroni

40-57 53-67 53 50 57 57 62 102 110 66 240

>15 >15 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Neuroni maturi din SN central i periferic SNC n dezvoltare celule neuro-epi-

8 teliale stem TIPUL V Laminina A 70 1 Laminina B 67 1 Laminina C 67 1 NF = neurofilamente; L, H, M = low, medium, high, se refer la greutile moleculare PM = pondere (greutate) molecular n toate celulele