CITOSCHELETUL

CITOSCHELETUL
Reea complex de filamente proteice
rspndite n toat citoplasma:
microfilamentele de actin (MFA), filamentele
intermediare (FI) i microtubulii (MT)
Structur dinamic care rspunde mediului
nconjurtor celulei
Ofer posibilitatea deplasrii organitelor
citoplasmatice
Favorizeaz segregarea cromozomilor
Responsabil de contracia muscular
 CITOSCHELETUL
Comparat nu de mult cu scheletul osos uman,
comparaie care va fi completat ulterior prin
includerea proprietilor dinamice ale
citoscheletului
O funcie foarte mportanta a citoscheletului
este cea de meninere a volumului celular n
limite normale, chiar n absena peretelui
celular.
Rol de compartimentare celular
Rol n transportul intracelular
CELULA EUCARIOT I PROCARIOT
CITOSCHELETUL ASPECT GENERAL
MICROFILAMENTELE DE ACTIN (MFA)
Provin din polimerizarea actinei G
Exist trei tipuri de actin: n fibrele musculare striate i
netede, i n celulele non-musculare
Forma de stocaj este forma G, protein cu GM 42 kDa, cu
un acid aminat rar, 3-metil-histidina
Polimerizerea actinei G formeaz actina F, un filament cu
diametrul de 7 nm
In vitro, polimerizarea poate fi iniiat prin adugarea de
sruri la o soluie de actin G
Polimerizarea are trei faze: faza de lag , prin agregarea lent
a monomerilor de actin G, faza de elongare a filamentului
n formare, faza de echilibru cnd nu se mai produc
modificri la nivelul filamentelor, chiar dacmonomerii de
actin G polimerizeaz i depolimerizeaz la capetele
filamentelor.
 Polimerizarea i depolimerizarea actinei F
numai n celulele non-musculare

Polimerizarea depinde de prezena i

concentraia ionilor de Mg++ i K+, de ATP
i de actina G
Debutul se produce printr-o faz de
nucleaie, cnd trei molecule de actin se
asambleaz pentru a forma un trimer
Urmeaz asocierea reversibil a
moleculelor de actin G
Nucleaia, polimerizarea, poziia i
lungimea filamentelor de actin depind de
o serie de proteine de legtur i de
hidroliza ATP-ului
MICROFILAMENTELE DE ACTIN (MFA)
Citochalasinele, extracte de ciuperci
microscopice, sunt inhibitori ai
polimerizrii actinei G
Phaloidele (Amanita phalloides) sunt
inhibitori ai depolimerizrii i provoac
intoxicaii mortale
Microfilamentele au o extremitate pozitiv a
crei cretere este mai rapid dect
extremitatea negativ.
Diferena vitezei de cretere depinde de
schimbarea conformaiei moleculei de
actin G
MFA FORMA CELULAR I FAGOCITOZ
MFA
 MFA CELULELOR NON-MUSCULARE

Instabilitate dinamic i durat scurt de via

Actina G - polimerizare i depolimerizare
Actina F - reticulare i de dereticulare, fasciculat
i defasciculat
Cea mai bine reprezentat protein (5% din totalul
proteinelor) n celulele eucariote
Repartizat n ntreaga citoplasm, mai ales
perinuclear, dispoziie sub form de co
La periferia celulei animale, sub membrana
plasmatic, dispunere n fascicole sau n reele
tridimensionale, formnd cortexul celular
 PROTEINELE DE LEGTUR ALE ACTINEI

ABP - actin binding protein - se asociaz

actinei G sau MFA
Intervenind n polimerizarea/depolimerizarea
MFA, n stabilizare, organizare n
fascicole/reea, fragmentare, fixare la faa
intern a membranei plasmatice
n asociere cu MFA, constituie un citoschelet
cortical (forma celulei )
 PROTEINELE DE LEGTUR ALE ACTINEI

Proteine de sechestrare de monomeri

(profilin, depactin) regleaz polimerizarea
actinei G
Proteine de blocaj ale extremitilor -
controleaz lungimea MFA
Proteine de stabilizare (tropomiozin) care
menin structura MFA
Tropomiozina are numeroase situsuri de fixare
la actin
CITOSCHELETUL I ADAPTRI ALE
SUPRAFEEI CELULARE
CITOSCHELETUL I FORMA CELULAR
 FASCICULE CONTRACTILE
Sunt constituite din MFA asociate cu molecule de
miozin II
Se inser de membrana plasmatic n puncte focale de
contact (plac de adezivitate, plac de aderen)
conin integrine
Constituie inele contractile
Se asociaz cu jonciuni intermediare (centuri de
adezivitate)
n fasciculele contractile, miofilamentele de actin se
gsesc la distan de 30-60 nm unele de altele
Molecule de miozin II au o coad i dou capete
globulare
Favorizeaz glisarea celor doua filamente de actin,
determinnd contracie fr modificarea lungimii
MFA I PUNCTELE FOCALE DE CONTACT
- ancorarea celulelor la substrat
- controlul locomoiei celulare
- controlul formei celulare
- stabilitatea legturii intercelulare
- rspunsul citoplasmatic la factorii de
cretere sau la ali stimuli.
Fasciculele contractile se pot organiza n
inele contractile sau centuri de adezivitate
 FASCICULELE STRNSE

MFA paralele, legate prin proteine de

asociere (fimbrina sau vilina), la distan de
10-20 nm unele de altele
Aceste fascicule nu sunt contractile
Expansiunile filiforme (filopode, lamelipode) -
n deplasarea fibroblatilor sau n
microviloziti
 MFA I MIOZINA I
DEPLASAREA ORGANITELOR
Miozina este una dintre cele mai abundente proteine din organism.
Exist n jur de paisprezece clase de miozine. Clasificarea se face
in funcie de domeniile capetelor miozinice.
Structural, moleculele de miozin au fost mprite n dou grupe
mari: miozine convenionale (tip II) i neconvenionale (tip I i tip
III-XV)
Miozina tip II este un dimer, format din dou lanuri grele i dou
perechi de lanuri uoare.
Miozina I care are un singur cap i o coad, este responsabil de
micarea de deplasare de-a lungul MFA
Miozina se fixeaz prin coada sa pe organit i prin capul su de un
MFA care este ancorat la membrana plasmatic
Migrarea de la extremitatea negativ la extremitatea pozitiv a MFA
 REELE DE MICROFILAMENTE

Microfilamentele controleaz vscozitatea

citoplasmei organizndu-se n reele
Filamina, un dimer din 2 subuniti de 270
kDa, este un factor gelificator al citoplasmei
Gelsolina, n prezena calciului, fragmenteaz
microfilamentele i transform un gel
citoplasmatic ntr-un sol (rol fundamental n
exocitoz sau endocitoz)
 MICROFILAMENTELE I FORMA CELULAR
Hematia - celul rotund cu 2 fee biconcave
Interaciunea dintre spectrin i
microfilamente, proteinele de legtur sau
proteinele membranare
Proteina de banda 4.1 conecteaz complexele
joncionale cu domeniile transmembranare
ale glicoforinelor
Ankrina, care este principala protein de
legtur a eritrocitelor, leag tetramerii
spectrinei de proteina membranar de band
3
 MFA I MIOZINA CELULELOR MUSCULARE
STRIATE
n FMS actina F se gsete sub form
stabil n structuri contractile, miofibrilele
Miofibrilele - structuri difereniate,
asocierea MFA i miozin
Formate din filamente de titin care
menin miofilamentele de miozin pe loc
i din filamente de nebulin care regleaz
asamblarea miofilamentelor de actin
 SARCOMERELE

FMS are mai multe mii de miofibrile cu

diametrul ntre 1 i 2 m, care parcurg
longitudinal fibra muscular de la un
capt la altul, desprite de o cantitate
sczut de sarcoplasm
Miofibrilele constituie partea esenial
a muchiului, aproximativ 100 de
milioane /cm de muchi uman
INTERACIUNEA MFA MIOZIN 1
 SARCOMERELE
Structur heterogen (alternane de zone sau discuri)
- discurile A (anizotrope n lumin polarizat) ntunecate,
cu o lungime de 1,5 m: ele sunt mprite n dou
semidiscuri printr-o zon clar H (Hensen) care prezint n
mijloc o linie ntunecat, linia M (Mittelmembran)
- discurile I (Isotrope), cu o grosime de 0,8 m, prezentnd
pe mijloc o striaie Z (Zwichenscheibe) - desmin
Fiecare segment de miofibril cuprins ntre dou striaii Z
constituie un sarcomer.
Un sarcomer are dou semidiscuri I i un disc A.
Repetarea acestor uniti dispuse cap la cap constituie o
miofibril.
Sarcomerele tuturor miofibrilelor unei fibre sunt situate la
acelai nivel -aspect striat miocitelor
 ORGANIZAREA MIOFILAMENTELOR N
MIOFIBRILE
Miofibrilele asocierea a dou tipuri principale de
microfilamente
Filamentele de miozin (miozina II) au un
diametru de 10 nm i o lungime de 1,5 m i
extremiti conice
MFA au un diametru de 5-7 nm i n jur de 1
lungime i se inser pe striaiile Z
Aceste dou tipuri principale de miofilamente se
asociaz cu titina care este una dintre cele mai
voluminoase molecule fibrilare cunoscute astzi
(3000 kDa) i cu filamente de nebulin
 ORGANIZAREA MIOFILAMENTELOR
N MIOFIBRILE
Filamentele de miozin i MFA sunt paralele ntre ele i
longitudinale
Filamentele de miozin ocup n totalitate discul A
MFA din fiecare sarcomer pleac de la striaia Z, la
marginea discului H.
Semidiscurile I ale fiecrui sarcomer nu conin dect
MFA
Semidiscurile A situate de o parte i de alta a discului H
conine att microfilamente de actin ct i filamente de
miozin.
Discul H are n partea median filament de miozin,
uor umflat la mijloc.
Linia M corespunde ansamblului tuturor acestor
umflturi ale miozinei.
 FILAMENTELE DE MIOZIN II
Sunt bipolare, GM de 450 kDa i este alctuit din 6 lanuri
polipeptidice : 2 lanuri grele i 2 perechi de lanuri uoare
Lanurile grele sunt identice o regiune helicoidal cu o
lungime de 30 nm, numit coad i o regiune globular
carboxi-terminal, cu diametrul de 4 nm numit cap.
Miozina poate fi scindat la nivelul punctelor de flexiune
sub aciunea unor enzime proteolitice
Chimiotripsina scindeaz miozina n dou domenii
Primul domeniu, meromiozina grea (HMM), conine capul
bilobat i un segment din coada lanurilor grele,
Al doilea domeniu, meromiozina uoar (LMM), cuprinde
segmentul aminoterminal al cozii
Prin tratarea domeniului HMM cu papain, segmentul de
coad este eliberat i rezult fragmentele S1, ce conin cte
un cap globular i perechea de lanuri asociate acestuia.
Fragmentele S1 prezint activitate ATP-azic
 INTERACIUNEA ACTIN -MIOZIN
n procesul de micare, energia necesar acestui proces, este
dat de legatura dintre miozin i hidroliza ATP. La rndul ei,
miozina este activat de actin.
Interactiunea dintre o molecul de miozin i un filament de
actin, se desfoar n mai multe faze: faza iniial cnd
miozina este cuplat cu actina, iar situsul pentru cuplarea cu
ATP, de pe miozin este gol. Asa se intmpla si in cazul rigiditii
cadaverice(rigor mortis), cnd muchiul devine rigid, fiind
deposedat de ATP, iar moleculele de miozin sunt toate cuplate
cu actina. In prima faz a ciclului contraciei, o molecul de ATP,
se leag de situsul specific de pe miozin, iar situsul de cuplare
al actinei se desface.Miozina se desprinde de actin, ATP-ul este
hidrolizat. Apoi, situsul de legare pentru ATP se inchide,
determinnd cudarea capului miozinei. Deja, poate ncepe un
nou proces de legare a miozinei cu un nou monomer din cadrul
filamentului de actin.
 INTERACIUNEA ACTIN -MIOZIN

Faza a doua a ciclului contraciei, se

caracterizeaz prin legarea miozinei de un
nou filament de actin, iar n faza a treia a
contraciei, se elibereaz ADP i se
reorienteaz capul miozinic, care revine la
forma iniial de rigor mortis-like. Capul
miozinic isi modific din nou comformaia
determinnd domeniile gtului i cozii s se
deplasezespre captul + al filamentului de
actin. Miozinele se deplaseaz de-a lungul
filamentelor de actin
 Contracia muscular

Patru proteine regleaz contracia la nivelul fibrei

musculare:tropomiozina , troponina C, troponina I,
troponina T , in prezena Ca2+
Tropomiozina este format din subunitai care formeaz
un lan continuu de-.a lungul filamentului de actin, fiecare
tropomiozin avnd apte situsuri de legare la actin.
Troponina T, se leaga la capatul terminal al tropomiozinei
i inlesneste legarea troponinelor I i C, la aceeai
tropomiozin.
Troponina I leaga actina la fel ca i troponina T
Troponina C, leaga calciul i controleaz poziia
tropomiozinei pe filamentul de actin.
 FILAMENTELE INTERMEDIARE (FI)
Molecule fibrilare stabile, cu un diametru de 8-10 nm,
intermediar ntre cel al MFA i cel al MT, n
nucleoplasma i citoplasma tuturor celulelor animale
n celulele epiteliale se dispun n jurul nucleului i
sub membrana plasmatic.
Se inser de proteinele membranare cu ajutorul
proteinelor extrinseci citoplasmatice
n celulele epiteliale se fixeaz de placa
citoplasmatic a desmozomilor i au rol mecanic
n axonii celulelor nervoase formeaz o armtur
In FMS unific faa intern a membranei cu
miofibrilele - transmiterea forei n cursul contraciei
 FILAMENTELE INTERMEDIARE (FI)
FI (polimeri stabili) pot fi:
Homopolimeri : vimentina, desmina, GFA sau GFAP,
periferina
Heteropolimeri: citocheratinele, neurofilamentele.
Unitatea de baz - un monomer cu o parte central
(identic pentru mai multe tipuri) i dou extremiti
carboxy- i amino-terminale diferite
Partea central cuprinde 310 resturi de acizi aminai
dispui n dublu helix cu trei regiuni n care
dispoziia acestor reziduuri nu este helicoidal
 FILAMENTELE INTERMEDIARE
Tipul I i tipul II - cheratinele
Tipul I - cheratinelor acide
Tipul II familiile de cheratine neutre i bazice
Proteine fibrilare produse de cheratinocite sau celule
epiteliale
MARKER EPITELIAL CITOPLASMATIC
n cheratinocite sub form de fascicule ancorate n
plcile dense desmozomale
Citocheratinele CK5 i CK14 - stratul bazal
CK1, CK6, CK10, CK16, - corpul mucos Malpighi
CK9 - stratul granular.
n epiderm CK unesc desmozomii ntre ei
CK se inser de molecule de pacoglobulin - o plac
dens vecin i paralel cu membrana plasmatic
Moleculele de pacoglobulin se lipesc de caderinele
desmozomale transmembranare
FI CITOCHERATINA IMUNOFLUORESCEN
 FI CITOCHERATINA
IMUNOHISTOCHIMIE (IHC)
 FILAMENTELE INTERMEDIARE
Tipul III - Vimentina, Desmina, GFAP i Periferina

Vimentina (54 kDa) - MARKER al celulelor

mezenchimatoase
Seroasa pleural, pericardic, peritoneal
n celulele endoteliale vasculare
n fibroblati, fibrocite, condrocite
n cursul embriogenezei, neuroblatii (neuroni
imaturi) conin VIM
Absena vimentinei n citoscheletul celulelor su
vimentin modific morfologia nucleului
n adipocite VIM formeaz un fel de cuc n jurul
grsimii
Menine pe loc nucleul i ansamblul organitelor
celulare
VIMENTINA - IHC
 FILAMENTELE INTERMEDIARE
Tipul III - Vimentina, Desmina, Proteina fibrilar
glial acid(GFAP) i Periferina

Desmina (53 kDa) MARKER al fibrelor musculare netede sau

striate
FMS in cursul miogenezei sau n cursul regenerrii conin o
mare cantitate de DES
n FMS adulte DES leag striaiile Z vecine unele de altele i
de membrana plasmatic
GFAP (50 kDa) MARKER al celulelor de origine
neuroectodermic -nevroglia sistemului nervos central
(astrocite i microglie) i a sistemului nervos periferic (celule
Schwann ale fibrelor amielinice)
Periferina (57 kDa) MARKER al neuronilor n cursul dezvoltrii
embrionare i n cursul regenerrii
n esuturile adulte se gsete n cantitate mai mic
PER este indispensabil regenerrii neuronale
FI DESMINA IMUNOFLUORESCEN I IHC
GFAP - IMUNOFLURESCEN
GFAP - IHC
 FILAMENTELE INTERMEDIARE
Tipul IV - neurofilamentele
NF - localizate n neuroni i se asociaz MT axonilor
3 tipuri: NF-L (light), NF-M (medium), NF-H (heavy)
Reprezint 25% dintre proteinele axonului i intervin
mpreun cu neurotubulii n transportul intra-axonal
(flux axonal)
Menin rigiditii i rezistenei axonului precum
Prin fosforilarea NF-H i a NF-M se adaug la
microfilamente grupri fosfat (sarcina negativ)
Forele de respingere, generate prin creterea
sarcinilor negative, asigur un diametru axonal
constant.
NF - IMUNOFLUORESCEN
NF Schem i IHC
 FILAMENTELE INTERMEDIARE
Tipul V - laminine nucleare
Lamininele constituie citoscheletul nucleului
Se cunosc 2 tipuri: laminine de tip I (cu subtipurile A i
C), laminine de tip II (cu subtipurile B1, B2)
Formeaz o reea tridimensional care acoper complet,
cu excepia porilor, faa intern a nveliului nuclear
Microfilamentele de tip A i C menin forma nucleului i
servesc drept loc de ancorare pentru moleculele de ADN
Laminina B nu are afinitate pentru nucleotide
Intervin n mitoz - lamininele A i C se fixeaz pe
siturile specifice de legtur ale cromozomilor mitotici
Lamininele intervin n momentul reconstruciei nucleului
i al nveliului nuclear
Se gsesc n toate celule
 MICROTUBULII (MT)
MT sunt polimeri instabili lungi i rigizi de
heterodimeri - de tubulin
Au o extremitate pozitiv distal (apropiat de
membrana celular) i o extremitate negativ
aproape de centrul celular
Au forma unor tubi cu diametrul n jur de 25 nm, a
cror polimerizare i depolimerizare depind de
hidroliza GTP
Se gsesc la vertebratele superioare, n toate tipurile
celulare (cu excepia hematiei)
Sunt mai numeroi n neuronii cerebrali unde
reprezint n jur de 20 % dintre proteinele solubile.
 FILAMENTE INTERMEDIARE

Caracteristici de difereniereale filamentelor

intermediare fa de microtubuli i
microfilamente
Filamentele intermediare sunt stabile, ele
rmnn polimerizate chiar la concentraii
saline mari, sau dup extragere de detergeni.
Filamentele intermediare sunt structuri
.helicale care vor asambla filamente. Ele nu
pot cupla nucleotide, iar polimerizarea lor nu
depinde de ATP sau GPT
 CENTROZOMUL - MTOC
MT se dispun radiar n jurul centrosomului - MTOC
(microtubule organizing center)
MTOC - doi centrioli i o mas granulo-filamentoas
pericentriolar
MT cresc plecnd din centrozom - extremitatea lor
negativ ptrunde n masa pericentriolar, dar nu intr
niciodat n contact cu centriolii .
Organizare molecular a MT
MT au un diametru extern uniform, perete dens,
ngroat, de 5 nm i o cavitate axial de 14 nm lrgime
Lungimea de mai muli microni
MT nu se ramific
Peretele are 13 protofilamente, alternan de tubuline
i de 5 nm diametru, paralele i avnd aceeai
polaritate, legate lateral unele de altele
CICLUL CELULAR MTOC FUSUL DE
DIVIZIUNE
 FUNCIILE MICROTUBULILOR

Dinamica mediului extracelular

Deplasarea celulelor
Morfogeneza celulei i meninerea formei celulare
Polaritatea celular
Meninerea structurii membranei celulare
Migrarea vacuolelor de endocitoz
Eliberarea granulelor de secreie
Integritatea aparatului Golgi
Micarea cromozomilor n cursul mitozei i a meiozei
Transportul dirijat al ARN-m n citoplasm
Transportul substanelor i al materialului
intracelular
CITOSCHELETUL IMUNOFLUORESCEN
CITOSCHELETUL