LP.16 Identificarea stafilococilor coagulazo-negativi. Hemocultura n diagnosticul infeciilor.

Obiective:
1. Definirea i clasificarea bacteriemiei.
2. Discutarea speciilor bacteriene izolate frecvent din hemocultur.
3. Discutarea particularitilor hemoculturii
4. Hemocultura: definiie, indicaii, momentul, numrul i volumul prelevrilor, incubarea i urmrirea
hemoculturilor, interpretarea rezultatelor.
5. Descrierea etapelor de identificare a stafilococilor coagulaz-negativi.

1. Bacteriemia = prezena efemer a bacteriilor n snge, urmare a unui pasaj / descrcri unice fr
gravitate particular.
o tranzitorie translocare de la nivelul mucoaselor normal colonizate
- dup intervenii terapeutice / exploratorii invazive la nivelul mucoaselor
o intermitent descrcare de la nivelul unor focare infecioase
o continu torentul circulator scald focarul infecios (endocardit)
2. Specii bacteriene izolate frecvent i cu semnificaie clinic din hemocultur:
Staphylococcus aureus
Enterococi
Bacili gram-negativi fermentativi
Haemophilus influenzae tip b
(Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp.)
Pseudomonas aeruginosa
Streptococi i -hemolitici
Bacterii anaerobe
Pneumococi
3. Particularitile hemoculturii:
- numrul mic de bacterii prezente n snge (efectul bactericid al sngelui) ce volum de snge trebuie
s recoltm?
- descrcrile bacteriene n snge sunt intermitente cte probe trebuie s recoltm? cnd i cum ?
4. Definiia hemoculturii = nsmnarea i incubarea ntr-un mediu de cultur adecvat a unei
probe de snge, n scopul izolrii i identificrii bacteriilor pe care le conine.
Indicaiile hemoculturii:
- bacteriemii cu mai multe posibile etiologii
- sepsis
- endocardit infecioas
- sindrom sugestiv pentru o infecie sistemic cu bacterii strict patogene: salmonele tifoidice,
Leptospira, Brucella
- sindrom febril de origine neprecizat
- stri febrile dup cateterism venos prelungit, dializ peritoneal, etc.
o

Tehnica hemoculturii:
prelevarea hemoculturii:
medii de cultur:
medii lichide cu valoare nutritiv mare, adecvate pentru creterea unei game largi de bacterii
pentru anaerobi: flacoane cu atmosfer anaerob
medii difazice: pant de mediu solid + mediu lichid
medii pentru sistemele automate de urmrire a hemoculturilor

o volumul prelevrilor
la adult - 20 ml per prob
nou-nscui, sugari i copii mici 1-3 ml (concentraia bacteriilor n snge este mai mare dect la
adult)
o numrul prelevrilor
n bacteriemii continue 2 prelevri
n bacteriemii intermitente 3 prelevri n 24 ore, n caz de urgen la interval de 30-60 minute
o momentul prelevrii
naintea instituirii antibioticoterapiei
ct mai aproape de debutul bolii
n momentul apariiei frisoanelor sau n cursul evoluiei ascendente a curbei febrile
n bacteriemii continue (endocardita infecioas) oricnd n cursul zilei
o tehnica prelevrii
cele 2-3 prelevri trebuie fcute din vene diferite i de fiecare dat n cel puin 2 flacoane diferite
decontaminarea zonei de puncie 3 etape: 1) ap i spun, 2) alcool iodat, 3) eter importana
uscrii tegumentului.
pregtirea flacoanelor cu medii de cultur medii prenclzite la 37C ; dezinfecia membranei de
cauciuc
recoltm pn la indicatorul de pe flacon / realizm o diluie a sngelui n mediul de cultur de aprox.
1/10 pentru a reduce efectul bactericid al sngelui
agitarea blnd a flaconului
transportul ct mai rapid la laborator
- incubarea hemoculturilor i urmrirea lor
o un flacon va fi incubat aerob, iar cellalt anaerob
o urmrire timp de 7 zile cu examinare macroscopic, microscopic i prin subcultivare
o endocardite infecioase, pacieni tratai cu antibiotice, suspectarea unor microorganisme pretenioase
nutritiv urmrire timp de 14-21 de zile
o examenul macroscopic - de 2 ori pe zi n primele 3 zile, apoi zilnic, cu aprecierea semnelor creterii:
prezena coloniilor sau a unui depozit pe stratul de hematii
tulburarea mediului
hemoliza
coagularea mediului
prezena bulelor de gaz
colonii pe stratul de geloz al mediilor difazice
o examenul microscopic - frotiuri Gram efectuate din flacoane.
o subcultivarea
hemocultur cu cretere evident subcultivare pe medii adecvate bacteriei observate la examenul
microscopic, n atmosfer adecvat n funcie de flaconul n care a aprut creterea.
se pot efectua teste de identificare pe cultur primar i antibiogram pe cultur primar, ce va trebui
confirmat prin antibiograma standardizat a subculturii.
o identificarea bacteriei izolate
o testarea sensibilitii la antibiotice
- interpretarea rezultatelor argumentarea semnificaiei clinice a bacteriei izolate:
o argumentele bacteriologului:

 izolarea aceleiai bacterii n mai multe flacoane ale unui set de hemocultur sau n hemoculturi
repetate din sedii venoase diferite semnificaie clinic
izolarea unor bacterii diferite din flacoanele hemoculturilor de la acelai pacient contaminare
izolarea a 2 specii bacteriene din aceeai hemocultur de cel puin 2 ori n 24 ore bacteriemie
polimicrobian
o argumentele clinicianului
vrsta i statusul imun al pacientului
particularitile focarului septic primar
5. Etapele de identificare a stafilococilor coagulaz-negativi.
Coci gram pozitivi
Testul catalazei
(+)
Genul Staphylococcus

(-)
Genul Streptococcus

Testul coagulazei
(+)
S. aureus

(-)
Stafilococi coagulaz negativi
Testarea sensibilitii la Novobiocin
S (>16mm)
S.epidermidis

R(<16mm)
S .saprophyticus

n sal se gsesc:
1. 2 seturi de hemoculturi: din ambele flacoane ale unui set am izolat S. epidermidis / al doilea set =
hemocultur negativ
2. set de transfer
3. frotiuri din hemocultura pozitiv (stafilococi)
4. subcultura pe agar-snge, din hemocultura pozitiv
5. subcultura pe agar-nutritiv
6. frotiuri din cultur (stafilococi)
7. H2O2, lame de microscop pentru testul catalazei (pozitiv), beioare, pipet
8. testul coagulazei-negativ (+ martor pozitiv i martor negativ)
9. testul de sensibilitate la novobiocin pozitiv: S. epidermidis (i martor negativ)

10. antibiograma difuzimetric pentru tulpina de testat i pentru S. aureus ATCC: penicilin, oxacilin,
vancomicin, eritromicin, gentamicin.
11. rigle, tabel cu diametrele zonelor de inhibiie