PROPRIETILE GENERALE ALE

PROTEINELOR

Obiectivele:

1. Proprietile fizico-chimice ale proteinelor

2. Masa molecular, metode de deteminare
3. Solubilitatea proteinelor, factorii ce o influieneaz.
4. Proprietile soluiilor proteice (coloizi). Factorii de
stabilizare n
soluie a substanelor coloidale.
5. Starea soluiilor coloidale sol, gel, xerogel. Exemple.
6. Sarcina electric a proteinelor. Punctul i starea
izoelectric.
7. Denaturarea proteinelor, agenii ce provoac
denaturarea. Ce modificri sufer structura proteinei la
denaturare.
8. Coagularea proteinelor. Factorii care previn
coagularea.
9. Metodele de studiere a componenei calitative i
cantitative a proteinelor a) hidroliza b) cromatografie c)
electroforeza d) salifiere e) dializa f) gel-filtrare

Proprieti fizico-chimice
Mas

molecular
Solubilitatea proteinelor
Proprietile amfotere
Sarcina electric a proteinei
Denaturarea

Mas molecular
a proteinelor

1.

2.

3.
4.
5.

este mare: intre 10.000 i 40.000.000 Daltoni.

se determin prin urmtoarele metode:
prin calcul cu ajutorul compoziiei chimice
cunoscute: Ex: Masa mol. a Hb (Fe)=56x100 /
0,34=16470Da
mrimea presiunii osmotice, constanta
ultracentrifugrii (pr. sedimenteaz n raport cu m i
mrimea lor)
Metoda difuziunii luminii (intensitatea ei e
dependent de nr. particulelor i de m ei)
Mrimea difraciei razelor Roentgen
Microscopia electronic

Masa molecular a diferitelor proteine

Solubilitatea proteinelor
Proteinele

- substane cu proprieti

hidrofile
Solubilitatea variaz n limite mari:
- Proteinele globulare prezint grade
diferite de solubilitate,
- cele fibrilare sunt insolubile n ap.

Solubilitatea este deteminat de:

prezena pe suprafaa moleculei proteice a

resturilor AA cu sarcini electrice (COO- ;
NH3+) i de grupri polare (OH-, SH) care
interacioneaz cu dipolul de ap.
de particularitile de organizare (proteinele
globulare se dizolv mai bine fa de cele
fibrilare)

Solubilitatea
este influenat de:

1.
2.

PH-ul mediului, care modific sarcina

electric a P
Temperatur
de proprietile solventului (ex:apa pur,
soluii saline slabe;).
Prezena srurilor metalelor uoare Na Cl,
MgCl2, Na2SO4, care:
la concentraii mici mresc solubilitatea
proteinelor
la concentraii mari scad solubilitatea
proteinelor i ele precipit. Acest proces se
numete salifiere.

Stabilitatea soluiei proteice e determinat de 2

factori:

sarcina

electric determin
respingerea moleculelor proteice
ncrcate pozitiv sau negativ.
membrana apoas care
ndeprteaz moleculele proteice
una fa de alta impedicnd
agregarea i precipitarea lor.

Membrana apoas (apa fixat)

Se

formeaz la interaciunea grupelor

ionogene ce fixeaz dipolii de ap
Grupa COO fixeaz 4 mol de H2O,
NH2- -3; OH i NH cte 2.
Apa ce intr n componena membranei
apoase e numit ap legat

Proprietile apei fixate

1. moleculele ei au o dispunere mai compact,
ce o apropie de un corp solid
2. proprietile ei de solvent sunt reduse
3. nghea la temperaturi joase( -40C)
4. constanta dielectric (fora de atracie dintre
ionii ncrcai opus) este de 2,8, pe cnd la
H2O obinuit este de 8

Proprietile electrochimice

Pr. prezint polielectrolii amfoteri

Sarcina electric este determinat:
1. de componena AA:

1.

dac predomin AA acizi (Glu,Asp) sarcina

sumar a proteinei va fi negativ

2. dac predomin AA bazici (Lys,Arg)

proteinei va fi pozitiv

sarcina sumar a

Sarcina electric este influenat

2. de pH mediului:

n ap aminoacizii se
comport ca vetiriioni
n mediu acid sarcina
sumar va fi pozitiv
n mediu bazic sarcina
sumar va fi negativ

Datorit acestui fapt la trecerea unui

curent electric n soluie, AA vor migra
n mediu acid spre catod(-),
iar n mediu alcalin spre anod(+).

Punct izoelectric

Este o valoare a pH-ului la care suma sarcinilor pozitive

este egal cu suma sarcinilor negative (migrarea proteinelor
sau a AA ntr-un cmp electric este nul)
se noteaz pHi i este diferit pentru fiecare aminoacid sau
protein.
n aceast form se exercit fore de atracie reciproce
ntre gruprile COO- i - NH3+; are loc o aglomerare a
moleculelor din soluie i solubilitatea devine minim.

pHi
Pentrui

AA neutri
se afl ntre pH 56
Pentrui AA bazici
se afl n mediu
bazic
Pentrui AA acizi
se afl n mediu
acid

Sarcina proteinei
La

un pH mai acid ca valoarea pHi proteina

capt o sarcin pozitiv (cation) i
migreaz spre catod(-);
la PH mai mare ca pHi proteina capt o
sarcin negativ i migreaz spre anod(+)

Proprietile coloidale i osmotice ale

proteinelor
Proteinele

sunt substane
macromoleculare,solubile, la dizolvarea
crora se formeaz soluii coloidale
proteice.
Spre deosebire de soluiile coloidale
obinuite, soluiile proteice nu necesit
prezena stabilizatorului. Soluiile
proteice sunt stabile i cu timpul nu se
precipit.

Soluiile proteice posed proprieti caracteristice

soluiilor coloidale:

Proprietile

optice (efectul Tindal)

Vitez de difuzie mic.
Viscozitate mare
Proprieti osmotice
Proprietatea de a forma geluri

Proprietile optice

1.
2.

La iluminarea lateral a soluiei proteice raza de lumin n ea

devine vizibil, formnd conul de lumin- efectul Tindal. Acest
efect de dispersie a luminii se explic prin difracia razelor de
lumin de ctre particulele n soluie.
Capacitatea proteinelor de a dispersa lumina este folosit:
la determinarea cantitativ a proteinelor prin metoda
nefelometric
la studierea microscopic a structurilor celulare.
Soluiile proteice posed absorban n limitele spectrului
ultrafiolet, caracterizat de prezena in ele a resturilor
aminoacizilor fenilalanina, tirozina i triptofan. Fenilalanina i
tirozina are absorbana maxim la lungimea de und 280 nm,
iar triptofanul - 254 nm.

Vitez de difuzie mic.

Difuzie deplasarea spontan a moleculelor

substanei dizolvate datorit gradientului de
concentraie (de la zone cu concentraii mai mare
spre cele cu concentraie sczut).
Viteza de difuzie a proteinelor depinde mai mult
de forma moleculei, dect de masa ei.
Repartizarea intracelular a proteinelor din locul de
sintez (ribosomi) are loc prin difuzie. Deoarece
viteza de difuzie e mic are loc limitarea vitezei
proceselor dependente de funciile proteinelor
difuzabile n sectorul respectiv.

Viscozitate mare

1.
2.

e dependent de masa i forma

moleculelor.
Mrirea c% proteinei conduce i la mrirea
viscozitii soluiei (se mresc forele de
coeziune ntre moleculele proteice).
Proteinele fibrilare sunt mai vscoase
comparativ cu cele globulare.
Viscozitatea e dependent de:
temperatur- t0 - viscozitatea
prezena electroliilor (ex. srurile de Ca2+
mresc viscozitatea prin formarea punilor de
Ca2+)

Proprieti osmotice

proteine fiind macromolecule nu difundeaz prin

membrane semipermiabile, pe cnd micromoleculele trec
prin asemenea membrane. Acest proces e numit dializ.
Incapacitatea de a difuza prin membranele semipermiabile
are ca urmare apariia fenomenului de osmoz (deplasarea
mol. de H2O prin membran n soluia proteic). Deplasarea
apei este limitat de presiunea hidrostatic (presiunea
coloanei de ap) i se numete presiune osmotic
Presiunea osmotic depinde de concentraia molar a
proteinei i de temperatur.
Presiunea osmotic determinat de proteine presiune
oncotic.

Proprietatea de a forma geluri

Proteinele prezint coloizi liofili, i deci pot forma geluri.

Moleculele proteinei interacioneaz ntre ele formnd
reele structurale n interiorul crora se imobilizeaz apa.
Gelatinizarea are loc mai uor n sol. pr. fibrilare
Formarea de gel se observ la coagularea sngelui
(formarea reelei de fibrin).
La nvechirea gelurilor are loc sinerezisa expulzarea
apei, datoprit contraciei mol din reea i eliminarea
apei.

Formarea gelului depinde de :

concentraia soluiei (odat cu creterea

concentraiei);
temperatur (la scderea temperaturii);
concentraia ionilor de hidrogen (n punctul
izoelectric se observ o vitez maxim de formare a
gelului);
prezena electroliilor (Ionul SO42- contribuie n mod
preferat la transformarea solului n gel).

Xerogel

este gelul secat (uscat) - lipsit de ap.

se capt prin secare liofil a soluiilor coloidale
Secarea liofil const n ndeprtarea apei n vid din
soluia coloidal ngheat.
se pstreaz un timp mai ndelungat ceea ce
prezint importan practic n industria de preparare
a medicamentelor de origine proteic.
Ex: deferite proteine (albumina, gama-globulinele i
altele).

Denaturarea proteinelor
este distrugerea nivelurilor superioare de organizare
ale moleculei proteice (secundar, teriar, cuaternar)
n afar de structura primar cu pierderea
proprietile fizico-chimice i biologice ale proteinei.
Agenii denaturani se mpart n fizici i chimici.
1. factorii fizici: temperatura, presiunea, radiaiile
ultraviolete i ionizante.
2. factorii chimici : acizi, bazele, solvenii organici,
detergenii, amidele, srurile metalelor grele.

Trsturile proteinei denaturate:

pierderea activitii biologice

micorarea solubilitii
schimbarea formei i mrimii moleculelor
creterea reactibilitii unor grupe
pierderea capacitii de a se cristaliza

Substanele ce pot mpedica denaturarea

soluii

de glucide
glicerina
a. grai
Pentru a evita denaturarea proteina se
pstreaz la rece, n soluii concentrate de
sruri la un PH anumit

Renaturare (renativare).
- este restabilirea structurii i activitii
biologice a proteinei la nlturarea
agentului denaturant.

Metodele de studiere a componenei calitative i

cantitative a proteinelor
a)

hidroliza (ruperea unei legturin ordinare cu adiia unei

molecule de ap)

b)

cromatografie
c) electroforeza
d) salifiere
e) dializa
f) gel-filtrare

Cromatografie

- este identificarea i separarea aminoacizilor.

Principiul: Metoda este bazat pe diferena
coeficientului de repartiie a aminoacizilor n ap i
solvent organic (butanol), care nu se amestec cu
apa.
Apa se absoarbe pe hrtia cromatografic, constituind
faza staionar, iar solventul organic, migreaz pe ea.
Concomitent cu ultimul se mic i aminoacizii.
Viteza migrrii aminoacizilor pe banda cromatografic
este direct proporional cu gradul de solubilitate n
butanol.

Electroforeza
-

este metoda de separare a particulelor ce

posed sarcin (proteine) ntr-un cmp
electric

Direcia migrrii Pr depinde de pH-ul

mediului; Pr fiind electrolii amfoteri
n mediul acid ele posed sarcin + i
se mic spre C, n mediul bazic
posed sarcin -migreaz spre A.
Separarea Pr din serul sanguin
La pH-ul 8,6 -8,9 n cmpul electric
continuu Pr serului posed sarcina
negativ i vor migra spre A cu o vitez
care depinde n aceeai msur de
mrimea sarcinii electrice i de masa
molecular a particulelor. n rezultat se
separ
Albumine(care agung primele),apoi
globulinele care se separ n fracii:
1, 2; i n final -globulinele.

Salifierea

este metoda de precipitare a P din soluie la

aciunea c %mari de sruri neutre (sulfatul de
amoniu, clorura de sodiu i al.)
este un proces reversibil.
Mecanismul salifierii se reduce la dehidratare
macromoleculelor proteice i nlturarea
sarcinii electrice.
Asupra vitezei de precipitare a proteinelor prin
salifiere acioneaz un ir de factori ca:
hidrofilitatea proteinei, masa molecular,
sarcina electric; de aceea salifiere diferitelor
proteine are loc n concentraii diferite de
sruri.
De exemplu, albuminele se precipit n soluie
saturat de sulfat de amoniu, pe cnd
globulinele - n soluie semisaturat

Dializa proteinelor

Dializa (din grecete dialisis separare) metoda de separare i

purificare a substanelor
macromoleculare i soluiilor
coloidale de substane
micromoleculare cu ajutorul
membranelor semipermeabile
(celofan, pergament etc.).
Prin porii acestor membrane pot
trece numai substanele
micromoleculare, ce au mas
molecular i dimensiuni mici.
Membrana nu poate fi traversat de
proteine i alte macromolecule.

Gel filtrare

Sitele moleculare sunt formate din

granule de gel polizaharidic inert
hidratat. Granulele posed pori de
diferit diametru.
Micromoleculele cu dimensiuni mici
ptrund prin aceti
pori,macromoleculele- nu.
V migrrii micromol. prin coloan
este mai mic dect a macromol. fapt ce permite purificarea
proteinelor de subst
micromoleculare.
Viteza migrrii proteinelor prin
coloan este n funcie de masa i
dimensiunile lor se mic mai
repede cele ce au m i d mai mari.