CUPRINS

Introducere.....................................................................................................................2 I. Sisteme coloidale diverse folosite pentru transportul medicamentelor la int..................3 I.1.Emulsii, nanoemulsii i aerosoli.........................................................................3 I.2. Lipozomi............................................................................................................7 I.3.Niozomii i sfingozomii...................................................................................11 I.4. Sisteme de nanoparticule n distribuia medicamentelor..................................13 II. Metode de preparare a lipozomilor....................................................................................18 II.1.Mecanismul formrii veziculare......................................................................18 II.2.Metode de preparare a lipozomilor..................................................................19 II.3.Producerea industrial a lipozomilor...............................................................27 III. IV. V. Stabilitatea lipozomilor......................................................................................................29 Aplicaiile principale ale lipozomilor................................................................................33 Medicamente pe baz de lipozomi existente pe pia .......................................................35 BIBLIOGRAFIE

INTRODUCERE Scopul tuturor sistemelor de eliberare controlat este ca medicamentul s ajung intact la zona intit, ntr-un mediu care s poat controla administrarea principiului activ pe ci de declanare chimice sau fiziologice. Pentru a realiza acest scop, cercettorii i ndreapt atenia spre lumea micro i nanotehnologiei. n ultimul deceniu, micro i nanosferele, micelele polimerice, materialele de tip hidrogel, nanocapsulele s-au artat a avea efect n mbuntirea intirii specifice a medicamentelor, scderea toxicitii sistemice a acestora, mbuntirea ratei tratamentului i protecia substanelor active mpotriva degradrii biochimice. O categorie aparte de microparticule capabile de a include cantiti mari de principii active, att hidrofile ct i hidrofobe, o constituie lipozomii. Aplicaiile acestora ca sisteme de eliberare controlat este ns limitat de stabilitatea lor redus n medii fiziologice. Exist mai multe metode de a obine sisteme lipozomale folosite n transportul componentelor active. Una dintre acestea este metoda simpl de hidratare, n care lipidele sunt amestecate i dizolvate ntr-un solvent organic. Aceti solveni pot fi ndeprtai prin evaporare sau uscare la vacuum. Filmul lipidic omogenizat este apoi hidratat. n timpul hidratrii lipidelor se formeaz vezicule mari multilamelare, mrimea lor este redus prin omogenizare sau sonicare. A doua metod este emulsionarea. Fosfolipidele sunt nti dizolvate n solveni organici prin agitare viguroas. Solventul organic este apoi ndeprtat sub presiune sczut. Dispersia lipozomal rezultat este crescut prin filtrare sau extrudare. Pentru transportul medicamentelor, lipozomii pot fi exprimai ca o suspensie sau form semisolid similar cremelor gel, loiunilor sau pudrei veziculare. Lipozomii sunt foarte versatili, variaz ca form, ncrcare electric superficial, compoziia lipidic, permeabilitate. Ei pot ncapsula att n faz apoas, ct i lipidic, o multitudine de molecule active farmacologic. Acest fapt a condus la dezvoltarea unor tehnici ingenioase pentru prepararea lipozomilor, cu avantaje practice, i de asemenea a ajutat la mbuntirea sistemelor cu multe aplicaii.

I. SISTEME COLOIDALE DIVERSE FOLOSITE PENTRU TRANSPORTUL MEDICAMENTELOR LA INT

I.1. Emulsii, nanoemulsii i aerosoli

a. Emulsii n 1960 a fost descoperit de Wretlind prima emulsie lipidic (intralipidic) utilizat pentru nutriia parental. Acesta a fost nceputul pentru obinerea de noi sisteme pentru eliberarea controlat a medicamentelor lipofilice, care pot fi ncorporate cu uurin n picturi de ulei. Emulsiile sunt sisteme coloidale n care att mediul de dispersie ct i faza dispers sunt lichide. Cele dou faze sunt lichide nemiscibile sau parial miscibile, una din ele fiind de regul un lichid polar, iar cealalt un lichid nepolar sau cu polaritate mic. Emulsionarea se poate realiza prin metode de dispersie, prin metode mecanice (agitarea), cu ajutorul ultrasunetelor (105 oscilaii/s), pe cale electrostatic (potenial electric de 10 4 V), etc. n toate cazurile se produce o micorare a tensiunii superficiale la interfaa celor dou faze lichide. Emulsiile sunt preparate farmaceutice lichide, mai mult sau mai puin vscoase, constituite dintr-un sistem dispers, format din dou faze lichide nemiscibile, realizat cu ajutorul unor emulgatori i destinate administrrii interne sau externe. Sunt sisteme disperse microeterogene, n care diamentrul picturilor de lichid dispersat, n general, este cuprins ntre 0,5-50 m, deci particulele sunt vizibile la microscopul obinuit. Termenul de emulsie deriv de la verbul latin molgo, ere a mulge i se folosete n domeniul farmaceutic ncepnd din sec. al XVII-lea denumind astfel toate lichidele medicamentoase cu aspect lptos. Fundamentarea tiinific a teoriei emulsionrii i a explicrii fenomenelor care stau la baza formrii emulsiilor a nceput abia n a doua parte a secolului trecut. n anul 1990 Ostwald d prima explicaie tiinific

a formrii emulsiilor, fcnd diferena, ntre emulsiile de tip U/A (ulei dispersat n ap) i cele A/U (ap dispersat n ulei). n practica farmaceutic emulsiile prezint urmtoarele avantaje: - asigur administrarea concomitent, precis a dou lichide nemiscibile; - prin emulsionare se poate masca gustul neplcut al unor medicamente i se poate facilita administrarea unor substane medicamentoase vscoase; - emulsionarea poate s dirijeze absorbia medicamentelor asigurnd o absorbie mai rapid, mai perfect. Clasificarea emulsiilor 1) n funcie de dimensiunea particulelor dispersate i aspectul general al emulsiei exist: - macroemulsii: n care diametrul picturilor dispersate este mai mare de 0,1 m, fiind caracterizate prin instabilitate pronunat i turbiditate evident, - microemulsii: n care diametrul picturilor dispersate este mai mic de 0,1 m, fiind caracterizate prin stabilitate termodinamic mare iar macroscopic sunt clare, transparente. 2) Dup numrul prilor componente pot fi: - emulsii propriu-zise (3 pri principale); - pseudo- sau cvasiemulsii (2 pri principale fr emulgator). La cvasiemulsii contopirea picturilor dispersate este mpiedicat de vscozitatea mare a fazei continue. 3) Dup compoziie pot fi: - emulsii ulei n ap (U/A): uleiul este dispersat n ap sau alt lichid hidrofil. Se ntrebuineaz mai ales intern i pot fi diluate cu ap. Emulsiile de uz intern sunt numai de tip U/A; - emulsii ap n ulei (A/U): un lichid hidrofil este dispersat ntr-un lichid lipofil. Se utilizeaz extern i poate fi diluat cu ulei. - emulsii complexe de tip ap/ulei/ap (ap n ulei) n ap (iaurtul).

4) Dup provenien pot fi: - naturale (laptele, latexul diferitelor plante); - artificiale (emulsii farmaceutice). 5) Dup modul de utilizare: - emulsii utilizate ca atare de ctre consumator (untul, smntna etc); - emulsii utilizate ca ingrediente n alte produse (brnzeturi, produse de patisserie, etc); - emulsii care se destabilizeaz n tipul procesrii pentru a forma structuri noi n produsul finit (ngheata). b. Nanoemulsii Nanoemulsiile sunt emulsii foarte fine, heterogene, ce conin dou lichide nemiscibile, n care un lichid este dispersat sub form de nanopicaturi n alt lichid, cu un diametru mediu al picturii < 100 nm. Ele pot fi preparate prin emulsifierea spontan, precum inversia de faze sau prin utilizarea unui omogenizator cu grad nalt de forfecare, care permite un control mai bun al dimensiunii picturii i un domeniu larg de compoziii. Nanoemulsiile sunt sisteme foarte fragile. Fiind sisteme transparente i uzual foarte fluide, destabilizarea se observa foarte uor, fiind vizibil datorit opacitii i consistentei (devin cremoase). Exist dou surse majore de instabilitate ale acestor sisteme: una cauzat de natura fazei uleioase i alta ce provine de la adugarea polimerilor folosii pentru ngroarea sau gelifierea nanoemulsiei. Nanoemulsiile ulei-in-apa reprezint cele mai importante sisteme de transport al medicamentelor parentale, la care medicamentele lipofile sunt dizolvate n miezul emulsiei. Degradarea picturilor ce conin medicament lipofil are loc foarte repede cnd s-a administrat intravenos, astfel nu se realizeaz o eliberare ntrziat. Dup intrarea n circulaia sangvin, emulsiile grase sunt tratate ca o grsime ce apare natural i prin urmare este hidrolizata rapid de enzimele lipaze.

c. Emulsiile multiple sunt sisteme complexe i instabile termodinamic care combina o emulsie U/A i alta A/U ntr-un singur vehicul. Emulsia multipl a fost utilizat ca mijloc de distribuie a medicamentelor ctre anumite inte din corp fr efecte adverse ale acestor medicamente asupra altor organe i prelungirea eliberrii medicamentelor cu un timp de njumtire biologic scurt. n plus, emulsia multipl a fost recent utilizat ca mediu de reacie pentru sinteza microsferelor polimerice ce conin ncapsulate medicamente, peptide sau proteine prin metoda evaporrii solventului. n procesul de evaporare, medicamentul este dispersat ntr-un solvent nemiscibil n ap ce dizolv polimerul, i apoi aceast emulsie rezultat este emulsifiata ntr-o faz continua apoas. d. Aerosoli. Aerosolii sunt dispersii ale unor picturi de lichide sau particule solide ntr-un gaz. Astfel de sisteme sunt de interes pentru distribuia unor proteine terapeutice i a peptidelor, deoarece pot circula n reeaua sangvin, ncepnd din epiteliul alveolar, fr intensificatori de penetrare i deoarece bolile respiratorii pot fi tratate prin aciunea direct la partea de interes. n pofida stabilitii lor finite, sistemele coloidale disperse de tipul emulsiilor i aerosolilor prezint cteva avantaje ca sisteme de distribuie a medicamentelor. De exemplu, emulsiile ofer ofer oportuniti pentru solubilizarea unor cantiti relative mari de ingrediente active hidrofobe, cu avantaje le asociate, de exemplu: solubilitatea efectiv a medicamentului, viteza de eliberare a medicamentului, stabilitatea chimic i mascarea gustului. Cantitatea de surfactant necesar este n general sczut, i surfactanii sunt relativ netoxici.

I.2. Lipozomi
Lipozomii sunt definii ca fiind vezicule uni- sau multilamelare, cu dimensiuni ce variaz de la 20 nm la civa m, n care un volum de ap este nconjurat n totalitate de o membran lipidic (bistraturi de surfactani lipidici precum: fosfolipide, colesterol, glicolipide). Lipozomii, similar altor tipuri de transportori coloidali de medicamente, pot fi stabilizai steric prin modificarea suprafeei lipozomale cu polietilenoxid (PEO). Aceste tipuri de lipozomi cu suprafaa modificat prezint un interes deosebit n acest context, datorit timpilor de circulaie relative lungi i distribuiilor relative uniforme n esut ale acestor sisteme dup administrare intravenoas. Lipidele sunt predominant fosfolipide care formeaz bistraturi similare celor care se gsesc n biomembrane (fig 1). n majoritatea cazurilor, componenta major este fosfatidilcolina. n funcie de condiiile de procesare i compoziia chimic, lipozomii sunt formai cu unul sau mai multe bistraturi concentrice.

Fig. 1. Structura chimic i reprezentarea schematic a unui fosfolipid (lecitina)

Lipozomii se deosebesc deseori dup numrul lor de lamele i dimensiuni. Se disting veziculele unilamelare mici (SUV), veziculele unilamelare mari (LUV) i veziculele mari multilamelare (MLV) sau veziculele multiveziculare (MVV) (fig. 2). Lipozomii SUV au diameter de la 20 pn la aproximativ 100 nm. Celelalte categorii de lipozomi variaz n dimensiuni de la cteva sute de nanometre pn la civa microni. Grosimea membranei (bistratului lipidic) masoar aproximativ 5-6 nm. 7

Fig. 2. Ilustrarea schematic a lipozomilor de diferite mrimi i numr de lamele. SUV: Vezicule mici unilamelare; LUV: Vezicule largi unilamelare; MLV: Vezicule multilamelare; MVV: Vezicule multiveziculare.

Metode de procesare pentru a forma lipozomi mari Lipozomii mari se formeaz n mod spontan cnd fosfolipidele sunt dispersate n ap cu temperatur mai mare dect temperature lor de tranziie de faz. Prepararea lipozomilor univeziculari mici ncepe de obicei cu cei multilamelari, care sunt transformai n vezicule mici folosind o tehnic de fabricaie corespunztoare, de exemplu omogenizarea la presiune nalt.

Lipozomii au fost dezvoltai cu scopul de a reduce efectele toxice secundare ale medicamentelor ncorporate i pentru creterea eficacitii tratamentului. Ei sunt utilizai pentru distribuia medicamentelor datorit proprietilor lor unice, fiind capabili s transporte ambele categorii de molecule, hidrofobe i hidrofile. Dimensiunea veziculelor joac un rol important n activarea complementar i transparenta sistemului mononuclear fagocit (MPS) al lipozomilor. 8

Pentru distribuia moleculelor ctre poziiile de aciune, bistratul lipidic poate fuziona cu alte bistraturi precum membrana celular, astfel distribuind coninutul din lipozom. Prin obinerea de lipozomi ntr-o soluie de ADN sau medicamente (care n mod normal ar fi incapabile s difuzeze prin membrana), acetia pot fi distribuii prin bistratul lipidic. Utilizarea lipozomilor pentru transformarea sau transfecia ADN-ului ntr-o celul gazd este cunoscut ca lipofection. Administrarea parental a lipozomilor. Lipozomii, similar altor transportori coloidali de medicamente, pot prezenta cteva efecte avantajoase, de exemplu pentru administrarea direct n esuturi asociat cu sistemul reticoloendotelial (ficat, splina i mduva), ca auxiliari n formulrile de vaccinuri. Formulrile pe baz de lipozomi au i numeroase puncte slabe i dificulti n ceea ce privete condiiile de preparare complicate i costisitoare, dificultile ntmpinate la sterilizare, stabilitatea sczut pe timpul depozitarii, limitrile privind capacitatea sczut de solubilizare pentru mai multe medicamente hidrofobe. n administrarea parental, o alt problem observat la utilizarea acestui tipde formulare a fost eliminarea rapid din circuitul sangvin, acest lucru reflectndu-se ntr-o biodisponibilitate sczut de medicament i o toxicitate local n esuturile asociate sistemului reticuloendotelial. n ultimele dou decenii, dezvoltarea aa numiilor lipozomi Stealth (lipozomi care au suprafaa modificat cu derivai de tip polietilenoxid PEO) a rezolvat cel puin cteva dintre aceste probleme, existnd i n prezent o activitate crescut n acest domeniu. Administrarea local a lipozomilor. Distribuia medicamentelor pe cale dermala i local reprezint o alt arie de interes n care lipozomii au fost considerai utili. Problem major n ceea ce privete distribuia local a medicamentului este aceea ca medicamentul poate s nu ajung la poziia de aciune. Pentru a contracara aceast problem, formulrile locale pot s conin aa-numiii intensificatori de penetrare, cum ar fi dimetilsufoxidul, propilenglicolul. Un mod de a obine o penetrare crescut a medicamentului fr utilizarea intensificatorilor de penetrare este utilizarea

microemulsiilor. Dei exista un numr mare de medicamente care pot fi de interes n ceea ce privete distribuia de medicament transdermala lipozomala, de interes particular sunt anestezicele locale, retinoizii i corticosteroizii. Lipozomii n terapia genetic. La amestecarea lipidelor cu ADN, pot fi obinui compleci compaci, n special n cazul lipidelor cationice. Prin utilizarea lipozomilor a fost observat o eficien crescut a distribuiei de ADN. S-a observat c eficiena transformrii depinde de sarcina net a complexului. Totui, aceast dependent nu este direct i diferite linii celulare necesita sarcini variate ale complexului n vederea unei exprimri optime. Exist cteva probleme poteniale legate de distribuia n vivo de gena, prin preluare mediat de sarcina cationic. De exemplu, n cazul administrrii intravenoase, transportorul complex ntlnete proteice serice ncrcate negative, lipoproteine i celule din snge, astfel c apare riscul floculrii i de formare de embolii. n ceea ce privete transportorii administrai pe calea aerului, apr probleme referitoare la surfactantii cu catena lung. n ambele cazuri, exista riscul ca transportorii s nu fie capabili s menin sarcinile lor positive pn cnd ajung la int, ceea ce le deterioreaz performanele. Cu att mai mult, transportorii administrai intravenos sunt scoi din circulaie rapid prin RES. n pofida acestor obstacule, s-a confirmat faptul c ADN-ul administrat prin intermediul complecilor lipozomici cationici este mult mai eficient dect distribuia ADN-ului liber.

10

I.3. Niozomii i sfingozomii

Niozomii i sfingozomii sunt vezicule cu structur similar. Spre deosebire de lipozomi, surfactanii neionici, ex. poligliceril alchil eteri, sau sfingolipidele alctuiesc bistratul niozomilor i sfingozomilor, respectiv: (fig. 3).

Fig. 3. Structura chimic a lipidelor din alctuirea sfingozomilor i niozomilor

Niozomii sunt vezicule de surfactant neionic (NSV-uri), ce se aseamn n constituia lor cu lipozomii i constau din molecule superficial active sintetice (de ex.: alchil polioxietilen eteri). Lanurile hidrocarbonate sturate i legturile eter intramoleculare cresc stabilitatea chimic a niozomilor. NSV-urile se formeaz prin autoasamblarea amfifililor neionici n medii apoase, conducnd la structuri bistrat nchise.

11

Niozomii, similar lipozomilor, pot fi preparai pe aceeai cale, ntr-o varietate de condiii, conducnd la formarea structurilor unilamelare i multilamelare. Niozomii sunt considerai ca fiind superiori lipozomilor, fiind capabili s ncapsuleze ambele categorii de medicamente hidrofile i lipofile i pot servi ca transportori eficieni de medicament. Stabilitatea mare, costul sczut al surfactantilor i problemele minore de stocare au determinat exploatarea acestor vezicule ca o alternativ a veziculele fosfolipidice. O aplicaie important a acestor compui s-a materializat sub form de dispersii veziculare utilizate n domeniul chemoterapiei cancerului, medicamente precum doxorubicin i methotrexat fiind ncapsulate n niozomi. Veziculele sunt n general destinate s fie ncorporate n amestecuri complexe. Multe substane organice sunt mai mult sau mai puin superficial active, de aceea este essential s se studieze proprietile surfactantilor n prepararea veziculelor ncapsularea medicamentelor n niozomi poate scdea toxicitatea, poate crete absorbia medicamentului i de asemenea poate ntrzia ndeprtarea medicamentului din circulaie, datorit eliberrii lente a medicamentului. Cu toate acestea, caracteristicile veziculelor/niozomilor preparai cu surfactanti neionici, precum stabilitatea dispersiei, dimensiunea particulei i microfluiditatea, nu au fost inc ape deplin elucidate, deoarece majoritatea studiilor n acest domeniu au fost anexate pe potenial utilizare a acestor vezicule ca sisteme de distribuie controlat.

12

I.4. Sisteme de nanoparticule n distribuia medicamentelor

Nanosuspensiile particulelor de medicament sunt produse uzual prin dou metode. Prima metod a producerii nanosuspensiei implic spargerea particulelor mai mari la dimensiune nanometric, utiliznd omogenizarea la presiune nalt a suspensiilor de medicament, n prezena unor surfactani precum Tween 80 i Pluronic F68. A doua metod implica cristalizarea, construind nanoparticule de la starea de soluie suprasaturat. Starea solid a nanosuspensiei este mult mai stabil chimic, ofer o mas mai mare de medicament pe volum de ncrcare i este util n special pentru compui terapeutici care necesit dozare riguroas. n etapa de preparare este necesar meninerea medicamentului n stare cristalin n domeniul nanometric, dar nu i n starea dizolvat a medicamentului. Nanoparticulele pot fi subclasate dup compoziia lor n: nanoparticule pe baz de lipid (nanoparticule lipidice solide), de polimer (nanoparticule polimerice), de materiale ceramice (nanoparticule ceramice), nanoparticule de albumin i nanogeluri. a. Nanoparticule lipidice dispersate A. Faze cristal lichid dispersate. Astfel de sisteme transportoare sunt preparate prin omogenizarea la presiune nalt a fazelor cristal lichid cubice, care sunt de asemenea stabile n echilibru n exces de ap. Particulele cu faza cubic dispersat sunt stabilizate mpotriva floculrii i coalescentei, de exemplu prin adugarea unui copolimer ce conine PEO. Datorit dimensiunilor mici care pot fi atinse (~100-300 nm) i a acoperirilor pe baz de PEO, este surprinztor faptul c aceste particule sunt capabile s circule prin sistemul sangvin o perioad considerabil de timp. Astfel de sisteme ofer avantaje poteniale referitoare la biodisponibilitatea crescut a medicamentelor i reducerea efectelor toxice n esuturile asociate RES, precum i capacitatea ambelor substane solubile n ap i ulei de a fi solubilizate n particule eliberate ntr-o manier controlat.

13

B. Nanoparticule lipidice solide (SLN). Aceste sisteme prezint un interes deosebit datorit faptului c permit un grad ridicat de ncrcare cu medicamente hidrofobe, deoarece degradarea hidrolitic este limitat iar viteza de eliberare a medicamentelor poate fi controlat prin dimensiunea particulelor i a compoziiei. Particulele lipidice solide sunt obinute prin cristalizarea i/sau precipitarea n sisteme de emulsie ulei/ap sau prin dispersia obinut prin omogenizare la presiune ridicat la temperature nalte, urmate de rcirea i solidificarea picturilor lipidice. Pentru biodisponibilitatea mbuntit a SLN-urilor sunt necesare msuri de protecie ale moleculelor de medicamente sensibile la diferii factori de mediu (ap, lumina) i cunoaterea caracteristicilor de eliberare controlat. ncapsularea cu succes a medicamentelor a fost realizat nu numai n cazul moleculelor lipofile, ci i n cazul moleculelor hidrofile. SLN-urile prezint ns i cteva dezavantaje ce includ: creterea i agregarea particulelor, tendina de gelifiere neprevzut, dinamici neateptate n ceea ce privete tranziiile polimorfe, eliberarea brusc a medicamentelor i capacitatea de ncorporare relative sczut datorit structurii cristalin a lipidului solid. NLC i LDC. La sfritul anilor 2000 au fost introdui modificatori ai SLNurilor, aa-numiii transportori lipidici nanostructurati (NLC) i nanoparticule conjugate cu medicament lipidic (LDC). Aceste sisteme de transport previn limitrile obeservate n cazul SLN-urilor convenionale. Lipidele lichide au capacitate de solubilizare a medicamentelor mult mai mare dect lipidele solide. n accord cu acest model, nanoparticulele NLC ofer o capacitate de ncorporare ridicat i un control al eliberrii medicamentului. S-a demonstrat c moleculele de trigliceride cu lan mediu (MCT) pot nlocui cu succes moleculele convenionale de behenat de gliceril, GB n reeaua cristalin ntr-o distribuie ntmpltoare, pn la o ncrcare de MCT de 16% (procente de mas din lipidul total). Alte ncercri au artat c grade de incaracare ridicate de ulei (pn la 38%) pot fi ncorporate sub form de clusteri de MCT n interiorul matricei solide, particulele solide fiind descries a fi sferice, forma care le confer un volum maxim pentru incorporare de

14

ulei sau medicament. n pofida eforturilor de cercetare susinute, la nivelul anului 2004 nici una din cele dou categorii de nanoparticule (SLN i NLC) nu a fost industrializata nc pentru utilizare clinic. Utilizarea SLN-urilor pentru incorporare medicamentelor lipofile este o aplicaie arhicunoscut. Datorit efectelor de distribuie din timpul procesului de obinere, pot fi ncorporate cu succes n matricea lipidica solid numai medicamente care sunt eficiente n concentraii mici. Cu scopul de a elimina aceasta limitare, au fost dezvoltate aa-numitele nanoparticule de medicamente lipidice conjugate (lipid drug conjugate nanoparticles LDC) care prezint capacitate de nglobare a medicamentului pn la 33%. b. Nanoparticule polimerice Nanoparticulele polimerice se obin din polimeri biodegradabili ai cror produi de degradare sunt netoxici i uor de resorbit. Avantajul acestor particule l constituie intirea specific i eliberarea controlat a medicamentelor ncorporate. Nanoparticulele polimerice dispersate preparate din astfel de polimeri sunt interesante ca transportori pentru distribuia oral a medicamentelor convenionale, antigeni vaccinuri sau enzime, dar n general pentru acele medicamente care nu sunt stabile n stomac, pentru vaccinri orale i pentru formulri unde este dorit biadeziunea. Componentele active pot fi dizolvate sau captate n matricea polimeric sau pot fi absorbite pe suprafaa particulelor. n funcie de polimer, de interaciunea dintre medicament i polimer i metoda de obinere, eliberarea medicamentului este diferit. Ambele ci de administrare, oral i parentala, a sistemelor transportor coloidale sunt dependente de natura transportorului. n ultimul caz, preluarea reticuloendoteliala (RES) a transportorilor coloidali de medicament depinde de o serie de factori, cei mai importani find proprietile superficial ale transportorului. Aceasta este asociat cu absorbia anumitor proteine serice (opsonina) la suprafa trasportorului, care iniiaz diferite rspunsuri biologice. Polimerii adecvai pentru prepararea nanoparticulelor includ: derivai celulozici, poli (alchilciano acrilai), poli (metiliden malonat), poli (ortoesteri), poli (anhidride),

15

acid poli (lactic), acid poliglicolic i copolimerii lor. Obligatoriu trebuie luate n consideraie toxicitatea substanelor, iniiatorii de radicali sau reziduuri de solvent. Nanoparticulele formate din polimeri de tipul acidului poli (lactic)-PLA, acidului poli (glycolic)-PGA i amestecuri ale acestora sunt cele mai mult utilizate, deoarece sunt biocompatibile i aprobate de Federaia Internaional de Administrare a Medicamentelor pentru administrare uman. PLA i PGA se degradeaz prin hidroliza la metabolite de tip acid lactic i acid glicolic, care sunt eliminai din organism prin intermediul cilor naturale. Pot aprea de asemenea i cteva probleme legate de erodarea polimerului, de difuzia medicamentului prin matrices au de desorbia de pe suprafaa. Citotoxicitatea polimerilor dup introducerea acestora n celule este aspectul crucial i adesea cel mai discutat, alturi de producerea problematic la scar industrial a nanoparticulelor polimerice. Nanocapsule polimerice. Nanocapsulele ce conin ulei sunt diferite de nanoemulsiile ulei-in-apa n ceea ce privete furnizarea unei bariere de natura polimeric, poziionat ntre miez i mediul nconjurtor. Adesea, pentru prepararea nanocapsulelor sunt aplicate metodele de nlocuire a solventului i polimerizarea interfaciala. n acord cu caracterul lipof al coninutului din capsula, pot fi dizolvate medicamente lipofile i hidrofile. n plus, suprafaa particulei polimerice poate servi drept compartiment unde medicamentele hidrofile pot fi adsorbite. c. Nanoparticule ceramice Nanoparticulele preparate pe baz de materiale ceramice precum silice, alumina i oxidul de titan prezint cteva avantaje pe lng nanoparticulele polimerice. n primul rnd prepararea lor este simpl, similar cunoscutului proces sol-gel, i necesit condiii de temperatur ambiental. n al doilea rnd, materialele ceramice utilizate sunt biocompatibile i suprafeele lor pot fi uor modificate cu diferite grupri funcionale pentru ataarea unui ligand. n al treilea rnd, particulele sunt inerte i pot fi preparate la mrimea i forma dorit. Ele nu sufer modificri n ceea ce privete fenomenele de

16

gonflare i de modificare a porozitii odat cu varierea pH-ului i nu sunt sensibile la atacul microbian. d. Nanoparticule de albumin. Nanoparticulele de albumina au fost investigate pentru distribuia ADN-ului, deoarece complexul ADN-albumina poate evita distrugerea anticorpilor de ctre celulele immune i preluarea prin MPS. Nanoparticulele de ADNpolietilenimina (PEI)-albumina sunt mai puin toxice dect complecii ADN-PEI individuali chiar i n concentraii ridicate.

17

II. METODE DE PREPARARE A LIPOZOMILOR

II.1. Mecanismul formrii veziculare Lipozomii (veziculele lipidice) se formeaz atunci cnd filme subiri lipidice sau multistraturi lipidice sunt hidratate i stive de bistraturi cristaline lichide se fluidizeaz i se umfl. Foile hidratate lipidice se detaeaz n timpul agitrii i se autonchid formnd vezicule mari, multilamelare ( (LMV) care previn interacia apei cu miezul hidrocarbonat al bistratului la margini. Odata aceste particule fiind formate, reducerea dimensiunii lor necesit energie extern sub form de energie sonic (sonicare) sau energie mecanic (extrudare).

Fig. 4 Mecanismul formrii veziculare

18

II.2. Metode de preparare a lipozomilor Caracteristicile formulrilor lipidice pot varia n funcie de compoziie (specii lipidice cationice, anionice, neutre), totui, aceeai metod de preparare poate fi folosit pentru toate veziculele lipidice indiferent de compoziie. Elementele generale de procedur implic prepararea lipidelor pentru hidratare, hidratarea cu agitare, i redimensionarea la o distribuie omogen de vezicule.
a.

Pregtirea lipidelor pentru hidratare:

Cnd se prepar lipozomi cu compoziie lipidic mixt, lipidele trebuie mai nti dizolvate i amestecate ntr-un solvent organic ca sa asigure omogenitatea amestecului de lipide. n mod uzual, acest proces este realizat folosind cloroform sau amestecuri cloroform: metanol. Intenia este de a obine o soluie lipidic limpede penru amestecarea complet a lipidelor. Soluiile lipidice tipice se prepar cu 10-20 mg lipid/ mL de solvent organic, dei concentraii mai nalte pot fi folosite dac solubilitatea lipidului i amestecul sunt acceptabile. Odat ce lipidele sunt amestecate temeinic cu solventul organic, solventul se ndeprteaz pentru a obine un film lipidic. Pentru volume mici de solvent organic (<1mL), solventul poate fi evaporat folosind un curent uscat de azot sau argon ntr-o hot. Pentru volume mai mari, solventul organic ar trebui ndeprtat prin centrifugare obinnd un film lipidic subire pe pereii cuvelor cu fund rotund. Filmul lipidic este uscat temeinic pentru a ndeprta solventul organic rezidual prin plasarea flaconului sau cuvelor la un rotavapor peste noapte. Dac folosirea cloroformului este controversat, o alternativ este dizolvarea lipidului sau lipidelor n t-butanol sau ciclohexan. Soluia lipidic este transferat n recipiente i ngheat prin plasarea acestora pe un bloc de ghea uscat sau agitarea recipientului ntr-o baie uscat de aceton ngheat sau alcool (etanol sau metanol). Trebuie avut grij n timpul procedeului cu baia ca recipientul s poat suporta schimbri brute de temperatur fr s crape. Dup nghearea complet, stratul lipidic ngheat este plasat la o pomp de vid i liofilizat pn la uscare (1-3 zile n funcie de volum).

19

Grosimea stratului lipidic nu ar trebui s fie mai mare dect diametrul recipientului folosit pentru liofilizare. Filmele sau straturile uscate lipidice pot fi ndeprtate de la pompa de vid, recipientul nchis strns i sigilat, i depozitat ngheat pn cnd este gata de hidratare.

Fig. 5 Etapele procesului de pregtire a lipidelor pentru hidratare

20

b.

Hidratarea filmului/ stratului lipidic:

Hidratarea filmului/ stratului lipidic uscat se realizeaz simplu prin adugarea unui mediu apos n recipientul cu lipidul uscat i agitare. Temperatura mediului de hidratare ar trebui s fie superioar temperaturii de tranziie gel lichid (Tc sau Tm) a lipidelor cu cel mai nalt Tc nainte de adugarea lipidelor uscate. Dup adugarea mediului de hidratare, suspensia lipidic ar trebui meninut deasupra Tc n timpul perioadei de hidratare. Pentru lipide cu tranziie nalt, acest lucru se realizeaz uor prin transferarea suspensiei lipidice ntr-un flask cu fund rotund i plasarea acestuia pe un rotavapor fr vid. nvrtirea flaskului cu fund rotund n baie de ap fierbinte men inut la o temperatur peste Tc a suspensiei lipidice permite lipidului s se hidrateze n faza lui fluid cu o agitare adecvat. Timpul de hidratare poate varia uor n funcie de specia i structura lipidului, totui, este foarte recomandat un timp de hidratare de 1 or cu agitare viguroas, amestecare sau micare. De asemenea, se crede c permind suspensiei veziculare s stea peste noapte (mbtrnire) nainte de micorarea dimensiunilor face procesul de dimensionare mai uor i mbuntete omogenitatea distribuiei dimensionate. Procesul de mbtrnire nu este recomandat pentru lipidele cu tranziie nalt deoarece hidroliza lipidelor crete cu temperatura ridicat. Mediul de hidratare este n general determinat de aplicaia veziculelor lipidice. Mediul de hidratare potrivit include ap distilat, soluii tampon, saline, i neelectrolii, precum soluiile zaharoase. Osmolalitatea fiziologic (290 mOsm/kg) este recomandat pentru aplicaiile in vivo. Soluiile general acceptate care ntrunesc aceast condiie sunt 0.9% sare, 5% dextroz, i 10% sucroz. n timpul hidratrii, unele lipide formeaz complexe unice cu structura lor. Lipidele cu ncrcare electric nalt s-a observat c formeaz un gel vscos cnd sunt hidratate cu soluii cu trie ionic slab. Problema poate fi evitat prin adugarea de sare sau prin micrarea dimensiunilor suspensiei lipidice. Lipidele slab hidratate, cum este fosfatidiletanolamina, au tendina de a forma agregate dup hidratare. Veziculele lipidice care conin mai mult de 60 mol% fosfatidiletanolamin formeaz particule care prezint un strat subire de hidratare n jurul

21

veziculei. Pe msur ce particulele se apropie unele de altele nu exist repulsie de hidratare care s le fac s se resping i cele dou membrane cad ntr-un minim de energie n care ader i formeaz agregate. Agregatele se separ de soluie sub form de flocoane mari care se disperseaz la agitare, dar se refac n repaus.

Fig. 6 Etapele procesului de hidratare

Produsul hidratrii este o vezicul mare, multilamelar (LMV), analoag n structur unei cepe, n care fiecare bistrat lipidic este separat de un strat apos. Distan a dintre bistraturile lipidice este dictat de compoziie cu straturi polihidratate mai apropiate dect straturile cu ncrcare electric nalt care se separ datorit repulsiilor electrostatice. Odat ce a fost produs o suspensie stabil, hidratat de vezicule LMV, particulele pot fi micorate printr-o varietate de tehnici, incluznd sonicarea sau extruzia.

22

c. Dimensionarea suspensiei lipidice i. Sonicarea: Dezagregarea suspensiei de LMV folosind energie sonic (sonicare) produce n general vezicule mici, unilamelare (SUV) cu diametre de ordinul 15-50 nm. Cea mai obinuit aparatur pentru prepararea particulelor sonicate sunt bi i sonicatoare tip sond. Sonicatoarele de tip ceac, dei mai rar folosite, au produs cu succes SUV. Sonicatoarele tip sond transmit energie nalt suspensiei lipidice dar sufer de supranclzire, cauznd degradarea suspensiei lipidice. Sonicatoarele mai au, de asemenea, tendina s elibereze particule de titan n suspensia lipidic care trebuie ndeprtate prin centrifugare nainte de folosire. Din aceste motive, sonicatoarele cu baie sunt aparatele cel mai nelept de folosit pentru obinerea de SUV. Sonicarea unei dispersii LMV se realizeaz prin plasarea unui tub test coninnd suspensia ntr-un sonicator tip baie (sau plasnd al tip de sonicator n tubul test) i sonicnd pentru 5-10 minute peste temperatura Tc a lipidului. Suspensia lipidic ar trebui s se limpezeasc conducnd la o soluie uor opalescent. Opalescena se datoreaz mprtierii luminii induse de particulele mari reziduale rmase n suspensie. Mrimea principal i distribuia sunt influenate de compoziie i concentraie, temperatur, timp de sonicare i putere, volum i frecvena sonicatorului. Cum sunt aproape imposibil de reprodus condiiile sonicrii, variaii de dimensiuni ntre loturi diferite nu sunt neobinuite. De asemenea, datorit gradului nalt de curbare al acestor membrane, SUV sunt instabile prin natere i i vor fuziona spontan pentru a forma vezicule mai mari daca sunt depozitate sub temperatura lor de tranziie de faz.

Fig. 7 - Ultrasonicator

23

ii. Extruzia: Extruzia lipidelor este o tehnic n care o suspensie lipidic este forat s treac printr-un filtru policarbonat cu dimensiuni definite ale porilor pentru a obine particule cu un diametru apropiat de dimensiunea porilor filtrului utilizat. nainte de extruzia prin filtrul cu mrimea final a porilor, suspensiile LMV sunt dezagregate fie prin cteva cicluri de ngheare dezgheare, fie prin prefiltrarea suspensiei printr-un filtru cu marime mai mare a porilor (de obicei 0,2-1 m). Aceast metod ajut la prevenirea vicierii membranelor i mbuntete omogenitatea distribuiei mrimilor particulelor a suspensiei finale. Ca toate procedurile de micorare a dispersiilor LMV, extruzia ar trebui fcut la o temperatur peste Tc a lipidului. ncercrile de extruzie sub Tc nu vor avea succes deoarece membrana are tendina de a forma membrane rigide care nu pot trece prin pori. Extruzia prin filtre cu pori de 100 nm duce de obicei la vezicule mari, unilamelare (LUV) cu un diametru general de 120-140 nm. Dimensiunea general a particulelor depinde de asemenea de compoziia lipidic i este destul de reproductibil de la lot la lot.

Fig. 8 Graficul extruziei lipozomilor prin filtru cu pori de 100 nm

24

Calculul numrului de molecule lipidice per lipozom , dac dimensiunile i lamelaritatea lipozomilor se cunosc: O cale de a msura lamelaritatea lipozomilor este spectroscopia 31P-NMR. Putem de asemenea presupune c lipozomii de 100 nm sunt unilamelari. Ecuaia de mai jos este folosit pentru a calcula numrul de molecule lipidice ntr-un lipozom unilamelar.

unde

este aria suprafeei unuia din monostraturile lipozomului (d este diametrul lipozomului) h este grosimea bistratului i este de aproximativ 5 nm a este suprafaa gruprilor de capete lipidice. Suprafaa gruprilor de capete lipidice la fosfatidil colin este de cca 0,71 nm ptrai. n ecuaia de mai sus sunt adunate mpreun ariile suprafeelor ambelor monostraturi ale lipozomului multilamelar. Apoi suprafaa total a lipidului este mprit la suprafaa gruprii cap a unei molecule de lipid.

25

Pentru un lipozom unilamelar compus din fosfatidilcolin, ecuaia de mai sus se simplific la:

De exemplu, nr de lipide ntr-un lipozom cu mrimea de 100 nm este cca 80047. Dac se cunoate concentraia lipidelor din soluie, atunci se poate uor calcula nr total de particule per mL, dup urmtoarea formul:

unde N(a) este numrul lui Avogadro i este egal 6.023 *1023, M (lipid) este concentraia molar a lipidului, i N(tot) este numrul total de lipide per lipozom. De exemplu, nr de lipozomi, dac presupunem ca sunt unilamelari i au dimensiuni de 100 nm, ntr-un mL de soluie care are o concentraie lipidic de 3 M este de 22,6 bilioane.

26

II.3. Producerea industrial a lipozomilor Principalele probleme cu care se confrunt formulatorii i supervizorii produciei sunt prezena reziduurilor de solveni organici, stabilitatea fizic i chimic, controlul pirogenitii, sterilitatea, dimensiunile i distribuia mrimilor i reproductibilitatea de la lot la lot Lipozomii pentru uz parenteral trebuie sa fie sterili i lipsii de pirogeni. Pentru experimentele pe animale, o sterilitate adecvat poate fi obinut prin trecerea lipozomilor printr-o membran filtranta Millipore cu dimensiunea porilor de cca 400 nm. Pentru uzul uman, precauiile pentru sterilitate trebuie luate pe parcursul ntregului proces de preparare, adic: materialele de lucru trebuie s fie sterile i lipsite de pirogeni prepararea n sistem steril: zonele de lucru trebuie s fie echipate cu hote folosirea de containere sterile.

n flux laminar Unele chestiuni legate de fosfolipide necesit atenie. Lipozomii bazai pe fosfolipidele din glbenuul crud de ou nu sunt foarte stabili. Costul lipidelor purificate este foarte ridicat. Mai nou, au fost preparai lipozomi folosind lipide sintetice i polimerizabile. Lipozomii preparai din lipide polimerizabile sunt expui la lumin UV. Procesul de polimerizare are loc n bistrat. Unele preparate lipozomale au n mod uzual stabilitate mai mare de depozitare. (i) Dializa cu detergeni

27

Avantajele metodei de dializ a detergenilor sunt reproductibilitatea excelent i producerea de populaii de lipozomi omogene ca dimensiuni. Principalul dezavantaj este retenia urmelor de detergeni n interiorul lipozomilor. O instalaie pilot denumit LIPOPREPR II-CIS este disponibil n Diachema, Elveia. Capacitatea de producie la concentraii lipidice ridicate (80 mg/ml) este de 30 ml lipozomi/ minut. Diachema, AG, Switzerland. The production capacity at higher lipid concentration (80 mg/ml) is 30 ml liposomes/minute. Dar cnd concentraia lipidic este de 10-20 mg/ml, 100 mg/ml pn la mai muli litri de lipozomi pot fi produi. n SUA, LIPOPREPR este comercializat de compania Dianorm-Geraete. (ii) Microfluidizarea O metod bazat pe microfluidizare/ microemulsificare/ omogenizare a fost dezvoltat pentru prepararea lipozomilor. MICROFLUIDIZERR este disponibil de la compania Microludics Corporation, Massachusetts, SUA. O instalaie bazat pe aceast tehnologie poate produce cca 20 galoane/ minut de lipozomi cu dimensiuni de 50-200 nm. Se poate ajunge la un randament al ncapsulrii de 75%. (iii) Dispersiile apoase de lipozomi au adesea tendina de agregare i fuzionare i sunt susceptibile de hidroliz i/ sau oxidare. Au fost propuse dou soluii n acest sens: (iiia) Prolipozomi n prolipozomi, lipidul i medicamentul sunt mbrcate ntr-un purttor solubil , formnd un material granular care prin hidratare formeaz o suspensie lipozomal izotonic. Aceast abordare poate oferi o oportunitate de fabricare pe scar larg a lipozomilor coninnd medicamente lipofile particulare. (iiib) Liofilizare nghearea-uscarea (liofilizarea) implic ndeprtarea apei din produse n stare congelat la presiuni extrem de sczute. Procesul este n general folosit pentru uscarea produselor termolabile i care ar fi distruse prin uscarea la cldur. Tehnica are un mare potenial ca metod penru rezolvarea problemelor de stabilitate n timp lung cu referire la stabilitatea lipozomilor. n timpul procesului de congelare i uscare i recontituirii pot

28

avea loc scurgeri de materiale nglobate. Recent, s-a constatat c liofilizarea lipozomilor n prezena unor cantiti adecvate de trehaloz (un carbohidrat care se gsete n mari concentraii n organism) reine aproape 100% din coninutul original. Trehaloza este un excelent crioprotector pentru lipozomi. Echipamente de liofilizare pe scale de la mici laboratoare pn la uniti industriale mari sunt disponibile pe piaa farmaceutic.

III. STABILITATEA LIPOZOMILOR

Stabilitatea lipozomilor este o chestiune complex. Exist trei tipuri de stabilitate a lipozomilor: 1) Stabilitate fizic; 2) Stabilitate chimic; 3) Stabilitate biologic. Stabilitatea fizic indic constana dimensiunilor i raporului lipidelor la componenta activ precum medicamente, molecule ADN etc. Lipozomii cationici pot fi stabili la 4C (frigider) pentru o perioad ndelungat de timp dac sunt sterilizai corespunztor. Instabilitatea chimic se refer n principal la hidroliza i oxidarea lipidelor. Hidroliza detaeaz lanurile hidrofobice de legturile esterice. Oxidarea este mai probabil datorat prezenei lanurilor nesaturate. Adugarea de antioxidani formulei lipozomale poate proteja n general lipidele de oxidare. Stabilitatea biologic a lipozomilor este limitat. Lipozomii cationici n plasm sunt dispui agregrii i scurgerilor. Lipoproteinele de nalt densitate (HDL) sunt responsabile de destabilizarea lipozomilor datorit interaciei acestora cu celule fagocitare circulante precum monocitele. Destabilizarea lipozomilor se datoreaz schimburilor de lipide ntre lipozomi i HDL. Aplicarea industrial a lipozomilor (ex. comercializarea formulrilor de medicamente lipozomale) cere studii extensive de stabilitate pe raft. Expirarea perioadei de valabilitate a unui produs medicamentos este definit ca fiind timpul la care media

29

caracteristicilor medicamentului (ex. potena) rmne la nite specificaii aprobate dup fabricaie.

Sunt mai multe modaliti de a crete stabilitatea chimic i fizic a lipozomilor: 1. O cale este de a evita folosirea fosfolipidelor nesaturate, care formeaz obiectul proceselor de peroxidare. Totui, acest lucru nu este ntotdeauna posibil i folosirea lipidelor nesaturate poate fi necesar unor formulri de lipozomi. Dac sunt folosite lipide nesaturate, atunci este important s se procedeze n urmtoarele feluri: * * * S se menin un mediu lipsit de oxigen n timpul procesului de fabricaie i S se adauge tocoferoli sau ali antioxidani activi de membrane; depozitrii; S se limiteze expunerea la lumin n timpul procesului de fabricaie i depozitrii. 2. Depozitarea lipozomilor la 4C. 3. Niciodat nu se congeleaz lipozomii. 4. Meninerea cu ajutorul soluiilor tampon a pH-ului lipozomilor 6-6.5 n timpul fabricrii i depozitrii pentru a evita hidroliza catalitic att acid ct i bazic. 5. Majoritatea tampoanelor sporesc hidroliza, trebuie asigurat concentraia minim de tampon suficient pentru meninerea pH. 6. Adugarea de acid etilendiaminotetraacetic (EDTA) care s asigure absena cationilor multivaleni. Prezena acestora poate cauza agregri i destabilizri ale bistratului. 7. Controlul temperaturii sau alegerea de lipide astfel nct sa nu se ntmple tranziii de faz lipidice n timpul depozitrii. 8. Monitorizarea stadiului de agregare al lipozomilor i ajustarea fazei apoase sau compoziiei lipidice corespunztor.

30

9. Evitarea folosirii compoziiilor lipidice care fuzioneaz spontan sau i sporesc activitatea fuzional dup acumularea de produi de hidroliz 10. ncorporarea de colesterol n lipozomi poate reduce efectele destabilizatoare ale produilor de hidroliz. Prezena colesterolului exercit o profund influen a proprietilor bistratului lipidic al lipozomilor. Se tie c adugarea de colesterol la un bistrat n faz fluid, n principal din lipide nesaturate, scade permeabilitatea lui la ap. Un lipozom alctuit 100% din lipide nesaturate n faz fluid nu poate menine coninutul ncapsulat i medicamentele ncapsulate solubile n ap vor iei n timp, fenomen pentru prevenirea cruia este necesar adugarea de colesterol. Moleculele de colesterol umplu spaiile libere care se formeaz n lanurile de lipide nesaturate i scad flexibilitatea lanurilor lipidice nconjurtoare. Aceast interacie crete de asemenea rigiditatea mecanic a bistratului fluid i scade difuzia lateral a acestuia. n opoziie, adugarea de colesterol la bistraturi n faz de gel, alctuite n principal din lipide saturate, ntrerupe mpachetrile locale i crete coeficientul de difuzie. Lipozomii alctuii 100% din lipide saturate sunt rezisteni la scurgeri n absena colesterolului. Unul din motivele principale de adugare a colesterolului la lipozomii formai din lipide saturate este scderea temperaturii de tranziie de faz. Efectul temperaturii de tranziie de faz la formularea lipozomilor Proprietile fizico-chimice ale lipozomilor depind de muli factori precum tria ionic, pH i temperatur. Lipozomii obinuii au permeabilitate slab pentru moleculele ncapsulate, dac molecula nu este permeabil prin membran. Permeabilitatea membranei se schimb cu temperatura. Una din cele mai importante proprieti a bistratului lipidic este relativa fluiditate i mobilitatea individual a fiecrei molecule de lipid n interiorul bistratului. Mobilitatea lipidelor se schimb cu temperatura. La o temperatur dat un bistrat lipidic poate exista n faz solid (gel) sau lichid. n ambele faze moleculele lipidice sunt constrnse la cele dou planuri dimensionale ale membranei, dar n faz lichid moleculele lipidice pot difuza mult mai uor n cadrul

31

planului. La o temperatur dat, o molecul lipidic i va schimba poziia cu moleculele lipidice vecine de milioane de ori pe secund, iar procesul este total ntmpltor. Temperatura de tranziie de faz a bistraturilor de fosfolipide i lipide depinde de urmtorii factori: 1) Lungimea lanului acil n lipid 2) Gradul de saturare al lanului hidrocarbonat n lipid 3) Tria ionic a mediului de suspensie 4) Tipul gruprii capului polar

Comportarea de faz a bistratului lipidic este determinat de interaciile Van der Waals ntre moleculele adiacente de lipid, interacii guvernate n principal de doi factori: 1) Lungimea lanului acil n lipid 2) mpachetarea lipidelor n bistrat Lipidele cu cozi mai lungi au mai mult suprafa de interacie, ceea ce va crete tria interacei i va scdea consecvent mobilitatea lipidului. De aceea la o temperatur dat un lipid cu coad scurt va fi mai fluid dect un lipid identic cu coad lung. Gradul de nesaturare al cozilor lipidice poate influena mpachetarea lipidelor n bistrat. O dubl legtur nesaturat poate produce o deformare a lanului alcanic, care va crea spaiu liber n plus ntre bistraturi, ceea ce va permite o mai mare flexibilitate a lanurilor adiacente. Lipidele nesaturate au o temperatur de tranziie de faz semnificativ mai sczut comparativ cu lipidele saturate. Lipozomii formai exclusiv din fosfolipide (n absena colesterolului) nu se vor forma la temperaturi mai sczute dect temperatura de tranziie de faz a fosfolipidului. Dac molecula ncapsulat este sensibil la temperatur (ex. o protein), nu pot fi folosite lipide pure cu lanuri saturate lungi deoarece acestea trebuie nclzite la temperaturi nalte pe care proteinele nu le tolereaz. Majoritatea bistraturilor lipidice nu sunt alctuite dintr-un singur tip de lipid. n natur, membranele lipidice sunt de obicei un amestec complex de diverse molecule lipidice. Dac unele lipide din amestec sunt lichide la o anumit temperatur, n timp ce

32

altele sunt n faza de gel, atunci cele dou faze vor exista n popula ii separate spa ial. Acest fenomen se numete "separare de faz".

IV. APLICAIILE PRINCIPALE ALE LIPOZOMILOR

Lipozomii sunt folosii n domenii variate, cum ar fi tratarea tumorilor, vaccinuri i tratamente cosmetice. Lipozomii care sunt folosii ca sisteme de livrare, pot ncapsula hidrolitic substane n miez. Substane amfifile i lipofile, de ex filtre UV liposolubile, pot fi incorporate n bistratul lipidic. Lipozomii cu ncrctur, precum i far ncarctur, simpli, sunt folosii n cosmetic. Efectul principal al lipozomilor simpli este o cretere a umiditii pielii., Beneficiile folosirii lipozomilor n produsele de ngrijire a pielii Lipozomii favorizeaz frecvent dispoziia ingredientelor active ncapsulate n epiderm i derm, n timp ce rata de ptrundere scade. Aceasta ajut la fixarea ingredientelor active la straturile superficiale ale pielii, aa cum se dorete la produsele cosmetice. Simultan, splarea lor poate fi ntrziat., astfel inct, de exemplu, produsele apoase de ngrijire i protecie colar care conin lipozomi - filtre UV ncapsulate sunt rezistente la ap. Mrimea, compoziia i numrul lipozomilor folosii determin succesul acestora n produsele cosmetice Totui, efectele pozitive menionate depend de compoziia, dimensiunile i cantitatea de lipozomi, astfel c nu se justific concluziile generale. Ct vreme este vorba de lipozomi goi, efectele positive nu sunt puternic legate de natura vezicular.

33

Prezena lipidelor potrivite (fosfolipide, sfingolipide) este suficient pentru eficacitate cosmetic. Compatibilitatea cu pielea a fosfolipidelor aplicate n present este foarte nalt. Nu exist restricii privind utilizarea lor n industria alimentar i cosmetic, nici n UE, nici prin reglementrile Administraiei Alimentelor i Medicamentelor din US, lecitinele sunt n general acceptate ca fiind sigure. Totui, este cunoscut faptul c doze nalte de fosfolipide care sunt aplicate pe o perioad mai mare de timp poate duce la irita ii pe pielea uscat i normal. Asfel, datorit unui mecanism de feedback biochemic, aplicarea pe termen lung a fosfolipidelor poate influena metabolismul lipidic dermal. Una din principalele consecine ale descoperirii iniiale a lipozomilor de ctre Bengham este folosirea lor ca vectori de livrare selectiv a componentelor active la esuturile specifice. Bazat pe proprietile lor unice, datorate lipidelor amfifilice, lipozomii pot fi administrai fr s produc efecte secundare semnificative. Sistemele de terapie convenional a cancerului au artat o eficien sczut n livrarea componentelor bioactive, astfel c este important cercetarea sistemelor de livrare care au ca efecte o eficien crescut i limiteaz toxicitatea diverilor ageni chemoterapeutici. n majoritatea cazurilor, folosirea lipozomilor permite eliminarea i reducerea semnificativ a multor dezavantaje, cum este toxicitatea, i ofer multe beneficii, precum : - protejarea medicamentului, stabilizarea i prelungirea timpului de njumtire biologic; - doze aplicate reduse; - ci alternative de aplicare medicamentoas: intravenos, dermal/transdermal, prin intermediul mucoaselor. Lipozomii pot fi alctuii astfel nct s includ o larg varietate de ageni, att hidrofili, ct i hidrofobi, i s protejeze agenii ncapsulai de procesele metabolice celulare. Pentru o terapie de succes cu componente active incluse n lipozomi, acetia ar trebui s fie capabili s ajung cu precizie la destinaie, la momentul potrivit, cu o concentraie corect i o vitez adecvat. Bioncapsularea componentelor active n lipozomi schomb proprietile farmaco-cinetice ale acestora, iar acest lucru poate fi

34

folosit pentru a atinge scopurile terapiei. Utilitatea lor este bazat pe proprietile lor (mrime, eficien, proprieti de suprafa, stabilitate), proprieti care pot fi modificate de interaciile biologice i n timpul procesului de preparare Lipozomii au proprietatea de proteja mediul nconjurtor prin pstrarea componentei ncapsulate un timp ndelungat fr s-o elibereze. Timpul de pstrare a a componentei este variabil, de la cteva secunde pn la cteva sptmni, n funcie de un mare numr de parametri, precum : timp, dimensiuni, ncrcare electric, fluiditate, polaritate, prezena ionilor bivaleni, a detergenilor i a componentelor serice n mediu.

V. Medicamente pe baz de lipozomi existente pe pia

Exist o varietate de formule pe baz de lipozomi care au fost comercializate i sunt multe formule pe baz de lipozomi care sunt n diverse stadii de testri clinice. Mai jos sunt enumerate cteva formule comercializate i din faza a III-a de testare: 1) Myocet (doxorubicin lipozomal)- Aceasta este o formul non PEG-ilat a doxorubicinei lipozomale. (PEG-ilarea reprezint modificarea unei proteine, peptide sau molecule neproteice prin legarea unuia sau mai multor lanuri de polietilenglicol, polimer netoxic, nealergic, care nu declaneaz rspuns imun, nalt solubil n ap. Medicamentele conjugate cu PEG au cteva avantaje: rezisten prelungit n corp, degradare
sczut ou de ctre enzimele (raport metabolice molar i reducerea Este sau eliminarea n terapia imunogenitii proteice). Lipozomii sunt compui din fosfatidilcolin (PC) din (EPC): colesterol 55:45). folosit combinaional a tratamentului cancerului de sn recurent.

2) Doxil, Caelyx (doxorubicin lipozomal)- Aceasta este o formul PEG-ilat a doxorubicinei lipozomale. Lipozomii sunt compui din fosfatidilcolin hidrogenat
din soia (HSPC): colesterol: PEG 2000-DSPE (raport molar 56:39:5). Este folosit n

tratamentul sarcomului Kaposi refractar, cancerul de sn recurent i cancerul ovarian. 3) LipoDox (doxorubicin lipozomal)- Aceasta este o formul PEG-ilat a doxorubicinei lipozomale. Lipozomii sunt compui
din fosfatidilcolin

35

dehidrogenat din soia (DSPC): colesterol : PEG 2000-DSPE (raport molar

56:39:5). Este folosit n tratamentul sarcomului Kaposi refractar, cancerul de sn recurent i cancerul ovarian. 4) Thermodox (doxorubicin lipozomal)- Aceasta este o formul PEG-ilat a doxorubicinei lipozomale. Thermodox este o formul cu eliberare la int. Lipozomii i vor elibera coninutul dup cldur. Tumpra este nclzit folosind ablaie prin radio frecven (RFA). Lipozomii i elibereaz coninutul n interiorul tumori dup nclzire. Lipozomii sunt alctuii din DPPC, mono steroil PC (MSPC) i PEG2000-DSPE. Este folosit la tratamentul cancerului primar de ficat (carcinom hepatocelular) i cancer de sn recurent. Thermodox este n faza III n testele clinice. 5) DaunoXome (Daunorubicin lipozomal)- Aceasta este o formul non PEGilat a daunorubicinei lipozomale. Lipozomii sunt alctuii din DSPC i colesterol. Este folosit pentru tratamentul sarcomului Kaposi. 6) Ambisome (amfoteracin B lipozomal)- Aceasta este o formul non PEGilat a amfoteracinei B lipozomale. Lipozomii sunt alctuii din HSPC, DSPG, colesterol i amfoteracin B n raport molar 2:0.8:1:0.4. Este folosit la tratamentul infeciilor fungice. 7) Marqibo (vincristin lipozomal)- This Aceasta este o formul non PEG-ilat a vincristinei lipozomale. Lipozomii sunt alctuii din sfingomielin din ou i colesterol. Este folosit la tratamentul melanomului malign metastatic uveal. Marqibo este n faza III de teste clinice. 8) Visudyne (verteporfin lipozomal)- Aceasta este o formul non PEG-ilat a verteporfinei lipozomale (BPD-MA). Lipozomii sunt alctuii din BPD-MA:EPG:DMPC n concentraie molar de 1:05:3:5. Este folosit la tratamentul degenerrilor maculare legate de vrst, miopiei patologice i histoplasmozei oculare. 9) DepoCyt (citarabin lipozomal)- Aceasta este o formul non PEG-ilat a citarabinei lipozomale. Platforma Depo-Foam este folosit n DepoCyt. Depo-Foam este un matrix lipozomal sferic multilamelar de 20 microni alctuit din Colesterol: Triolein: Dioleoilfosfatidilcolin (DOPC): Dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG) n raport molar de

36

11:1:7:1. Medicamentul este folosit prin administrare intratecal pentru tratamentul meningitei neoplastice i meningitei limfomatoase. 10) DepoDur (sulfat de morfin lipozomal) - Aceasta este o formul non PEGilat a sulfatului de morfin lipozomal. Platforma Depo-Foam este folosit n DepoCyt. Depo-Foam este un matrix lipozomal sferic multilamelar de 20 microni alctuit din Colesterol: Triolein: Dioleoilfosfatidilcolin (DOPC): Dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG) n raport molar de 11:1:7:1. Medicamentul este folosit prin administrare epidural pentru tratamentul durerilor postoperatorii care urmeaz dup operaiile chirurgicale majore. 11) Arikace (amikacin lipozomal)- Aceasta este o formul non PEG-ilat a amikacinei lipozomale. Lipozomii sunt alctuii din DPPC i colesterol. Mrimea lipozomilor este de 200-300 nm. Este folosit pentru tratamentul infeciilor pulmonare datorit patogenilor susceptibili. Arikace este folosit n form nebulizat i este inhalat de pacieni. Medicamentul este n faza a III-a n testele clinice. 12) Lipoplatin (cisplatin lipozomal)- Aceasta este o formul PEG-ilat a cisplatinului lipozomal. Lipozomii sunt alctuii din DPPG, colesterol PC din soia i PEG2000-DSPE. Este folosit pentru tratamentul malignitilor epiteliale cum ar fi cancerele de plamni, cap i gt, ovarian, vezic urinar i testicular. 13) LEP-ETU (paclitaxel lipozomal)- Aceasta este o formul non PEG-ilat a paclitaxelului lipozomal. Lipozomii sunt alctuii din DOPE, colesterol i cardiolipin. Este folosit pentru tratamentul cancerului ovarian, de sn i pulmonar. LEP-ETU termin faza II a testelor clinice. 14) Epaxal (vaccin pentru Hepatita A)- Lipozomii au fost folosii ca un adjuvant al vaccinului n aceast formulare. Vaccinurile inactivate conin uzual un adjuvant care poteneaz rspunsul imun la antigen. n ultimii 70 de ani, srurile de aluminiu au fost singurul adjuvant liceniat pentru uz uman. Activitatea adjuvantului se bazeaz pe folosirea lui ca depozit de antigeni i inducerea unui rspuns inflamator localizat. Aceti lipozomi, cunoscui ca fiind imunopotenatori ai virusului Influenza reconstituit (IRIV) sunt alctuii din DOPC/DOPE n raport molar de 75:25. Lipozomii au dimensiuni de 150 nm.

37

15) Inflexal V (vaccin gripal)- Lipozomii au fost folosii ca un adjuvant al vaccinului n aceast formulare. Lipozomii sunt alctuii din DOPC/DOPE n raport molar de 75:25. Lipozomii au dimensiuni de 150 nm.

BIBLIOGRAFIE

1. Aurelia Meghea, Ioana Lctuu, Nicoleta Badea, Sinteza dirijat de nanostructuri pentru materiale cu proprieti multifunctionale ,vol.I, Ed. Politehnica Press, Bucuresti 2009; 2. D.D. Lasic, Applications of Liposomes, R. Lipowsky, E. Sackmann, Handbook of Biological Physics, Elsevier Science, 1995; 3. M. U. Uhumwangho, R. S. Okor, Current trends in the production and biomedical applications of liposomes: a review, Journal of Biomedical Science, Vol. 4, No. 1, 2005; 4. O. M. Atrozz, The Incorporation Effects of Methanolic Extracts of Some Plant Seeds on the Stability of Phosphatidylcholine Liposomes , Pakistan Journal of Biological Science 10, 2007; 5. W. L. Stone, M. Smith, Therapeutic Uses of Antioxidant Liposomes , Molecular Biotechnology, Volume 27, 2004; 6. N. A. Kshirsagar, S. K. Pandya, B.G. Kirodian, S. Sanath, Liposomal drug delivery system from laboratory to clinic, Journal of Postgraduate Medicine, Vol. 51, 2005; 38

7. Bangham, A.D. and R.W. Horne, 1964, Negative staining of phospholipids and their structured modofication by surface active agents as observed in the electron microscope, Mol. Biol. 8; 8. Papahadjopoulos, D. (ed.), 1978, Liposomes and their use in biology and medicine, Ann. NY Acad. Sci. 308; 9. Lasic, D.D., 1992, Liposomes, Am. Sci. 80; 10. Lipowsky, R., 1992, The conformation of membranes, Nature 349; 11. Lasic, D.D., 1993, Liposomes: From Physics to Applications (Elsevier, Amsterdam) 1993; 12. Friese J. (1984). In: Liposome Technology (Gregoriadis G., ed.) CRC Press, Florida, Vol.1, Chapter 10; 13. Gabizon, A., 1992, Selective tumor localization and improved therapeutic efficacy of anthracyclines encapsulated in long circulating liposomes , Cancer Res. 52; 14. Felgner, P., T.R. Gadek, M. Holm, R. Roman, M.Wenz, J.P. Northrop, G. Ringold and M. Danielsen, 1987, Lipofectin: A highly efficient, lipid mediated DNA transfection procedure, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 84.

39