Universitatea tefan cel Maredin Suceava

Facultatea de Inginerie Alimentar

Protecia consumatorului i a mediului

Realizri notabile n tehnologia ADN-ului

recombinat

Cadru didactic:
Conf.dr.ing.Gontariu Ioan
Student:
Nistor Andrei
Anul III,grupa 1C

Suceava, 2016

Ingineria genic poate fi definit drept ansamblu de metode i tehnici prin care
este posibil manipularea materialului genetic la nivel celular i molecular pentru a
obine pe ci netradiionale produi utili omului i genotipuri noi, avnd la baz
tehnologia moleculelor recombinate (hibride) de ADN.
Ingineria genic se profileaz ca direcie tiinific i tehnologic n anii 70.
Apariia ei a fost determinat, n primul rnd, de aprofundarea cunotinelor de
genetic la nivel celular i molecular, de dezvoltarea cunotinelor privind
materialul genetic al organismelor vii, i anume:
- descoperirea mecanismelor principale de transmitere a informaiei ereditare:
transformaia (A.Avery, C.MacLeod, M.MacCarty, 1944) - prin intermediul
fragmentelor de ADN; sexducia (J.Lederberg, E.Tatum, 1946) - prin conjugarea
bacteriilor i transducia (J.Lederberg, 1952) - cu ajutorul fagilor;
- descoperirea structurii moleculei de ADN (J.Watson, F.Crick, 1953);
- descoperirea i izolarea enzimelor de restricie i legare a fragmentelor de ADN
(H.Smith, 1970);
- descoperirea fenomenului transcripiei inverse a informaiei genetice de la ARN
la ADN (H.Temin, S.Mizutani, D.Baltimor, 1970);
- descoperirea sintezei chimice a genelor (A.Kornberg, 1967; H.Khorana, 1970,
1976).

Datorit cercetrilor de genetic molecular, a fost posibil cunoaterea

structurii de profunzime a unor gene i genomuri, fapt ce a condus la elaborarea
tehnologiei ADN-ului recombinat i la transferul de gene peste barierele de specie.
Ingineria genetic a fost posibil prin descoperirea ADN-ului i crearea primei
bacterii recombinate n 1973: o bacterie E.coli ce coninea material exogenic de la
bacteria Salmonella.Aceasta a condus la preocupri n comunitatea tiinific cu
privire la riscurile poteniale din ingineria genetic, care au fost discutate n detaliu
la Conferina Asilomar n 1975.Herbert Boyer apoi a fondat prima companie de a
utiliza tehnologia ADN-ului recombinat, Genentech, i n 1978 compania a anunat
crearea unei E.coli pentru producerea proteinei umane insulin.
Plantrile la scar mic experimental a organismelor modificate genetic a nceput
n Canada i Statele Unitele la sfritul anilor 1980.Aprobrile pentru scar larg,
au avut loc la mijlocul anilor 1990.
Datorit cercetrilor n tehnologia ADN-ului recombinat, au fost elaborate
metode de transfer de gene n celulele procariote, care pot sintetiza multe proteine
utile.Astfel, a devenit posibil producerea i chiar comercializarea pe scar larg a
unor hormoni cum ar fi (insulina, somatostatina, somatotropina), a interferonului, a
preparatelor de diagnosticare etc.

Obinerea insulinei umane i a altor hormoni

n 1916, E.Sharpy-Schafer a descoperit c insulina este secretat de celule care
alctuiesc insulele Langherhans din pancreas, ceea ce l-a determinat s numeasc
hormonul insulin.n 1921, F.Banting i H.Best, la Toronto, au izolat din
pancreasul de cine hormonul insulin, demonstrnd aciunea lui antidiabetic.n
1923, firma farmaceutic american "Eli Lilly" pune deja n vnzare prima insulin
animal (n prezent, pentru a obine circa 100 grame de insulin, este nevoie de
800 kg de pancreas de bou (greutatea medie a unui pancreas de bou este de 200250 grame)).
Insulina uman este alcatuit din dou catene polipeptidice A i B, compuse
respectiv din 21 i 30 de aminoacizi, a cror secven a fost stabilit n 1955 de
F.Sanger.
n perioada 1963-1965, trei grupe de cercettori (americani, germani i chinezi) au
reuit sinteza artificial a insulinei prin intermediul a 170 de reacii chimice, lucru
ce facea imposibil producerea insulinei pe cale industrial.
Noile tehnologii industriale de obinere a insulinei umane au fost posibile odata cu
extragerea genei insulinei (W.Gillbert i colaboratorii si, 1980) i crearea
moleculelor recombinate de ADN n baza plasmidelor (fig.1).

Fig.1 Schema obinerii insulinei umane

Moleculele recombinate de ADN sunt transferate n colibacili (Escherichia coli),
unde are loc realizarea informaiei genetice codificate n molecula de ADN.Paralel
cu proteinele specifice bacteriei, se sintetizeaz i insulina.Pentru a proteja insulina
uman (ea nu este proprie colibacililor i este distrus de enzimele bacteriene), n

molecula recombinata de ADN se ncadreaz, pe lng gena insulinei, i o gen

reglatoare care codific o protein specific colibacililor (de exemplu
galactozidaza).Ca rezultat al manifestrii informaiei genetice a moleculei
recombinate de ADN, se obine o caten polipeptidic hibrid, din care mai apoi se
separ insulina.
Datorit utilizrii tehnologiei ADN-ului recombinat, se obin aproximativ 200
grame de insulin de pe 1 m3 de mediu de cultur, adica tot atta ct se poate
extrage din aproape 1600 kg de pancreas de bou sau porc.
Probele clinice efectuate cu insulina uman, produs prin tehnici de inginerie
genic, au demonstrat c ea nu are efecte secundare i ca poate fi comercializat,
adic folosit la tratarea bolnavilor de diabet (din 1982 n SUA, din 1983 n Marea
Britanie).

Obinerea interferonilor
Interferonii sunt produi de celule specializate pentru lupta mpotriva infeciilor
virale.Ei au fost descoperii n 1957 de F.Isaacs i I.Lindenmann la Institutul
Naional de Cercetri Medicale de lng Londra.Interferonii reprezint nite
substane proteice (din 146-166 de aminoacizi) i sunt produi n cantiti infime
de celula animal sau uman, cnd un virus patrunde n organism.
Pentru a obine interferon din celulele sanguine sau din fibroblastele cultivate,
acestea sunt infectate cu un virus, iar dupa 24 de ore prin centrifugare i purificare
se izoleaza din mediul de cultur.
n 1980, savanii americani W.Gilbert i C.Weissmann i japonezul T.Taniguki au
produs interferonul uman cu ajutorul unor colibacili cu genomul modificat.

Celulele de E. coli nu pot transforma predecesorul interferonului n interferon

activ, de aceea, iniial, complexul de ADN, format dintr-o regiune nucleotidic
reglatoare i o regiune ce determin structura interferonului, este supus aciunii
enzimelor de restricie, care taie molecula de ADN aproximativ la frontiera acestor
dou catene.
Gena interferonului se ncadreaz n continuare ntr-un plasmid, care se transfera n
E.coli. Astfel, colibacilii sintetizeaz interferonul uman. Dintr-un litru de suspensie
de E.coli (circa 1011 celule) se pot extrage pna la 5 mg de interferon (adic de
5000 de ori mai mult dect din 1 litru de snge).
Tehnicile de inginerie genic permit obinerea preparatelor hibride de interferon cu
un spectru larg de aciune.

Transferul de gene n celulele vegetale i animale

Tehnicile de recombinare genetic permit transferul genelor importante n
celulele de plante i animale, iar n rezultat se obin plante i animale transgenice.
Pentru transferul de gene la plante sunt utilizate bacteriile Agrobacterium
tumerfaciens (descoperite n 1907 de E.Smith si C.Townsend), care provoac
formarea unor tumori cancerogene (crown gall) pe tulpinile unor plante (la speciile
din 93 de familii de dicotiledonate).
Plasmidul Ti (tumor inducing) descoperit la A.tumefaciens cauzeaz tumori la
plante prin transferul unui segment de ADN (ADN-T) din plasmid n celulele
vegetale.
Strategia pentru transferul genelor cu ajutorul plasmidului Ti n celula vegetala
include:
- introducerea segmentului de ADN-T ntr-un plasmid de E. coli;

- introducerea n plasmidul format a genei necesare i a genei marker (gena pentru

rezistena la canamicin);
- introducerea plasmidului recombinat n Agrobacterium tumerfaciens;
-infecia cu A.tumerfaciens a plantelor respective;
- selectarea plantelor transformate (fig.2).
Pentru realizarea transferului de gene n celula vegetal este utilizat metoda
culturilor de celule i esuturi n vitro.
Firma

american

"Monsanto"

comercializeaz

deja

plante

transgenice

(transformate) de cartof, rezistente la gndacul de Colorado.

O realizare remarcabil n domeniul transferului de gene n celula animala o
constituie oarecii transgenici.Gena hormonului de cretere de la obolan a fost
transferata prin microinjecii n cele dou nuclee ale ovulului proaspt fecundat de
la oarece (n fiecare nucleu cte circa 600 copii ale genei hormonului de cretere).
Ovulele fecundate (170) au fost implantate n oviductul unei
femele-receptor. n consecin, s-au obinut 21 de oricei. La 6
dintre ei s-a constatat o cantitate mrit a hormonului de cretere
(de 100 - 800 de ori). Aceti oricei aveau o cretere mult mai
rapid i prezentau greutai corporale superioare animalelormartor.

Fig.2 Transferul de gene cu ajutorul plasmidului Ti n celula

vegetala.

Concluzii
Folosindu-se de ingineria genetic omenirea ar putea nltura
multe din problemele sale actuale. Plante cu o rezisten i o
productivitate mai mare ar putea eradica foamea i ar putea salva
multe din zonele naturale, att de afectate de extinderea
terenurilor agricole. Inserndu-se anumitor plante gene umane,
rspunztoare

de

producerea

anumitor

substane

precum

hormonii sau anticorpii, aceste plante ar putea produce astfel de

substane, att de necesare celor care sufer de anumite
afeciuni. Deasemenea, ingineria genetic ar putea corecta
diverse deficiene ale unor persoane, care le pun pe acestea n
poziie de inferioritate fa de alte persoane.

Bibliografie
http://www.scritub.com/biologie/INGINERIAGENICA2251116415.php
http://www.math.md/stireal/biologie/candidat/inginer_gen.pdf
https://www.scribd.com/doc/52999347/Ingineria-genic%C4%83
https://www.scribd.com/doc/267790327/Ingineria-Genetic
%C4%83-in-Sec-XXI
http://www.descopera.org/genetica-si-adn-ul-scurt-istoric/