Coloraii i colorani

COLORAREA
etapa prin care se urmrete
creterea contrastului dintre
diferitele componente tisulare
prin modificarea indicilor de
refracie ai substratului
morfologic cu ajutorul
coloranilor .
2

COLORAREA
Tehnica de colorare depinde de
natura fixatorului utilizat i de
esutul pe care dorim s l
examinm.

COLORANTUL
HISTOLOGIC

substan chimic colorat, de

obicei de natur organic, ce
poate intra n celul atandu-se la
nivelul componentelor celulare i
permind astfel diferenierea lor
optic.
Nu toate substanele colorate sunt
colorani!
4

COLORANI
- grupri cromofore
purttoare de culoare
- grupri auxocrome
capacitatea de a colora

GRUPARILE
AUXOCROME
1. Ionizate ( principale ) formeaz
legturi electrochimice cu
substratul
2. Neionizate ( secundare)
formeaz legaturi de hidrogen cu
substratul. Acest tip de legatur
mrete stabilitatea colorantului.
6

CLASIFICAREA
COLORANILOR

- natura lor

- caracterele chimice

CLASIFICAREA
COLORANILOR

Dup natura lor

Naturali
- vegetali : hematoxilina
,safranina , orceina , turnesolul
- animali : carminul
Sintetici : albastru de metil
8

CLASIFICAREA
COLORANILOR

Dupa caracterele chimice

Acizi

sunt de obicei sruri de

acizi organici , gruparea
auxocrom principal fiind
ncrcat electric negativ.

- se ataeaz pe un substrat
morfologic ncrcat electric pozitiv
9

CLASIFICAREA
COLORANILOR

Dupa caracterele chimice

Bazici gruparea auxocroma
principal ncrcat electric
pozitiv , deci se va ataa pe un
substrat ncrcat negativ

10

CLASIFICAREA
COLORANILOR

Dupa caracterele chimice

Neutri grupri auxocrome

principale ncrcate electric
pozitiv i negativ, fiind soluii
apoase de colorani bazici i acizi
ntr-o anumit proporie
11

MECANISMUL COLORRII
PROTEINELE - substratul
molecular la nivelul crora se
fixeaz coloranii prin legturi
electrochimice i de hidrogen.

12

MECANISMUL COLORRII
In funcie de tipul gruprilor
ionizabile din structur ,
proteinele sunt
1 acide
2 bazice
3 neutre
13

MECANISMUL COLORRII
Colorant bazic substrat
(=proteina) acid (ex:
hemalaunul)
Nucleul caracter bazofil:
albastru-nchis / violet
14

MECANISMUL COLORRII
Colorant acid substrat bazic
(ex: eozina)
Citoplasma caracter acidofil:
roz/rou

15

Evidentierea
componentelor celulare
( hemalaun-eozin)

16

ETAPELE COLORRII
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Deparafinarea
Hidratarea
Mordansarea ( la nevoie)
Colorarea propriu-zis
Splarea
Deshidratarea
Clarificarea
17

METODE DE COLORARE
1. In funcie de momentul colorrii
2.
3.
4.
5.

Dupa nr. de coloranti utilizai

Dup mecanism
Dup metoda de obinere a
coloraiei optime
In funcie de raportul dintre
rezultatul colorrii i culoarea
colorantului
18

Momentul colorrii

Vitale - colorant vital care este

ncorporat de animal n timpul
vieii; persist numai att timp ct
celulele supravieuiesc n vitro

Permanente pentru
colorarea preparatelor
permanente
19

 Numr de colorani
a Simple folosete un singur

colorant

b Combinate (policrom) 2 sau

mai muli colorani
i. Succesiv
ii. Simultan, ex . :
hemalaun - eozin, azan
20

Mecanism
- direct

simplu contact dintre

colorant si substrat
- indirect necesit prezena
unui mediator sau MORDANT ,
ntre colorant i substrat. Acesta
fixeaz colorantul de
componentele celulare.
21

Metoda de obinere a coloraiei

optime
- progresive

prin adugri
succesive pna se ajunge la
momentul optim de colorare

- regresive - prin aciunea

prelungit a colorantului pn la
obinerea unei supracolorri , apoi
se acioneaz cu un agent chimic
decolorant (difereniator) (ex.
Coloratia Nissl).
22

Rezultatul colorrii i
culoarea colorantului
-Ortocromatic substratul

se coloreaz n aceeai culoare

ca i cea a colorantului

- Metacromatic - substratul
se coloreaz n alt culoare ca
cea a colorantului
23

IMPREGNARI METALICE
PRINCIPIU:

precipitat de metal care

se depune pe diferitele elemente de
tesuturi evideniind structuri care n
mod obisnuit nu se coloreaz cu
colorani.

- cele mai folosite sunt : Ag , Au , Os ,

Hg.

24

IMPREGNARE
ARGENTIC
- folosit pentru evidenierea
elementelor din esutul
epitelial, conjunctiv i n
cercetarea sistemului nervos.
Rezultate: structurile vizate
sunt colorate n negru.
25

Coloraia

Componen Rezultate
i

26

COLORAIA
HEMALAUN EOZIN
2 colorani:
1- hemalaunul colorant bazic
2- eozina colorant acid
REZULTATE
- nuclei albastru - violet
- citoplasma roz- rosu
27

HEMALAUN-EOZIN

28

COLORAIA HEMALAUN
EOZINA CU ALBASTRU DE
METIL
REZULTATE
- coloratie
tricrom
1. Nuclei
violet
1. hemalaun
2. Citoplasma
2. eozina
albastru cenusiu
3. Fibrele de
3. albastru
colagen albastru
de metil
intens

29

COLORAIA HEMALAUN
EOZINA CU ALBASTRU DE
METIL

30

COLORATIA VAN
GIESON
- coloratie

REZULTATE
tricrom
1. Nuclei
1. hematoxilina negri
feric
2. Citoplasma
2. acidul picric galben
3. fuxina acid 3. Fibre de
colagen rou
intens
31

VAN GIESON

32

COLORATIA MASSON
- coloratie

tricrom
1. hematoxilin
feric
2. soluia
colorant A ce
conine fuxin acid
3. soluia
colorant B ce
conine albastru de
anilin

REZULTATE
1. Nuclei
negru
2. Citoplasma
rou violet
deschis
3 Fibrele de
colagen albastru
intens
33

COLORATIA MASSON

34

COLORATIA MALLORY
Se utilizeaz:

1. fuxin acid
2 albastru Mallory
( contine albastru de
anilina i orange G )

REZULTATE
1. Nuclei - rou intens
2. Citoplasma roie
3. Fibre de colagen i
reticulin albastru
4. esut muscular
neted - violet
5. esut muscular
striat - rou portocaliu
35

COLORATIA MALLORY

36

COLORATIA AZAN
REZULTATE
Nuclei rou viu
- albastru
Citoplasma rou
Heidenhein , cu
Fibre de colagen i
anilin i
reticulin albastru
orange G
deschis
esut muscular striat
rou , orange sau
galben

-azocarmin C

37

COLORATIA AZAN

38

COLORATII CITOLOGICE

- utilizate pentru evidenierea

anumitor organite celulare

39

METODA CAJAL DA
FANO
- evidenierea complexului Golgi
REZULTATE
Nuclei necolorai
Aparatul Golgi reea perinuclear
de culoare neagr
Citoplasma aurie
40

METODA CAJAL DA
FANO

41

METODA
HEMATOXILINA FERICA
REGAUD
- evidenierea

mitocondriilor

REZULTATE
Nucleu necolorat
Nucleol negru
Mitocondrii puncte negre

42

METODA
HEMATOXILINA FERICA
REGAUD

43

TEHNICI DE EXAMINARE A
TESUTULUI EPITELIAL
IMPREGNAREA
ARGENTICA RANVIER
- evidentierea interstiiului
dintre celulele epiteliului din
seroase limitele intercelulare
apar net n culoarea neagr
44

IMPREGNARE ARGENTICA
ESUT EPITELIAL

45

TEHNICI SPECIALE DE
EXAMINARE A TESUTULUI
CONJUNCTIV

COLORAIA CU ALBASTRU DE
TOLUIDIN
- granulaiile din mastocite prin
coloraie metacromatic n
rou violet

46

47

TEHNICI SPECIALE DE
EXAMINARE A TESUTULUI
CONJUNCTIV
METODE PENTRU EXAMINAREA FIBRELOR
CONJUNCTIVE

1. Fibrele de reticulin se examineaz

folosind o metoda electiv - IMPREGNAREA
ARGENTICA i apar colorate n negru
2. Fibrele elastice se poate utiliza coloraia
cu
a. Rezorcin fuxina - albastre
b. Orcein cafeniu - roscate
48

Fibre elastice orcein

reticulin
impregnare argentic

Fibre

49

TEHNICI SPECIALE
PENTRU EXAMINAREA
ESUTULUI MUSCULAR
METODA HEIDENHEIN
- evidentiaz structura periodic a
miofibrilelor. Se remarc alternana
de zone clare i ntunecate.

50

METODA
HEIDENHEIN

51

Metode speciale pentru

evidenierea esutului
- metoda Nissl
nervos
-

impregnare argentic
Evidenierea tecii de mielin
prin fixare cu tetraoxid de
osmiu

52

Impregnare Ag

Nissle

53

54