CULTURA IN VITRO DE ENDOSPERM

Endospermul este un ţesut unic din punct de vedere genetic, fiind triploid la cele mai multe
angiosperme, rezultând din fuziunea a trei nuclei haploizi.
Endospermul este ţesutul nutritiv al embrionului şi în acelaşi timp centrul dinamic al influenţei
de dezvoltare a acestuia.
Tesutul endospermic este triploid - plantele formate prin cultura acestuia in vitro sunt triploide.

Primele cercetări privind cultura de ţesut endospermic au fost efectuate încă din 1933 de Mills
R, Lamp C. Aceştia au plasat endosperm de la boabele tinere de Zea mays pe mediu nutritiv, conţinând
extract de cartof şi au obţinut o uşoară proliferare a celulelor învecinate embrionului.

Mai târziu, în 1949, La Rue,

extinde cercetările privind creşterea şi
diferenţierea endospermului in vitro,
reuşind să obţină o creştere continuă de ţesut
endospermic, imatur provenit de la porumb.
 Tehnica culturii in vitro de endosperm

•O importanţă deosebită pentru tehnica culturii endospermului o constituie momentul optim de excizare a endospermului.
•Astfel, la Zea mays, timpul optim este la 8-11 zile după polenizare iar la Cucumis sativus la 7-10 zile după polenizare.

•Mediul de cultură se suplimentează cu diferiţi factori de creştere: suc de tomate, extract de drojdie.
•Cele mai adecvate medii nutritive pentru cultivarea endospermului sunt mediul White şi mediul MS (Murashige-Skoog).

•Indiferent de compoziţia mediului de bază, prezenţa auxinei (2,4D sau IAA), a citokininei (BAP sau kinetina) şi a extractului
de drojdii sau hidrolizatului de cazeină (sursa de azot organic) este esenţială pentru iniţierea unei culturi de endosperm .
 Organogeneza indusă în calusul obtinut din culturile de endosperm

Specia Autorii
Euphorbiaceae Srivastava,1973Srivastava,1973
Jatropha panduraefolia
Putranjiva roxburghii
Gramineae Bajaj et al., 1980
Oryzasativa
Loranthaceae Bhojwani, 1970Nag si Johri, 1971
Scurrula pulverulenta
Taxillus vestitus
Santalaceae Lakshmi Sita et al,1980
Santalum album
Rutaceae Wang si Chang, 1978
Citrus grandis
Rosaceae Shu-quiong si Jia qu, 1980Mu et al, 1977
Prunus persica
Pyrus malus

Endospermul cultivat pe medii nutritive adecvate poate genera plantule direct prin
embriogeneză sau indirect prin formarea mai întâi a calusului şi apoi, prin diferenţierea
acestuia.

Pentru formarea mugurilor direct din tesut endospermic este absolut necesară prezenţa
în mediu a unei citokinine.
 CULTURA IN VITRO DE EMBRIONI

•Embriocultura constituie o metodă eficientă de obţinere de plante fertile de la hibrizi

neviabili sau de la seminţe care şi-au pierdut capacitatea de a germina. Metoda
culturii de embrioni constă in izolarea aseptică a embrionului şi transferul lui pe
mediu nutritiv.

•Ovulele intacte, seminţele sau capsulele care conţin ovule se sterilizează iar
embrionii sunt extraşi în condiţii aseptice.

•Sterilizarea seminţelor se poate face cu etanol, timp de 3 minute, sau cu clorura

mercurică 0,1%, timp de 15 minute. In condiţiile în care se lucrează cu seminţe de
dimensiuni reduse, toate operaţiile de excizare a embrionilor din seminţe se
efectuează sub microscop.

•Mediile de cultură folosite pentru cultivarea embrionilor variază in funcţie de specia

de la care provin embrionii si de vârsta acestora.
 Prepararea mediului de cultură

•Mediul nutritiv complet - compoziţie :

KH2PO4 910
KCl 750
MgSO47H2O 740
MnSO4H2O 3
H2BO3 5
ZnSO47H2O 5
CoCl2 0,25
CuSO45H2O 0,25
citrat de Fe 10
inozitol 50
tiamină 25
pantotenat de Ca 25
piridoxină 25
glutamină 400
alanină 50
cisteină 20
arginină 10
leucină 10
fenilalanină 10
tirozină 10
acid malic 1
zaharoză 30000
 Tehnica culturii in vitro de embrioni la grâu (Triticum aestivum)

•Boabele de grâu - spălate în alcool etilic 70 %

- sterilizate cu hipoclorit de calciu 5%, timp de 5-10 minute
- excizia embrionului cu ajutorul unui bisturiu.

Embrionii excizaţi sunt plasaţi în vase Petri mici, fiecare conţinând 5 ml din mediul de
cultură. Probele sunt menţinute la o temperatură de 25°C, în condiţiile unei
fotoperioade de 16 ore.
Compoziţia mediului nutritiv utilizat pentru cultivarea embrionilor de grâu
(Triticum aestivum)

Macroelemente mg/l
KNO3 1900
CaCl2.2H2O 880
NH4NO3 825
MgSO4.7H2O 370
KCl 350
KH2PO4 170

Microelemente mg/l

H3BO3 12,4
MnSO4.H2O 33,6
ZnSO4.7H2O 21
KI 1,66
Na2MoO4 0,5
CuSO4.5H2O 0,5
CaCl2.6H2O 0,5