1

CROMATINA SEXUAL

DEFINIIE
Cromatina sexual este un cromocentru cu particulariti morfologice bine definite
care permite stabilirea sexului genetic.
Cromatina sexual este o form de heterocromatin facultativ, deoarece are
morfologie distinct n celule provenite de la persoane cu sex diferit (la femei - crt.X, la
brbai - crt.Y)
Sexul genetic se stabilete n momentul fecundrii gameilor i reprezint
configuraia cromosomilor sexuali ai zigotului i implicit a fiecrei celule somatice a unui
individ. El este n mod normal:
XX pentru femeie;
XY pentru brbat.
Numai aceast configuraie gonosomic asigur o sexualizare normal.

A. CROMATINA X
1. DATE GENERALE

a. Definiie: Cromocentru vizibil, n mod normal, n nucleii interfazici ai celulelor
aparinnd sexului feminin; ea rezult prin heterocromatinizarea unuia dintre cei doi
cromosomi X.
b. Istoric
- descris n 1949 de Barr si Bertram n nucleul neuronilor de le pisica femel; ulterior
cromatina X a fost observat i la alte animale, precum i la om :
- explicarea originii i semnificaiei cromatinei X a fost realizat de MARY LYON (1961)
Ipoteza MARY LYON privind originea cromatinei X (3 postulate):
(1) rezult prin inactivarea si heterocromatinizarea unuia din cei doi cromosomi X la
femeie;
(2) inactivarea cromosomului X matern sau cromosomului X patern se face la ntmplare i
independent n celule diferite.
(3) inactivarea este precoce (pn n ziua 16 de via intrauterin) i definitiv (toat
viaa);
Dup M. Lyon semnificaia apariiei cromatinei X se datorete faptului c la
om, i la mamifere, este necesar un singur X activ, restul se inactiveaz, altfel diferena dintre
materialul genetic la femeie i brbat ar fi prea mare. De fapt, nu tot cromosomul X se
inactiveaz. O parte mic a acestuia rmne activ, asigurnd un mic avantaj selectiv sexului
feminin (o mai bun adaptare i o mai mare rezisten la aciunea factorilor exogeni).
c. Metode de studiu:
- studiul celulelor interfazice din orice esut provenit de la organismul feminin normal.
Tehnicile uzuale folosesc frotiul din celulele mucoasei bucale (testul Barr) i frotiul din
snge periferic;
- stabilirea numrului cromosomilor X n corelaie cu numrul de corpusculi de
heterocromatin X.

2. STUDIUL CROMATINEI X N FROTIUL DE MUCOAS BUCAL
a. Tehnica efecturii frotiului de mucoas bucal:
(1) recoltarea: se racleaz (rzuiete) faa intern a obrazului (la copii buza inferioar) cu o
lam de sticl rodat; recoltarea superficial (celule descuamate) se nltur, a doua recoltare
se folosete ntinzndu-se un frotiu celular gros pe o lam de microscop;
2
(2) fixarea: cu amestec fixator, durata 30 minute 12 ore;
(3) rehidratarea: 4 bi succesive a 5' fiecare cu: alcool 70, alcool 50, ap distilat I, ap
distilat II;
(4) hidroliza: neobligatorie (cu HCl);
(5) colorarea: colorant CARR (fuxin bazic);
(6) examinarea frotiului la microscopul cu imersie
b. morfologia corpusculului Barr
- condensat i intens colorat bazofil (corpuscul BARR);
- situat cel mai adesea periferic, lipit de faa intern a membranei nucleare (intranuclear);
- forma: ovalar, plan convex, discoidal sau triunghiular;
- mrime medie: 1 micron ( 0,3);
- cnd este situat central trebuie difereniat de nucleol (rotund i mai mare, brun-crmiziu n
coloraia cu verde de metil pironin) i de cromocentri nespecifici (mai mici sau mai mari cu
form neregulat).
c. Frecvena: teoretic 100%, practic aproximativ 30-40%. Aceast frecven real
se datorete:
- excluderii corpusculilor situai central;
- calitilor improprii ale unor nuclei din celulele superficiale sau profunde, defecte de
colorare;
- existenei reale a celulelor cromatin - negative: cromosomul X inactiv nu se condenseaz
din cauza unor condiii metabolice generale sau celulare;
- alte cauze: vrsta, ciclu ovarian, boli, tratamente.
d. Interpretare:
Nr. corpusculi BARR = nr. cromosomi X - 1
- n mod normal corpusculul BARR lipsete la brbat i este prezent ntr-un singur exemplar
la femeie, deoarece brbatul are un singur cromosom X, iar acesta nu se inactiveaz, n timp
ce femeia are 2 cromosomi X, din care unul se inactiveaz;
- n cazuri patologice - anomalii de numr ale cromosomilor X (disgenezii gonadice) - poate
fi prezent la brbat (47,XXY), absent la femeie (45,X) sau prezent n mai multe exemplare la
ambele sexe;
- mrimea corpuscului BARR depinde de mrimea cromosomului X inactivat (mai mare de 1
micron: isoXq, mai mic de 1 micron: isoXp, deleie pe cromosomul X);
- cnd pe aceeai lam se ntlnesc celule cu un numr diferit de corpusculi BARR, se ia n
consideraie numrul maxim gsit deoarece unii ar putea s nu apar (vezi frecvena).

3. STUDIUL CROMATINEI X N FROTIUL DE SNGE PERIFERIC
a. Tehnica: se evideniaz n nucleul polimorfonuclearelor neutrofile pe frotiuri
colorate cu soluie MAY - GRUNWALD - GIEMSA.
b. Morfologie:
(1) aspectul cromatinei:
- apendici nucleari de tip A au form de "b de tob" (drum stick) i prezint un cap
ovalar sau rotund legat printr-un filament subire de unul din lobii nucleului PMN;
- apendici nucleari de tip B sau noduli sesili prezint aceeai mrime i form ca i
apendicii nucleari de tip A dar sunt legai direct la nucleu printr-o baz larg de implantare.
(2) culoare: intens bazofil.
(3) mrime: 1,5 microni.

c. Frecvena:
- normal la femeie: 1/38 PMN (1/6 --> 1/98 PMN).
3
- n practic, pe o lam cu frotiu din snge periferic trebuie s fie cel puin 6 apendici tipici
pentru a declara cromatina X pozitiv i s nu existe nici un apendice tipic n cel puin 500
neutrofile studiate pentru a declara cromatina X negativ.
d. Interpretare:
Nr. apendici nucleari = nr. cromosomi X - 1
Interpretarea se face dup aceleai reguli ca i n cazul frotiului de
mucoas bucal.
B. CROMATINA Y
a. Origine: aspectul interfazic al celor 2/ 3 distale ale braului q al cromosomului
Y;
b. Morfologie:
- se evideniaz prin colorare cu quinacrin
- corpuscul intens fluorescent (corpuscul F), vizibil n nucleul interfazic;
- mrime 0,25 microni;
- situat liber sau lipit de membrana nuclear;
- frecvena: diferit n diferite esuturi ale sexului masculin:
* 70-80% n fibroblati;
* 45% n spermatozoizi;
c. Interpretare:
Nr. corpusculi F = Nr. cromosomi Y
- corpusculul F este prezent exclusiv la brbat ntr-un singur exemplar; poate fi prezent n
dou exemplare la persoanele cu cariotip 47,XYY.

C. VALOAREA PRACTIC A TESTULUI CROMATINEI SEXUALE
(INDICAII I LIMITE)

Testul cromatinei X este un test rapid, foarte util n multe situaii, care poate fi
efectuat n condiii de dotare minim, cu mijloace modeste.
1. INDICAII:
a) prenatal: n celulele extrase prin puncie amniotic;
- permite stabilirea sexului genetic al ftului n anomaliile gonosomale recesive (de
exemplu hemofilie sau miopatie Duchenne) n cazul n care femeia este purttoare a genei
anormale (risc 50%).
b) la natere: n cazul ambiguitii sexuale la nou nscuii cu testicul nepalpabil.
- pentru precizarea sexului genetic i punerea n concordan cu sexul civil; sexul civil
are importan mai ales n edificarea ulterioar a sexului psiho-comportamental.
c) mai trziu: n diferite anomalii de sexualizare:
- pentru precizarea sexului genetic;
- diagnosticul disgeneziilor gonadice - orhitice sau ovariene - anomalii de numr i
structur a cromosomilor sexuali.
d) n medicina legal i criminalistic: pentru precizarea provenienei feminine sau
masculine a unor fragmente de esuturi, pete de snge, fire de pr.
2. LIMITE:
Testul cromatinei sexuale este un test subiectiv, nu poate depista toate mozaicurile i
nici anomaliile autosomilor; n multe situaii, pentru rigurozitate necesit efectuarea
cariotipului.
D. PRACTIC
- Realizai tehnica de obinere a frotiului de mucoas bucal;
4
- Analizai la microscop frotiurile obinute i stabilii sexul gonadic al persoanei de la care s-a
recoltat;
- Analizai la microscop cromatina sexual din frotiurile din snge periferic;
- Analizai diapozitive, plane i fotografii referitoare la heterocromatina sexual n diferite
celule de la brbat i femeie;
- Discutai condiiile n care este indicat realizarea testului Barr;
- Facei corelaii ntre mrimea corpusculului Barr sau a corpusculului F i situaiile fiziologice
sau patologice ale celulei respective.

E. VERIFICARE CUNOTINE
1. Definii urmtorii termeni:
- corpuscul barr - sex genetic - corpuscul F - apendice
nuclear
- drum stick - nodul sesil - disgenezie gonadic - sex gonadic
2. ntrebri:
- Care sunt postulatele ipotezei Lyon asupra inactivrii unui cromosom X la femeie?
- Care este corelaia dintre numrul de corpusculi Barr i numrul cromosomilor X?
- Care sunt caracterele morfologice ale corpusculului F i care este semnificaia lui?
- Care este explicaia discordanei dintre frecvena teoretic i cea practic a cromatinei
sexuale?