Mecanismele de obinere a energiei la chemoorganotrofe n funcie de acceptorul final de H : Respiraie

aerob. Acceptorul final este oxigenul gazos. Implic lanul respirator de transport al electronilor asociat
MCP. Produs final H2O sau H2O2 . Respiraie anaerob. Acceptori finali compui anorganici (nitrat,
sulfat, S). Transportul de electroni prin lanul respirator. Produse finale nitritul, amoniacul, sulfura (n
prezena O H2O2).
Fermentaie. Substratul organic este metabolizat fr intervenia unui agent oxidant extern. Const n
procese de ox-red care realizeaz numai o oxidare parial a substratului, donorul i acceptorul de H+ fiind
substane organice. Astfel se ajunge de la un substrat mai redus la o molecul mai oxidat (ex.: fermentare
lactic, fermentare alcoolic, acid mixt, acetoinic, etc). Fermentaia se poate desfura n prezena O2,
dar fr intervenia acestuia.
Conservarea energiei::::: O parte din energia eliberat se pierde sub form de cldur sau poate fi utilizat
direct sub form de energie electro-chimic (fpm) la nivelul MCP (ex.: rotaia flagelilor, transport
transmembranar) sau stocat n compui chimici macroergici bogai n energie: ATP (sintetizat prin
fosforilare oxidativ sau fosforilare la substrat), fosfoenol-piruvat, acetilfosfat i acetil-CoA.n procesele de
respiraie se elimin mai mult energie dect din fermentaie (n glicoliz dintr-un mol de glucoz - 38 moli
ATP, prin fermentaie - 2 moli ATP). n procese de fermentare se formeaz deeuri rejetate de ctre celul.
EXAMENUL BACTERIOLOGIC
Examenul bacteriologic const n inocularea prelevatelor pe medii de cultur pentru izolarea culturilor pure
de bacterii (tulpinilor) care vor fi ulterior identificate, testate vis-a-vis de antibiotice, eventual
conservate.Examenul bacteriologic const din cteva etape succesive, de la prelevarea (recoltarea)
probelor biologice pn la remiterea rezultatelor.
Faza pre-analitic (responsabilitatea medicului)-----Prescrierea investigaiei (n funcie de datele examenului
clinic i paraclinic). n ordonan se fixeaz identitatea medicului, a pacientului, scopul analizei,
manifestrile patologice, locul, data apariiei, alte date: imunosupresie, tratament cu antibiotice,
graviditate, etc.
Prelevarea probelor :::Alegerea prelevatului (de la poarta de intrare, locul multiplicrii sau/i din cile de
eliminare a agentului patogen)
EXAMENUL BACTERIOLOGIC PENTRU CULTURILE AEROBE-----Prelevatul este supus examenului macroscopic
(modificarea aspectului, a mirosului, etc) - orientare n diagnostic .Dup necesitate, probele sunt supuse
pregtirii pentru investigaie (diluare, omogenizare, centrifugare, etc) .Examinarea microscopic (preparate
native, Gram, Ziehl-Neelsen, Burri-Hinss...) prezena mi/o, forma, cantitatea, G+/-.
I etap IZOLAREA CULTURILOR PURE --Scopul izolrii - de a obine o cultur pur dintr-un melanj de celule
bacteriene sau dintr-un produs patologic. O colonie separat constituie o cultur pur.Tehnici utilizate:Prin
epuizarea inoculului pe suprafaa gelozei din cutia Petri (nsmnare n striuri paralele, nsmnare n
cadrane, etalarea consecutiv pe trei cutii).Metoda diluiilor logaritmice a inoculului n geloz topit i
rcit la 50 C (10-1, 10-2,...), apoi turnate n cutii Petri sau eprubete.Incubare n termostat la 37 C, 18-24
h (n funcie de TG).

Metode speciale de izolare n culturi pure:

A bacteriilor sporulate: nclzirea prealabil a prelevatului 80 C 20 min
A bacteriilor acido-rezistente: tratarea prealabil cu acid a prelevatului i neutralizarea ulterioar cu o baz
A bacteriilor din asociaii cu numr minim de mi/o patogene: mbogirea prealabil a florei patogene
utiliznd medii de mbogire
A bacteriilor cu virulen nalt i pretenioase la cultivare: inocularea la animalele de laborator sensibile
II etap ACUMULAREA CULTURII PURE
Examinarea macroscopic a coloniilor crescute (form, culoare, dimensiuni, etc)
Examinarea microscopic (frotiu Gram) a coloniilor suspecte, confirmarea puritii culturii
Repicarea coloniilor suspecte pe geloz n pant (nclinat) pentru acumularea culturii pure
Termostat, 37 C, 18-24 ore
III etap IDENTIFICAREA CULTURII PURE
Verificarea puritii culturii (frotiu Gram)
Identificarea culturii pure const n evidenierea unor caractere specifice ale acestei culturi pentru a o
include ntr-o familie, gen, specie, variant
Se studiaz caracterele:
Morfologice
Tinctoriale
De cultur
Biochimice
Antigenice (seroidentificarea)
De patogenitate
Sensibilitatea la bacteriofagi (fago-identificarea)
Sensibilitatea la antibiotice
STUDIEREA ACTIVITII
BIOCHIMICE A BACTERIILOR
Activitatea zaharolitic (irul Hiss, coagularea laptelui, etc)
Activitatea proteolitic
Degradarea proteinelor native (lichefierea gelatinei sau a serului coagulat, peptonizarea laptelui,
etc)Evidenierea enzimelor specifice (ureaz, decarboxilaze, dezaminaze, etc) prin detectarea produsele
finale ale reaciilor: H2S, NH3, indol Depistarea producerii H2S: formarea sulfurii de fer de culoare neagr
n mediile multitest Kligler, Olkeniki, etc; plasarea unei benzi de hrtie de filtru mbibat cu acetat de Pb
deasupra BP n care crete cultura studiat (formarea sulfurii de Pb nnegrete hrtia)Depistarea indolului
(produs al metabolizrii triptofanului) benzi de hrtie mbibate cu acid oxalic. n prezena indolului
indicatorul vireaz n roz. Depistarea amoniacului (ureaza) hrtia de turnesol se coloreaz n albastru.
Depistarea catalazei (H2O2 .... H2O + O2)
(cultura se amestec cu o pictur de ap oxigenat apariia bulelor de gaz)
Depistarea oxidazei (detectarea prezenei citocromoxidazei din lanul respirator)
Reactiv di (tetra)metil-parafenilen-diamin (benzi sau rondele de hrtie mbibate cu reactiv, creioane, etc)
Oxidarea reactivului culoare violet-neagr
Oxidazo+ : Neisseria, Vibrio, Pseudomonas
Oxidazo- : Enterobacteriaceae
Depistarea lecitinazei mediu cu glbenu de ou 10% - formarea unui halou opac n jurul coloniilor
Depistarea lipazei mediu cu Twin 80 1% halou opac n jurul coloniilor (precipitarea acizilor grai)

Depistarea hemolizinei geloz-snge 5-10% - zon clar n jurul coloniei

Depistarea ADNazei, fosfatazei, etc
Probele sunt incubate la 37 C, 18-24 h
Identificarea rapid
Utilizarea galeriilor miniaturizate standarde (economie de timp, spaiu, material)
Sistemul API o galerie din plastic format din numeroase alveole care conin fiecare un mediu deshidratat
diferit (glucide, AA, etc). Alveolele sunt inoculate cu o suspensie bacterian testat i incubate. Ulterior la
necesitate se adaug reactive pentru detectarea metaboliilor particulari.
Lectura conform unui cod de cifre sau computerizatIV etap EVALUAREA REZULTATELOR, FORMULAREA
SI ELIBERAREA RSPUNSULUI Compararea rezultatelor obinute cu caracterele speciilor bacteriene
cunoscute pentru a gsi asemnri.Exemplu de rspuns: Din proba examinat a fost izolat tulpina de
Corynebacterium diphtheriae, biovar gravis, tox+, sensibil la ...., rezistent la ..... EXAMENUL
BACTERIOLOGIC PENTRU CULTURI ANAEROBE (clostridiene, neclostridiene)
Condiia principal cultivare n absena oxigenului Utilizarea mediilor anaerobe (Kitt-Tarrozzi regenerat 100 C, 20 min, rcit, acoperit cu vazelin; nsmnarea n geloz n coloan)
2. Crearea condiiilor de anaerobioz--Metoda fizic utilizarea anaerostatului
Metoda chimic n exicator se ntroduc substane ce fixeaz oxigenul (pirogalol+baz); utilizarea gaspachetelor ..Metoda biologic Fortner cultivarea concomitent a aerobilor i anaerobilor.Recoltarea
cu precauie, evitnd contactul cu aerul (n seringi, utiliznd medii speciale)
I etap MBOGIREA ANAEROBILOR..nsmnarea prelevatului n 2 eprubete cu mediul Kitt-Tarrozzi
regenerat
nclzirea unui tub la 80 C, 20 min distrugerea florei nesporogene
Incubarea la 37 C, 24-48 h (va avea loc nmulirea anaerobilor)
II etap - IZOLAREA CULTURII PURE DE ANAEROBI--Studierea caracterelor de cultur tulburarea mediului,
descompunerea bucilor de ficat, etc..Izolarea culturii pure de anaerobi prin metoda Zeissler
(nsmnarea a 0,1 ml din mediul K-T pe 3 cutii cu geloz-snge glucozat consecutiv). Incubarea n
anaerostat/exicator/gas-pack, 24-48 h.Metoda Weinberg diluii succesive a culturii n geloz glucozat
lichefiat i aspirarea n tuburi lungi i nguste, nchise ermetic. Incubarea n termostat, 24 h
III etap - ACUMULAREA CULTURII PURE
Studierea macroscopic a coloniilor
Examinarea microscopic (frotiu Gram) a coloniilor suspecte
Repicarea n mediul K-T regenerat pentru acumularea culturii pure
Incubarea n termostat, 24 h
IV etap - IDENTIFICAREA CULTURII PURE DE ANAEROBI
Verificarea puritii culturii pure (frotiu Gram)
Studierea caracterelor culturii pure izolate (cu respectarea condiiilor de anaerobioz)
V etap - EVALUAREA REZULTATELOR, FORMULAREA I ELIBERAREA RSPUNSULUI.