1

Semnalizarea celular
Evoluia de la organisme unicelulare la pluricelulare a durat peste 1 milion de
ani datorit supraspecializrii metodelor de comunicare intercelular. Aceste
metode de comunicare sunt necesare pentru asigurarea contextului social
celular i evitarea tulburrilor de genul multiplicrilor necontrolate (cancer).
Comunicarea prin semnale intercelulare implic 6 etape:
1. sinteza moleculelor semnal
2. eliberarea moleculelor semnal de ctre celula care semnalizeaz
3. transportul semnalului ctre celulele int
4. detectarea semnalului de ctre o protein receptoare specific
5. o modificare a metabolismului celular sau a expresiei genice la nivelul
celulei int, fenomene induse de ctre complexul receptor-molecul
semnal
6. ndeprtarea sau inactivarea moleculei semnal i terminarea rspunsului
celulei int
n ceea ce privete semnalizarea ca fenomen ea implic: celule, receptori
liganzi (molecule semnal).
Celulele pot emite semnale ce vor fi recepionate de alte celule (semnalizare
intercelular) sau chiar de ctre celulele ce emit aceste semnale
(autosemnalizare).
Receptorii sunt macromolecule glicoproteice care pot lega reversibil i prin
complementaritate o molecul semnal (ligand). Pot fi situai la suprafaa celulei
sau n interiorul ei.
Liganzii sunt de o imens diversitate. Celulele comunic, schimbnd sute de
tipuri de semnale incluznd proteine, peptide mici, aminoacizi, nucleotide,
steroizi, retinoizi, derivai de acizi grai i chiar gaze solubile ca NO i CO. De
obicei semnalele sunt emise de o celul prin exocitoz.
Semnalizarea poate avea loc ntre celule situate la distan sau ntre celule
aflate n contact direct.

ntre 2 celule situate la distan semnalizarea poate fi de tip paracrin, endocrin

sau neurocrin.

Semnalele emise i captate de aceeai celul realizeaz modul de semnalizare

autocrin. De asemenea, 2 celule se pot afla n contact direct, permanent
(comunic prin intermediul jonciunilor "gap") sau temporar (celulele
sistemului imun).
Modul de semnalizare paracrin se dezvolt ntre celule situate n imediata
apropiere a celulei emitoare de semnal. Semnalizarea se face prin mediatori
locali care au o durat de via scurt, fiind preluai de celulele receptoare, de
matricea extracelular sau degradai enzimatic n mediul extracelular.

Modul de semnalizare sinaptic este descris la nivelul neuronilor care

comunic ntre ei sau cu celulele efectoare prin intermediul sinapselor (n cazul
de fa chimice - deoarece exist i sinapse electrice) unde se produce
descrcarea unor mediatori sintetizai de neuroni i transportai pe calea
axonal pn la nivelul sinapsei.
Modul de semnalizare endocrin este un sistem de semnalizare care determin
toate celulele unui organism s se comporte ca un tot.

Semnalele emise de celulele endocrine (grupate n glande endocrine sau relativ

disperse n cadrul sistemului APUD - amine precursor uptake and
decarboxylation) sunt numite hormoni; acetia sunt eliberai n fluxul sangvin
care i transport ctre esuturile int, deci ctre celulele dotate cu receptori
specifici, unde vor aciona specific, determinnd un rspuns celular.
ntre modurile de semnalizare endocrin i neurocrin exist diferene clare,
evideniate n figura de mai jos
Modul de semnalizare autocrin reprezint o modalitate de autosemnalizare n
care semnalele emise de o celul sunt captate de aceeai celul.

Un bun exemplu l constituie celulele care au ales o anumit cale de

difereniere, ele emind semnale pe care le i recepioneaz, confirmnd i
ntrind decizia direciei evolutive. Semnalizarea autocrin pare a avea o mare
importan n diferenierea celular timpurie (perioadele embriogenezei) cnd
un grup de celule identice au un comportament social, rspunznd la acelai
stimul n timp ce o celul izolat nu. Un tip de molecul semnal n
semnalizarea autocrin sunt eicosanoizii. Eicosanoizii sunt derivai de acizi
grai sintetizai n plasmalem, eliberai n mediul extracelular unde i exercit
aciunile i apoi sunt rapid degradai enzimatic. Eicosanoizii deriv din acidul
arahidonic (desprins de fosfolipaza A2 din membran) i au o mare varietate de
aciuni biologice ntre care: contracia fibrelor musculare netede, agregarea
plachetar participnd la mecanismele durerii i inflamaiei locale.
Intricarea dintre sistemele de reglare paracrin i autocrin este evident.
Tipuri de reacii de rspuns - n funcie de timpul de rspuns:
Reacii de ordinul milisecundelor (n cazul neurotransmitorilor);
Reacii de ordinul secundelor (dac receptorii sunt situai la nivelul
plasmalemei);
Reacii de ordinul orelor/zilelor, dac receptorii sunt situai intracitoplasmatic sau intranuclear.
Tipuri de reacii de rspuns - n funcie de modalitatea de rspuns:

4
Modificare a metabolismului celulei int (de exemplu creterea
glicogenolizei n momentul n care celula hepatic primete un semnal de tipul
moleculei de adrenalin).
O modificare de potenial la nivelul membranei celulare prin activarea sau
inactivarea unor canale ionice (ex. generarea potenialului de aciune).
O modificarea a expresiei genice: n special procese de transcripie la
nivelul nucleului (acest tip de rspuns se produce mai lent i dureaz mai mult)

5
Tipuri de molecule semnal
A. Semnale care traverseaz plasmalema
- compui hidrofobi, liposolubili (hormoni steroidieni, tiroidieni, retinoizi,
vitamina D)
- molecule hidrofile suficient de mici sau non-polare (CO, NO).

B. Semnale care nu traverseaz plasmalema - necesit lanul receptortraductor-amplificator - compui hidrofilici, insolubili n medii lipidice.

Iar n imaginea de mai jos se poate observa o comparaie ntre cele dou moduri
de semnalizare la distan, cu receptori la suprafa i receptori intracelulari:

6
DISCUII LEGATE DE SEMNALIZARE RAPORTATE LA TIPURILE
DE RECEPTORI
n funcie de poziia n membran, n cadrul cii de transmitere a semnalului,
receptorii se mpart n dou categorii: membranari i intracelulari
(intracitoplasmatici i intranucleari)
n funcie de activitatea n cadrul cii de semnalizare, receptorii pot fi
mprii n: receptori cu activitate catalitic i receptori fr activitate
catalitic.
Receptorii cu activitate catalitic se mpart n
- receptori cu activitate guanilat-ciclazic,
- receptori tirozin-kinazici i
- receptori tirozin-fosfatazici.
Receptorii fr activitate catalitic se mpart n:
- receptori cuplai la canale ionice,
- receptori cuplai cu proteinele G i
- receptori pentru citokine.
Termenul de transducie a semnalului indic faptul c stimulul primit de
receptorul celular este diferit de semnalul transmis n interiorul celulei.
Transducia semnalului este un proces complex n care informaia este purtat
de cile de semnalizare reprezentate de o serie de proteine distincte.
RECEPTORI PENTRU MOLECULE SEMNAL LIPOFILE - STEROIZI
I NO (care traverseaz plasmalema)
Steroizii reprezint molecule semnal hidrofobe mici care pot difuza liber prin
plasmalem n citoplasm i respectiv n nucleu.
Receptorii pentru steroizi sunt dimeri de proteine cu zinc prezente n nucleu (cu
excepia receptorilor pentru glucocorticoizi care se afl n citoplasm pn n
momentul cuplrii cu ligandul). Pn n momentul n care se cupleaz cu
ligandul, unii receptori pentru steroizi situai la nivelul nucleului se asociaz cu
histon-deacetilazele, meninnd expresia genic reprimat n acele regiuni ale
cromozomilor.
Liganzii. Unii hormoni steroizi regleaz expresia genic:
- glucocorticoizii (ex. cortizol, denumit i hidrocortizon) care cresc
nivelul glucozei n snge prin stimularea gluconeogenezei la nivelul
ficatului; sunt secretai de corticosuprarenal, zona cortical a
suprarenalei; glanda suprarenal are dou zone: cortical care secret
glucocorticoizi, mineralocorticoizi i androgeni i medulara care secret
adrenalin i noradrenalin
- mineralocorticoizii, cu efect asupra metabolismului mineralelor; ex.
aldosteron;
- hormoni sexuali: ex. estradiol, progesteron, testosteron
- ecdisona, steroid la insecte care determin schimbarea exoscheletului.

7
Mecanism

Molecule hidrofobe, lipofile:

Hormonii steroizi, tiroidieni, retinoizi, vitamina D, toi difer ca i structur i
funcie dar au acelai mecanism de aciune, fixarea de un receptor intracelular,
rspunsul celular manifestndu-se prin transcripie genic sintez proteic.
Hormonii steroizi sunt sintetizai pornind de la colesterol i au acelai schelet
chimic. De exemplu, la mamifere, estrogenii stimuleaz creterea peretelui
uterin ca pregtire pentru implantarea embrionului. Tiroxina, inclusiv
tetraiodotironina i triiodotironina principalul compus iodat n organism
este format n tiroid prin proteoliz intracelular a proteinei iodate numit
tiroglobulin. Tiroxina este produs de celulele tiroidiene i eliberat imediat n
snge. Hormonii tiroidieni stimuleaz catabolismul glucozei, grsimilor i
proteinelor prin creterea nivelului unor enzime care catalizeaz astfel de reacii
precum i creterea enzimelor mitocondriale implicate n procesele de
fosforilare oxidativ.
Receptorii intracitoplasmatici fac parte din superfamilia receptorilor
intracelulari.
Receptorii sunt situai fie intracitoplasmatic fie intranuclear.
Receptorii pentru cortisol (h. Steroid) sunt situai intracitoplasmatic. Lanul de
semnalizare rspuns este: Cortisol traverseaz membrana legare de
receptor intracitoplasmatic activarea acestui receptor cu expunerea situsului
de legare pentru ADN complexul hormon-receptor (H-R) traverseaz porii
nucleari, ajungnd n nucleu complexul H-R se fixeaz pe o regiune
specific din ADN numit SRE (steroid responsive element), parte a unui
promotor genic, inducnd dereprimarea unor gene alturate care vor iniia
transcripia ADN i deci vor iniia procesele de sintez proteic.
Receptorii pentru retinoizi sunt situai n special intranuclear. Spre deosebire de
receptorii pentru cortizol ei se pot fixa pe ADN i n absena ligandului
(hormonului) dar vor declana rspunsul celular (transcripia genic) numai n
momentul cuplrii ligandului.
Rspunsul propriu-zis cuprinde dou etape: o reacie primar, determinat de
transcripia unui numr mic de gene, apare n circa 30 de minute, urmat apoi
de un rspuns tardiv, mult amplificat, reacia secundar.
n general, rspunsurile la aceste tipuri de substane sunt extrem de specifice
din dou motive: n primul rnd, numai anumite celule au receptori intracelulari

8
pentru aceste substane i acetia sunt specifici pentru fiecare ligand n parte; n
al doilea rnd activarea genic nu se face printr-un singur semnal (H-R) ci
printr-o secven de semnale aranjate ntr-o ordine prestabilit i caracteristic,
de asemenea, fiecrui tip de ligand.
Molecule mici, non-polare, hidrofile sau hidrofobe.
Exemplul cel mai cunoscut este monooxidul de azot (NO), recunoscut azi ca
molecul semnal. NO difuzeaz liber prin membranele celulare. Exist o
mulime de molecule cu care NO poate interaciona, deci va fi rapid inactivat,
n apropierea locului unde este sintetizat. Astfel, NO poate aciona n mod
paracrin sau autocrin, afectnd celulele din imediata apropiere a locului de
sintez.
Receptorii. Funcia de molecul semnal a NO ncepe legarea la proteinele
intracelulare din celula int. Locurile de legare pot fi: un ion metalic la nivelul
unei proteine (Fe din guanilat-ciclaz) sau un atom de S de la nivelul unei
molecule de cistein.
Mecanism de aciune. n ambele cazuri cuplarea NO cu receptorii determin o
modificare allosteric (se refer la o modificare a proprietilor unei proteine
inclusiv modificare de form ca urmare a cuplrii cu o alt molecul) a
proteinei ceea ce determin mai departe formarea unui mesager secund la
nivelul celulei int. Proteina cea mai frecvent folosit ca int de NO este
guanilat-ciclaza, enzim care prin cuplarea cu NO determin producia unui
mesager secund GMPc (guanozin-monofosfat ciclic), care continu i
amplific mecanismul de semnalizare, inducnd rspunsul celular. GMPc va fi
ulterior degradat rapid de o fosfodiesteraz (PDE5), cu un turnover rapid, deci
efectele NO vor fi rapide.
La nivelul fibrelor musculare netede din pereii vaselor, el mediaz relaxarea
acestor fibre indus de acetilcolin (fiziologic) sau de medicamente ca
nitroglicerina (terapeutic). Nitroglicerina este utilizat n afeciuni cardiace cum
ar fi angina pectoral, unde inima sufer din lipsa de O 2 indus de o
insuficien de aport prin sistemul coronarian. Tratamentul (iniial) const n
administrarea de nitroglicerin care, relaxnd fibrele musculare netede din
pereii vaselor, le dilat, permind un aport de O 2 suficient. De asemenea,
relaxarea i mrirea diametrelor vasculare scade presiunea "de ntoarcere" a
sngelui la inim i rezistena la ejecie n faa ventricolului stng, reducndu-se
astfel munca inimii i deci consumul ei de oxigen.
Toate aceste importante aciuni fiziologice sau terapeutice sunt mediate de NO
care este (fiziologic) sintetizat de ctre NO sintetaz, prin deaminare, pornind
de la Arg (arginin, un aminoacid). NO sintetizat intracelular poate deci difuza
rapid prin membrane i poate aciona rapid asupra celulelor vecine, fiind deci
un mediator local. Durata sa de supravieuire (exprimat prin "semivia") este
scurt - semiviaa este de 5-10 secunde n spaiul extracelular. n celulele int
reacioneaz cu ionul de Fe din enzima guanilat ciclaz (asemntoare adenilat
ciclazei) activnd-o i stimulnd producia de GMPc. Acesta din urm poate
induce relaxarea n fibrele musculare netede.
RECEPTORI DE SUPRAFA pentru molecule care nu strbat
plasmalema (hidrofile)

9
Transmiterea de informaii prin molecule hidrofile necesit existena unui
"lan": receptor-traductor-amplificator pentru a genera rspuns celular.
Rspunsul celular const n activarea unui canal ionic (deci variaie n
concentraia ionic intracelular) sau (ca i n cazul precedent) transcripie
genic.
Moleculele semnal vor aciona asupra unor receptori care se vor cupla cu
proteine traductoare care, la rndul lor vor aciona asupra unei proteine
amplificator, genernd mesagerul secund. Mesagerul secund va declana o
cascad de evenimente (activare de canale ionice, fosforilri proteice etc.) ce se
constituie n rspunsuri celulare, modificnd comportamentul celulei int.
Receptori cu activitate catalitic
1. Receptorii cu activitate guanilat ciclazic (RGC) prezint un domeniu
extracelular cu activitate receptoare i un domeniu intracelular cu activitate
guanilat-ciclazic.

Legarea ligandului la acest tip de receptor activeaz domeniul citoplasmatic

guanilat ciclazic (mecanism valabil pentru peptidul natriuretic atrial). RGC
utilizeaz GMPc ca i mediator intracelular aa cum receptorii cuplai cu
proteinele G utilizeaz AMPc, deosebirea fiind absena, n primul caz, a
intermedierii transmiterii semnalului prin proteinele G. GMPc rezultat din
hidroliza ATP va activa o serie de fosforilaze care pot fosforila proteine
intracelulare, inducnd realizarea unui rspuns celular.
Un exemplu este peptidul natriuretic atrial (PNA). PNA face parte dintr-o
familie de molecule nrudite secretate de fibrele musculare cardiace de la
nivelul camerei atriale atunci cnd presiunea sangvin crete. PNA stimuleaz
celulele renale s excrete Na+ i ap precum i relaxarea fibrelor musculare
netede din pereii vaselor. Toate aceste fenomene au ca rezultat scderea
presiunii sangvine. Receptorul pentru PNA este prezent la nivelul
miocardiocitelor (celulele musculare cardiace), la nivelule celulelor renale i la
nivelul fibrelor musculare netede din pereii arterelor i arteriolelor. Acest
receptor este o protein uni-pass, dotat cu un domeniu de legare extracelular
pentru PNA i un domeniu intracelular, catalitic, de tip guanilat-ciclaz.
Legarea PNA la nivelul situsului extracelular de legare activeaz situsul
catalitic, determinnd producerea de GMPc. GMPc activeaz (n ordinea
cunoscut de la AMPc), o protein-kinaz GMPc-dependent (G-kinaz) care
fosforileaz reziduuri serinice sau treoninice la nivelul unor proteine specifice.

10

Astfel, receptorul de tip guanilat-ciclaz utilizeaz GMPc ca i mediator

intracelular aa cum receptorii cuplai cu proteinele G utilizeaz AMPc,
deosebirea fiind absena, n primul caz, a intermedierii transmiterii semnalului
prin proteinele G.

11
2. Receptorii tirozin-kinazici (RTK) sunt receptori cu activitate catalitic
intrinsec, realiznd, prin activare, degradarea ATP i transferul unei grupri
fosfat pe reziduuri Tyr ale proteinelor int intracelulare

n aceeai categorie a RTK intr i receptorii serin-treonin-kinazici, receptori cu

activitate catalitic intrinsec, realiznd, prin activare, degradarea ATP i
transferul unei grupri fosfat pe reziduuri Ser/Thr.

RTK- Ser/Thr sunt de dou tipuri, I i II, acetia dimeriznd n cadrul

procesului de cuplare a ligandului. Semnalul intracelular este transmis de
receptorul de tip I.

12
Receptorii pentru insulina i numeroi factori de cretere (TGFbeta) sunt
receptori de tip tirozin-kinazic care se cupleaz cu ligandul; legarea enzimligand duce la dimerizarea receptorilor, urmat de activarea fie a serin/treoninkinazelor fie a tirozin-kinazelor. Aceste tipuri de receptori fosforileaz reziduuri
din domeniul citoplasmatic al receptorului nsui. Autofosforilarea RTK creeaz
situsuri de legare pentru unele enzime citosolice, aducndu-le n vecintatea
substraturilor de la nivelul plasmalemei.

RTK fosforileaz numeroase proteine substrat, afectndu-le activitatea. Multe

din aceste proteine substrat sunt de asemenea tirozin-kinaze, formnd astfel o
cascad de fosforilri care au loc n citoplasm. Unele tirozin-kinaze
citoplasmice acioneaz direct asupra transcripiei genice prin transportul n
nucleu i transferul gruprii fosfat unor factori de transcripie pe care astfel i
activeaz.
3. Receptorii tirozin-fosfatazici (RTP), dup cuplarea ligandului, activeaz la
nivelul domeniului lor citoplasmatic protein-fosfataza care are rolul de a
defosforila unele proteine intracitoplasmatice.

Receptori fr activitate catalitic

13
1. Receptori asociai la canale ionice (sau care sunt ei nsui canale ionice)

Prin cuplarea la proteina-canal, ligandul i modific acesteia conformaia

modificnd pentru scurt timp permeabilitatea la ioni a canalului respectiv. Este
cazul neuromediatorilor care, odat eliberai n spaiul sinaptic de ctre celula
presinaptic, se leag de receptorii ataai canalelor ionice din membrana
celulei postsinaptice. Aceast legare duce la deschiderea canalelor care are
drept consecin modificarea polaritii i excitabilitii celulei postsinaptice
(rspuns celular). Receptorii legai la canale ionice aparin unei familii de
proteine transmembranare multi-pass. Ca exemplu, receptorii pentru
acetilcolin la nivelul jonciunii neuromusculare.
2. Receptori care activeaz calea JAK-STAT
Aceti receptori nu prezint activitate enzimatic intrinsec dar se asociaz
direct cu protein-kinaze citoplasmice. Sunt proteine transmembranare unipass.
Exemple de liganzi,: interferoni, interleukine (11-2, 3, 4, 5, 6, 7, 11), factor de
cretere (GH), prolactina (PRL), eritropoietina (EPO), trombopoietina, factor
granulocitar-macrofagic stimulator de colonii.

Legarea ligandului determin dimerizarea receptorilor monomerici. Receptorul

astfel dimerizat activeaz una sau mai multe tirozin-kinaze citoplasmatice.
Pentru exemplele de liganzi menionate mai sus, receptorul dimerizat
interacioneaz cu JAK (Janus-kinaz) care fosforileaz reziduuri tirozinice de
la nivelul uneia sau mai multor proteine STAT (Signal Transducer and Activator
of Transcription - un factor de transducie a semnalului i de activare a
transcripiei genice). Aceste proteine STAT formeaz la rndul lor dimeri care
ptrund n nucleu i se cupleaz la nivelul promotorilor unor gene pe secvene
de ADN specifice, ceea ce determin iniierea proceselor de transcripie. Cile
Jak-STAT sunt mult mai scurte dect cile RTK, astfel nct rspunsul celular la
liganzi va fi mult mai rapid.
Receptori cuplai cu proteinele G - fac parte dintr-o mare familie cu aproape
100 de membri, prototipul fiind o protein transmembranar multi-pass cu 7
pasaje transmembranare. Din familie fac parte rodopsina, protein sensibil la
radiaiile din spectrul vizibil, gsit n celulele retiniene de la vertebrate i de

14
asemenea, receptorii olfaciei, tot la vertebrate. De-a lungul evoluiei speciilor,
aceti receptori i-au pstrat nu numai secvena de aminoacizi ci i relaia cu
proteinele G. Dei aceste tipuri de receptori leag specii diferite de hormoni
hidrosolubili i pot media diferite rspunsuri celulare, ei posed o serie de
proprieti comune:
- secvena de aminoacizi care formeaz receptorul conine 7 domenii
transmembranare formate fiecare din 22-24 aminoacizi hidrofobi;
- bucla din receptor cuprins ntre zonele transmembranare 5 i 6
precum i segmentul C-terminal sunt eseniale pentru cuplarea cu
proteinele G.
Proteinele G pot aciona ca i comutatoare deoarece ele exist n dou stri
reversibile: o stare activ n care este legat o molecul de GTP i una inactiv
n care este legat o molecul de GDP. Diferena dintre aceste dou conformaii
este faptul c proteina G cu GTP poate lega proteine specifice pe care cea cu
GDP nu le poate lega.
Trecerea din starea inactiv n starea activ i invers, a proteinelor G, este
ajutat de o serie de proteine accesorii ce se pot lega la acestea i le regleaz
activitatea:
1. Proteinele de activare a GTP-azelor (GAPs)
Majoritatea proteinelor G au capacitatea de a hidroliza GTP legat, dar aceast
capacitate este mult accelerat de interaciunea cu o GAPs specific care
stimuleaz hidroliza GTP legat ceea ce va conduce la inactivarea proteinei G.
Deci GAPs scurteaz rspunsul mediat de proteina G.
2. GEFs Factorii de schimb guanin-nucleotidici
Dac se leag de o protein G inactiv stimuleaz disocierea GDP legat urmat
de legarea GTP i activarea proteinei G.
3. Inhibitorii de disociere guanin-nucleotidici (GDIs) - inhib eliberarea GDP
legat la o protein G i menine proteina G inactiv.
Proteinele G sunt structuri heterotrimerice care sunt meninui n plasmalem
prin legturi covalente de lanurile lipidice. Au fost descoperite i caracterizate
de Martin Rodbell i colegii si la nceputul anilor `70. Au fost numite proteine
G deoarece leag guanin-nucleotide (GDP sau GTP). Sunt formate din trei
subuniti polipeptidice: , , . Exist i proteine G formate dintr-o singur
subunitate. Subunitile i sunt comune tuturor proteinelor G iar cele sunt
specifice: s, i (i1, i2, i3, etc.), q (activeaz fosfolipaza C) etc.
Subunitatea are dou domenii: unul cu funcie GTP-azic ce are patru situsuri
de legare specifice pentru receptor, guanin, efectorul membranar i subunitatea
; unul a crui funcie nu este nc pe deplin elucidat, dar se presupune c ar
contribui i la activitatea GTP-azic a subunitii, acest domeniu are o structur
helicoidal.
Subunitatea
La mamifere exist cinci tipuri de subuniti care difer ntre ele n proporie
de 53-90% i ase tipuri de subuniti ce prezint diferene structurale mult
mai mari. Rolul subunitii nu este doar unul pasiv, de a poziiona complexul
proteinei G. Recent, s-a pus n eviden activitatea enzimatic att a subunitii
ct i a celei . La fel ca subunitatea , subunitatea interacioneaz direct
cu mai multe tipuri de efectori (enzime, canale ionice, etc.). Cuplarea

15
subunitii cu aceti efectori poteneaz aciunea subunitii asupra lor sau
determin, pe cont propriu, activarea sau inhibiia efectorilor.
n cazul proteinelor Gi subunitile , pot inhiba sinteza de AMPc n dou
moduri: legare la adenilatciclaz direct; legare la alte subuniti s libere din
aceeai celul mpiedicnd activarea adenilatciclazei de ctre acestea.
Funcia proteinei G este releu de transmisie a semnalului de la receptorul
activat la un efector din membrana plasmatic.

Fig.
Reprezentare 3D a
domeniilor proteinei G
heterotrimerice membranare,
alturi de receptorul
rodopsinic

Domeniul helical are structura cea mai variabil n cadrul familiilor

subunitilor G i poate fi implicat n direcionarea specificitii cuplrii
dintre receptor i proteina G.
Proteina G are activitate GTP-azic intrinsec, deci va hidroliza GTP la
GDP + Pi, devenind din nou inactiv. Forma activ a traductorului (proteina G
+ GTP) poate suferi o translaie prin membran, activnd un lan de evenimente
care au ca finalitate producerea unor molecule semnal mici, intracitoplasmatice,
denumite mesageri secunzi. Aceti mesageri secunzi transmit mai departe,
amplificat, semnalul, modificnd comportamentul unor proteine intracelulare.
Cei mai frecvent ntlnii mesageri secunzi n aciune sunt AMPc i Ca2+.
Practic acum putem descrie pentru moleculele semnal ce nu pot traversa
plasmalema 2 etape n transmiterea mesajelor: o etap membranar i una
citoplasmatic, ultima pornind de la sinteza mesagerului secund (mesagerul
primar este considerat molecula semnal).

16
Proteinele trimerice G pot fi de tip stimulator Gs sau inhibitor Gi dup tipul de
aciune asupra enzimei care va genera mediatorul secund (adenilat ciclaza - AC
- n cazul AMPc). Proteinele G sunt alctuite din 3 subuniti , i .
Subunitatea este cea responsabil de activitatea GTP-azic n timp ce
subunitile , formeaz un complex care are rolul de a ataa G s la faa
citoplamatic a plasmalemei prin intermediul unei grupri prenil. n starea
inactiv, proteina G are ataat o molecul de GDP la nivelul subunitii s.
Legarea moleculei semnal la receptor duce la activarea s care va elibera GDP
i va cupla GTP din citoplasm. Aceast schimbare determin o disociere a
subunitii s de complexul iar subunitatea s capt o afinitate mai mare
pentru adenilat ciclaz (AC) ctre care migreaz i pe care o activeaz.
Cuplarea s cu AC duce la activarea capacitii GTP-azice a s care, ntr-un
timp scurt va hidroliza GTP la GDP, moment n care afinitatea s pentru AC
scade, urmnd desprinderea i reasocierea acesteia cu complexul . Astfel,
complexul trimer G este refcut i gata de a primi un nou semnal.

17

18
Importana inactivrii subunitii s i n consecin a AC este major. n cazul
bolnavilor afectai de holer, deci de toxina vibrionului holeric, aceast
inactivare nu se mai produce. Cauza o constituie fixarea ADP ribozei, preluat
din NAD-ul citoplasmatic de ctre toxina holeric, la subunitatea s care nu
mai poate hidroliza GTP-ul, activitatea ei GTP-azic devenind foarte sczut.
n consecin, AC va fi ndelung activat i va genera nivele crescute de AMPc.
Rezult un transfer important de Na+ nspre lumenul intestinal care va atrage n
acelai sens un flux de ap, determinnd astfel diareea apoas, caracteristic
din holer.
Am remarcat pn aici modul de aciune al unei proteine G stimulatorii (G s)
care activeaz o enzim membranar AC (adenilat-ciclaza) determinnd apariia
unui mesager secund (AMPc) care va genera etapele intracitoplasmatice ale
rspunsului celular. Dar exist i alte tipuri de proteine G cu efecte diferite, dei
este vorba de un acelai semnal. Este cazul unor receptori diferii pentru aceeai
molecul semnal. Aceeai molecul semnal poate avea efecte diferite n teritorii
diferite tocmai datorit existenei unor receptori diferii (pluralitatea
receptorilor) cuplai la traductori diferii. S exemplificm cazul adrenalinei
(epinefrin) (semnal). Exist mai multe tipuri de receptori adrenergici din care
menionm aici i . Aciunea ligandului pe -receptori activeaz AC prin
intermediul unei proteine Gs, crescnd nivelul AMPc. Aceeai aciune asupra
unui receptor 2 va inhiba AC prin intermediul unei proteine G inhibitoare (G i),
reducnd astfel nivelul AMPc. Se pare c la nivelul acestor proteine G,
complexul este asemntor, ceea ce difer fiind subunitatea . Inhibarea AC
este indirect, nu neaprat prin i ci mai degrab prin complexul care poate
fixa alte subuniti de tip s libere, mpiedicndu-le s activeze AC; de
asemenea complexul poate fixa AC direct, inactivnd-o. Totui, o funcie
mai important a proteinelor Gi, implicat n efectele diferite ale semnalelor
este activarea unor canale pentru K+ la nivelul plasmalemei.
Am parcurs pn aici, etapa intramembranar a transmiterii semnalelor ce nu
pot traversa plasmalema i am obinut traducerea semnalului prin proteinele G,
activarea unei enzime membranare i sinteza unor mesageri secunzi (AMPc sau
GMPc i IP3).
Etapa intracitoplasmatic are ca debut sinteza AMPc i ca finalitate un
rspuns celular care poate fi modificarea unei ci metabolice sau activarea
transcripiei genice cu sintez proteic ulterioar.
Aceste finaliti se pot obine printr-o serie de fosforilri ale unor proteine
(enzime) prin care acestea devin active i capabile de a cataliza alte reacii n
citoplasm. Este o cascad a fosforilrilor.

19

Etapele transmiterii intracitoplasmatice ale mesajului. AMPc va activa o

enzim citoplasmatic i anume protein-kinaza AMPc-dependent sau Akinaza. Aceast enzim are capacitatea de a transfera un grup fosfat terminal de
la ATP (care se va transforma n ADP) pe reziduuri aminoacide de tip serin sau
treonin din proteinele int. Se pare c A-kinaza este responsabil de toate
efectele AMPc la nivel celular (o excepie ar fi numai activarea direct prin
AMPc a unei clase de canale ionice la nivelul neuronilor olfactivi).
Fosforilarea proteinelor citoplasmatice (sau a enzimelor) i activarea lor de
ctre A-kinaz are ca rezultate finale activarea unei ci metabolice sau
transcripia genic.
Activarea unei ci metabolice a fost demonstrat la nivelul metabolismului
glicogenului din fibrele musculare. Sub influena adrenalinei (epinefrin),
secretate n caz de stress acut, celulele musculare degradeaz glicogenul la
glucoz-1-fosfat care va intra pe calea glicolizei, cu producie de ATP,
substratul energetic al contraciei. Mecanismul este exemplificat n cadrul
figurii de mai jos.

20
A-kinaza va activa simultan 2 enzime prin fosforilare: mai nti fosforilarea
unei fosforilaz-kinaze, activnd-o i fosforilarea glicogen-sintetazei, inactivndo. Fosforilaz-kinaza activ va aciona, n cascad, prin fosforilare o glicogen
fosforilaz, care va cataliza degradarea glicogenului la glucoz-1-fosfat. n
acelai timp, inactivarea glicogen-sintetazei duce la oprirea sintezei
glicogenului din glucoz (oprirea glicogenogenezei). Finalitatea o reprezint
creterea cantitii de glucoz-1-fosfat ce intr pe calea glicolizei, cu generarea
ulterioar de ATP, utilizat n contracia muscular.
Activarea transcripiei genice are loc doar n celule specializate. Un exemplu
este cazul celulelor secretoare de somatostatin. A-kinaza fosforileaz o protein
specific de reglare a transcripiei genice (CREB - cAMP responsive element
binding-protein) iar aceasta se va lega la nivelul ADN pe o poriune specific,
denumit CRE (cAMP responsive element). Finalitatea este transcripia genic,
urmat de sintez proteic (somatostatin, n acest caz).
Inactivarea rspunsurilor la mesaje extracelulare. Este important ca la un
moment dat, efectele AMPc s fie tranzitorii. Pentru aceasta, celulele trebuie s
fie capabile s defosforileze protein-enzimele activate anterior, cum s-a vzut
mai sus, prin fosforilare. Ne amintim c A-kinaza transfer grupri fosfat (adic
fosforileaz) gruprile serin i treonin de la nivelul proteinelor int.
Defosforilarea acestor proteine este catalizat de 4 grupe de serin/treonin
fosfoprotein-fosfataze. De menionat c, n timpul transmiterii mesajului
(sinteza AMPc i fosforilrile care genereaz rspunsuri celulare), aceste
protein-fosfataze sunt inactivate prin cuplarea cu o protein inhibitorie, activat
la rndul ei prin fosforilare, tot de ctre A-kinaz (feed-back).

21
Un alt mesager secund, extrem de important i cu raz se aciune (se pare) mai
vast dect AMPc este IP3 care controleaz concentraia de Ca2+. La nivel
intracelular, Ca se afl n concentraii sczute pentru a asigura buna funcionare
a proceselor celulare (10-7M). n schimb, concentraia acestui ion att
extracelular ct i n unele compartimente subcelulare (reticul endoplasmic, sau
n celulele musculare forma sa specializat - reticulul sarcoplasmatic) este
crescut (10-3M). Astfel, exist un gradient de concentraie ntre mediile noncitoplasmatice i citoplasm, n ceea ce privete Ca. De aceea orice ocazie n
care Ca ptrunde n celul, reprezint (n limite fiziologice) un mod (foarte
rspndit) de semnalizare. Ptrunderea Ca2+ n celul reprezint momentul
declanrii unor procese secundare care vor culmina cu finalitatea ateptat:
rspunsul celular (contracie, micare, proliferare, difereniere). Ca 2+ devine
periculos pentru viaa celulei dac nivelul concentraiei sale depete 10 -5M.
De aceea celula are trei ci de a-l scoate n mediul non-citoplasmatic.
a. Pompa de Na+-Ca2+ ce pompeaz Ca spre exteriorul celulei la antiport cu Na+
b. Pompe de Ca2+ care pompeaz Ca spre reticulul endoplasmatic
c. Dac nivelul Ca2+ devine periculos (>105M), intervine alt mecanism,
mitocondrial, care pompeaz Ca2+ n mitocondrii cu ajutorul energiei furnizate
de lanul transportor de electroni. De asemenea, n citoplasm sau n organite,
exist proteine captoare de Ca2+ care-l sechestreaz.
Deci creterea nivelelor Ca2+ ntr-o celul se produce prin 2 mecanisme:
deschiderea unor canale pentru Ca2+ ghidate de potenial (cu poart ghidat
de potenial); se gsesc n special la nivelul terminaiilor nervoase axonale,
unde deschiderea lor sub influena impulsului depolarizant i influxul de Ca 2+
produc descrcarea neuromediatorului n fanta sinaptic.
eliberarea Ca2+ din depozitele sale intracelulare (reticul endoplasmatic, mai
ales) sub influena unui alt mediator secund a crui genez se datoreaz (din
nou!) activrii unei proteine din familia G, dar de un tip special G q. Activarea
acestei proteine Gq declaneaz activarea unei fosfolipaze specifice (fosfolipaza
C-). Fosfolipaza C- acioneaz asupra fosfolipidelor membranare care conin
inozitol (PIP i PIP2 - fosfatidil inozitol i difosfatidil-inozitol), degradndu-le.
Din aceast degradare rezult IP3 (inozitol-trifosfat) i DAG (diacil-glicerol)
(vezi figura de mai jos).

22

Fiecare din aceste substane se comport ca un intermediar n eliberarea unui

nou mesager secund deci Ca2+.
IP3 va activa canalele de calciu dependente de ligand de la nivelul RE
(reticul endoplasmatic). Canalele de Ca din membranele RE au o structur
similar cu a canalelor de Ca clasice (sensibile la ryanodin) din reticulul
sarcoplasmatic din fibrele musculare. Eliberarea Ca 2+ este reglat printr-un
mecanism de feedback pozitiv, adic: dup activarea canalelor de Ca din RE
prin cuplarea IP3 la receptorii asociai acestor canale i eliberarea Ca, acesta
nsui va activa alte canale, mrind brusc concentraia Ca 2+ intracitoplasmatic.
Ca2+ accentueaz eliberarea de noi cantiti de ion din RE (feedback pozitiv).
Dar, aa cum am menionat, Ca2+ are efecte toxice n celul dac depete
concentraia de 10-5M. Deci, el va trebui nlturat dup ce-i exercit efectele
de mediator secund. nlturarea Ca2+ se poate face prin:
- inactivarea IP3 prin defosforilare de ctre fosfataze (le-am
ntlnit i la inactivarea proteinelor fosforilate de A-kinaz); inactivarea IP3 nu
se face numai prin defosforilare ci i printr-o fosforilare suplimentar n poziia
3, rezultnd IP4 (1,3,4,5-tetrafosfat). Acest IP4 are o aciune interesant, el
putnd stimula un rspuns celular prelungit (deci o eliberare lent a Ca 2+ din
depozite) fie o reumplere a depozitelor intracelulare din surse extracelulare.
Enzima ce catalizeaz producia IP4 din IP3 este activat de creterea Ca2+
intracitoplasmatic. Aici este vorba despre o reglare prin feedback negativ:
creterea brusc a Ca2+ n celule determin nti reacia de feedback pozitiv,
apoi, de feedback negativ, ultima avnd ca rezultat fie pomparea Ca 2+
extracelular sau ctre depozite, fie generarea unui compus (IP4) care va controla
eliberarea de durat a Ca2+ cu prelungirea efectelor.

23
- pomparea rapid a Ca2+ n afara celulei (vezi mecanismele mai
sus).
DAG (diacil-glicerol) este el nsui un mediator secund. El poate fi
clivat mai departe pn la acid arahidonic ce va fi utilizat n sinteza
eicosanoizilor, la rndul lor mediatori (vezi mai sus). Pe de alt parte, DAG va
activa o protein-kinaz: protein-kinaza C (PKC) denumit astfel deoarece este
Ca-dependent. Activarea PKC este reprezentat de deplasarea acesteia din
citoplasm pn la nivelul feei interne a membranei unde va fi acolat.

Explicaii la figur: Figura reprezint dou stri ale PKC inactiv (stnga) i
activ, acolat la faa intern a plasmalemei (dreapta). n dreapta, n cazul
activrii PKC, rspunsul celular se poate obine n dou moduri. n stnga
figurii din dreapta (ce exprimare! din cauz c nu am imprimant color) PKC
activeaz o cascad de fosforilri care duce la fosforilarea unei proteine pivot
denumit MAP-kinaz care fosforileaz i activeaz o protein reglatoare a unei
gene, protein numit Elk-1. Elk-1 este cuplat pe o secven scurt de ADN,
denumit SRE (serum responsive element) i este asociat cu alt protein de
cuplare a ADN, denumit SRF (serum responsive factor). Rezultatul, adic
rspunsul celular const n activarea transcripiei genice. Cealalt cale, n
dreapta figurii din dreapta (scuze!) const n fosforilarea unui factor inhibitor,
IB. CE ESTE ACEST IB ? IB este un inhibitor citoplasmatic al factorului
NF-B. CE ESTE NF-B ? Este un mesager secund care abia ateapt s fie
activat pentru a determina un rspuns celular. I CUM FACE ASTA ? Simplu !
Legarea ligandului (n acest caz, TNF - tumor necrosis factor sau a
limfotoxinei - TNF) la un receptor transmembranar tipic determin, prin
intermediul Gq-PKC fosforilarea IB. Acesta, ca inhibitor al NF-B se

24
desprinde de NF-B i astfel, acesta din urm se activeaz. NF-B activat trece
n nucleu (dac era legat cu ditamai inhibitorul nu putea!) unde acioneaz ca
un factor de transcripie, cuplndu-se pe promotorii sau amplificatorii a peste
60 de tipuri de gene (numele de NF-B provine de la descoperirea sa ca factor
de transcripie cuplat cu amplificatorul genei lanului uor kappa () al
anticorpilor). Astfel, induce transcripie genic, deci (victorie!) rspuns celular.
Acesta este efectul combinat al creterii nivelului intracelular al Ca 2+ sub
influena iniial a IP3, aciunii DAG i sarcinilor negative ale fosfatidil-serinei
de pe faa intern a membranei celulare. Cu toate acestea este de menionat c
nivelul de DAG produs iniial prin clivarea PIP2 nu poate fi suficient, el fiind
rapid inactivat. Pentru a menine un nivel de semnalizare ridicat un timp
suficient unor rspunsuri ca proliferarea sau diferenierea celular, DAG
trebuie produs i de o alt surs, o fosfolipaz care cliveaz fosfatidil-colina.
Odat activat, PKC (o protein-kinaz) va fosforila diferite proteine int cum
ar fi, de exemplu, canale ionice din celulele nervoase, provocnd depolarizarea
(rspunsul).
O alt modalitate de rspuns este activarea transcripiei genice, care se poate
realiza n 2 moduri: prin activarea unei cascade de protein-kinaze care vor
fosforila i activa n final o protein asociat ADN care va determina iniierea
transcripiei sau, prin fosforilarea unei proteine inhibitorii care va elibera o
protein de activare genic. Aceasta din urm va activa transcripia genic, dup
fixarea pe ADN.