Sunteți pe pagina 1din 22

Cuprins

Introducere.......................................................................................................................................3
I. Substanele din compoziia vinului..............................................................................................4
1. Alcoolii din vin.........................................................................................................................4
2. Alcoolii polihidroxilici.............................................................................................................5
3. Aldehidele................................................................................................................................5
4. Acizii........................................................................................................................................6
5. Zaharurile.................................................................................................................................7
6. Compuii polifenolici...............................................................................................................7
7. Substanele azotate...................................................................................................................7
8. Substanele pectice i polizaharidele........................................................................................8
9. Acetalii.....................................................................................................................................8
10. Esterii.....................................................................................................................................8
11. Substanele odorante..............................................................................................................8
12. Substanele minerale..............................................................................................................9
13. Vitaminele..............................................................................................................................9
II. Tehnica cromatografic folosit pentru analiza substanelor volatile din vinuri este
cromatografia de gaze cuplat cu spectrometria de mas (GS-MS)..............................................10
1. Cromatografia de gaze...........................................................................................................10
2. Componentele unui sistem GC...............................................................................................11
3. Introducerea probelor n coloana cromatografic..................................................................13
4. Spectrometria de mas utilizat ca tehnic de detecie n cromatografie..............................14
5. Cuplarea cromatografului de gaze cu spectrometrul de mas...............................................15
6. Realizarea practic a analizelor GC-MS...............................................................................16
7. Avantajele folosirii GC/MS....................................................................................................18
III. Identificarea componentelor volatile din vinurile roii folosind metoda gaz-cromatografic.19
1. Aparatur................................................................................................................................19
2. Condiii cromatografice - parametrii de lucru........................................................................19
3. Modul de lucru.......................................................................................................................20
4. Rezultatele obinute................................................................................................................20

IV.Concluzii...................................................................................................................................23
Bibliografie................................................................................................................................24

Introducere
Aroma este un parametru important al vinului de calitate, n care buchetul este produsul
unor procese biochimice i secvene tehnologice, i este influenat de componentele volatile
produse n timpul fermentrii, reprezentnd mai mult de 500 de compui volatili, care au fost
deja identificai

n struguri i vin. Compoziia volatil a vinului este unul dintre cei mai

importani factori pentru a stabili caracterul, aroma i calitatea acestuia.


Datorit originii sale, vinul are o compoziie complex care variaz n coresponden cu
diveri factori. Aceti factori influeneaz calitatea i cantitatea de struguri i, prin urmare, a
vinului: solul, factorii climatici, mijloacele prin care se face vinul.
n componena vinului se regsesc: alcooli, acizi, zaharuri, fenoli, substane aromate, care
determin caracteristicile organoleptice i fizicochimice ale vinului. Acumularea acestor
substane are loc n timpul de maturare a strugurilor, dar nu la aceeai intensitate ca i
acumularea de zaharuri. La majoritatea strugurilor substanele odorante se gsesc n coaj i mai
puin n semine i pulp.
Natura chimic a substanelor odorante din struguri este foarte complex.
n vin, alturi de substanele care provin din struguri, se regsesc, de asemenea, substane
care rezult n timpul procesului de fermentaie alcoolic sau se formeaz n timpul depozitrii
vinului. Astfel de substane aromate care provin din struguri formeaz aroma principal, n timp
ce substanele formate n timpul fermentaiei alcoolice sunt responsabile pentru aroma secundar.
Substanele odorante care apar n timpul mbatranirii vinului, din cauza unor procese
precum oxidare, reducere, hidroliz, esterificare, formeaz aa numitul buchet de maturare.
Pstrarea vinului n sticle provoac o uoar modificare a coninutului de substane
odorante, care duce la apariia buchetului de maturare, caracteristic pentru vinurile de colecie.

I. Substanele din compoziia vinului


Vinul provine din sucul de struguri care este supus fermentrii fiind format dintr-un
sistem polifazic, obinut din diverse substane care se gsesc n proporii diferite. Din cele

aproximativ 500 componente care alctuiesc vinul, o parte se ntlnesc sub form de molecule
nedisociate (glucide, alcooli, esteri etc.) care formeaz soluii adevrate i altele sunt sub form
de molecule disociate (acizi i srurile lor).
1. Alcoolii din vin
Sunt compui organici care conin n molecula lor, una sau mai multe grupri OH legate
de un radical hidrocarbonat. Vinul este o soluie hidroalcoolic, n care se gsesc dizolvate foarte
multe substane, variate din punctul de vedere a structurii chimice, dar cu rol bine definit, cu
valoare calitativ i alimentar cunoscut.
Alcoolul etilic este principalul component al vinului dup ap, rezultat din fermentaia
zaharurilor. Prin mirosul i gustul su imprim caracteristicile specifice acestuia i are aciune
antiseptic care confer vinului o stabilitate microbiologic. Coninutul de alcool etilic din vin,
depinde de tipul de vin obinut, limita inferioar este de 8 % vol. alcool, iar cea superioar de 1518 % vol. alcool.
Alcoolul metilic nu are important oenologic, n vin se gsete n doze care variaz n
limite largi, depinznd de mai muli factori. Dintre acetia amintim: coninutul strugurilor n
substane pectice i cantitatea de enzime pectolitice, de unii factori tehnologici (macerare,
tratamente termice), etc. Vinurile provenite din strugurii hibrizi sunt mai bogate n alcool metilic,
acetia conin pn la 35 mg/l.
Alcoolii superiori sunt importani deoarece i pun amprenta n buchetul vinului, att
prin prezena lor n stare natural ct i prin combinaiile care le formeaz. Proporia n care s-au
determinat variaz ntre 0,3 si 0,5g/l. Reprezentanii acestei clase de alcooli monohidroxilici sunt
urmtorii: propanolul, izobutanolul, alcoolul amilic i izoamilic.
Alcooli aromatici prin distilarea vinului, alcoolii superiori trec o parte n distilat i o alt
parte, datorit punctelor de fierbere ridicat, se regsesc n uleiul de fuzel. n compoziia uleiului
de fuzel, alturi de alcoolii superiori, se gsesc aldehide, acizi, acetai i diferii derivai
terpenici.
2. Alcoolii polihidroxilici
Glicerolul rezult ca produs secundar al fermentaiei alcoolice, este componentul cel mai
important al vinului i influeneaz extractul vinului.

Poate fi atacat de unele bacterii acetice, iar n urma acestei reacii, se obine acroleina,
care prin condensare formeaz compui cu gust amar. Datorit gustului sau dulce, glicerolul
influeneaz calitaile gustative ale vinului imprimnd acestuia suplee i catifelaj. De asemenea,
contribuie la reinerea i conservarea aromelor caracteristice soiului.
Glicerolul analitic se exprim n g/l, iar valorile obinuite sunt cuprinse ntre 5-15 g/l,
situndu-se pe locul trei dup ap i alcool.
Butandiolul-2,3. n funcie de tulpina de drojdie, de potentialul redox al mustului, dar i
de accesul aerului n vasul de fermentare, coninutul de butandiol-2,3 variaz ntre 0,2-1,3g/l. n
mod obinuit, vinurile conin ntre 0,5-0,7g/l.
Mezoinozitolul provine din struguri i se gsete n vin n cantiti de 0,2-0,7g/l. Are rol
de vitamin pentru celelalte drojdii i este atacat de alte bacterii.
Manitolul este un component al vinurilor sntoase, rezultnd n urma reducerii fructozei
de ctre bacteriile anaerobe, respectiv, a bacteriilor lactice, n timpul fermentaiei alcoolice, n
anumite condiii. Odat format manitolul n vin, acesta primete un gust dulce-acrior datorit
acidului acetic i lactic care se formeaz la manitarea vinului.
Sorbitolul este un izomer al manitolului, provine din struguri, dar n cantiti extrem de
mici, poate fi obinut de ctre bacterii prin reducerea glucozei. Limita maxim admis este de
100mg/l, iar cnd se depeste aceast limit, vinurile provin din vinuri normale, la care s-a
adugat must din alte fructe.
3. Aldehidele
Cele mai ntlnite sunt aldehidele alifatice i aromatice. n vin exist o serie de aldehide,
n cantitate mai mare se gsete aldehida acetic, iar celelalte, se gsesc sub form de urme. La
vinurile roii, n faza de nvechire la sticl, acetaldehida liber formeaz cu substanele colorante
compui insolubili. Cu timpul, acetia se depun pe pereii sticlei formnd cmaa vinului.

4. Acizii
Acizii din vinuri sunt de natur organic sau anorganic, acizii organici se gsesc n must
n form liber, parial i total legai, iar acizii anorganici, se gsesc sub form de sruri.
Principalii acizi organici din vin provin din struguri n urma fermentrii alcoolice:
- acizii din struguri: acidul tartric, acidul malic, acetia formeaz aciditate fix, acidul
citric;

- acizii din fermentatie: acidul succinic, acidul lactic, acidul acetic, acetia formeaz
aciditate volatil.
Acidul tartric este acidul care caracterizeaz att strugurele ct i vinul gsindu-se n
proporii de 1/4, 1/3 din totalul acizilor din vin.
Acidul malic. Din punct de vedere oenologic, acidul malic este un acid important
datorit faptului c reflect maturitatea strugurilor i finisarea vinului. Strugurii verzi conin
cantitatea cea mai mare de acid malic, acesta le imprim un gust acru crud, de agurid, care
dispare la maturizare.
Acidul malic este uor metabolizat de ctre drojdii care l pot transforma n alcool etilic
i dioxid de carbon. Prezena acidului malic n vin imprim un gust crud, de verdea fiind i un
factor de instabilitate microbiologic
Acidul citric n vinuri se gsete n cantitate mic, de 0,1-0,5g/l, iar n vinurile provenite
din strugurii botritizai, ajunge pn la 1g/l. Este degradat de bacteriile malolactice dnd produi
ce mresc aciditatea volatil.
Acidul succinic influeneaz gustul vinului prin imprimarea acestuia cu nuane acide,
srate i amare, specifice bauturilor fermentate.
Acidul lactic nu exist n struguri, el provine din fermentare, fiind un component normal
al vinului cruia i imprim o aciditate moale, agreabil.
Acidul acetic rezult n urma fermentaiei alcoolice, fiind unul dintre acizii stabili fa de
bacterii.Coninutul n acid acetic reflect starea de sanatate a vinului.
Acidul carbonic este caracteristic vinurilor de mas i spumante, carora le imprim
proprietile de perlare i spumare. De regul, prezena dioxidului de carbon n vin confer
acestuia o senzaie picant, plcut, rcoritoare, proaspt, apreciat la toate vinurile. La vinurile
roii acest acid le accentueaz asprimea i duritatea.

5. Zaharurile
Zaharurile i au originea n struguri, fiind reprezentate de hexoze, pentoze n proporie
mic i de unele poliglucide. La maturitate strugurii conin un raport ntre glucoz i fructoz, de
0,95 care n cursul fermentaiei scade fiindc drojdiile fermenteaz mai rapid glucoza. La
terminarea fermentaiei alcoolice, raportul ntre glucoz i fructoz este de 0,25, n zahrul
rezidual, procentul cel mai mare l ocup fructoza, cea care d gustul mai pronunat de dulce.

6. Compuii polifenolici
Au rol n tipicitate, caracteristici organoleptice, prin transformrile fizico-chimice i
chimice ale vinurilor. Compuii fenolici sunt responsabili de culoarea i gustul vinului,
difereniind din punct de vedere organoleptic i chimic, vinurile roii de cele albe. Ele au caracter
reductor, coaguleaz proteinele, intervin n limpezirea spontan i cleirea vinurilor.
7. Substanele azotate
Provin din struguri, drojdii autolizate i din substane organice folosite la cleire. Ponderea
principal a substanelor azotate este reprezentat de aminoacizi, polipeptide i azotul proteic,
celelalte forme se regsesc n cantiti mici.
Proteinele sunt substane azotoase macromoleculare care au un caracter coloidal. Sunt
precipitate sub influena cldurii, taninului, alcoolului si variatiei pH-ului, avnd un rol esenial
n stabilizarea vinurilor. n timpul pstrrii i nvechirii datorit denaturrii i precipitrii, sub
aciunea unor factori sau interaciuni cu taninul, cantitatea proteinelor este diminuat.
Polipeptidele si peptonele nu sunt implicate n formarea nsuirilor calitative ale
vinurilor, dar contribuie adesea la instabilitatea acestora, de aceea este recomandat eliminarea
lor.
Aminoacizii. n vinuri au fost evideniai aminoacizi , dintre care prolina (n cantitatea
cea mai mare), acidul glutamic, alanina, arginina, acidul aminobutiric etc. La nvechirea vinurilor
aminoacizii sufera mari transformari fiind diminuati cantitativ.

8. Substanele pectice i polizaharidele


n depozitele vinurilor, n cantiti de cteva g/l apar pectine, gume i mucilagii. Chiar n
doze mici se opune limpezirii vinurilor colmatnd suprafeele de filtrare.
9. Acetalii
n urma reaciilor dintre aldehide i alcooli se obin acetali, care sunt compui organici.
Aceti acetali sunt nevolatili, nu particip la formarea buchetului, iar prin fixarea acetaldehidei
pot contribui benefic la modificarea nsuirilor organoleptice.

10. Esterii
Sunt substane cu miros plcut de fructe, care iau natere n urma combinrii acizilor
organici cu alcoolii. Dintre esterii din vin, acetatul de izoamil se formeaz n timpul fermentaiei
alcoolice i este responsabil de buchetul vinului tnr obinut din anumite soiuri.
11. Substanele odorante
Sunt substane volatile care impresioneaz simul olfactiv. Au o compoziie chimic
divers aparinnd mai multor grupe de compui, i anume: acizi, alcooli, aldehide i cetone,
esteri i acetali, terpene etc. Se ntlnesc sub form de urme dar i n cantiti de pn la cteva
mg/l. n vinurile aromate, aroma acestora se datoreaz compuilor terpenici (linalolului,
nerolului, geraniolului). Substanele odorante din vin i au originea n materia prim, strugurele,
unde se gsesc n stare liber sau sub form de combinaii. Noile combinaii apar n timpul
fermentaiei alcoolice sau malolactice, a unor tratamente termice sau enzimatice, cnd au loc
eliberarea unor compui care au un miros plcut i se regsesc n buchetul vinului. Reaciile
continu pe toat durata vieii vinului, adic n timpul maturrii i nvechirii vinurilor. Vinul n
prima faz de via, se caracterizeaz printr-o arom de fructe, iar odat cu nvechirea acestuia,
aroma se diminueaz i are loc accentuarea buchetului de nvechire prin formarea de noi
combinaii. Datorit transformrilor substanelor odorante care au loc n struguri i vin, deosebim
urmatoarelor arome:
- aroma primar dobndit de vin din strugurii din care provin;
- aroma secundar sau de fermentaie format din compuii volatili mirositori obinui n
timpul fermentaiei alcoolice. Aceast arom se remarc la vinurile tinere i se
diminueaz pe msura nvechirii acestora;
- aroma teriar sau buchetul poate fi de maturare sau de nvechire, fiind dat de
substanele odorante formate n timpul maturrii i nvechirii vinului.
Substanele odorante din struguri, cele obinute n urma fermentaiei alcoolice i cele care
se formeaz n timpul maturrii i nvechirii vinurilor formeaz mpreun, aroma i buchetul
vinurilor.
Se introduce clasa prefermenativ cnd apar noi compui aromatici (mai ales aldehide i
alcooli). Indiferent de modul de grupare, numrul mare de substane odorante din vin este foarte
mare. Compoziia chimic a diferitelor vinuri este identic, diferena apare pe plan cantitativ, la

civa constitueni. Materia prim joac un rol important n imprimarea aromei i buchetului din
vin la care se adaug i condiiile tehnologice de fermentare.
12. Substanele minerale
Provin din materia prim, din struguri. Ele particip la formarea gustului din vin, dnd o
senzaie de prospeime, din cauza tartratul acid de potasiu care imprim un gust acid i srat, iar
clorurile i sulfaii vor micora gustul plcut din vinul. Cantitativ substanele minerale reprezint
2-4 g/l i sunt influenate de soi, sol, agrotehnica aplicat, precipitaii, modul de obinere a
vinului i tratamentul aplicat vinurilor.
13. Vitaminele
Coninutul vinurilor n vitamine este redus deoarece n timpul fermentaiei i a unor
tratamente, o serie de vitamine sunt consumate de ctre drojdii sau distruse prin reacii de
oxidoreducere. Vitaminele predominante n vinuri sunt cele din grupa B.

II. Tehnica cromatografic folosit pentru analiza substanelor volatile din


vinuri este cromatografia de gaze cuplat cu spectrometria de mas (GS-MS)
Metoda cromatografic a fost iniiat de M. vet care a separat pigmeni vegetali printr-o
coloan umplut cu carbonat de calciu folosind ca eluent eterul de petrol. Domeniul de aplicaie
al cromatografiei s-a extins i s-a diversificat foarte mult.
Cromatografia reprezint posibilitatea de caracterizare a unui amestec dup ce se
realizeaz separarea componentelor sale. Aceasta folosete volume mici, separ, identific i
dozeaz componentele, fcnd parte din categoria metodelor de analiz prin distribuie diferit
ntre faze (una staionar i una mobil).

1. Cromatografia de gaze
Cromatografia n faz gazoas descris pentru prima dat de James i Martin, a deschis
noi domenii de aplicaii ale cromatografiei, fiind una dintre cele mai rspndite i eficace tehnici
de analiz care include mai multe metode de separare, att n cercetare ct i n industrie. n
toate variantele, separarea precede analiza i se realizeaz prin repetarea, de un numr mare de
ori, a echilibrului de distribuie ntre dou faze. Una dintre faze este imobil i poart denumirea
de faz staionar (aflat de regul ntr-un tub numit coloan) iar cealalt - faz mobil - aflat n
micare, se deplaseaz prin golurile primei faze. Separarea se petrece n coloana cromatografic.
Faza mobil, denumit i eluent - scurgndu-se continuu (deci cu vitez constant) prin
interstiiile fazei staionare, adeseori poroase, poate provoca migrarea, cu viteze diferite, a celor n
componeni ai amestecului de separat de-a lungul coloanei. Amestecul supus separrii se
introduce sub form de soluie la nceputul coloanei, folosindu-se un dispozitiv de introducere a
probei (de exemplu o microsering), i se afl iniial fixat ntr-o zon ngust de la nceputul
coloanei. Splai de eluent, o parte din componenii probei migreaz apoi prin coloan cu viteze
diferite. Acest lucru se datoreaz interaciunilor fizice specifice, dintre moleculele probei i faza
staionar. Efectul, este numit retenie i aceasta provoac o aa-numit migrare difereniat.
Adic moleculele migreaz n grupuri, n fiecare grup existnd doar molecule de acelai fel.
Aceasta face posibil sesizarea componenilor, pe rnd, la prsirea coloanei, de ctre un
instrument, n grupurile respective - denumite uneori zone. Instrumentul amintit este un analizor
fizico-chimic, sensibil la mai muli dintre componeni ce ies din coloan i care este plasat n
eluent, imediat dup ieirea din coloan. Acest analizor, denumit detector este capabil s dea un
semnal proporional cu masa sau cu concentraia soluiei de component n faza mobil. n
consecin, dispozitivul, "marcheaz" trecerea fiecreia din substanele ce formeaz iniial proba.
Reprezentarea grafic a semnalului detectorului n funcie de timp poart numele de
cromatogram.
Compuii amestecului supus separrii nu trebuie s fie neaprat gaze, ci pot s fie i
lichide sau chiar solide volatile.
Datorit relativei simpliti, sensibilitii mrite i eficacitii n separarea componenilor
unui amestec, gaz cromatografia a devenit n ultimul timp o unealt foarte important de
analiz, att n analiza cantitativ, ct i calitativ a amestecurilor.
Uurina cu care se pune la punct o analiz nou, sensibilitateasa, posibilitatea de
automatizare, precum i largile posibiliti de aplicare sunt avantajele principale ale acestei

metode. Printre domeniile n care cromatografia de gaze i-a cucerit un loc de prim rang sunt:
petrochimia, industria farmaceutic, protecia mediului, analiza aromelor, igiena i criminalistica.
Pe de alt parte, utiliznd gaz-cromatografia, o mulime de analize de rutin din mediu i
alte domenii pot fi efectuate rapid. Ca urmare a acestui fapt, multe ri au fixat puncte de
monitorizare pentru msurarea continu (prin metoda gaz-cromatografic) a nivelului de emisii
cum ar fi oxizii de azot, bioxidul i monoxidul de carbon.
2. Componentele unui sistem GC
Un cromatograf de gaze are trei componente principale: injectorul, camera de
termostatare a coloanei cromatografice i sistemul de detecie (unul sau mai muli detectori).
Acestora li se altur sursa de gaz purttor pentru realizarea fazei mobile a separrii prin GC.
Injectorul permite plasarea probei n captul coloanei, ntr-o zon ct mai ngust cu putin.
Proba n GC poate fi gazoas sau lichid; atunci cnd proba este lichid, componenii probei
trebuie s fie volatili i stabili termic la temperature injectorului, precum i pe intervalul de
temperatur n care se face separarea cromatografic (domeniul de temperatur obinuit pentru
separrile GC este 20 - 400C).

Fig. 2.1. Reprezentarea schematic a structurii unui cromatograf de gaze + anexe.

Principiul de funcionare al cromatografului const n trecerea eluentului prin dispozitivul


de introducere a probei de unde preia proba de analizat i o introduce n coloana cromatografic
care este sediul procesului de separare. Datorit interaciunilor dintre moleculele probei cu faza
staionar, compuii din amestecul de analizat rmn n urma eluentului, migrnd prin coloan cu
viteze diferite. Astfel, la ieirea din coloan componenii vor fi separai i purtai de eluent la
detector.
Detectorul transform o proprietate fizico-chimic a unui component din eluent de obicei
ntr-un semnal electric, proporional cu concentraia componentului. nregistrarea grafic a
semnalului dat de detector n funcie de timp pentru toi componenii din prob se numete
cromatogram, iar n cazul unui component se numete pic. Suprafaa picului poate fi integrat
cu ajutorul unui computer.
Faza mobil n GC trebuie s fie inert din punct de vedere chimic, de puritate nalt (fr
urme de ap sau oxigen), compatibil cu tipul de detecie aplicat i convenabil din punct de
vedere al costului. Faza mobil n GC mai este cunoscut i ca gaz purttor, putnd fi H2, N2, He
sau Ar; gazul purttor poate fi produs de un generator de gaz (H2 sau N2), sau se gsete stocat
n cilindri metalici, de unde este adus cu un debit controlat de un reductor de presiune n sistemul
cromatografic. Uneori debitul gazului purttor este prea mic fa de volumul detectorului (n
special cnd se folosesc coloane capilare), iar n acest caz se suplimenteaz necesarul cu un debit
de aa-numit make-up gas.
Incinta termostatat (cuptorul) asigur regimul termic n coloana cromatografic.
Temperatura fiind un parametru esenial n separarea GC trebuie s fie uniform pentru toat
lungimea coloanei; fluctuaii de temperatur influeneaz procesul de retenie cromatografic i
astfel exactitatea timpilor de retenie ai analiilor din prob, conducnd n unele cazuri chiar la
splitarea picurilor cromatografice. Instrumentele GC comercializate asigur ajustarea rapid i
controlul temperaturii ntr-un interval de 50- 450C. Operarea n regim termic subambiental
presupune utilizarea unui sistem criogenic de rcire, bazat pe N2 sau CO2 lichid.
Sistemul de achiziie i prelucrare a datelor este utilizat i pentru programarea unor
parametrii ai separrii (regimul de temperatura) sau parametrii sistemului de detecie.
Cromatograma poate fi vzut n timp real, iar gradul de prelucrare a acesteia depinde de
complexitatea softului cu care este dotat calculatorul sistemului.
3. Introducerea probelor n coloana cromatografic
Metoda utilizat pentru introducerea probei depinde de starea de agregare n care
se gseste proba: gazoas, lichida sau solid. Este indicat n toate cazurile ca introducerea

probei s aib loc ntr-un timp ct mai scurt. Marimea probelor variaz ntre mai puin de 1 g n
cazul coloanelor capilare i ordinul gramelor n cazul coloanelor preparative.
Probele gazoase sunt introduse cu ajutorul unor seringi speciale, rezistente la presiune,
sau folosind dispozitive speciale care constau dintr-un robinet cu mai multe ci i o bucl
calibrat .Aceste dispozitive permit introducerea unui volum cunoscut de prob n coloana printro singur micare a rotorului robinetului, fr a se opri fluxul gazului purttor.
Probele lichide sunt introduse n coloan cu ajutorul unor microseringi, avnd n mod
uzual capacitatea de 1, 5, sau 10 l. Ele trebuie aduse n stare de vapori, ceea ce se realizeaz
prin injectarea ntr-o camer de vaporizare (sau injector), care se gsete naintea coloanei i
care este nclzit la o temperatur programat. Injectarea se face printr-un dop de cauciuc
siliconic numit septum, care realizeaz izolarea injectorului de mediul exterior. Tot n camera de
vaporizare se introduce si gazul purttor, care preia proba vaporizat i o transport prin coloan.
Probele solide sunt introduse n coloan tot prin injectare cu microseringi, dupa ce au
fost dizolvate ntr-un solvent adecvat. n cazul lor nsa trebuie avut grij ca proba s se
vaporizeze la temperatura injectorului, altfel analiza nu va fi posibil, substanele cu punct de
fierbere foarte rificat sau care se descompun nainte de fierbere neputnd fi analizate prin
cromatografie de gaze.

Fig.2.2. Aspectul unei seringi micrometrice folosite n GC


4. Spectrometria de mas utilizat ca tehnic de detecie n cromatografie
Dintre toate tehnicile spectroscopice, spectrometria de mas este poate cea care ofer cele
mai multe posibiliti aplicative, datorit varietii de genuri de spectre pe care le poate da.
Spectrometria de mas este un instrument puternic pentru studiul tuturor substanelor,
deoarece dintr-o cantitate infim furnizeaz mai multe informaii despre structura i compoziia
unei substane, dect orice alt tehnic analitic. n acelai timp este i un puternic instrument de
cuantificare.
Spectrometria de mas (MS) este o tehnic de investigare cu largi aplicaii n chimia
analitic, cum ar fi: determinarea maselor atomice i moleculare; compoziia izotopic a
elementelor; sau identificarea compuilor organici. Pe lng aceste aplicaii, ea a devenit una

dintre cele mai importante tehnici de detecie n cromatografie, fiind utilizat att la identificarea
analiilor care elueaz din coloana cromatografic, ct i la determinarea lor cantitativ.
Principalele componente ale unui spectrometru de mas, redate n figura de mai jos, sunt:
camera de ionizare; separatorul (analizorul) de ioni; detectorul de ioni.

Fig. 2.3. Schema de baz a unui spectrometru de mas


Astfel, spectrometria de mas, ca metod analitic structural, poate fi de cele mai multe
ori unica metod folosit pentru identificarea unor substane necunoscute, despre care, prin
celelalte metode de analiz (reacii de culoare, cromatografie n strat subire, gaz-cromatografie),
se obin doar informaii aproximative.
5. Cuplarea cromatografului de gaze cu spectrometrul de mas
Att cromatografia de gaze ct i spectrometria de mas sunt tehnici analitice de mare
utilitate pentru analiza compuilor organici. Combinarea lor ntr-un singur sistem duce ns la
obinerea unor rezultate care depesc mult ceea ce s-ar realiza prin simpla nsumare a datelor
oferite de cele dou tehnici. Pentru a putea gestiona imensa cantitate de date oferit de un sistem
GC-MS este neaparat necesar utilizarea unui calculator echipat cu un program adecvat.
Cuplarea cromatografiei de gaze cu spectrometria de mas ofer n primul rnd posibilitatea
identificrii calitative a componentelor analizate, cu o probabilitate de eroare foarte mic.
Optimizarea performanelor unui sistem GC-MS nu este ns deloc simpl, deoarece este
vorba despre dou aparate care lucreaz n condiii mult diferite. Astfel, cromatograful de gaze
folosete diferite gaze purttoare cu diverse debite, iar temperatura la ieirea din coloan i
cantitatea din fiecare component variaz de asemenea pe un domeniu larg. Pe de alt parte,
spectrometrul de mas lucreaz n condiii de vid avansat realizat n diferite variante, iar

construcia camerei de ionizare i a analizorului de mas poate fi realizat n diverse modaliti.


Problema principal este de a plasa o cantitate ct mai mare din fiecare compus organic, separat
n coloan i corespunzator unui pic cromatografic, n camera de ionizare a spectrometrului fr
a afecta vidul necesar funcionrii acesteia. n aceast camer presiunea trebuie meninut la o
valoare sub 10-4 torr pentru a evita ciocnirile dintre ionii formai i molecule neutre, care ar duce
la o fragmentare necontrolat. De asemenea, n analizorul de mas drumul liber mijlociu al
moleculelor trebuie sa fie mai mare dect 200 cm pentru a nu avea loc ciocniri ntre ionii formai,
iar acest lucru nseamn meninerea unei presiuni mai sczute dect 10-5 torr.
Trecerea ntre cromatograf i spectrometru cu respectarea acestor condiii se realizeaz
folosind nite dispozitive numite interfee.
6. Realizarea practic a analizelor GC-MS
Pentru utilizarea practic a sistemelor GC-MS pot fi luate n considerare dou
alternative:
* Fixarea spectrometrului de mas la o anumit valoare m/z caracteristic doar pentru o
anumit component care ne intereseaz, el funcionnd n acest caz ca un detector foarte
specific.
* Parcurgerea (scanarea) ntregului domeniu de mas ntr-un interval de timp redus, ceea
ce nseamn c se obin sute sau chiar mii de spectre pentru fiecare analiz. Toate aceste spectre
sunt stocate n memoria calculatorului ataat instrumentului.
n practic se utilizeaz cu precdere cea de-a doua variant, pentru c ea permite
identificarea calitativ a tuturor componentelor prezente n amestecul supus analizei i nu doar a
uneia dintre acestea. Acest lucru nseamn nsa c este necesar prelucrarea unui numr foarte
mare de date, deoarece spectrometrele moderne au viteza de scanare ridicat (de obicei ntre 0,11,5 secunde). Apelarea oricrui dintre spectrele de mas nregistrate se poate face simplu, prin
asociere cu numrul scanrii sau cu timpul trecut de la nceputul analizei i care corespunde
timpului de retenie obinut n condiiile utilizrii ca detector a spectrometrului de mas. Trebuie
ns precizat c acest timp de retenie nu va fi identic cu cel obinut cu un alt detector (de
exemplu FID), din cauza caracteristicilor constructive diferite ale celor dou detectoare, chiar
dac se utilizeaz aceeai coloan i acelai gaz purttor. Din acest motiv este necesar ca analiza
GC-MS sa produc i o cromatogram pe care s fie evideniate picurile corespunzatoare
componentelor separate, la fel ca n cazul celorlalte detectoare.

Aceast cromatogram se realizeaz pe baza curentului ionic total, care reprezint


nsumarea curenilor corespunztori tuturor ionilor rezultai n urma fragmentrii compusului
respectiv. Acest curent ionic total este calculat pentru fiecare spectru de mas corespunzator unei
scanri, iar diagrama curentului ionic total n funcie de timp (sau numrul de scanri) constituie
cromatograma asociat analizei respective. Evident c atunci cnd nu elueaz nici o component
curentul ionic total va fi slab, corespunzator liniei de baz, iar pe masur ce numarul moleculelor
din substana respectiv care ajung n spectrometrul de mas crete el va crete de asemenea i va
fi maxim n zona concentraiei corespunzatoare timpului de retenie al substanei respective
(maximul picului cromatografic). Datorit faptului c rspunsul detectorului pentru fiecare
compus va fi diferit, rezult c i mrimile relative ale picurilor vor fi diferite comparativ cu
aceeai analiz realizat cu un alt tip de detector. Uneori este posibil ca n cromatograma
realizat pe baza spectrelor de mas s nu fie separate toate picurile care aparin unor
componente cu rezoluie mic, pentru ca capacitatea de rezoluie a acestui tip de detector este
mai mic dect a altora. Cu ct viteza de scanare este mai mare, rezoluia componentelor n
cromatogram va fi i ea mai mare.
Viteza de scanare ridicat este important nu numai pentru a realiza o rezoluie bun a
picurilor vecine ci i pentru a obine spectre de mas ct mai fidele i reproductibile. Dac n
timpul elurii unei componente concentraia se schimb mai repede dect timpul necesar
realizrii spectrului de mas, acest spectru va fi distorsionat i identificarea calitativ a
compusului va fi ngreunat. Din acest motiv pentru identificarea calitativ este recomandat s se
utilizeze un spectru de mas selectat din zona de vrf a picului compusului respectiv.
n condiii de analiz date, spectrul de mas al unei molecule reprezint o caracteristic
specific numai compusului respectiv i poate fi utilizat pentru identificarea sa calitativ. Aceast
identificare este ns foarte dificil (dei nu imposibil) de realizat prin interpretarea spectrului
de mas pe baza fragmentelor de ioni pe care le conine i a abundenei relative a acestora. O
variant mult mai simpl este compararea cu spectre de referin ale unor compui cu structur
cunoscut. Aceast comparaie se poate face cel mai uor cu ajutorul calculatorului. Exist o
serie de variante de cutare pentru identificarea spectrului de mas al unui compus necunoscut
prin comparaie cu spectrele stocate n biblioteca de spectre a calculatorului. Eficiena acestei
variante de identificare calitativ depinde de numrul de spectre de mas care se gsete n
bibliotec, complexitatea programului de cutare i viteza de lucru a calculatorului.
Bibliotecile moderne de spectre conin zeci de mii de spectre de mas ale compuilor

organici cei mai folosii i ele se livreaz n general odat cu programul care realizeaz achiziia
i prelucrarea datelor provenite de la spectrometrul de mas. Rolul operatorului este ns de a
evalua critic rezultatele analizei calitative oferite de calculator i de a le compara cu rezultatele
unor analize paralele efectuate cu alte metode care pot oferi informaii despre compusul analizat.
7. Avantajele folosirii GC/MS
Cromatografia de gaze este de succes, puternic, convenabil din punct de vedere al
preului, iar uneltele analitice sunt uor de utilizat.
Cromatografia de gaze are ns cteva defecte, cum este cererea de compui volatili, dar
marea sa problem este lipsa dovezii finale a naturii a compuilor detectai, aa cum sunt
separai. Pentru majoritatea detectorilor GC, identificarea se bazeaz numai pe timpul de retenie
pe coloan.
Un spectrometru de mas este ns o unealt excelent pentru identificarea clar (sigur)
a structurii a unui singur compus, dar este mai puin folositoare cnd se prezint un amestec.
Combinarea celor doi componeni ntr-un singur sistem GC/MS formeaz un instrument
capabil s separe amestecurile n componenii lor individuali, s identifice i apoi s furnizeze
informaii cantitative i calitative asupra cantitii i structurii chimice pentru fiecare compus.
Spectrometrul de mas trebuie s fie reglat i calibrat nainte ca informaii semnficative
s fie obinute. Informaia obinut are timp, intensitate i componeni spectrali, necesitnd un
calculator cu memorie bun, pentru procesarea i identificarea de compui.
Un mare neajuns al sistemului este acela c este foarte scump n comparaie cu alte
sisteme analitice.

III. Identificarea componentelor volatile din vinurile roii folosind


metoda gaz-cromatografic

Acest studiu prezint posibilitatea de separare i concentrare a aromelor volatile din


vinurile roii i analizarea coninutul de arome volatile prin cromatografia de gaze i
determinarea substanelor de arom prin spectrometria de mas.
1. Aparatur
Analizele au fost efectuate cu ajutorul unui gaz cromatograf cu tub capilar HP 5890 seria
II, avnd ca detector un spectrometru de mas HP 5972.
2. Condiii cromatografice - parametrii de lucru
Gaz cromatograf HP 5890 seria II:
- Injector: temperatura de 1800C, volumul de proba injectat 1l, deschiderea supapei n
timp de 0,75 minute.
- Coloana capilar HP-SM5, lungime 30 m, = 0,53 mm
- Gaz purttor: He de nalt presiune
- Programare temperatur: 500 C temperatura iniial, eliminarea solventului 5 minute,
gradientul de temperatur 20 C/minut, temperatura final 2500 C
- Interfaa: temperatura de 2800 C
Spectrometrul de mas HP 5972:
- Sursa de ionizare: EI (impact electronic)
- Metoda de lucru: SCAN
- Canale media: 20-350
- Optimizarea parametrilor de lucru: ATUNE

Unitatea de procesare: HP486s/20 Vectra


- Bibliotec spectral Wile
3. Modul de lucru
Hidro-distilarea mai multor cantiti de vinuri roii de calitate superioar, din soiurile
Merlot, Cabernet Sauvignon i Pinot Noir a fost utilizat pentru a obine hidro-distilate, care au
fost supuse apoi la extracie cu hexan. Datorit hidro-distilrii, separarea de arome volatile a fost

fcut n timp ce extracia a permis identificarea prin cromatografia de gaze cuplat cu


spectrometria de mas a unui numr de componente din totalul substanelor care au fost extrase.
4. Rezultatele obinute
Gaz- cromatogramele extractului de hexan obinute din vinurile studiate sunt prezentate
n figura 3.1 (pentru vin Merlot), figura 3.2 (pentru vin Cabernet Sauvignon) i figura 3.3 (pentru
vin Pinot Noir). De asemenea, aromele volatile din cromatogram sunt identificate.

Fig. 3.1. Gaz-cromatograma extractului de hexan obinut din vinul Merlot


1. trans-sabinen hydrate
2. Ipsdienol
3. -Terpineol
4. Linalool
5. 2,5-Dimetil-2-cilclohexen-1-ona
6. 3-Penten-2-ona
7. Linalil acetate
8. Nerol
9. Citronelil propionate
10. Geranil acetate
11. -Mircen
12. izo-Cariofilen
13. trans-Cariofilen
14. Cadinen
15. di-hydro-carvil acetate
16. trans-Izolimonen

17. Cedren
18. Cadinen

Fig. 3.2. Gaz-cromatograma extractului de hexan obinut din vinul Cabernet Sauvignon
1. trans-sabinen hydrate
2. Ipsdienol
3. -Terpineol
10. Geranil acetate
13. trans-Cariofilen
16. trans-Izolimonen
19. 1-(1-etoxietoxi)- pentane
20. Cariofilen oxide
21. Hexyl pentil -ether
22. Neorilatol
23. Izocamfan
24. Ciclocitral

Fig. 3.3. Gaz-cromatograma extractului de hexan obinut din vinul Pinot Noir
19. 1-(1-etoxietoxi)- pentane
25. 1,1-dietoxi-3-metil-butan

IV.Concluzii
Dup realizarea gaz cromatogramelor i identificarea componentelor de arom principale,
precum i verificarea spectrelor computerizate atribuite pentru componentele de arom de baz
au fost trase urmatoarele concluzii:
- metoda de preconcentrare de arome volatile permite identificarea principalelor
componente i, de asemenea, i a unui numr semnificativ de componente minore.
- identificarea componentelor volatile prin gaz cromatografie cuplat cu spectrometria de
mas reprezint o metod rapid, precis i cu o sensibilitate mare, necesitnd cantiti mici de
substane. Metoda poate fi aplicat la toate tipurile de vinuri.
- s-a remarcat faptul ca vinul Pinot Noir are un coninut mai ridicat n acetaldehid, n
timp ce vinurile Cabernet si Merlot sunt mult mai aromate coninnd compui terpenici.

Bibliografie

1. Elena Jercan, Analiz Cromatografic, Editura Academiei Republicii Socialiste


Romnia, Bucureti 1982
2. Lorentz J., Horea N., Chimie analitic i instrumental, Academic Pres &
AcademicDirect, 2009
3. Claudia Muresan, .a of ., Identification several volatile components from red
wines, Scientifical Researches. Agroalimentary Processes and Technologies,
Volume XI, No. 2, 2005
4. www.scribd.com/doc/76163660/Cromatografia-de-Gazeproiect
5. www.scritube.com/stiinta/chimie/Cromatografia-de-gaze41182.php
6. www.sciencedirect.com