Dorel Lucian RADU, MD, PhD

Conferentiar universitar
UMF Carol Davila

Hematopoieza

Hematopoieza

(haima=sange, poiesis=formare)

Hematopoieza are functia de a produce

elementele si celulele din sangele periferic.
Hematopoieza are rolul de a mentine
homeostazia elementelor sanguine.

Hematopoieza

Celulele stem pluripotente

eritropoieza productia eritrocitelor
granulocitopoieza (mielopoieza)
productia granulocitelor
monocitopoieza
megacariocitopoieza - trombocitopoieza
limfopoieza productia de limfocite

Hematopoieza

Celule stem pluripotente

Celule progenitoare (CFU unitati formatoare de
colonii)
Celule precursoare (......blast, .....cite)
Procese celulare: proliferare, diferentiere,
moarte
Celule stem pluripotente sunt apte de
autoreinoire si totodata genereaza toate tipurile
de celule sanguine (dupa o serie de procese la
nivelul maduvei osoase)

Celule implicate in hematopoieza

Organizare
Celule stem
pluripotente

Celule progenitoare

Celule precursoare

Celule diferentiate (mature)

Celulele stem
1.

1.

1.

Celulele stem au capacitatea de autoreinnoire

Celulele stem formeaza tipuri celulare diferite

si diferentiate ireversibil.
Celulele stem pot functional sa reconstituie un
tesut in vivo

Tipuri de celule stem

Celule totipotente

Celule stem pluripotente

Celule stem multipotente

Originea celulelor stem

Celulele stem embrionare (ESCs)

Deriva din embrion in special din stadiul de blastocit

Au capacitate de autoregenerare
Mentin capacitatea de a forma celule stem
pluripotente

Celule stem (somatice)

Sunt parte a celulelor tesuturilor specifice a

organismului dupa nastere
Sunt celule destinate sa se diferentieze
Exista mai multe tipuri de celule stem adulte
identificate: hematopoietice, mesenchimale, neurale,
hepatice, muschi, etc.

Hemangioblastul
Studiile au demonstrat existenta unor celule la embrion ce au potential
de formare atat a celulelor sanguine cat si a celulelor endoteliale
vasculare.
Celulele au fost numite hemangioblaste si apar din mezodermul
embrionar.

Hematopoieza in stadiile precoce ale embriogenezei

1. Hemangioblaste in insule de celule sanguine la nivelul sacului vitelin.

2. Hemangioblastele sunt responsabile pentru hematopoieza de la nivelul
ficatului fetal si a maduvei osoase hematogene.

Originea celulelor la nivelul tesuturilor hematopoietice

1.

2.

3.

Hematopoieza la nivelul sacului vitelin apare in

saptamana 3-6 de dezvoltare embrionara. Se gasesc
eritrocite nucleate, granulocite si macrofage, nu sunt
observate limfocite.
Hematopoieza la nivelul embrionului (ficat si splina)
apare intre saptamanile 6 - 22 de gestatie. Sunt
prezente eritrocite anucleate, seriile mieloide si
limfocite.
Maduva osoasa hematogena apare din saptamana
20 de gestatie si este prezenta pe toata durata vietii.
Exista toate tipurile de celulele sanguine. Limfocitele
T se dezvolta in timus.

Hematopoieza la nivelul mezodermului sacului vitelin

Sacul vitelin este primul loc al
hematopoiezei unde celulele
mezenchimale se vor diferentia in
celule numite hemangioblaste.
Aceste celule formeaza celulele
endoteliale si celulele sanguine.

Hematopoieza la nivelul ficatului embrionar

Ficatul este colonizat de celule hematopoietice stem
Toate tipurile de celule sanguine cu exceptia
limfocitelor T se vor diferentia in ficatul si splina din
stadiul organismului de embrion

Celule la nivelul ficatului embrionar

Neutrofile (n)

Maduva osoasa hematogena

Celulele stem vor coloniza canalele medulare ale oaselor lungi si in
cavitatile oaselor spongioase.
Toate seriile celulelor sanguine (exceptie limfocitele T) se vor
diferentia in maduva osoasa hematogena

Recoltare de maduva osoasa

Procedura sterila dupa anestezie locala

Creasta iliaca posterioara
Stern, Tibia
Aspirat: lichid si celule
Biopsie

Maduva osoasa hematogena

Doua tipuri de lame pentru microscopie:

Sectiuni tisulare: arata toate componentele

(stroma + vase sanguine + adipocite +
cordoane hematopoietice)
Aspirat -> frotiu: sunt evidentiate celulele din
seriile celulare si progenitorii.

Maduva osoasa hematogena

Coloratia May Grunwald Giemsa

Coloratia Wright

Maduva osoasa hematogena

Maduva osoasa - organ vascular

Maduva osoasa rosie
Maduva osoasa galbena

Maduva osoasa hematogena

Structura maduvei hematogena

- stroma (colagen tip I si III, fibronectina, laminina si proteoglicani)

- cordoane hematopoietice

- capilare sinusoidale

Stroma: 3D retea de fibre de reticulina, in cadrul careia

se gasesc celule reticulare, celule hematopoietice,
macrofage.

Maduva osoasa hematogena

Maduva osoasa hematogena

~5,000,000 eritrocite/ mL
~5 L de sange (persoana de 70 Kg) = 5 x
106 mL X 5 x 106
~ 25 x 1012 eritrocite in organism
Durata de viata a eritrocitelor = 120 zile
astfel ~2 x 1011 eritrocite/zi
sau
~8,000,000,000 eritrocite/ora

Maduva osoasa hematogena

~10,000 leucocite/ mL (~1/2 limfocite, ~1/2 PMNs)

~5 L de sange (persoana de 70 Kg) = 5 x 106 mL
~ 5 x 1010 leucocite in organism (fara cele din MO)

Viata medie a leucocitelor este variabila

PMNs ~ 24 ore, limfocite de la zile la ani (celule memorie)
Estimare ~ 2 X 1010 celule noi/zi
Productia de eritrocite creste in anemie si de
leucocite in sepsis

Studii asupra celulelor stem hematopoietice

In mod extensiv pe modele murine

Se pot recolta

Teste functionale

Adult maduva osoasa, sange periferic

Peri-natal sange din cordonul ombilical

in vitro test clonogenic (formare de colonii)

in vivo la soareci transplant de celule

Markeri de suprafata
Folositi pentru caracterizare, cuantificare si izolare

Positive pentru CD34, c-Kit, Thy-1, Flk-2/Flt-3, AC133

Sistem de cultura in Methyl Cellulose

Sistem de cultura in mediu

semisolid in vitro
Sursa fiind Celulele Stem
Hematopoietice

Aspirat de la nivelul MO (3-4%)

Sange periferic (2%)
Sange CO (10%)

Formarea coloniilor: coloniile

celulelor stem multipotente
ori coloniile tipurilor celulelor
angajate specific
Unitate formatoare de colonii
(CFU)

Cultura in Methylcellulose
CD34+ Cells
CFU-GM

BFU-E

CFU-Mix

Controlul hematopoiezei

Factori de crestere si stimulare a coloniilor

Factori de crestere si stimulare a coloniilor

Colony Stimulating Factors (CSF)
Se definesc prin capacitatea de a stimula cresterea
coloniilor celulare
Glicoproteine
Exista receptori specifici la nivelul celulelor
Au activitate biologica intensa

Citokine

Citokinele au functie pleiotropica

Pot stimula sau inhiba cresterea celulelor
hematopoietice

Factorii de reglare a hematopoiezei

Sunt produsi de mai multe tipuri celulare

Celule endoteliale, fibroblaste, macrofage, limfocite

Celulele stem exprima in mod simultan receptori

pentru mai multi factori
Cei mai multi factori sunt activi pe mai multe linii
hematopoietice
Polifunctionali

Proliferare, angajare catre o linie celulara, maturare,

afectare a functiilor celulare.

Factori de crestere
Name
Stem cell factor
Interleukin-3
Interleukin-6

Function
Hematopoiesis
Hematopoiesis
Hematopoiesis

Source
Stromal cells
Activated T & B cells
Monocytes & fibroblast

GM-CSF
G-CSF
M-CSF
Interleukin-8

CFU-GM mitosis
CFU-G mitosis
CFU-M mitosis
Neutrophil migration

T cells; Endo
Macrophage; Endothelium
Macrophage; Endothelium
Leukocyte; Endothelium

EPO

CFU-E differentiation;
BFU-E mitosis

Kidneys

TPO
Interleukin-11

CFU-meg differentiation Liver

CFU-meg differentiation

Abbreviations: GM-CSF, granulocyte monocyte colony stimulating

factor; M-CSF, monocyte CSF.

Granulocyte Colony-Stimulating Factor

G-CSF

Principala citokina cu rol hematopoietic asupra

productiei neutrofilelor, diferentiere si activitate
celulara.
Stimuleaza cresterea celulelor progenitoare
angajate catre linia neutrofilelor

Stimuleaza maturarea neutrofilelor

Activeaza functia fagocitara a neutrofilelor
mature

G-CSF scurteaza timpul de maturare a

neutrofilului

Multipotent
HSC

Neutrophil
precursors

Post-mitotic maturation
neutrophils

4-5 days

normal

1 day

G-CSF treated

Blood

Blood

Utilizarea clinica a G-CSF

Larg utilizat pentru tratarea neutropeniei

Dupa chemoterapie in cancer

Dupa transplant de maduva osoasa

Mobilizarea celulelor progenitoare in

sangele periferic

Neutropenia congenitala

Eritropoietina

Produsa predominant la nivel renal

Stimuleaza sinteza de ARNm si globina

Accelereaza angajarea celulelor stem

pluripotente catre dezvoltarea seriei
eritroide

Activitate biologica

Stimuleaza cresterea clonala in seria eritroida

Supresia apoptozei in progenitorii seriei eritroide

Induce eliberarea reticulocitelor din MO

Induce sinteza globinei in precursorii seriei eritroide

Utilizarea terapeutica

In momentul scaderii nivelului eritropoietinei

Insuficienta renala cronica

Necesitatea cresterii eritropoiezei

Pacientii dupa chemoterapie

Mai rar utilizat

AIDS, dupa proceduri chirurgicale, copii nascuti
prematur, unele afectiuni cronice inflamatorii

Eritropoieza

Celulele implicate in acest proces:

proeritroblast -> eritroblast bazofil ->
eritroblast policromatofil ->eritroblast
ortocromatofil (acidofil) -> reticulocite ->
eritrocite
Aspecte generale :
1. Toate celulele blast au nucleu
2. Celulele nu au granulatii citoplasmatice

Eritropoieza

Proeritroblast - 20-25 mm, celula mare, nucleu

rotund, cromatina laxa dantelata, nucleoli
prezenti, citoplasma bazofila cu o zona mai

deschisa perinuclear.

Ertroblast bazofil - 16-18 mm, nucleu rotund

cu heterocromatina, citoplasma intens bazofila

(numar mare de poliribozomi).

Eritropoieza

Eritroblast policromatofil : 9 -12 mm, nucleu

rotund heterocromatic, citoplasma albastru/roz
deschis datorita inceperii acumularii de hemoglobina

Eritroblast ortocromatofil (acidofil) : 8 - 9 mm,

nucleu foarte mic si intens colorat, citoplasma

acidofila.

Reticulocite contine numar redus de poliribozomi

ce se coloreaza cu albastru de cresyl briliant

Eritrocite

Granulocitopoieza

Celulele implicate in acest proces:

mieloblaste, promielocite, mielocite,
metamielocite, granulocite
nesegmentate, granulocite mature
(segmentate)
Aspecte generale:
1. Celulele blast au nucleoli, celulele cite
nu au nucleoli, cu exceptia promielocitelor
2. Scaderea volumului celular pe parcursul
diferentierii, exceptie la promielocit
3. Prezenta de granule azurofile si granule
specifice in functie de stadiul maturarii

Granulocitopoieza

Mieloblast - 15-20 mm, nucleu rotund cu

1 -4 nucleoli, citoplasma bazofila si fara
granule citoplasmatice.

Promielocite - 20-25 mm, nucleu ce

poate contine nucleoli; citoplasma

abundenta si bazofila cu granule azurofile

Granulocitopoieza

Mielocite trei tipuri celulare, nucleul rotund

se condenseaza si este mai intens colorat decat
la promielocit, citoplasma mai putin bazofila si
prezinta granule specifice :
1. Neutrofile- 15-20 mm, numeroase
granule neutrofile
2. Eozinofile - 20-25 mm, granule mari
rosu-portocaliu
3. Bazofile - 13-15 mm, granule (cu
dimensune de 0,5 mm) ce se coloreaza
metacromatic.

Granulocitopoieza

Metamielocite nucleu reniform,

citoplasma asemanatoare mielocitelor
Granulocite nesegmentate (nucleu in
banda) nucleu in forma de U sau S,
citoplasma acidofila
Granulocite segmentate (mature)
nucleu complet segmentat

Mieloblast si promielocit

Promielocite, mielocite si metamielocite

Originea trombocitelor

Megacarioblaste, megacariocite, megacariocite

adulte formatoare de trombocite
Megacarioblastul 15-50 m, nucleu mare
oval sau reniform, prezenta nucleolilor,
citoplasma bazofila.
Megacariocitul 35-150 m, nucleu lobulat
neregulat, cromatina macrogranulara , nu se
observa nucleoli, citoplasma acidofila sau
bazofila.
Megacariocitul adult dimensiune pana la
150 m, nucleu lobulat si la nivelul citoplasmei
acidofile se formeaza invaginatii ale membranei
plasmatice.

Megacariocite la nivelul maduvei osoase

Monocitopoieza

Monoblast caracteristici morfologice

asemanatoare mieloblastului
Promonocite - 10-20 mm, nucleu (ce prezinta o
mica indentatie) unde cromatina este dantelata
si nucleoli prezenti , citoplasma bazofila.
Monocite 12- 15mm, nucleu cu o dimensiune
de 50% din suprafata celulei, citoplasma cu
granule azurofile.

Limfopoieza

Limfoblast - 10-18 mm, nucleu eucromatic cu

1-2 nucleoli,citoplasma bazofila. Unele limfocite
din maduva osoasa se diferentiaza in limfocite B,
alte limfocite din maduva osoasa migreaza in
timus unde se diferentiaza in limfocite T.
Limfocitele B si T migreaza catre organele
limfoide secundare.
Lymphocyte