Sunteți pe pagina 1din 41

STIMULANTE SNC

Carmen Dobrea

Bazele xantinice i amfetaminele sunt printre cele mai


ntlnite substane farmacologic active prezente n buturi
calde, buturi rcoritoare, dulciuri i suplimente alimentare.

BAZE XANTINICE

cafein teofilin teobromin

Figura 1.Structura chimic a bazelor xantinice

CAFEINA

Cafeina este cel mai consumat stimulent la nivel mondial,


fiind prezent n medicamente, suplimente alimentare, cafea,
ceai, buturi rcoritoare. Dintre produsele nemedicamentoase,
buturile energizante conin cantiti ridicate de cafein.
Produsele vegetale care conin cafein sunt numeroase,
printre acestea se numr: semninele de cafea (Coffea
arabica), frunzele de ceai (Camellia sinensis), frunzele de cola
(Erythroxylum coca), frunzele de mate (Ilex paraguariensis),
frunzele de guayusa (Ilex guayusa), seminele de guarana
(Paullinia cupana).

1
n medie, un adult din rile dezvoltate consum 300 mg
cafein/zi, iar adolescenii 100 mg.
Conform FR X, doza terapeutic maxim de cafein este 500
mg pentu o administrare i maxim 1 500 mg pentru 24 de ore.
Doza letal se situeaz n jurul valorii de 100 mg/kg corp

Exemple de produse medicamentoase disponibile pe


piaa intern
SARIDON - paracetamol 250 mg, propifenazon 150 mg i
cafein 50 mg comprimate
CODAMIN P- paracetamol 400 mg, cafein anhidr 23 mg
i fosfat de codein hemihidrat 15 mg comprimate
PEYONA cafein citrat 20 mg/ml soluie
perfuzabil/orala

Toxicocinetic
Cafeina se absoarbe la nivel intestinal, atingnd
concentraia plasmatic maxim la aproximativ 1 2 ore dup
ingestie. Poate fi abosrbita i la nivel rectal. Timpul de
njumtire, la persoanele sntoase, variaz ntre 3 i 7 ore.
Nicotina reduce timpul de njumtire cu aproximativ 50 %, iar
contraceptivele orale l pot dubla. Tmpul de njumtire al
cafeinei este prelungit pe durata sarcinii, iar la nou-nscui
valoarea acestuia poate fi de cteva zile. Metabolizarea
substanei se face la nivel hepatic, fiind implicat citocromul
P450, principalii metabolii obinui prin N-demetilare sunt
paraxantina, teobromina i teofilina. Aceste substane sufer
transformri ulterioare prin: oxidare n poziia 8, cu formare de
acizi metilurici; scindarea ciclului imidazolic, cu formare de
uracil-derivai; acetilri (fig. 2). Nou nscuii prezint
capacitate redus de metabolizare a cafeinei. Exceptnd aceste
cazuri, se consider c reaciile de metabolizare au loc rapid,
riscul de acumulare n organism fiind sczut.

2
Cafeina traverseaz bariera placentar i poate fi
identificat n laptele matern. Eliminrarea se face preponderent
la nivel renal.

cafeina

paraxantina
teofilina teobromin

1-metilxantina 7-metilxantina
3-metilxantina

acid 1-metiluric xantina acid 3-metiluric

Figura 2. Biotransformarea xantinelor

3
Coninutul n cafein al buturilor uzuale variaz ntre 5 i
200 mg/ porie: aproximativ 5 mg/250 ml n cazul buturilor
rcoritoare, 60 mg/can de cafea, 75 mg/can de ceai; 80 200
mg/doz de buturi energizante.

Toxicodinamie
Cafeina prezint aciune stimulant asupra sistemului
nervos central, la doze mari producnd convulsii. La doze
terapeutice crete tensiunea arterial la hipotensivi, stimuleaz
centrul respiraiei i produce bronhodilataie, stimuleaz
secreia gastric, stimuleaz diureza.
Efectele cafeinei asupra organismului uman, n funcie de
doz:
85-250 mg cafein (echivalentul a 3 cni de cafea):
senzaie de sporire a atentiei, diminuarea strii de
oboseal;
250 500 mg: agitaie, insomie, tremor, tahicardie,
hiperaciditate gastric;
mai mult de 500 mg: sindrom hiperadrenergic cu
afectare cardiovascular.

Intoxicaia acut este destul de rar i survine, n general, ca


urmare a ingestiei de cafein.
Simptome:
SNC: anxietate, tremor, confuzie, psihoze
cardiovascular: tahicardie, hipotensiune, aritmii,
tahipnee
gastrointestinal: grea, vom, dureri abdominale,
diaree, anorexie
Nu este necesar recoltarea probelor de snge n cazul
pacienilor hemodinamic stabili, care au semnalat consum
ridicat de cafein.
n cazul pacientilor cu simptome cardiovasculare severe se
recomand realizarea electrocardiogramei.

4
Inhibitoarele enzimatice pot reduce metabolizarea cafeinei;
eliminarea cafeinei este redus la pacieni cu afeciuni hepatice
cornice. Eliminarea cafeinei este accentuat la fumtori; astfel
n cazul unei personae care a renunat recent la fumat,
concentraia plasmatic a cafeinei poate atinge valori duble,
chiar daca se inger aceeai doz.
Intoxicaia acut cu cafein se soldeaz rareori cu decesul
pacientului. Cu toate acestea, n ultimul deceniu au fost
semnalate decese asociate direct cu consumul de buturi
energizante.
Tratamentul este simptomatic. La scurt timp dup ingestie
se poate efectua lavaj gastric utiliznd crbune active. n situaii
de intoxicaie sever se urmrete stabilizarea tensiunii arteriale
i a ritmului cardiac blocante ale canalelor de calciu:
diltiazem, beta blocante; vasopresoare; antiaritmice:
amiodarona i controlul simptomelor SNC cu ajutorul
benzodiazepinelor de tip lorazepam;

Intoxicaia cronic poarta numele cafeism sau teism, n


funcie de natura buturii frecvent ingerate. Simptomele
intoxicaiei cronice cuprind: agitaie, tremor, cefalee, insomnie,
aritmii. Sevrajul se manifest n momentul ntreruperii brute a
administrrii.
Consumul de cafein n doze mai mari de 400 mg/zi asociat
cu un aport sczut de calciu n alimentaie, determin o cretere
a deficitului de calciu n organism.

Izolare
Conform metodei Stas-Otto-Ogier, cafeina se extrage din
probele biologice cu cloroform n mediu acid sau bazic.

Identificare
prin nclzirea cafeinei n prezena unui oxidant (acid
azotic, ap oxigenat) se formeaz acidul amalic

5
incolor. Prin adugare de amoniac se dezvolt o
coloraie rou-purpuriu.
n prezena fericianurii de potasiu i a acidului azotic, la
cald, se formeaz un precipitat albastru Berlin
cafeina reacioneaz cu fosfomolibdatul de amoniu, n
mediu alcalin i dezvolt o coloraie albastr
Absorbana

Lungimea de und

Figura 3. Spectrul UV al cafeinei n mediu acid. Maxim de


absorbie la 273 nm.

Dozare
Metoda spectrofotometrica de dozare a cafeinei din bauturi
si alimente
Cafeina se extrage din probele lichide n diclormetan. Se
msoar absorbana la 260 nm.
Reactivi: diclormetan;
Mod de lucru: 50 ml prob se aduc ntr-o plnie de separare.
Se adaug 25 ml diclor metan, se agit energic, se separ

6
solventul. Procedeul se reia de nc dou ori. Se reunesc cele
trei cantiti de extract.
n paralel se pregatete scara de etalonare. Se prepar o
soluie de cafein 1000 ppm dizolvnd 198,2 mg cafein n
200,0 ml ap distilat. Se pipeteaz 2,5; 5; 7,5; 10; 12,5; 25 ml
solutie stoc in baloane cotate de 50 ml i se completeaz la
semn cu ap. Se va extrage cafeina din soluiile astfel pregatite,
folosind diclormetan, similar probei.
Se traseaz curba de etalonare i se ncadreaz valorile
probelor pe acest grafic.

Determinarea cantitativ GC a cafeinei din plasm


Coloan: DB-17 (15 m x 530 mm d.i., 1 m). Gaz purttor:
He, 21 ml/min. Program de temperatur: 70C la 280C.
Detecie NPD. Limita de detecie 50 g/L
Coloan: OV-17. NSD. Limita de detecie 1 g/L. Detecie
AFID. Limita de detecie 50 g/L

Determinarea cantitativ HPLC a cafeinei din plasm


Coloan: Partisil-10 SCX. Faza mobil: 0.1 mol/l tampon
fosfat de sodiu (pH 4,9) : metanol (92 : 8), debit 1,5 ml/min.
Detecie UV ( = 254 nm). Timp de retenie: 5,1 min.
Limita de detecie 10 g/l
Coloan: faz invers. Detecie UV. Limita de detecie 0.1
mg/L cafein i teofilin
Coloan: TSK gel ODS-80TM (150 x 4,6 mm d.i.). Faza
mobil: metanol : dihidrogenofosfat de sodium 0,1 mol/l
(30 : 70), debit 0,8 ml/min. Detecie UV ( = 274 nm).
Limita de detecie 5 g/l cafein. Detecie UV. Limita de
detecie 100 g/l. Detecie UV ( = 273 nm). Limita de
detecie 100 g/l.

Determinarea cantitativ LC-MS a cafeinei din plasm


Ionizare FAB. Limita de detecie ~5 g/l.

7
Determinarea cantitativ HPLC a cafeinei din ser
Coloan: MZKromasil C4 (250 x 4 mm d.i., 5 m). Faza
mobil: soluie tampon acetat de sodiu (pH 3,5) : metanol
(97 : 3 la 80 : 20 n 20 min). Detecie UV ( = 275 nm).
Limita de detecie 20mg/l pentru cafein. Metoda separ i
metaboliii cafeinei.
Coloan: faz invers. Detecie UV. Limita de detecie 0,3
mg/l pentru cafein. Metoda poate fi utilizat i pentru
paraxantin
Meto de dozare a cafeinei i teofilinei. Coloan: ODS faz
invers. Faza mobil: soluie tampon hidrogenfosfat de
sodiu 0,2 mmol/l (pH 7,4). Detecie UV ( = 273 nm).
Limita de detecie 0,5 mg/l pentru cafein

Determinarea cantitativ HPLC a cafeinei din urin


Cafein, teofilin, teobromin. Detecie UV. Limita de
detecie < 1 ng/l
Cafein i metabolii. Coloan: Eclipse XDB-C18. Detecie
DAD.
Coloan: YMC-Pack Polyamine-II (250 x 4,6 mm d.i.).
Faza mobil: acetonitril :acid formic 0,75 % (91 : 9), debit
1,0 ml/min. Detecie UV ( = 260 i 280 nm)
Cafein i metabolii. Coloan: ODS. Faza mobil: acid
acetic 0,05 % : metanol (92.5 : 7.5). Detecie UV ( = 280
nm)
Metaboliii cafeinei. Detecie UV. Limita de detecie 12
mol/l.

TEOFILINA

Este bronhodilatator, se utilizeaz n tratamentul


afeciunilor pulmonare de tip astm, bronhopneumopatie

8
obstructiv cronic (BPOC). Poate fi utilizat n tratamentul
apneei la nou-nscui. n prezent bolile pulmonare cornice
beneficiaz de alte substane active ca tratament de elecie,
deoarece n cazul teofilinei, efectele nedorite se manifest
inclusiv la doze terapeutice.
Interaciuni
Dac pe parcursul tratamentului cu teofilin se
administrareaz concomitant metilxantine, se manifest efect
aditiv al intensitii aciunii stimulatoare la nivel SNC. Surse de
metilxantine de natur medicamentoas: cafein, pentoxifilin
sub diverse forme farmaceutice. Alte surse de metilxantine:
buturi i alimente care conin cafea, ceai, cacao, ciocolat,
cola, buturi energizante.
O categorie larg de substane medicamentoase determin,
de asemenea, intensificarea aciunii stimulante a teofilinei:
alopurinol, cimetidin, disulfiram, fenilbutazon, fluvoxamin,
fluoroquinolone, furosemid, imipenem, izoniazid, blocante ale
canalelor de calciu, lincomicin, macrolide, paracetamol,
contraceptive orale, probenecid, propafenon, propranolol.
Asocierea acestor substane cu teofilina impune monitorizarea
concentraiilor plasmatice i ajustarea dozelor n funcie de
rezultatele analizelor.
Printre substanele care determin reducerea aciunii
teofilinei se numr: fenobarbitalul, fenitoina, carbamazepina,
rifampicin, ritonavir.
Activitatea -agonitilor este intensificat n prezena
teofilinei.
Administrarea -blocantelor, indeosebi cele neselective,
contracareaz activitatea teofilinei.
Exemple de produse medicamentoase disponibile pe
piaa intern
TEOTARD teofilin 200 mg; 300 mg capsule cu
eliberare prelungit

9
MIOFILIN aminofilin 100 mg (teofilin : etilendiamin
2:1) capsule
MIOFILIN - aminofilin 24mg/ml - soluie injectabil

Toxicocinetic
Teofilina se absoarbe complet dup administrare oral, se
leaga de proteinele plasmatice n proporie de 60 %.
Concentraia terapeutic trebuie meninut n intervalul 10-20
g/ml. Valori superioare produc efecte nedorite, iar n
intervalul 80-100 g/ml apar efecte toxice severe. Dup
administrare cronic, intervalul toxic coboar la 40-60 g/ml.
Se metabolizeaza hepatic i se elimin renal.
Teofilina traverseaz bariera placentar. La gravide,
teofilina trebuie administrat doar dac beneficiul terapeutic
matern depete riscul potenial fetal. Administrarea teofilinei
n ultimul trimestru de sarcin trebuie evitat, deoarece aceasta
poate reduce contractilitatea uterin.
Prin intermediul laptelui matern, teofilina ajunge n
circulaia sugarului, putnd determina iritabilitate i dificulti
de adormire.

Intoxicaia acut
n general, intoxicaiile acute apar ca urmare a ingerrii unei
cantiti superioare dozei prescrise sau prin injectarea rapid
intravenoas. Intoxicaiile cornice pot fi cauzate de asocierea cu
inhibitoare enzimatice, afeciuni hepatice etc.
Simptome:
cardiovascular: tahicardie, aritmii, hipotensiune, stop
cardiac;
respirator: tahipnee care conduce la alcaloz
respiratorie, insuficien respiratorie;
SNC: tremor, agitaie, halucinaii, iritabilitate,
convulsii;
gastrointestinal: grea, vrsturi, dureri abdominale;

10
Intoxicaia cronic
n aceast situaie, simptomatologia gastrointestinala este
minora, trecnd, de multe ori, neobservat.
La concentraii plasmatice apropiate valorii de 80 g/ml
se manifest hipotensiune i aritmii severe.
Aritmiile sunt semnalate mai des decat n intoxicaiile
acute i se manifest la concentraii plasmatice mai sczute.
Colapsul cardiovascular survine rareori n urma unei
intoxicaii cronice.
Pentru tratarea intoxicaiilor se utilizeaz carbune activ,
dac pacientul se prezint la unitatea de primiri urgene n
interval mai mic de 60 de minute de la momentul ingestiei.
Se apeleaz la msuri mai agresive de eliminare a
coninutului stomacal i al intestinelor, dac pacientul a
ingerat forme farmaceutice cu cedare prelungit. Se
administraz o soluie coninand polietilenglicol i electrolii
(2 l/h la aduli, 500 ml/h la copii) pan n momentul n care
soluia eliminat rectal este limpede.
Eventualele convulsii pot fi controlate cu fenobarbital
(avantaj suplimentar efect inductor enzimatic) sau alte
barbiturice.
Se administraz perfuzii izotonice pentru a regla
tensiunea arterial. Dac nu se poate corecta hipotensiunea
cu aceast abordare, se administreaz substane vasopresoare
(adrenalin, noradrenalin).
Metoclopramidul este antivomitivul de electie.

Izolare
Conform metodei Stas-Otto-Ogier, teofilina se extrage din
probele biologice cu cloroform n mediu acid sau bazic.
Identificare
teofilina reacioneaz cu acetatul de mercur n acid
acetic anhidru, formnd un precipitat alb cristalin;

11
teofilin se agit timp de 2 minute cu o soluie de
hidroxid de sodiu, se filtreaz. Filtratul reacioneaz cu
clorura de cobalt formnd un precipitat alb-roz
(deosebire de cafein i teobromin)
Absorbana

Lungimea de und
Figura 4 . Spectrul UV al teofilinei n mediu acid

Determinarea cantitativ LC-MS a teofilinei din snge


Coloan: Luna ODS2 (75 x 6 mm d.i., 3 m). Faza mobil:
metanol : ap (20 : 80), debit 0.5 ml/min. Mod de detecie
SIM. Limita de cuantificare 12 g/l

Determinarea cantitativ HPLC a teofilinei din plasm


Coloan: Inertsil C18 (150 x 4,6 mm d.i., 5 m). Faza
mobil: soluie tampon de acetat de amoniu 10 mmol/l :
metanol : acetonitril (86 : 7 : 7), debit 1,0 ml/min. Detecie
UV ( = 272 nm). Limita de cuantificare 100 g/l pentru
teofilin

12
Coloan: TSK gel ODS-80TM (150 x 4,6 mm d.i., 5 m).
Faza mobil: metanol : soluie tampon fosfat 0,01 mol/l (pH
3,5; 30 : 70). Detecie UV ( = 270 nm). Limita de detecie
24.1 g/l
Coloan: ODS (150 x 6 mm d.i., 5 m). Faza mobil: acid
acetic 5 % : acetonitril-metanol (20 : 80, 80 : 20 timp de 10
min la 40 : 60 la 15 min la 20 : 80 la 20 min la 10 : 90 la 25
min), debit 1 ml/min. Detecie UV ( = 280 nm). Timp de
retenie 8 min. Limita de cuantificare 0,5 mg/l
Coloan: ODS (250 x 4,6 mm d.i., 5 m). Faza mobil:
soluie tampon acetat 0,01 mol/l (pH 4) : metanol (91 : 9),
debit 1,0 ml/min timp de 11 min la 1,5 ml/min timp de 6
min la 2, 5 ml/min la 17 min timp de 13 min. Detecie UV
( = 273 nm). Limita de detecie 0,2 mol/l pentru teofilin
i 0,1 mol/l pentru metaboliii teofilinei (acid 1-metiluric,
3-metilxantina, acid 1,3-dimetiluric
Coloan: RP ODS-2 cu Spherisorb C18 (150 x 4,6 mm d.i.,5
m), oel inoxidabil. Faza mobil: acetonitril :
tetrahidrofuran : acid acetic concentrat : ap (20 : 20 : 5 :
955), debit 1 ml/min. Detecie UV (L = 273 nm). Timp de
retenie: 5,0 min. Limita de detecie 0,1 mg/l

Determinarea cantitativ LC-MS a teofilinei din plasm


Coloan: C18. (150 x 3 mm d.i., 3 m). Faza mobil: ap
metanol (95 : 5) : ap-metanol (10 : 90), ambele coninnd
acid formic 0, 05 % (100 : 0 la 20 : 80 n 3 min timp de 2
min la 100 : 0 la 6 min), debit 0,3 ml/min. Ionizare ESI,
mod ion pozitiv, mod detecie MRM. Limita de cuantificare
24,4 g/l
Coloan: C18 (50 x 2,0 mm d.i., 3 m). Faza mobil:
metanol : acid acetic 0,5 ml/l (70 : 3), debit 0, 25 ml/min.
mod de detecie MRM. Limita de cuantificare 0,0625 mg/l,
Limita de detecie 0,028 mg/l

13
Determinarea cantitativ GC a teofilinei din ser
Coloan: 2 % SP 2510-DA sau 2 % SP 2110/1 % SP 2510-
DA pe 100/120 Supelcoport (2 m x 4 mm d.i.). Gaz
purttor: N2, 50 ml/min. Program de temperature: 25C la
250C la 2/min. Limita de detecie 2,5 mg/l

Determinarea cantitativ GC-MS a teofilinei din ser


Coloan: DB-5MS (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 1,0 ml/min. Program de temperatur: 60C
timp de 1 min la 300C la 20/min timp de 2 min. Ionizare
EI la 70 eV. Mod de detecie SIM. Timp de retenie: 11,03
min. Limita de detecie 1 ng

Determinarea cantitativ HPLC a teofilinei din ser


Coloan: Nautilus C18 (150 x 4,6 mm d.i.). Faza mobil:
acetat 0,02 mol/l : soluie tampon fosfat (pH 3,0) coninnd
9,6 % acetonitril. Detecie UV ( = 273 nm).
Coloan: ODS modificat cu CHAPS (3-[(3-
colamidopropil)-dimetilamoniu]-1-propansulfonat). Faza
mobil: hydrogen fosfat de sodiu 0,2 mmol/l (pH 7,4).
Detecie UV ( = 273 nm). Limita de detecie 0,2 mg/l
pentru teofilin i 0,5 mg/l pentru cafein

Determinarea cantitativ LC-MS a teofilinei din ser


Coloan: XTerra MS C18 (150 x 2,1 mm d.i., 3,5 m). Faza
mobil: acetonitril : acetat de amoniu 10 mmol/l (pH 7, 2 :
98 timp de 15 min la 25 : 75 ntre 15 i 29 min pn la 50
min la 2 : 98 ntre 50 i 70 min), debit 0,15 ml/min. Ionizare
ESI, mod ion pozitiv, mod de detecie SIM. Limita de
cuantificare 0,5 mg/l.

Determinarea cantitativ HPLC a teofilinei dinurin


Coloan: LiChrospher 100 RP-18 (244 x 4,4 mm d.i., 5
m). Faza mobil: ap : etanol : acid acetic (75 : 24 : 1),

14
debit 1,0 ml/min. Detecie UV ( = 273 nm). Limita de
detecie 0,06 g/l pentru teofilin, 0,1 g/l pentru cafein i
0,07 g/l pentru teobromin
Coloan: LC-18-DB. Faza mobil: metanol : soluie tampon
acid citric 5 mmo/l (pH 5, 20 : 80). Detecie UV. Teofilin,
cafein, teobromin i paraxantin, Limita de cuantificare
0,8 mg/l pentru teofilin, 1,2 mg/l pentru teobromin.
Limita de detecie 0,15 mg/l pentru teofilin, 0,3 mg/l
pentru teobromin
Coloan: Bondesil C18. Faza mobil: metanol : ap : acid
acetic sau etanol :ap : acid acetic (20 : 75 : 5), debit 0,7
ml/min. Detecie UV ( = 273 nm). Limita de detecie 0,1
ng/l pentru teofilin, cafein i teobromin.
Coloan: RP Ultrasphere-ODS (150 x 4,6 mm d.i., 5 m).
Faza mobil: acetat de sodiu 10 mmol/l : acetonitril :
tetrahidrofuran (96,9 : 3,0 : 0,1) coninnd 5 mmol/l
tetrabutilamoniu hydrogen sulfate (pH 4,7), debit 1.5
ml/min. Detecie UV ( = 280 nm). Limita de detecie 1
mg/l pentru teofilin i 0,5 mg/l pentru metaboliii
teofilinei.

TEOBROMINA

Teobromina prezint aciune preponderent diuretic,


bronhodilatatoare, vasodilatatoare i stimulant SNC.
Seminele de cacao conin aproximativ 1,2 % teobromin,
iar cacaoa pudr aproximativ 10 %. Ciocolata procesat conine
un procent mai scazut. n general intoxicaiile apar n cazul n
care vrstnicii sau copiii consum cantiti crescute de
ciocolat.
Simptomele intoxicaiei acute cuprind: greaa, vrsturi,
diaree, volum crescut de urin, aritmii, crize tip epilepsie, stop
cardiac.

15
Izolare
Conform metodei Stas-Otto-Ogier, teobromina se extrage
din probele biologice cu cloroform, n mediu acid.

Identificare

Lungimea de und
Figura 5. Spectrul UV al teobrominei n mediu acid

teobromina se oxideaz cu ap oxigenat, la cald. Dup


adugare de amoniac apare o coloraie rou-violet;
Filtratul rezultat dup reacia teobrominei cu hidroxid
de sodiu se trateaz cu clorur de cobalt; apare o
coloraie violet apoi se formeaz un precipitat cenuiu
albastru (deosebire de teofilin);
teobromin reacioneaz la cald cu nitratul de argint,
formnd un precipitat gelatinos. Dup racire se adaug
ammoniac, iar precipitatul se dizolv.

16
Dozare
Metodele HPLC permit dozarea concomitent a derivailor
xantinici, cum s-a prezentat anterior.

AMFETAMINE

amfetamin efedrin

Figura 6 .Structura chimic a amfetaminei i a efedrinei

Amfetaminele sunt subsatne cu aciune psihoanaleptic i


anorexigen. Amfetamina a fost sintetizat de chimistul roman
Lazr Edelenu la sfritul secolului al XIX-lea. Proprietile
sale farmacologice au fost descoperite ma trziu. Iniial se
utilizau ca decongestionate nazale, asemntor cu efedrina, cu
care se nrudesc structural (fig. 6). Ulterior s-a observat efectul
psihostimulent, anorexigen i posibilitatea instalrii
dependenei, eliberarea i utiilizarea lor fiind mai strict
reglementat.
Din punct de vedere chimic, amfetaminele sunt derivai de
fenil-propilamin. Structural or poate conine nclusiv
heterocicluri. Prezena unui atom de carbon chiral determin
apariia izomerilor optici i a amestecului racemic, iar
proprietile acestor izomeri pot fi sensibil diferite.
n funcie de aciunea predominant, amfetaminele se pot
clasifica n:
amfetamine psihotonice (denumite i amine de
trezire): amfetamina, metamfetamina, metilfenidat

17
amfetamine anorexigene: amfepramona,
sibutramina, fentermina
Amfetaminele s-au dovedit utile n tratamentul tulburrii
hiperchinetice cu deficit de atenie (ADHD), mai ales
metilfenidatul.
n terapie se ntlnesc i amfetaminele anorexigene.
Consumul ilicit i sinteza n laboratoare clandestine vizeaz n
general cealalt clas, urmrind instalarea efectului euforizant,
halucinogen.

Exemple de produse medicamentoase disponibile pe


piaa intern
CONCERTA 18 mg; 36 mg 54 mg comprimate cu
eliberare prelungit
REGENON 25 g capsule moi
REGENON RETARD 60 g - capsule cu eliberare
prelungit

Toxicocinetic
Amfetaminele se absorb uor dup administrare oral, dar
se pot utiliza i alte ci de ptrundere n organism. Administrare
subcutanat determin o absorbie rapid a substanei.
Concentraia plasmatic maxim se atinge dup aproximativ
2-3 ore de la ingerarea substanei; durata scade la 30 de minute
dup administrare intramuscular i la cteva minute dup
inhalare. Administrarea intravenoas este cea mai rapid
modalitate de realizare a unor concentraii plasmatice mari.
Se legarea de proteinele plasmatice n proporie sczut, de
aproximativ 10 %, iar volumul de distribuie este mare, strbat
cu uurin bariera hemato-encefalic. Structura lor nu este
afectat de sucul gastric.
Amfetaminele se pot elimina direct sau n urma
biotransformrii. Metabolizarea presupune reacii de oxidare la
nucleu, dezaminare oxidativ, demetilare i conjugare (fig. 4).

18
Metamfetamina este biotransformat prin demetilare la
azot, cu formare de amfetamin sau prin parahidroxilare.
Metilfenidatul este metabolizat prin hidroliz la acid
ritalinic (fig.8)

glucurono
sulfo
conjugare
norefedrin

glucurono
sulfo
conjugare
amfetamin 4 - hidroxiamfetamin

acid benzoic acid hipuric


fenilaceton

Figura 7. Metabolizarea amfetaminei

Eliminarea se face preponderent renal. Valoarea pH-ului


urinar influeneaz rata de metabolizare i viteza de epurare a
amfetaminelor. La pH acid, timpul de njumtire este de
aproximativ 10 ore, iar substana este eliminat preponderent
sub form netransformat. La la pH bazic, timpul de
njumtire poate ajunge la 30 de ore, iar n urin se identific
majoritar metabolii ai substanei.

19
acid ritalinic p-hidroxi metilfenidat

metilfenidat

lactam etilfenidat

Figura 8. Metabolizarea metilfenidatului

Toxicodinamie
n funcie de structura chimic, amfetaminele prezint
preponderent aciune psihostimulatoare sau anorexigen.
Datorit stimulrii SNC, persoana care i administreaz
amfetamine experimenteaz o cretere a activitii psihice,
tradus prin sporirea ncrederii, a siguranei de sine, a
iniiativei; scade senzaia de oboseal i crete rezistena la
efort fizic. Apare senzaia de euforie. Stimuleaz centrul
respiraiei i pot fi utilizate n tratamentul efectelor produse de
20
substane cu aciune deprimant SNC. Aciunea anorexigen
este nsoit de creterea metabolismului bazal. Utilizarea
exagerat conduce la epiuzarea organismului.
Printre efectele secundare se numr: anxietata, insomnia,
confuzie, hipertensiune arterial, uscciunea gurii, senzaii
gustive alterate, dificulti de miciune.
Tolerana i dependent se instaleaz dup aproximativ o
lun de tratament. Doza toxic variaz n funcie de
sensibilitatea individului i durata de administrare a
tratamentului. Manifestri toxice severe sunt semnalate la doze
de aproximativ 30 mg.

Intoxicaia acut
n general aminele psihotonice sunt implicate n intoxicaii
de tip supradozare, n urma utilizrii recreaionale. Aminele
anorexigene pot determina i ele simptome asemntoare, dac
sunt utilizaten doz mare.
Simptomele intoxicaiei se manifest prin agitaie, tremor,
agresivitate, dizartrie, tahicardie, hipertensiune sau
hipotensiune, dureri abdominale, grea, anorexie. Pot fi
evideniate uritcarie sau exeme.

Intoxicaia cronic se manifest la persoane care si


administraz aceste substane o perioad mai lung.
Amfetaminele sunt atractive deoarece creeaz impresia c
subiectul poate nltura orice obstacol prin senzaia de atenie
sporit, nlturarea oboselii, rezisten crescut la efort i
creterea stimei fa de propria persoan. Continuarea
administrrii conduce la pierdere ponderal, iritabilitate,
anxietate, agresivitate, se pot declana convulsii.
ntreruperea brusc a administrrii declaneaz sindromul
de abstinen. Durata acestuia este de aproximativ o lun, cu
efectele cele mai intense raportate n prima sptmn.
Dependena psihic fiind mare, simptomele se manifest

21
primordial la acest nivel: anxietate, dorina imperioas de
administrare a drogului, depresie, insomnie, comaruri, foame.
Amfetaminomania poate fi nsoit de alte adicii.
Persoanele dependente de barbiturice sau opioide pot recurge la
amfetamine n scopul reducerii efectelor deprimante SNC.
Sportivii au folosit amfetamine pentru a mbuntii
performanele fizicele. Forurile internaionale au introdus
controale stricte pentru depistarea dopajului. Pe lista
substanelor interzise, alturi de amfetamine, se afl
stimulantele, analgezicele opiode, agenii anabolizani, anumii
hormoni, diuretice.
Prezena amfetaminelor n urin face parte din testele
standard antidrog. Administrarea suplimentelor alimentare
bogate n zinc poate reduce detecia anumitor substane ilicite,
inclusiv a amfetaminelor.
Tratatametul intoxicaiei poate include lavajul gastric cu
crbune activ, dac ingestia de substan a avut loc n ora
precedent.
Se administreaz sedative pentru a combate efectele
psihostimulante i a preveni apariia convulsiilor.
Se urmresc funciile vitale i se intervine pentru susinerea
acestora.
Epurarea este grbit prin diurez osmotic forat, se
recomand montarea unei sonde urinare pentru a monitoriza
cantitatea de urin eliminat i pentru a contracara efectul
amfetaminelor la nivelul vezicii urinare i al sfincterelor.

Izolare
Se utilizeaz, de preferin, probe de urin.
Amfetaminele se izoleaz din soluii apose alcaline prin
extracie cu solveni organici. Fiind volatile, amfetamina poate
fi izolat prin antrenare cu vapori de ap din soluii alcalinizate,
urmat sau nu de extragere cu solveni. Amfetamina se salific

22
nainte de evaporarea solventului, pentru a evita pierderea prin
volatilizare.

Identificare
Din pulberi sau forme farmaceutice solide se dizolv o
cantitate de substan n ap, din aceast soluie se pipeteaz
cteva picturi pe patru sticle de ceas
la adaugarea unei picturi de acid cloroplatinic se
formeaz cristale glbui, care se compar la microscop
cu cristale martor
la adugarea unei picturi de reactiv Marquis, apare un
precipitat rou-crmiziu, care trece apoi n brun-verde
la adugarea unei picturi de reactiv Mayer, apare un
precipitat alb
la adugarea unei picturi de reactive Dragendorff,
apare un precipitat portocaliu.
Absorbana

Figura 9. Spectrul UV al amfetaminei n mediu apos acid

23
Din soluii extractive:
amfetamina reacioneaz prin condensare cu acetil-
dihidrotoluidina, se dezvolt o coloraie galben-
portocalie
aminele secundare reacioneaz cu acetaldehid i
cloralhidrat, se dezvolt o coloraie verde-albastr
n prezena reactivului Marquis se dezvolt o coloraie
portocalie

Dozare
Metoda spectrofotometric
Principiu: amfetamina se cupleaz cu para-nitroanilina
diazotat n mediu alcalin, formnd un azoderivat de culoare
roie.

n prezent se utilizeaz frecvent metode ELISA, HPLC sau


GC.

Determinarea cantitativ GC-MS a amfetaminei din snge


Coloan: HP-5 MS (15 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He. Program de temperatur: 60C timp de 1 min,
la 220C la 20/min. Ionizare EI, mod de detecie SIM.
Timp de retenie: 4, 66 min pentru amfetamin, 5,3 min
pentru metamfetamin, 7,14 min pentru 3,4-metillendioxi-
metamfetamin (MDMA)
Coloan: Supelco, PTE-5 (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m).
Gaz purttor: He, 0,4 ml/min. Program de temperatur:
60C timp de 3 min la 280C la 20/min. Ionizare EI, mod
de detecie SIM. Limita de cuantificare 0,5 ng/g pentru
amphetamine i metamfetamin
Coloan: Supelco PTE-5 (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m).
Gaz purttor: He, 60kPa. Program de temperatur: 60C
timp de 3 min la 280C la 20/min. Ionizare EI, mod de
detecie SIM. Limita de detecie 10 ng/g

24
Coloan: HP-5 MS capilar (30 m x 0,32 mm d.i.). Ionizare
El, mod de detecie SIM. Limita de cuantificare 10 g/l,
limita de detecie 0,58 g/l
Coloan: fused silica (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 8 psi. Program de temperatur: 45C timp de
3,5 min la 270C la 25/min. Ionizare EI, mod de detecie
SIM. Limita de detecie 0,01 g/g pentru amfetamin i
metamfetamin.

Determinarea cantitativ LC-MS a amfetaminei din snge


Coloan: Varian Pursuit 3 C18 (100 x 3 mm d.i., 3 m).
Faza mobil: soluie tampon de formiat de amoniu 2 mmol/l
: acetonitril (pH 5,3; 92 : 8): metanol (97 : 3 timp de 3 min,
la 80 : 20 n decurs de 4 min timp de 4 min la 70 : 30 n
decurs de 6 min, la 10 : 90 timp de 13 min), debit 0,3
ml/min. Mod de detecie MRM. Limita de cuantificare
0,010 mg/g. Limita de detecie 0,0008 mg/g
Coloan: Sphinx RP. Faz mobil: formiat de amoniu 10
mmol/l : acetonitril. Limita de cuantificare 2,5 g/l. Limita
de detecie 0,050,5 g/l
Coloan: Uptisphere ODB C18 (150 x 2,1 mm d.i., 5 m).
Faz mobil: acetonitril : tampon formiat 2 mmol/l (pH 3,
20 : 80 timp de 8 min la 90 : 10 n decurs de 5 min la 20 :
80 n decurs de 7 min), debit 250 ml/min. Ionizare ESI, mod
ion pozitiv, mod de detecie MRM. Limita de cuantificare
0,1 g/l
Coloan: BEH C18 (50 x 2,1 mm). Faz mobil: pirolodin
soluie apoas : metanol (52 : 48), debit 0,4 ml/min. Timp
de retenie: 1,32 min
Coloan: Hypersil BDS-C18 (100 x 2,1 mm d.i., 3 m). Faz
mobil: acetonitril : acid formic 0,001 % (6 : 94 timp de 5
min la 50 : 50 n decurs de 10 min la 6 : 94 n decurs de 5
min timp de 15 min), debit 0,3 ml/min. Ionizare SS. Limita
de detecie 5 g/l.

25
Determinarea cantitativ GC a amfetaminei din plasm
Coloan: HP (25 m x 0,3 mm d.i., 1,05 m). Gaz purttor:
He, 2 ml/min. Program de temperatur: 105C timp de 0,50
min la 300C la 5/min timp de 15 min. Detecie ECD.
Limita de detecie <1 g/l
Coloan: HP-5 (25 m x 0,32 mm d.i., 0,52 m). Detecie
NPD. Limita de cuantificare 1 g/l. Limita de detecie 1
g/l

Determinarea cantitativ GC-MS a amfetaminei din plasm


Coloan: HP-5 MS (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 1,0 ml/min. Program de temperatur: 80C la
280C la 20/min timp de 1,5 min. Ionizare EI, mod de
detecie SIM.
Coloan: SGE-BPX5 (15 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 1,5 ml/min. Program de temperatur: 100C
timp de 1 min la 180C la 40/min la 195C la 5/min la
310C la 40/min timp de 2 min. Ionizare NICI, mod de
detecie SIM. Limita de cuantificare 0,049 g/l pentru (R)-
(-)-amfetamin i 0,195 g/l for (S)-(+)-amfetamin
Coloan: HP-5 MS (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 0,6 ml/min. Program de temperatur: 100C la
250C la 10/min la 310C la 30/min timp de 1 min.
Ionizare EI, mod de detecie SIM. Limita de cuantificare 5
g/l
Coloan: HP-5 MS (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 1,0 ml/min. Program de temperatur: 100C la
180C la 30/min la 230C la 5/min la 310C la 30/min.
Ionizare NICI, mod de detecie SIM.

Determinarea cantitativ HPLC a amfetaminei din plasm


Detectare de fluirescen. Limita de detecie 0,87 g/l
pentru amfetamin i metamfetamin

26
Coloan: MetaSil Basic (100 x 2 mm d.i., 3 m). Faz
mobil: acid formic 0,1 % : metanol (73 : 27), debit 0,25
ml/min. Ionizare APCI, mod ion pozitiv, mod de detecie
MRM. Limita de cuantificare 0,2 g/l
Coloan: ODS. Faz mobil: acetonitril : tampon citrat (55 :
45). Detecie UV. Limita de detecie 20 g/l

Determinarea cantitativ LC-MS a amfetaminei din plasm


Coloan: Alltima RP C18 (250 x 4,6 mm d.i., 5 m). Faz
mobil: acetonitril : acid formic 5 mmol/l (10 : 90 pentru 2
min la 25 : 75 n 16 min la 30 : 70 n 0,1 min la 100 : 0 n
decurs de 12 min), debit 1,0 ml/min. Mod ion pozitiv, mod
de detecie MRM. Limita de cuantificare 1,0 g/l. Limita de
detecie 0,6 g/l
Coloan: Atlantis dC18 (100 x 2,1 mm d.i., 3 m). Faz
mobil: acetonitril : tampon formiat de amoniu (5 : 95 timp
de 1 min, la 50 : 50 n 10 min timp de 1 min, la 5 : 95 n 1
min timp de 4 min), debit 0,2 ml/min. Ionizare ESI, mod de
detecie SIM. Limita de cuantificare 2 g/l. Limita de
detecie 0,51 g/l.
Coloan: Hypersil BDS-C18 (100 x 2,1 mm d.i., 3 m). Faz
mobil: acetat de amoniu 10 mmol/l : acetonitrile. Ionizare
ESI, mod ion pozitiv, mod de detecie MRM. Limita de
cuantificare 0,5 mg/l, Limita de detecie 0,5 g/l

Determinarea cantitativ GC-MS a amfetaminei din ser


Coloan: DB-5 MS ( 30 m x 0,32 mm d.i., 1,0 m). Gaz
purttor: He. Program de temperatur: 130C timp de 2 min,
la 320C la 15/min timp de 3 min. Mod de detecie SIM.
Coloan: DB-5 MS (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 1 ml/min. Program de temperatur: 60C la
120C la 30/min la 180C la 20/min la 250C la 30/min
timp de 0,5 min. Mod de detecie SIM . Limita de detecie
0,6 g/l

27
Coloan: DB-5 MS (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m).
Program de temperatur: 80C timp de 1 min la 200C la
20/min la 240C la 5/min la 310C la 30/min timp de 6
min. Mod de detecie SIM. Limita de cuantificare 4,9 g/l,
Limita de detecie 1,5 mg/l.

Determinarea cantitativ HPLC a amfetaminei din ser


Coloan: Superspher 100 RP C18 (125 x 3 mm d.i., 4 m).
Faz mobil: acetonitril : tampon formiat de amoniu 50
mmol/l (25 : 75), debit 0,3 ml/min. Ionizare APCI, mod de
detecie SIM. Limita de detecie 2 g/l
Coloan: Superspher Select B (125 x 3 mm d.i.). Faz
mobil: tampon formiat de amoniu 50 mmol/l (pH 3,0) :
acetonitril (60 : 40), debit 0,8 ml/min. Detecie UV ( = 250
nm). Limita de detecie 30 g/l
Coloan: Superspher Select B (125 x 3 mm d.i.). Faz
mobil: tampon formiat de amoniu 50 mmol/l (pH 3,0) :
acetonitril (60 : 40), debit 0,8 ml/min. Detecie DAD.
Limita de detecie 100 g/l

Determinarea cantitativ GC a amfetaminei din urin


Coloan: HP-5 (300 x 32 mm d.i., 0,25 m). Gaz purttor:
He, 1,5 ml/min. Program de temperatur: 140C la 300C la
20/min. Detecie PDHID. Limita de detecie 0,5 mg/l
Coloan: DB-5 MS (150 x 2,5 mm d.i.). Gaz purttor: He, 1
ml/min. Program de temperatur: 70C la 200C la 15/min.
FTIR. Limita de cuantificare 20 g/l. Limita de detecie 10
g/l

Determinarea cantitativ GC-MS a amfetaminei din urin


Coloan: DB-5 MS (5 m x 100 mm d.i., 0,1 m). Gaz
purttor: He, 0,6 ml/min. Program de temperatur: 85C la
115C la 62/min timp de 0,8 min la 300C la 65/min timp

28
de 0,52 min. Mod de detecie SIM. Limita de detecie 6,25
g/l
Coloan: HP-5 MS (150 mm). Program de temperatur:
100C timp de 1,8 min la 200C la 15 30/min. Mod de
detecie SIM. Limita de detecie 62,5 g/l
Coloan: HP-5 MS (300 x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 0,8 ml/min. Program de temperatur: 100C
timp de 1 min la 300C la 10/min timp de 3 min. Ionizare
EI, mod de detecie SIM. Limita de detecie 5 g/l
Coloan: HP-5 MS (300 x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 1 ml/min. Program de temperatur: 90C timp
de 3 min la 280C la 20/min timp de 3 min. Mod de
detecie SIM. Limita de cuantificare 1,0 g/l. Limita de
detecie 0,3 g/l

Determinarea cantitativ HPLC a amfetaminei din urin


Coloan: Supelcosil LC-CN (33 x 4,6 mm d.i., 3 m). Faz
mobil: acetonitril : acetat de amoniu 50 mmol/l (15 : 85),
debit 0,4 ml/min. Ionizare ESI, mod de detetcie SIM.
Limita de cuantificare 13 g/l
Coloan: RP C18 ODS (250 x 4 mm d.i.). Faz mobil:
tetrahidrofuran : acetonitril : trietilamin 0,1 % (15 : 15 :
70). Detecie UV ( = 260 nm). Limita de detecie 10 g.
Coloan: ODS. Faz mobil: tampon clorhidrat
hidroximetilaminoetan 0,1 mol/l (pH 7,0) : acetonitril (45 :
55), debit 0,2 ml/min. Detector de fluorescen sau detecie
UV. Limita de cuantificare 47 g/l, limita de detecie 14
g/l

Determinarea cantitativ LC-MS a amfetaminei din urin


Coloan: CAPCELL PAK C18 MG-II (150 x 2,0 mm d.i.,
5 m). Faz mobil: formiat de amoniu 5 mmol/l :
acetonitril (95 : 5 la 20 : 80 n 8 min timp de 1 min), debit

29
0,23 ml/min. Ionizare ESI, mod de detecie MRM. Limita
de cuantificare 5,0 g/l, Limita de detecie 0,87 g/l
Coloan: Symmetry Shield RP C18 (150 x 2,1 mm d.i., 5
m). Faz mobil: acetronitril : acid trifluoroacetic 0,05 %
(10 : 90), debit 0,2 ml/min. Mod de detecie MRM. Limita
de cuantificare 5 g/l. Limita de detecie 1 g/l
Coloan: Symmetry Shield RP C18 (50 x 2,1 mm d.i., 3,5
m). Mod de detecie MRM. Limita de cuantificare 9,1
g/l. Limita de detecie 2,8 g/l

Determinarea cantitativ GC-MS a amfetaminei din bil


Coloan: Shiseido CAPCELL PAK SCX80 (250 x 1,5 mm
d.i.). Faza mobil: acetat de amoniu 25 mmol/l (pH 4,0) :
acetonitril (3 : 7), debit 0,2 ml/min. Ionizare ESI, mod de
detecie SRM.

Determinarea cantitativ GC-MS a amfetaminei din meconiu


Coloan: HP-5 MS (15 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m).
Program de temperatur: 120C timp de 5 min, la 260C la
35/min timp de 0,5 min. Ionizare EI, mod de detecie SIM.
Limita de cuantificare 75 ng/g, Limita de detecie 30 ng/g
Coloan: DB-1 (10 m x 0,18 mm d.i., 0,4 m). Program de
temperatur: 120C timp de 1 min la 150C la 5/min.
Limita de cuantificare 100 ng/g. Limita de detecie 50 ng/g

Determinarea cantitativ LC-MS a amfetaminei din meconiu


Coloan: Synergi Hydro RP (150 x 2 mm d.i., 4 m). Faz
mobil: formiat de amoniu 1 mmol/l (pH 3,4) : acetonitril
coninnd 5 % formiat de amoniu 1mmol/l (100 : 0 la 70 :
30 n decurs de 8 min, la 65 : 35 n decurs de 2 min timp de
1 min, la 100 : 0 n decurs de 2,5min), debit 0,250 ml/min.
Mod de detecie MRM. Limita de cuantificare 5ng/g. Limita
de detecie 1ng/g

30
Coloan: Phenomenex Synergi Hydro RP (50 x 2,0 mm d.i.,
2,0 mm). Faz mobil: acetat de amoniu 10 mmol/l cu 0,1
% acid formic : acetonitrile cu 0,1 % acid formic (88 : 12),
debit 0,6 ml/min. Limita de cuantificare 0,6 ng/g. Limita de
detecie 0,2 ng/g
Coloan: Synergi Polar RP (150 x 2,0 mm d.i., 4 m). Faz
mobil: soluie 10 mmol/l de acetat de amoniu care conine
0,01 % acid formic : acetonitril (90 : 10 timp de 1 min la 50
: 50 n decurs de 13 min timp de 2 min la 10 : 90 n decurs
de 2 min timp de 2 min la 90 : 10 n decurs de 2 min), debit
200 l/min. Mod de detecie MRM. Limita de cuantificare
12,5 ng/g. Limita de detecie 4 ng/g
Coloan: C18. Faz mobil: soluie 10 mmol/l bicarbonate
de amoniu : metanol. Mod de detecie SIM. Limita de
cuantificare 0,005 g/g

Determinarea cantitativ HPLC a amfetaminei din meconiu


Coloan: Supelcosil LC-18 DB C18 (150 x 4,6 mm d.i., 5
m). Faza mobil: dihidrogenfosfat de potasiu : metanol :
acetonitril : tetraidrofuran : trietilamin (600 : 100 : 25 : 7 :
1 : 5), debit 1 ml/min. Detecie DAD ( = 204 nm). Limita
de cuantificare 0,5 g/g

Determinarea cantitativ HPLC a amfetaminei din laptele


matern
Coloan: Phenomenex Aqua C18 (250 x 4,6 mm d.i., 5 m).
Faz mobil: acetonitril : tampon fosfat 45 mmol/l (12 : 88),
debit 1,2 ml/min. Detecie UV ( = 200 nm). Limita de
cuantificare 3 mg/l

Determinarea cantitativ GC-MS a amfetaminei din saliv


Coloan: DB-5 (30 x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz purttor:
He, 1,0 ml/min. Program de temperatur: 100C timp de 1

31
min la 230C la 10/min timp de 10 min. Mod de detecie
SIM. Limita de detecie 100 g/l
Coloan: Varian (15 m x 0,25 mm d.i.). Limita de
cuantificare 3 g/l
Coloan: HP-5 MS (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 1 ml/min. Program de temperatur: 100C la
190C la 30/min, la 230C la 5/min la 245C la 30/min la
260C la 5/min la 310C la 30/min. Ionizare NICI, mod de
detecie SIM.
Coloan: HP-5 MS (30 m x 0,32 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 1,5 ml/min. Program de temperatur: 70C la
170C la 25/min timp de 2 min la 195C la 5/min timp de
0,5 min la 300C la 30/min timp de 1 min. Ionizare EI,
mod de detecie SIM. Limita de cuantificare 5,0 g/l, limita
de detecie 2,5 g/l.

Determinarea cantitativ LC-MS a amfetaminei din saliv


Coloan: Pinnacle II C18 (50 x 4,6 mm d.i., 5 m). Faz
mobil: acetat de amoniu 5 mmol/l : 0,1 % acid formic n
metanol, debit 1,2 ml/min. Mod de detecie MRM. Limita
de cuantificare 10 g/l. Limita de detecie 10 g/l
Coloan: Atlantis dC18 (100 x 2,1 mm d.i., 3 m). Faz
mobil: acetonitril : tampon formiat de amoniu (pH 3, 5 : 95
timp de 1 min la 50 : 50 n 10 min timp de 1 min la 5 : 95 n
1 min), debit 0,2 ml/min. Ionizare ESI, mod de detecie
SIM. Limita de cuantificare 1 g/l, limita de detecie 0,5
g/l

Determinarea cantitativ GC-MS a amfetaminei din coninutul


stomacal
Coloan: DB-5 (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 0,9 ml/min.
Coloan: DB-5 fused silica (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m).
Gaz purttor: He, 0,8 ml/min. Program de temperatur:

32
70C timp de 1 min, la 100C la 30/min la 270C la
10/min.

Determinarea cantitativ gC-MS a amfetaminei din umoarea


vitros
Coloan: DB-5 MS (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 1,0 ml/min. Program de temperatur: 80C la
120C la 40/min la 240C la 10/min timp de 5 min.
Determinarea cantitativ HPLC a amfetaminei din umoarea
vitroas
Coloan: Hypersil BDS-C18 (100 x 2,1 mm d.i., 3 m).
Detecie de fluorescent (ex = 288 nm, em = 324 nm).
Limita de cuantificare 2,0 g/l, limita de detecie 0,8 g/l

Determinarea cantitativ LC-MS a amfetaminei din umoarea


vitroas
Coloan: Hypersil BDS-C18 (100 x 2,1 mm d.i., 3 m).
Limita de cuantificare 2,0 g/l. Limita de detecie 0,8 g/l

Determinarea cantitativ GC-MS a amfetaminei din creier


Coloan: HP-1 MS (3 m x 0,32 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 1,1 ml/min. Program de temperatur: 70C
timp de 1 min la 175C la 30/min la 250C la 23/min la
310C la 18/min timp de 5 min. Mod de detecie SIM.
Limita de cuantificare 50 ng/g, Limita de detecie 50 ng/g.

Determinarea cantitativ GC a amfetaminei din firele de pr


Coloan: CBJ-17. Detecie NPD. Limita de detecie 0,1
g/g pentru amfetamin i 0,4 g/g pentru metamfetamin

Determinarea cantitativ GC-MS a amfetaminei din firele de


pr
Coloan: DB-5 MS (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 1,1 ml/min. Program de temperatur: 90C

33
timp de 0,5 min la 150C la 25/min timp de 1,5 min la
230C la 15/min timp de 1 min la 300C la 40/min timp de
1,3 min. Ionizare EI, mod de detecie SIM. Limita de
cuantificare 0,1 g/g. Limita de detecie 0,027 g/g
Coloan: G&W Scientific Agilent Technologies 5 % fenil-
MS (17 m x 0,2 mm d.i., 0,33 m). Gaz purttor: He, 20
psi. Program de temperatur: 100C timp de 1 min la 140C
la 8/min la 310C la 30/min timp de 2 min. Limita de
cuantificare 0,2 g/g pentru enantiomerii (R)-(-) i (S)-(+).
Limita de detecie 0,1 g/g pentru enantiomerii (R)-(-) i
(S)-(+).
Coloan: HP-5 MS (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 1,0 ml/min. Program de temperatur: 100C
timp de 1 min la 300C la 10/min timp de 3 min. Limita de
detecie 1,6 g/g

Determinarea cantitativ HPLC a amfetaminei din firele de pr


Coloan: SP-120-5-ODS-BP (250 x 4,6 mm d.i., 5 m).
Faz mobil: acetonitril : metanol : ap (30 : 40 : 30), debit
1,0 ml/min. Detector de fluorescen (ex = 325 nm, em =
430 nm). Limita de detecie 11 ng/g
Faz mobil: acetonitril : metanol : tampon citrat (45 : 20 :
37,5). Limita de detecie 0,12 ng/g pentru amfetamin i
metamfetamin
Coloan: Chiralcel OD-RH (150 x 2 mm d.i.). Faz mobil:
tampon fosfatcitrat (pH 4,0) coninnd hexafluorofosfat de
sodiu : acetonitril (43 : 57), debit 0,1 ml/min. Detector de
fluorescen (ex = 330 nm, em = 440 nm). Limita de
detecie 54,0 ng/g.

Determinarea cantitativ LC-MS a amfetaminei din firele de


pr
Chiral DRUG (150 x 2 mm d.i.). Faz mobil: tampon
formiat de amoniu 2 mmol/l (pH 5) n metanol : tampon

34
formiat de amoniu 2 mmol/l (pH 5, 40 : 60 timp de 20 min
la 95 : 5 n decurs de 55 min), debit 0,1 ml/min. Ionizare
ESI, mod de detecie SIM. Limita de detecie 0,05 g/g
pentru enantiomerii (R)-(-) i (S)-(+)
Coloan: Betasil C 8. Faz mobil: ap : acetonitril cu 0,1
% acid formic (80 : 20). Mod de detecie MRM. Limita
de cuantificare 25 ng/g, limita de detecie 25 ng/g
Coloan: LiChroCART Purospher 60 RP C18 (125 x 4
mm d.i., 5 m). Faz mobil: acetonitril : ap (100 : 0 la
60 : 40 la 15 min la 100 : 0 la 15,2 min timp de 5 min),
debit 1 ml/min. Ionizare APCI, mod de detecie SIM.
Limita de detecie 0,10 g/g
Coloan: CAPCELL PAK SCXUG80 (150 x 1,5 mm d.i.,
5 m). Faz mobil: acetat de amoniu 12.5 mmol/l
coninnd acid formic : acetonitril (40 : 60), debit 0,15
ml/min. Mod ionizare pozitiv. Mod de detecie SIM.
Limita de detecie 0,02 g/g.

Determinarea cantitativ GC-MS a amfetaminei din rinichi


Coloan: DB-5 fused silica (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25
m). Gaz purttor: He, 0,8 ml/min. Program de
temperatur: 70C timp de 1 min, la 100C la 30/min la
270C la 10/min.
Determinarea cantitativ GC-MS a amfetaminei din ficat
Coloan: DB-5 fused silica (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25
m). Gaz purttor: He, 0,8 ml/min. Program de
temperatur: 70C timp de 1 min, la 100C la 30/min la
270C la 10/min.
Determinarea cantitativ GC-MS a amfetaminei din esut
muscular
Coloan: XTI-5 (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 1,7 ml/min. Program de temperatur: 60C
timp de 1 min la 290C la 20/min. Mod de detecie SIM.
35
Determinarea cantitativ GC-MS a amfetaminei din unghii
Coloan: DB-5 MS (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 1,0 ml/min. Program de temperatur: 90C
timp de 3 min, la 170C la 15/min timp de 2 min, la 210C
la 25/min timp 1,5 min la 230C la 20/min timp de 0,5
min, la 300C la 40/min timp de 0,3 min. Ionizare EI, mod
de detecie SIM. Limita de cuantificare 0,063 g/g, Limita
de detecie 0,019 g/g
Coloan: DB-5 MS (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 1,11,4 ml/min. Program de temperatur:
100C timp de 1 min la 150C la 20/min timp de 1,5 min la
285C la 30/min timp de 0,5 min la 300C la 30/min timp
de 2,5 min. Ionizare EI, mod de detecie SIM. Limita de
cuantificare 0,1 g/g. Limita de detecie 0,016 g/g
Coloan: HP-1 MS (30 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m).
Program de temperatur: 60C timp de 1 min la 300C la
20/min timp de 1 min. Limita de detecie 0,2 g/g

Determinarea cantitativ GC-MS a amfetaminei din placent


Coloan: ZB-5 (15 m x 0,25 mm d.i., 0,25 m). Gaz
purttor: He, 0,8 ml/min. Program de temperatur: 70C
timp de 2 min, la 160C la 30/min la 170C la 5/min la
200C la 20/min la 210C la 10/min la 300C la 30/min
timp de 3 min. Ionizare EI. Limita de cuantificare 3,4 g/l,
Limita de detecie 11 g/l.

Bibliografie selectiv

1. *** Farmacopeea European, ediia 6, volumul 2, 2007


2. Brunton L, Chabner BA, Knollmann BC. Goodman Gilmans
Pharmacological Basis of Therapeutics, Ed. McGraw-Hill Medical,
2006.

36
3. Cristea AN. Tratat de farmacologie. Ediia I. Editura Medical,
Bucureti 2005;
4. Juliano LM, Griffiths RR. A critical review of caffeine withdrawal:
empirical validation of symptoms and signs, incidence, severity,
and associated features. Psychopharmacology. 2004, 176 (1): 1-29.
5. Proca M, Butnaru E. Toxicologie vol. I. Editura Timpul, Iai 2000;
6. Venkatratnam A, Lents NH. Zinc reduces the detection of cocaine,
methamphetamine, and THC by ELISA urine testing. Journal of.
Analytical Toxicology. 2011, 35 (6): 333340.
7. Bendriss EK et al. Liquid chromatographic method for the
simultaneous determination of caffeine and fourteen caffeine
metabolites in urine. J Chromatogr B Biomed Sci Appl. 2008.
746:331338.
8. Bispo MS et al. Simultaneous determination of caffeine,
theobromine, and theophylline by high-performance liquid
chromatography. J Chromatogr Sci. 2002. 40: 4548.
9. Caubet MS et al. Analysis of urinary caffeine metabolites by
HPLC-DAD: the use of metabolic ratios to assess CYP1A2 enzyme
activity. J Pharm Biomed Anal. 2002. 27: 261270.
10. Ghosheh OA et al. A simple high performance liquid
chromatographic method for the quantification of total cotinine,
total 30-hydroxycotinine and caffeine in the plasma of smokers. J
Pharm Biomed Anal. 2000. 23: 543549.
11. Hieda Y et al. Highly sensitive and rapid determination of
theophylline, theobromine and caffeine in human plasma and urine
by gradient capillary high-performance liquid chromatography
FRIT-fast atom bombardment mass spectrometry. J Chromatogr B
Biomed Appl. 1995. 667:241246.
12. Ministerul Sntii. Agenia Naional a Medicamentului i a
Dispozitivelor Medicale. Lista medicamentelor din Nomenclator.
2016. material disponibil la adresa http://193.169.156.200/app
/nom1/anm_list.asp
13. Nyeki A et al. Extractionless method for the simultaneous high-
performance liquid chromatographic determination of urinary
caffeine metabolites for N-acetyltransferase 2, cytochrome P450
1A2 and xanthine oxidase activity assessment. J Chromatogr B
Biomed Sci Appl. 2001. 755:7384.
14. Rasmussen BB, Brosen K. Determination of urinary metabolites of
caffeine for the assessment of cytochrome P4501A2, xanthine
oxidase, and N-acetyltransferase activity in humans. Ther Drug
Monit. 1996. 18: 254262.

37
15. Sweetman M. The Complete Drug Reference, 35 ed.
Pharmaceutical Press., Londra. 2007.
16. Tsuda Tet al. Proposal of sampling process for collecting human
sweat and determination of caffeine concentration in it by using
GC/MS. Biomed Chromatogr. 2000. 14: 505510.
17. Bispo MS et al. Simultaneous determination of caffeine,
theobromine, and theophylline by high-performance liquid
chromatography. J Chromatogr Sci. 2002. 40: 4548.
18. Hori Y et al. Method for screening and quantitative determination
of serum levels of salicylic acid, acetaminophen, theophylline,
phenobarbital, bromvalerylurea, pentobarbital, and amobarbital
using liquid chromatography/electrospray mass spectrometry. Biol
Pharm Bull. 2006. 29: 713.
19. Saka K et al. Acetic acid improves the sensitivity of theophylline
analysis by gas chromatographymass spectrometry. J Chromatogr
B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2007. 846: 240244.
20. Song J et al. High-throughput liquid chromatographytandem mass
spectrometry assay for plasma theophylline and its metabolites.
Clin Chem. 2004. 50: 21762179.
21. Watson DG et al. A rapid and sensitive method for the
determination of the amount of theophylline in blood spots. J
Pharm Pharmacol. 2001. 53: 413416.
22. Zambonin CG et al. Determination of methylxanthines in urine by
liquid chromatography with diode array UV detection. J Pharm
Biomed Anal. 2004. 36: 621624.
23. Zhang Y et al. A tandem mass spectrometry assay for the
simultaneous determination of acetaminophen, caffeine, phenytoin,
ranitidine, and theophylline in small volume pediatric plasma
specimens. Clin Chim Acta. 2008. 398: 105112.
24. Al-Dirbashi O et al. Enantioselective high-performance liquid
chromatography with fluorescence detection of methamphetamine
and its metabolites in human urine. Analyst. 1998. 123: 23332337.
25. Al-Dirbashi OY et al. Achiral and chiral quantification of
methamphetamine and amphetamine in human urine by semi-micro
column high-performance liquid chromatography and fluorescence
detection. J Forensic Sci. 2000. 45: 708714.
26. Apollonio LG et al. Product ion mass spectra of amphetamine-type
substances, designer analogues, and ketamine using ultra-
performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry.
Rapid Commun Mass Spectrom. 2006. 20: 22592264.

38
27. Asghar SJ et al. A rapid method of determining amphetamine in
plasma samples using pentafluorobenzenesulfonyl chloride and
electron-capture gas chromatography. J Pharmacol Toxicol
Methods. 2001. 46: 111115.
28. Bartu A et al. Transfer of methylamphetamine and amphetamine
into breast milk following recreational use of methylamphetamine.
Br J Clin Pharmacol. 2009. 67: 455459.
29. BjorkMKet al. Determination of 19 drugs of abuse and metabolites
in whole blood by highperformance liquid chromatographytandem
mass spectrometry. Anal Bioanal Chem. 2010. 396: 23932401.
30. Bogusz MJ et al. Analysis of underivatized amphetamines and
related phenethylamines with high-performance liquid
chromatographyatmospheric pressure chemical ionization mass
spectrometry. J Anal Toxicol. 2000. 24: 7784.
31. Cairns Tet al. Amphetamines in washed hair of demonstrated users
and workplace subjects. Forensic Sci Int. 2004. 145: 137142.
32. Ch_eze Met al. Simultaneous analysis of six amphetamines and
analogues in hair, blood and urine by LC-ESI-MS/MS. Application
to the determination of MDMA after low ecstasy intake. Forensic
Sci Int. 2007. 170: 100104.
33. Cirimele V et al. Detection of amphetamines in fingernails: an
alternative to hair analysis. Arch Toxicol. 1995. 70: 6869.
34. Clauwaert KM et al. Determination of the designer drugs 3,4-
methylenedioxymethamphetamine, 3,4-methylenedioxyethyl-
amphetamine, and 3,4-methylenedioxyamphetamine with HPLC
and fluorescence detection in whole blood, serum, vitreous humor,
and urine. Clin Chem. 2000. 46: 19681977.
35. ConcheiroMet al. Determination of drugs of abuse and their
metabolites in human plasma by liquid chromatographymass
spectrometry. An application to 156 road fatalities. J Chromatogr B
Analyt Technol Biomed Life Sci. 2006. 832: 8189.
36. Concheiro M et al. Confirmation by LC-MS of drugs in oral fluid
obtained from roadside testing. Forensic Sci Int. 2007. 170: 156
162.
37. Fernandez MM et al. High-throughput analysis of amphetamines in
blood and urine with online solid-phase extraction-liquid
chromatographytandem mass spectrometry. J Anal Toxicol. 2009.
33: 578587.
38. Fritch D et al. Identification and quantitation of amphetamines,
cocaine, opiates, and phencyclidine in oral fluid by liquid

39
chromatographytandem mass spectrometry. J Anal Toxicol. 2009.
33: 569577.
39. Gray TR et al. A liquid chromatography tandem mass spectrometry
method for the simultaneous quantification of 20 drugs of abuse
and metabolites in human meconium. Anal Bioanal Chem. 2009.
393: 19771990.
40. Gunn JA et al. Simultaneous quantification of amphetamine and
methamphetamine in meconium using ISOLUTE HM-N-supported
liquid extraction columns and GC-MS. J Anal Toxicol. 2008. 32:
485490.
41. Gunn JA et al. Identification and quantitation of amphetamine,
methamphetamine, MDMA, pseudoephedrine, and ephedrine in
blood, plasma, and serum using gas chromatography mass
spectrometry (GC/MS). Methods Mol Biol. 2010. 603: 3743.
42. Huang MK et al. One step and highly sensitive headspace solid-
phase microextraction sample preparation approach for the analysis
of methamphetamine and amphetamine in human urine. Analyst.
2002. 127: 12031206.
43. Joya X et al. Gas chromatographymass spectrometry assay for the
simultaneous quantification of drugs of abuse in human placenta at
12th week of gestation. Forensic Sci Int. 2010. 196: 3842.
44. Kaddoumi A et al. High-performance liquid chromatography with
fluorescence detection for the simultaneous determination of 3,4-
methylenedioxymethamphetamine, meth-amphetamineand their
metabolites in human hair using DIB-Cl as a label. Biomed
Chromatogr. 2004. 18:202204.
45. Kala SV et al. Validation of analysis of amphetamines, opiates,
phencyclidine, cocaine, and benzoylecgonine in oral fluids by
liquid chromatographytandem mass spectrometry. J Anal Toxicol.
2008. 32: 605611.
46. Kelly Tet al. Development and validation of a liquid
chromatographyatmospheric pressure chemical ionization-tandem
mass spectrometry method for simultaneous analysis of 10
amphetamine-,methamphetamine- and 3,4-methylenedioxymeth-
amphetamine-related (MDMA) analytes in human meconium. J
Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2008. 867: 194
204.
47. Kim JY et al. Rapid and simple determination of psychotropic
phenylalkylamine derivatives in human hair by gas
chromatographymass spectrometry using micro-pulverized
extraction. Forensic Sci Int. 2010. 196: 4350.

40
48. Kuwayama K et al. Analysis of amphetamine-type stimulants and
their metabolites in plasma, urine and bile by liquid
chromatography with a strong cation-exchange column-tandem
mass spectrometry. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life
Sci. 2008. 867: 7883.
49. Marais AA, Laurens JB. Rapid GC-MS confirmation of
amphetamines in urine by extractive acylation. Forensic Sci Int.
2009. 183: 7886.
50. Meng P,Wang Y. Small volume liquid extraction of amphetamines
in saliva. Forensic Sci Int. 2010. 197: 8084.
51. Miki A et al. Determination of methamphetamine and its
metabolites incorporated in hair by column-switching liquid
chromatographymass spectrometry. J Anal Toxicol. 2003. 27: 95
102.
52. Nakashima K et al. Determination of methamphetamine and
amphetamine in abusersplasma and hair samples with HPLC-FL.
Biomed Chromatogr. 2003. 17: 471476.
53. PellegriniMet al. Rapid screening method for determination of
Ecstasy and amphetamines in urine samples using gas
chromatographychemical ionisation mass spectrometry. J
Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2002. 769: 243
251.
54. Valentine JL et al. GC-MS determination of amphetamine and
methamphetamine in human urine for 12 hours following oral
administration of dextro-methamphetamine: lack of evidence
supporting the established forensic guidelines for
methamphetamine confirmation. J AnalToxicol. 1995. 19: 581
590.

41