Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Scopul hemostazei secundare este producerea cheagului de fibrină pentru a închide o leziune vasculară.
Hemostaza, fibrinoliza, inflamația, reparația tisulară, răspunsul imun – sunt procese intercorelate,
implicate în răspunsul global la o injurie.
Cascada coagulării:
Procesul este inițiat când celulele purtătoare de Factor Tisular (TF) sunt expuse sângelui, secundar
unei leziuni vasculare (TFBC = TF bearing cells: miocite, fibroblaști – cel. adventicei, cel. gliale, cel. stromale, cel.
epidermale; țesuturi bogate în TF – creier, plămân, uter, placentă).
(*TF = tromboplastina tisulară = F III al coagulării)
TF este receptor și cofactor pt. F VII plasmatic; legarea F VII la TF determină activarea acestuia => FVIIa.
Complexul TF/F VIIa este localizat la nivelul TFBC și activează, în prezența Ca2+, FX și FIX. Complexul
TF/FVIIa + Ca2+ = complex tenazic al căii extrinseci; în acest complex enzima (tenaza) este FVIIa.
*Tenaza/complex tenazic = enzimă/complex enzimatic activator al F X (ten = zece).
1. FXa format la nivelul TFBC interacționează cu cofactorul său = FVa (activat în prealabil de F Xa)
pentru a forma complexul protrombinazic suficient pentru a genera mici cantități de trombină
(FIIa) în apropierea TFBC.
Cantitățile mici de trombină generate pe calea TF/FVIIa realizează:
activarea plachetară
activarea FV, FVIII, FXI.
Activitatea F Xa format de complexul TF/F VIIa este limitată la nivelul TFBC, iar F Xa care difuzează
de pe suprafața celulară este rapid inactivat de TFPI (=TF pathway inhibitor) și antitrombină (AT).
1
2. Spre deosebire de FXa, FIXa format de complexul TF/FVIIa își desfășoară activitatea în principal pe
suprafața plachetelor activate din apropierea celulelor purtătoare de TF și poate difuza pe
suprafața celulelor adiacente pentru că nu este inhibat de TFPI.
Plachetele joacă un rol major în localizarea reacțiilor coagulării în zona leziunii pentru că plachetele
aderă și agregă strict la nivelul leziunii vasculare. Odată plachetele activate, cofactorii FVIIIa, FVa
(activați de trombină) sunt rapid localizați la nivelul membranei plachetare – legarea cofactorilor
fiind mediată în mare parte de expunerea fosfatidil serinei printr-un proces de flip-flop de pe fața
internă pe cea externă a mb. plachetare (formându-se ‘tromboplastina plachetară’ = fosfolipide
din mb. plachetară = factor plachetar 3 = FP 3).
F IXa (format sub acțiunea complex TF/F VIIa) se atașează de suprafața mb. a plachetelor activate
prin receptori specifici și se formează complexe active FIXa/FVIIIa care, alături de FP 3 și în
prezența 𝑪𝒂𝟐+ , constituie tenaza plachetară = tenaza căii intrinseci.
Tenaza plachetară recrutează FX din plasmă și îl activează la FXa pe suprafața plachetelor
activate.
FXa se asociază cu cofactorul său FVa alături de FP3 în prezența 𝑪𝒂𝟐+ formând protrombinaza
(complexul protrombinazic) care generează trombina în cantități suficiente pentru a cliva
fibrinogenul și a forma cheagul de fibrină.
Fibrinogenul (Fbg.) e un dimer; fiecare monomer e format din câte 3 lanțuri non-identice: Aα, Bβ și
γ – legate între ele prin punți disulfidice; dpv. conformațional prezintă un domeniu central (E) și
două domenii periferice (D). Trombina se leagă de domeniul central al Fbg. (capetele N-terminale
ale lț. Aα și Bβ) și prin proteoliză limitată desprinde fibrinopeptidele A (FPA = fragmentul 1 – 16 din
lanțul Aα) și B (FPB = fragmentul 1 – 14 al lanțului Bβ) expunându-se astfel situsuri de legare;
această nouă moleculă = monomer de fibrină. Monomerii de fibrină polimerizează între ei prin
legături necovalente.
Trombina activează FXIII, în prezența Ca²⁺; FXIIIa stabilizează polimerul de fibrină prin cross-linkare.
Aceste legături (de cross-linkare) sunt de tip covalent și se realizează în principal între domenii
complementare de pe lanțurile γ de pe molecule diferite
2
FXI se atașează de suprafața plachetelor activate (prin receptor specific GPIX) și este activat de
trombină => un proces de amplificare – mecanism de booster (amplificare) – pentru a crește
generarea de trombină.
FXIa în prezența 𝑪𝒂𝟐+ activează FIX.
Acest rol de booster al FXI este sugerat și de faptul că deficite severe de FXI (hemofilia C) nu conduc
la hemoragii comparabile cu cele din deficitul de FVIII sau FIX (hemofilia A/B) deci există o activitate
tenazică bazală suficientă pentru activarea FX și formarea de trombină necesară formării cheagului de
fibrină. Tendința la hemoragii la acești pacienți poate rezulta și dintr-un deficit de activare al TAFI (o
inhibare mai scăzută a fibrinolizei).
In vivo este activat de către trombină și nu de către factorii activării de contact.
Factorii activării de contact:
FXI este activat și de FXIIa generat prin activarea de contact a coagulării care presupune interacțiuni
proteine-proteine dar și proteine-suprafața (in vivo această activare există dar este nesemnificativă dpv. al
coagulării).
FXII, HMWK (kininogen cu greutate moleculară mare), PK (precalicreina) formează sistemul
activării de contact. FXII prezintă spre capătul N-terminal o zonă intens electropozitivă (histidină, glicină,
lizină) prin care se atașează ușor de suprafețele electronegative (colagenul subendotelial expus secundar
unei leziuni vasculare sau sticla in vitro) – simpla atașare a FXII determină o slabă activare a acestuia.
Activarea FXII cea mai eficientă este scindarea în zona leg. disulfidice dinspre capătul carboxi-terminal
efectuată de kalikreină și/sau plasmină rezultând FXII-alfa; sub acțiunea C1s este scindat în afara leg.
disulfidice rezultând FXII-beta (activator mai slab) – între FXII și sistemul complementului există potențări
reciproce.
HMWK prezintă o zonă centrală intens electropozitivă prin care se atașează colagenului denudat –
simpla atașare conducând la modificări conformaționale ce expun situsurile de legare pt. FXI și
prekalikreină (PK).
Inițial pe colagenul expus se atașează FXII și HMWK. FXIIa scindează PK la kalicreină care amplifică
activarea FXII dar și formarea bradikininei din HMWK. FXIIa acționează pe FXI → FXIa.
FXI are situsuri de legare pt.: HMWK, protrombină/trombină, FXIIa, FIX, plachete (GPIX)
Activarea de contact a coagulării este evaluată de APTT (timpul de tromboplastină parțială
activată) – plasma + tromboplastină parțială + reagent activator(caolin/ac. elagic) care se comportă ca o
suprafață încărcată negativ.
Deși FXII, HMWK, PK sunt necesare pt. APTT normal ele nu sunt necesare pt. o hemostază normală
in vivo – nu există tendință la sângerare la pacienții cu deficit de acești factori. In vivo par să fie implicați
mai curând în inflamație și fibrinoliză.
3
Medicamente anticoagulante – care interferă cu activitatea factorilor coagulării:
- Heparinele – funcționează prin activarea AT III – inhibă factorii: X, II, IX, XI, XII
- Acenocumarol, warfarina ; aparțin cumarinicelor, sunt folosite ca ACO (anticoagulante orale);
inhibă epoxid-reductaza; se mai numesc și antivitaminice K → scad factorii vitamino-K-
dependenți (II, VII, IX, X, proteinele C și S)
- Anticoagulante mai recente (inclusiv administrare orală): Inhibitori direcți ai factorului Xa
(„xabani” – ex. apixaban), inhibitori direcți ai trombinei (ex. hirudină, argatroban)
Separarea debutului coagulării în cale intrinsecă și cale extrinsecă se datorează faptului că studierea
inițială a coagulării s-a bazat pe metode de evaluare in vitro, metode care folosesc sisteme
artificiale de inițiere a coagulării. Deși această separare nu are loc in vivo, are un rol important
pentru evaluarea în laborator a diverselor deficite/patologii ale coagulării.
Factorii coagulării:
Factorul I = fibrinogen
F Ia = fibrină
Factor II = protrombină
FIIa = trombină = enzimă, vit. K-dependentă
Factorul III = TF = factorul tisular
Factorul IV = Ca²⁺
Factorul V, F Va = proaccelerina = cofactor pt. F Xa
Factorul VI – identificat ulterior ca fiind F Va
Factorul VII, F VIIa = proconvertina = enzimă, vit. K-dependentă
Factorul VIII, F VIIIa = factorul antihemofilic A = cofactor pt. F IXa
Factorul IX, F IXa = factorul Christmas = enzimă, vit. K-dependentă
Factorul X, F Xa = factor Stuart-Prower = enzimă, vit. K-dependentă
Factorul XI, F XIa = factor Rosenthal = enzimă, independent de vit. K
Factorul XII = factorul Hageman
Factorul XIII, F XIIIa = stabilizator al fibrinei, enzimă.
4
Deficite/defecte dobândite ale factorilor coagulării:
- Deficit de sinteză: insuficiență hepatică (N.B. ficatul sintetizează majoritatea factorilor coagulării)
- Deficit de vit. K
- Consum exagerat: sd. CID, fibrinolitice, fibrinogenolitice
Deficitele hereditare sunt mai frecvent de tip singular iar cele de tip dobândit sunt mai frecvent de
tip multiplu.
A. Tehnica Lee-White
N (valori normale, de referință) : 6 - 12 minute
- puncție venoasă ; recoltarea a 1-2 ml sg. în eprubetă de sticlă cu menținerea la 37 grade Celsius
- se măsoară timpul până când eprubeta poate fi răsturnată fără ca sângele să curgă.
- cheagul se poate urmări la intervale diferite până la 24 ore urmărindu-se retracția cheagului și fibrinoliza.
B. Tehnica Millan
N : 10 - 12 minute
- utilă când nu se poate realiza puncție venoasă (copii, șoc hipovolemic, etc.) ; se înțeapă pulpa degetului
- se lasă o picătură de sânge să cadă liber peste o picătură de ser fiziologic, pe o lamă de sticlă
- se măsoară timpul până când picătura de sânge nu se mai deformează la înclinarea lamei
5
Timp de coagulare (al sângelui integral) prelungit:
- Deficite/defecte ereditare sau dobândite ale factorilor de coagulare aparținând căii intrinseci și/sau
comune (XII, XI, IX,VIII,X,V,II,I)
- +/- trombocitopenii/trombocitopatii
- tratamente anticoagulante (heparină, ACO)
- prezența de inhibitori ai factorilor coagulării
Se recoltează sânge venos într-o eprubetă care conține citrat de sodiu. Prin centrifugare se obține
plasmă săracă în trombocite. Plasma e incubată la 37˚C cu cefalină și un activator de contact (ex. kaolin) și
se adaugă calciu. Se măsoară timpul până când apar primele filamente de fibrină.
- Citratul de Na⁺ = chelator de calciu – rol de anticoagulant
- Cefalina = un fosfolipid, folosit ca substitut pt. fosfolipidele plachetare = tromboplastină parțială (nu conține
TF).
- Caolinul sau acidul elagic se folosesc ca activatori = se leagă de FXII și îl activează (se comportă ca o
suprafață încărcată electronegativ)
Evaluează global coagularea declanșată pe calea intrinsecă (= calea intrinsecă și calea comună).
Nu depinde de trombocite.
N: 25 - 35’’ (secunde)
PTT = timpul de tromboplastină parțială = timpul de cefalină = timpul de coagulare al plasmei anticoagulate, recoltate
pe citrat de Na⁺, săracă în trombocite, recalcifiate (CaCl₂) la care se adăugă tromboplastină parțială (fără activarea cu
caolin/ac. elagic); variantă mai veche și cu durată mai lungă - valoarea normală PTT = 70-110 sec.
Funcții APTT/PTT:
Controlul tratamentului cu heparină nefracționată (valori țintă = 1,5-2 X valoarea normală)
Test screening pentru calea intrinsecă și comună. (Notă – are o sensibilitate mai scăzută pt. calea
comună decât TQ)
APTT/PTT prelungit:
deficite ereditare ale factorilor de coagulare aparținând căii intrinseci(CI) și/sau căii comune(CC):
F XII, HMWK, kalicreina; F XI, F IX, F VIII, F X, F V, F II, F I
deficitul factorilor sistemului de contact (XII, HMWK, PK) nu determină manifestări
hemoragice dar determină alungirea APTT
6
deficite dobândite ale factorilor coagulării ai căii intrinseci și/sau comune
- insuficiență hepatică
- deficit de vitamina K
- consum de factori ai coagulării în sindromul de CID, fibrinoliză, fibrinogenoliză
tratamente anticoagulante:
- heparina: se leagă de AT III inhibând în principal trombina și F Xa, dar și XIIa, XIa, IXa
- anticoagulante orale cumarinice inhibă factorii vit. K dependenți (II, IX, X).
- altele (vezi mai sus)
prezența de inhibitori, ex. :
- Ac. anti-fosfolipidici
o Se atașează și blochează fosfolipidele membranare prelungind timpii de coagulare
dependenți de fosfolipide (APTT/dRVVT).
o Ac. anti-fosfolipidici (anticoagulantul lupic, ac. anticardiolipină) au însă in vivo efect
protrombotic:
Ei se atașează de complexul β2GPI – fosfolipide membranare (fosfatidil serină) și
blochează activitatea β2GPI (β2 glicoprotein 1); β2GPI inhibă aderarea plachetară
la colagen și e probabil un activator al t-PA.
Blochează anticoagulanți naturali: proteina C, AT III.
Stimulează expresia TF pe celule endoteliale și leucocite.
- PDF (= produși de degradare ai fibrinei și/sau ai fibrinogenului) în cantitate↑ blochează
activitatea trombinei
- Ac anti F VIII
Evaluează global coagularea declanșată pe calea extrinsecă (evaluează calea extrinsecă = CE și calea
comună).
N = 12-15’’
Funcții TQ:
controlul tratamentului cu anticoagulante orale (ACO) de tip cumarinic
test de evaluare a funcției hepatice (funcția de sinteză proteică a ficatului)
test screening pt. calea extrinsecă și comună a coagulării (are o sensibilitate mai mare pt. calea
comună decât APTT)
TQ prelungit :
- deficite ereditare sau dobândite de unul sau mai mulți dintre factorii căii extrinseci și/sau comune
(F I, F II, FV, FX, FVII)
- deficit de vitamina K - afectează II, VII, X
- insuficiența hepatică (deficit de sinteză proteică a factorilor coagulării și posibil deficit de vit K)
Factorul VII al coagulării are un T½ plasmatic scurt in vivo = 4 – 6 h → concentrația lui serică
scade rapid/semnificativ când funcția hepatică este afectată →TQ crește precoce în insuficiența
hepatică
- inhibitori, ex. anticorpi*, PDF (= produși de degradare ai fibrinei/fibrinogenului).
- tratamente anticoagulante: cu ACO (cumarinice – afectează imediat TQ prin afectarea F VII, etc.), cu
heparină (amplifică activitatea AT III ce inhibă FIIa, FXa) ș.a.
7
*Notă: TQ este mai puțin/rar afectat decât APTT sau dRVVT de prezența Ac antifosfolipidici, datorită
concentrațiilor diferite de fosfolipide folosite ca reactivi de respectivele teste.
În cazul pacienților care folosesc ACO de tip cumarinic e necesară menținerea unui nivel de
coagulare cât mai eficient și constant, și care în același timp să nu predispună pacientul unui risc major de
sângerare. Tratamentului se face urmărindu-se periodic valorile TQ sau ale variantelor standardizate, de
preferință INR. Folosirea unor surse variabile de tromboplastină tisulară determină variații ale TQ de la un
lot de tromboplastină la altul. De aceea s-a considerat necesar să se utilizeze o standardizare a TQ.
Pentru standardizarea metodei se folosesc formule care raportează valoarea TQ al pacientului la un
timp martor de referință:
TQ martor
Activitatea protrombinică (AP) = TQ bolnav × 100 – N = 70%- 120%
𝑇𝑄 𝑝𝑎𝑐𝑖𝑒𝑛𝑡 𝐼𝑆𝐼
INR (international normalised ratio) = (𝑇𝑄 𝑟𝑒𝑓𝑒𝑟𝑖𝑛ță) – N = 0,9-1,2
ISI (International Sensitivity Index): o evaluare comparativă a tromboplastinei (dată de
producător) – se compară cu o tromboplastină de referință OMS.
INR-ul țintă în monitorizarea tratamentului cu ACO
- INR țintă = 2 - 3 pt. tratamentul cu ACO adm. pentru tratamentului trombozei venoase
profunde (TVP), TEP (trombembolism pulmonar); profilaxia TVP și TEP; profilaxia
trombembolismului cardiac – FiA, valvulopatii, trombi murali post IM.
- INR țintă = 2,5 - 3,5 pt. tratamentul cu ACO adm. pentru profilaxia trombembolismului
cardiac la pacienți cu proteze mecanice ale valvelor cardiace.
Testul Koller
- efectuat când se suspicionează un deficit de vit. K
- se efectuează TQ inițial
- apoi se administrează vit. K - 10 mg/zi, 3 zile consecutiv; se preferă administrarea sc (subcutană); nu
se fac injecții IM la pacienți cu deficite severe de factori sau pacienți care primesc tratament cu
anticoagulante cumarinice.
- se repetă TQ : corectarea cu peste 15% din valoarea inițială = > deficit de vitamină K
8
TT prelungit:
prezența inhibitorilor de trombină: tratament cu heparină, hirudină, PDF (produși de degradare ai
fibrinei/fibrinogenului – dacă sunt în exces inhibă polimerizarea fibrinei, activitatea trombinei), Ac
anti-trombină
hipo/a/dis-fibrinogenemie
- congenitală
- dobândită: CID, insuficiență hepatică, tratament trombolitic
CID (hipo/a-fibrinogenemie prin consum, PDF)
N = 20 s.
Timp de reptilază prelungit:
- hipo/a/dis-fibrinogenemie congenitală sau dobândită
- PDF în exces
Interpretarea combinată TT și TR
Timp de reptilază prelungit: hipo/a/dis- fibrinogenemie//PDF↑//CID
Timp de trombină prelungit + Timp de reptilază normal: heparină, anticorpi anti-trombină
Dozarea fibrinogenului
N = 200-400 mg/dl
Funcții: Utilizat în controlul tratamentului fibrinolitic (streptokinază), marker nespecific de
inflamație
Valori scăzute: hipo-/a-/dis- fibrinogenemii congenitale sau dobândite (CID; insuficiență hepatică;
sd. fibrinogenolitic, medicație fibrinolitică)
Valori crescute: inflamații acute, cronice (aparține proteinelor ”de fază acută”); sindrom nefrotic
*Observație: TP este mai sensibil decât APTT la un deficit moderat al căii comune.
Teste de mixare
NOTĂ: prin mixarea unei plasme cu deficit de factor al coagulării cu o plasmă normală (= cu
conținut și activitate normală de factori ai coagulării), în raport de 1:1 (sau 50:50) se va corecta
timpul de coagulare al plasmei cu deficit
10
- Nu conține F II, I, V
o PPF = plasmă proaspătă filtrată – filtru Saitz
- Nu conține F VII, FX
- Conține FI, FII, FV
Observație: sunt enumerați doar factorii implicați în CE și CC
Dozări de factori
Se pot doza prin metode imunologice. Trebuie avut în vedere că aceste metode nu evaluează
funcțional factorii de coagulare.
Evaluarea inhibitorilor
Serul pacientului se amestecă cu ser normal în mixtură de 1:1 și se măsoară APTT/PT.
O mixtură de 1:1 va corecta deficiența de factor însă existența unui inhibitor va împiedica
normalizarea testului de coagulare.
Exemple :
- Ac. Antifosfolipidici – în cadrul sd. antifosfolipidic primar/ secundar (ex. LES)
- Anticorpi specifici anti factor de coagulare – pot fi întâlniți în circumstanțe ca: postpartum, LES,
hemofilie severă cu transfuzii multiple
11