Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Veronica Lazăr
MICROBIOLOGIE MEDICALA
A. Clasificare generală
1. Microbiota normală sau autohtonă, asociată sau permanentă - este reprezentată de
microorganismele indigene sau autohtone, respectiv din specii a căror asociere cu o anumită specie
animală a fost stabilită în cursul evoluţiei comune. Ca urmare, acestea sunt întâlnite datorită
caracterului lor ubicuitar la majoritatea membrilor care fac parte din comunitatea respectivă.
Totalitatea microoorganismelor care populează tegumentele şi cavităţile naturale ale unui organism
sănătos alcătuiesc microbiota normală. Este reprezentată de bacterii, microfungi şi protozoare. Au fost
propuse următoarele criterii pentru diferenţierea microorganismelor autohtone, de cele străine:
- prezenţa constantă la organismele convenţionale, normale;
- colonizarea habitatelor specifice, succesiv, la animalele tinere;
- colonizarea anumitor regiuni particulare ale organismului;
- menţinerea la nivele stabile de densitate în comunităţile stabile, echilibrate, la animalele
adulte.
2. Microorganismele străine sau alohtone, care pot fi întâlnite în orice habitat normal,
provin din mediul extern, respectiv din aer, sol, alimente sau de la alte animale. Unele dintre ele pot fi
patogene. Adesea sunt doar în tranzit, fără să contribuie semnificativ la activităţile ,,ecosistemului,, la
ale cărui condiţii nu se pot adapta, ci în care pot doar supravieţui temporar. Un microorganism alohton
se poate localiza într-o nişă eliberată de un autohton numai dacă echilibrul acesteia este perturbat, la
un organism aflat într-o condiţie anormală. Când sistemul revine la normal, microorganismul autohton
îşi reocupă nişa, eliminând specia alohtonă.
Diferitele compartimente ale organismului animal aparţin din punct de vedere microbiologic la
două categorii principale: sterile şi contaminate. O a treia categorie o formează cele la care starea
normală este de sterilitate, însă acestea pot fi contaminate temporar cu microorganisme al căror
număr poate să crească în unele situaţii, ajungând până la starea de infecţie şi boală consecutivă. In
aceste cavităţi în mod obişnuit sterile (laringe, trahee, bronhii, sinusuri nazale, esofag, stomac,
porţiunea proximală a intestinului subţire, tractul urinar superior) care pot purta o microbiota tranzitorie,
prezenţa microorganismelor şi mai ales la un anumit nivel numeric, constituie graniţa între starea de
sănătate şi cea patologică. Microbiota înregistrează o dinamică permanentă în raport cu condiţia
organismului-gazdă, modificările fiind atât de ordin cantitativ, cât şi de ordin calitativ (compoziţia în
specii) în raport cu diferitele particularităţi funcţionale ale acestuia legate de vârstă, sex, stare
fiziologică.
1
Microbiologie medicală Prof.dr. Veronica Lazăr
2
Microbiologie medicală Prof.dr. Veronica Lazăr
a salivei, fibronectina poate fi scindată, ceea ce favorizează aderenţa bacteriilor Gram negative:
Pseudomonas sp., enterobacterii condiţionat-patogene, responsabile de mirosul neplăcut al gurii sau
halenă.
3
Microbiologie medicală Prof.dr. Veronica Lazăr
(margine în perie) scurţi, neregulaţi, iar cea antiluminală este invaginată pentru a forma un buzunar
central, în care migrează limfocite şi macrofage. Nivelele scăzute ale conţinutului în enzime digestive
al acestor celule este un indiciu ca funcţia lor esenţială nu este cea digestivă. Morfologia lor
sugerează funcţia de transport transepitelial al moleculelor şi particulelor nedigerate. Materialul
transportat este probabil prezentat celulelor limfoide, rol sugerat de apropierea strânsă dintre aceste
celule şi diferite CPA (celule prezentatoare de antigen) care prelucrează antigenele prezente în
buzunarul lor central. Acest sistem de transport şi prelucrare a antigenelor, devine o cale de invazie
pentru unii patogeni enterici bacterieni care utilizează mişcarea transepitelială prin celulele M ca
poartă de intrare prin bariera intestinală. Exemple de astfel de patogeni : Yersinia sp., Shigella
flexneri, Salmonella sp. (salmonelele pot pătrunde şi prin celulele columnare), Campylobacter jejuni,
tulpini de E. coli enteropatogene.
In contradicţie cu necesitatea existenţei unei bariere fiziologice (furnizată de celulele
columnare), protecţia gazdei prin procese imunologice necesită ca macromoleculele şi
microparticulele să aibă o cale de penetrare a acestei bariere, spre sistemul limfoid asociat intestinului
reprezentat de plăci Peyer, foliculi limfatici izolaţi, apendice şi noduli limfatici mezenterici, care
alcătuiesc împreună sistemul GALT (Gastric Associated Lymphoid Tissue). Prin infectarea
experimentală a iepurelui cu o tulpină enteropatogenă de E. coli, s-au studiat la microscopul electronic
de baleiaj modificările produse ca urmare a aderenţei bacteriilor la mucoasa intestinală (fig. 1).
Microbiota intestinală complexă şi relaţiile sale cu organismul gazdă au fost asemănate cu un
ecosistem, în care micropopulaţia indigenă protejează organismele umane şi animale împotriva
colonizării cu bacterii alohtone invadatoare. Incă din timpul lui Metchnikoff acest fenomen a fost
observat şi descris ca “antagonism bacterian”, “efect de barieră” sau “rezistenţă la colonizare”. Prin
activităţile lor metabolice, prin interacţiunile dintre ele, ca şi cu cele alohtone, microorganismele
autohtone se opun aderenţei şi colonizării mucoasei intestinale cu microorganisme patogene
(pătrunse de la exterior odată cu alimentele, apa, aerul), contribuind prin aceasta la starea de
sănătate a gazdei.
11
3. Microbiota colonului. In intestinul gros microbiota realizează densităţi mari (10 / g
conţinut colonic), 99% dintre bacteriile componente fiind anaerobe (sute de specii, dintre care puţine
sunt cultivate şi identificate). Condiţiile de anaerobioză sunt create de Escherichi coli şi germenii
coliformi (0,1- 1 %) care sunt facultativ anaerobi, consumând oxigenul şi creând condiţii de
anaerobioză. La acestea se adaugă microorganisme alohtone, prezenţa lor fiind semnificativă atunci
când depăşesc densitatea de 106/g conţinut intestinal. Din punct de vedere calitativ şi cantitativ
microbiota este foarte constantă şi rezistă aportului de microorganisme exogene. De exemplu, o
tulpină de Escherichi coli nu poate fi înlocuită de altă tulpină, chiar dacă aportul este masiv. Aceste
populaţii se pot modifica dacă au loc modificări biochimice ale epiteliului, sub influenţa hormonală, de
exemplu. O altă cauză a modificării microbiotei normale ale cărei specii se găsesc în mod normal într-
o stare de echilibru, numită eubioză, poate fi tratamentul pe cale orală cu antibiotice de spectru larg,
care elimină microorganismele sensibile; dacă dieta nu substituie aceste pierderi (produse probiotice),
se dezvoltă excesiv microorganismele rezistente, cum ar fi specii de Staphylococcus şi Proteus ce
determină infecţii dificil de tratat, dar şi levuri (ex: Candida albicans) care determină infecţii denumite
candidoze postantibioterapie, ca rezultat al debalansărilor numerice dintre speciile microbiotei normale
(stare de disbioză).
4
Microbiologie medicală Prof.dr. Veronica Lazăr
Fig. 1. Imagini la microscopul electronic de baleiaj (A, C - F) şi de transmisie (B) ale unor fragmente de
intestin de iepure, după 24 de ore de la infecţia cu o tulpină de E. coli enteropatogenă la iepure REPEC O103 ;
A) - microvili ileali cu aspect normal ; B) – în timpul stadiilor timpurii ale infecţiei, bacteriile exprimă structuri de
suprafaţă fibrilare care realizează o aderenţă iniţială laxă la celulele gazdă epiteliale (bara = 1µm); C şi D - ca
răspuns la infecţie, microvilii enterocitelor de pe suprafaţa plăcilor Peyer prezintă structuri neregulate bowl-like (în
formă de cupă sau bol); E – F – o reţea de agregate de bacterii intim asociate unui material mucoid flocular sau
filamentos care acoperă o parte a epiteliului (după Heczko şi col., 2000).
3) Rolul microbiotei intestinale în digestie - rol major în cazul mamiferelor rumegătoare, în timp
ce la om acest rol este accesoriu; astfel procesul de digestie poate continua în colon sub acţiunea
microorganismelor pentru alimente nedegradate (pentru care nu există enzime specifice) sau
degradate parţial în etajele superioare (stomac, intestin subţire), cum ar fi celuloza, hemiceluloze,
amidon, proteine, acizi nucleici, glucide cu molecula mică, ca de exemplu stahioza din fasole. La
acestea se adaugă şi molecule endogene: imunoglobuline, constituenţi ai celulelor epiteliale
descuamate, mucus intestinal. Din procesele de fermentaţie a glucidelor realizate de bacteriile lactice
rezultă acid lactic şi acizi graşi cu lanţ scurt (AGLS), din care o parte sunt absorbiţi şi metabolizaţi de
către organismul-gazdă, reprezentând o sursă importantă de energie în cazul persoanelor cu o
alimentaţie bogată în fibre vegetale;
4) Microbiota normală exercită şi un efect de stimulare a dezvoltării normale a sistemului
imunitar şi a reacţiilor de apărare ale gazdei. Se consideră că bacteriile indigene din organismul
mamiferelor constitutie un set de antigene quasi-self cu un rol important în procesul de diferenţiere a
limfocitelor B.
5
Microbiologie medicală Prof.dr. Veronica Lazăr
5) Prin activităţile lor metabolice, prin interacţiunile dintre ele, ca şi cu cele alohtone,
microorganismele autohtone se opun aderenţei şi colonizării mucoasei intestinale cu microorganisme
patogene, contribuind şi prin aceasta la starea de sănătate a gazdei. Acest efect este denumit “efect
de barieră antiinfecţioasă” sau “rezistenţă la colonizare”.
O dovadă în acest sens au adus studiile pe animale axenice (= engl. germ-free = libere de
germeni), care pot fi infectate foarte uşor per os cu Shigella flexneri sau cu Salmonella enteritidis,
doza infectantă minimă fiind de 10 celule bacteriene; acestea se localizează în intestin, se multiplică
până ating o densitate maximă de 1 – 10 mld./ g conţinut intestinal în 12 – 24 h, după care se
stabilizează. In aceleaşi condiţii, animalele holoxenice, purtătoare ale unei microbiote normale
complexe, elimină bacteriile infectante cu aceeaşi viteză cu care îndepărtează un marker de control
inert (spori aparţinând unei tulpini termofile de Bacillus subtilis care nu germinează în organismul
6
gazdă). Doza infectantă în acest caz este de 10 celule de Salmonella enteritidis. Acest fenomen prin
care microbiota normală a unui organism holoxenic se opune colonizării cu microoganisme alohtone,
este denumit efect de barieră sau rezistenţă la colonizare (Ducluzeau, 1970). După unii autori,
rezistenţa la colonizare, numită şi excludere competitivă este considerată un caz particular al efectului
de barieră, constituind un mecanism exercitat de bacteriile intestinale indigene, care controlează
colonizarea intestinală de către microorganismele patogene sau potenţial patogene şi fiind considerat
un mecanism esenţial, deficitar în cazul organismelor compromise din punct de vedere imunologic. Se
apreciază că rezistenţa la colonizare ar manifesta trei grade de intensitate, care conduc la :
1) eliminarea rapidă a microorganismelor străine;
2) bariera permisivă, care asigură menţinerea temporară a microorganismelor alohtone,
inofensive pentru gazda care devine astfel «purtător» ;
3) efect curativ, de îndepărtare a microorganismelor străine în câteva zile – acest tip de
răspuns poate fi exploatată în favoarea omului (de ex., cu tulpini probiotice).
Datorită funcţiei de barieră, majoritatea încercărilor de implantare a unor bacterii străine sunt
abortive. De exemplu, se recomandă în timpul tratamentului sau postantibioterapie introducerea
iaurtului în dietă, produs de fermentaţie care conţine celule vii de Lactobacillus bulgaricus. Ori,
lactobacilii izolaţi din materiile fecale după tratament, nu sunt cei introduşi (cu care se pot confunda),
ci aparţin unor tulpini indigene a căror creştere este stimulată de alimentaţia lactată.
6
Microbiologie medicală Prof.dr. Veronica Lazăr
cu Bacteroides sp., care produce acid acetic în cantităţi suficiente pentru a inhiba in vitro dezvoltarea
unei culturi de S. flexneri, se constată lipsa oricărui efect inhibitor exercitat de Bacteroides sp. asupra
S. flexneri. In alte cazuri efectul de barieră se manifestă atât in vitro cât şi in vivo: de ex., anumite
tulpini de E. coli faţă de S. flexneri.
Dar nici modelele gnotoxenice (respectiv dixenice) nu sunt echivalente celor holoxenice; un
argument în acest sens îl constituie faptul că E. coli elimină S. flexneri la şoarecii dixenici, dar nu şi în
cei holoxenici; la şoarecii holoxenici este stabilit că bacteriile cu efect de barieră împotriva speciei S.
flexneri sunt strict anaerobe, sporulate, care fac parte din micropopulaţia dominantă a tubului digestiv
(acestea exercită şi un efect de barieră drastic împotriva bacteriei anaerobe patogene Clostridium
perfringens).
Nu întotdeauna primul ocupant al tubului digestiv are efect de barieră; astfel, celulele de
Lactobacillus casei dintr-un preparat comercial sunt eliminate de către E. coli.
Astfel de studii evidenţiază şi alte aspecte ale efectului de barieră: Bacillus licheniformis
produce in situ în partea superioară a tubului digestiv (stomac sau duoden) o substanţă antibiotică
asemănătoare bacitracinei, inhibitoare a colonizării cu Clostridium perfringens. Când acest antibiotic
este produs in situ nu se observă niciodată apariţia de mutante rezistente la acest antibiotic. B.
licheniformis asociat cu Lactobacillus sp. nu mai produce acest antibiotic, deşi supravieţuieşte în
număr mare. Uneori este importantă şi ordinea în care se face colonizarea: de exemplu, dacă prima
bacterie colonizatoare este C. perfringens şi apoi B. licheniformis, aceasta din urmă nu produce
antibioticul, cele două bacterii coexistând fără să interfere. Efectul de barieră poate fi modificat de
dieta gazdei (fermentarea lactozei are loc în cecum cu producere de acid lactic; glucoza este rapid
absorbită şi astfel efectul său este diferit).
Un alt tip de efect de barieră (al cărui mecanism este necunoscut) se manifestă prin
persistenţa unei tulpini date în micropopulaţia subdominantă; un exemplu în acest sens îl oferă E. coli
6
care nu este eliminată, dar marimea populaţiei nu depăşeşte densitatea de 10 celule/ g de materii
fecale proaspete (maximum 1% din totalul microbiotei intestinale), acesta fiind considerat un exemplu
de barieră permisivă. In concluzie, anumite bacterii intestinale exercită în ecosistemul gazdă –
microbiota tubului digestiv fie un efect drastic conducând la eliminare, fie permisiv asupra bacteriilor
exogene, efectul permisiv manifestându-se în special asupra bacteriilor potenţial patogene. Acest
mecanism de apărare de care dispune gazda pentru a se opune agresiunilor bacteriene este încă
insuficient explorat. In domeniul microbiologiei medicale, s-a conturat în ultimul timp o concepţie
ecologică în studiul agenţilor infecţioşi în interacţiune cu gazda lor.
Importanţa funcţiei de barieră antiinfecţioasă este demonstrată de numeroase observatii:
- microbiota intestinală inhibă creşterea unor patogeni importanţi, cum ar fi : Vibrio
cholerae, Salmonella sp., Shigella dysenteriae; suprimarea microbiotei normale cu
antibiotice reduce semnificativ rezistenţa faţă de aceste bacterii patogene;
- suprimarea microbiotei bucofaringiene normale cu antibiotice este urmata de instalarea
promptă a unor bacterii patogene: Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus,
Neisseria meningitidis.
- microorganismele rezidente în regiunea endocervicală uterină (Lactobacillus sp.,
Corynebacterium sp., Streptococcus sp., Neisseria sp., Candida albicans) inhibă
activitatea metabolică şi implantarea speciei patogene Neisseria gonorrhoeae.
Rolul de barieră antiinfecţioasă, ca şi cel de stimulare a mecanismelor imunitare (demonstrat
la animalele axenice care prezintă leucopenie, fagocite hiporeactive, ţesut limfoid subdezvoltat, titru
scazut de anticorpi şi interferoni) demonstrează că microbiota intestinală normală protejează
organismul gazdă faţă de infecţiile cu un număr moderat de patogeni enterici, pătrunşi pe cale bucală
(rol similar şi în cazul microbiotei din alte situsuri).
Intre speciile permanente se păstrează proporţii constante, microbiota având un grad de
stabilitate, manifestată între altele şi prin dificultatea implantării de tulpini noi. Populaţiile de
microrganisme din sistemul digestiv împreună cu gazda alcătuiesc un sistem ecologic, al cărui
echilibru este absolut necesar pentru sănătatea individului, fapt demonstrat de abolirea acestui efect
prin administrarea de antibiotice.
Din punct de vedere ecologic, declanşarea unei infecţii intestinale este consecinţa a două
fenomene care au loc simultan: 1) pătrunderea unui agent infecţios în intestin; 2) supresia efectului de
barieră şi a funcţiei sale de a se opune implantării şi multiplicării bacteriilor patogene. Cunoaşterea
mai în detaliu a bacteriilor cu rol de barieră, a substanţelor produse, constituie premise pentru
eliminarea unui efect nedorit, ca si pentru implantarea unor tulpini adecvate la nou-născut.
7
Microbiologie medicală Prof.dr. Veronica Lazăr
organismul gazdă, prin ameliorarea echilibrului microorganismelor din tubul digestiv. Preparatele
probiotice, sub diferite forme (capsule, granule sau suspensii adăugate în hrană), pot conţine unul sau
mai multe tipuri de bacterii, cum ar fi : Lactobacillus bulgaricus, L. acidophilus, L. casei, L. helveticus,
L. lactis, L. salivarius, L. plantarum, Bifidobacterium sp., Streptococcus termophilus. Modul lor de
acţiune este direct, printr-un efect antagonist datorat producerii de substanţe antimicrobiene (acizi
organici care determină scăderea pH-ului, H2O2, substanţe bacteriocine – like, biosurfactanţi),
competiţiei pentru nutrienţi sau pentru situsurile de ataşare la substratul celular, care previne
colonizarea acestuia cu bacterii patogene (este demonstrat că aderă şi celule omorâte de lactobacili).
Probioticele mai pot acţiona prin modificări metabolice, prin stimularea imunităţii (activarea
macrofagelor, stimularea sintezei de anticorpi).
Efecte : -stimularea creşterii organismului gazdă (prin îmbunătăţirea conversiei hranei şi
protecţia împotriva infecţiilor intestinale, contribuind la reducerea ratei morbidităţii şi
mortalităţii);
- înlocuirea antibioticelor şi aditivilor chimici sintetici la animalele de crescătorie;
- atenuarea fenomenului de intoleranţă la lactoză (deficitul de β- galactozidază al gazdei
este compensat de prezenţa acestei enzime în echipamentul enzimatic al bacteriilor
lactozo-fermentative) ;
- se consideră că speciile de Lactobacillus ar avea şi un efect anticancerigen (prin supresia
nitrat-reductazei şi a formării nitrozaminelor);
Există şi situaţii în care microorganisme care nu fac parte din ecosistemul tubului digestiv pe
care îl tranzitează, exercită totuşi un efect antagonic (preventiv sau curativ):
administrarea preventivă a speciei Saccharomyces boulardii reduce mortalitatea
şobolanilor gnotoxenici inoculaţi oral cu Clostridium difficile, la care se observă
scăderea producţiei de citotoxină, în timp ce numărul celulelor este puţin modificat;
glucanul din peretele celular al levurilor (Saccharomyces cerevisiae) activează
complementul şi fagocitele, având un efect protector în infecţiile bacteriene, fungice şi
parazitare;
produşii de metabolism stimulează creşterea lactobacililor indigeni.
8
Microbiologie medicală Prof.dr. Veronica Lazăr
9
Microbiologie medicală Prof.dr. Veronica Lazăr
specia Eubacterium aerofaciens (bacterie anaerobă) care de asemenea produce cantităţi importante
de acid lactic, s-au dovedit a fi asociate cu un risc scăzut în apariţia cancerului de colon.
De asemenea, s-au efectuat studii comparative privind compoziţia în specii a microbiotei
intestinale dominante la bolnavii cu cancer de colon, cu alte cancere în afara localizării gastro-
intestinale şi cu boli nemaligne. Bolnavii cu cancer de colon şi cu boli nemaligne nu diferă în privinţa
numărului total de aerobi şi anaerobi. La bolnavii cu cancer de colon predomină microbiota aerobă şi
scade numărul cocilor anaerobi, ca şi a bacteriilor din genurile Eubacterium si Fusobacterium. S-a
demonstrat că speciile aerobe pot să producă mai uşor amine, decât bacteriile anaerobe nesporulate.
Deci bacteriile aerobe asigură substratul, respectiv aminele, care intră apoi în reacţia de nitrozare cu
nitraţii.
* Există date care arată că infecţiile bacteriene acute la bolnavii canceroşi ar influenţa
favorabil desfăşurarea bolii şi supravieţuirea, iar administrarea de vaccinuri bacteriene
(imunomodulatori de tipul Cantastim, BCG, Corynebacterium parvum) ar avea avea un efect mai bun,
comparativ cu infecţiile naturale. Datele epidemiologice din „era antibioticelor” arată că în ţările
dezvoltate şi în curs de dezvoltare, pe măsură ce incidenţa infecţiilor a scăzut, incidenţa cancerului a
crescut. Literatura de specialitate menţionează date privitoare la frecvenţa scăzută a metastazelor în
cazurile de melanom din Africa, unde incidenţa tumorii primare este mare, dar adesea leziunile sunt
suprainfectate şi ulcerate. Aceste afirmaţii se bazează pe ideea că orice factor supresor al sistemului
imunitar poate să determine o incidenţă crescută a cancerului, iar cei care îl stimulează, cum ar fi
infecţiile bacteriene, pot reduce incidenţa cancerului şi pot reprezenta în acelaşi timp şi modalităţi
terapeutice ale acestuia. Există date, chiar dacă nu suficient argumentate, care încearcă stabilirea
unei corelaţii între incidenţa cancerului şi cea a bolilor infecţioase, ca şi cu utilizarea antibioticelor şi a
antipireticelor. Agenţii infecţioşi stimulează sinteza de γ - interferon, cu efect antitumoral, de către
limfocitele T activate şi de factor pirogen endogen- de către macrofagele activate, care determină
reacţia de febră, considerată a avea efect pozitiv, atât în apărarea antiinfecţioasă, cât şi în cea
antitumorală.
10
Microbiologie medicală Prof.dr. Veronica Lazăr
11
Microbiologie medicală Prof.dr. Veronica Lazăr
Lista bacteriilor implicate in infecţii oportuniste este foarte lungă şi incompletă, de multe ori
fiind ignorate şi considerate contaminanţi întâmplători, astfel că nu apar pe buletinele de analiză.
Dintre acestea pot fi enumerate:
- Escherichia coli;
- Enterobacter cloacae, E. aerogenes, E. agglomerans;
- Edwardsiella;
- Erwinia herbicola;
- Klebsiella pneumoniae;
- Proteus mirabilis;
- Yersinia enterocolitica, Y. pseudotuberculosis;
- Haemophilus influenzae, H. parainfluenzae;
- Lactobacillus casei, L. rhamnosus, L. plantarum;
- Listeria monocytogenes;
- Mycobacterium tuberculosis, M. kansasii, M. avium, M. fortuitum;
- Moraxella catharralis, M. lacunata;
- Mycoplasma pneumoniae;
- Neisseria meningitidis;
- Nocardia sp.;
12
Microbiologie medicală Prof.dr. Veronica Lazăr
- Dermatophilus congolensis;
- Pseudomonas aeruginosa, P. cepacia (den. actuală: Burkholderia cepacia);
- Staphylococcus aureus, S. epidermidis;
- Streptococcus pyogenes, Str. pneumoniae, Str. agalactiae;
- Acinetobacter calcoaceticus (denumire veche Herellea); A. baumannii;
- Alcaligenes sp;
- Bacillus cereus, B. licheniformis;
- Bacteroides fragilis;
- Clostridium perfringens, C. septicum, C. difficile, C. tertium;
- Corynebacterium pseudodiphtheriticum, C. hoffmani, C. xerosis etc.
13