Lucrarea practică nr.

Analiza calității farmaceutice a produsului vegetal Chamomillae flos

Având în vedere că obiectivul lucrării de faţă îl reprezintă evidenţierea calităţii

farmaceutice a unor mostre de ceai de muşeţel comercializat prin reţeaua farmaceutică
românească, s-a impus aplicarea normelor de calitate prevăzute de Farmacopeea Europeană
(Ph.Eur., ediţia a 6-a) şi respectiv Farmacopeea Română (FR X) pentru mostrele de
Chamomillae flos incluse în studiu.

Cu toate că din 2007 România face parte din Comunitatea Europeană, reglementările în
vigoare care privesc producţia, circulaţia şi comercializarea produselor vegetale destinate
utilizării în scopuri terapeutice s-au schimbat foarte puţin faţă de prevederile H.G. 22/2001 prin
care Ministerul Sănătăţii şi Familiei de la acea vreme stabilea următoarele:

 producătorul de extracte vegetale sau animale sau de plante medicinale trebuie să

realizeze produse sigure pentru sănătatea consumatorului, de bună calitate şi care să
răspundă cerinţelor consumatorului.

El trebuie să cunoască toate reglementările legislative, normele, regulile care se referă la

producţia de bunuri şi la protecţia vieţii şi sănătăţii consumatorului.

El este singurul responsabil, material sau juridic, dacă pune în consum produse care pot
dăuna consumatorului sau care nu respectă prevederile legal;

 producţia se realizează din materii prime de calitate, garantate de furnizorul de

materii prime prin buletine de analiză pentru fiecare lot.

Produsele destinate circulaţiei în reţeaua sanitară sunt aprobate de Ministerul Sănătăţii,

calitatea acestora fiind analizată conform monografiilor din Farmacopee; în cazul produselor
neoficinale ce sunt utilizate ca materie primă în industria medicamentelor de extracţie sau pentru
prepararea de ceaiuri, acestea se analizează după Normele de calitate, Fişele tehnice sau STAS-
uri.

Conform definiţiei, Chamomillae flos reprezintă capitulele florale recoltate de la specia

Chamomilla recutita L. Rauschert (sinonim Matricaria chamomilla L., Matricaria recutita L.)
din familia Asteraceae, denumită popular muşeţel sau romaniţă.

Materialul de lucru: 4 sorturi comerciale de muşeţel provenind de la diferiţi producători

autohtoni. Mostrele sunt codificate C1 – C4, ţinându-se cont de modul de condiţionare în saşet şi
respectiv ambalaj de 50 – 100g (pentru care se folosește ca prescurtare termenul „vrac”).

Pentru a verifica încadrarea în normele de calitate privitoare la ceaiurile/plantele utilizate

pentru ceai în scop medicinal, probele vor fi analizate cu privire la:
• aspectul macroscopic al produsului,

1
 • prezenţa elementelor microscopice caracteristice,
• prezenţa calitativă şi cantitativă a unor compuşi/grupe de compuşi bioactivi în
materialul vegetal.

Analiza a fost realizată în conformitate cu cerinţele Farmacopeei Române ed. a X-a şi

suplimentul la acesta, din 2006, respectiv Ph.Eur. ed. a 6-a (tabel 1).

Tabelul 1. Asemănări/diferenţe între FR X şi Ph.Eur.

Parametru
FR X
urmărit
Caractere - antodii late de 1,5 – 2cm
macroscopice - peduncul lung de cel mult 2 cm
- receptacul emisferic/conic (3-
6mm înălţime; 2-3mm lăţime)
- 12-18 flori femele ligulate situate
pe marginea receptaculului
- flori centrale numeroase,
hermafrodite, galbene, tubuloase
Caractere - celule alungite, sinuoase din
microscopice epiderma foliolelor
- celule cu striaţii cuticulare din
epiderma receptaculului
- celule izodiametrice/alungite din
corola florii (ligulate şi tubulare)
- papile numeroase pe faţa
superioară a petalelor florilor
- peri glandulari tip Asteraceae
- polen (diametru = 30 μm)
Ph.Eur a 6-a
- capitule – la etalare au involucru cu
multe bractee ovate/lanceolate, cu
marginea brună-gri, ordonate în 1-3
rânduri
- receptacul alungit şi conic, ocazional
emisferic (capitule tinere), gol la
interior şi fără palee
- 12-20 flori albe, ligulate, femele
- flori tubuloase, galbene, cu corolă cu
5 dinţi, situate în centrul receptaculului
-ovar inferior, ovoid/sferic, stil lung şi
stigmă bifidă
-bractee cu celule cu pereţi subţiri
(margine), sclereide alungite cu
stomate (zona centrală)
- flori ligulate: epidermă inferioară cu
celule cu pereţi subţiri, poligonale, uşor
papiloase; celule sinuoase şi puternic
striate pe epiderma superioară
- flori tbuloase: celule epidermice
alungite longitudinal, grupuri mici de
papile situate către vârful lobilor,
- peri glandulari tip Asteraceae pe
bractee şi corolă (ambele tipuri de flori)
-ovare cu un inel scleros la bază, pereţii
compuşi din celule alungite
longitudinal, subţiri, dispuse vertical şi
numeroşi peri glandulari, care
alternează cu grupe mici de celule
dispuse fuziform, alungite radiar şi
conţinând mucilag
- numeroase druze de dimensiuni mici

2
 Parametru
FR X Ph.Eur a 6-a
urmărit
în pereţii overieni şi lobii anterelor
- polen (sferic sau triunghiular),
diametru de 30 μm, cu 3 pori şi exină
verucoasă
Caractere
organoleptice
- Miros - aromat - caracteristic -
- Gust - uşor amar
Teste de - caractere macro şi microscopice
-
Identificare - C.S.S.
Substituirea - nu se admite înlocuirea cu
cu alte specii inflorescenţe ale speciilor:
- Chamomilla suaveolens (Pursh)
Rydb. (M. discoidea DC) -
- Matricaria perforata Merat (M.
inodora L.) sau cu
- Anthemis sp.
Condiţii de
Puritate
-Părţi din - flori brunificate = cel mult 50% - produs vegetal sfărâmat maxim 25%
aceeaşi plantă - resturi de frunze şi tulpini = cel
mult 1 %
- flori cu peduncul mai mare de
2cm = cel mult 5%
- flori sfărâmate ce trec prin sita V
= cel mult 1 %
-Părţi din alte
2% -
plante
-Produse
0,25 % -
minerale
-Pierderea prin maxim 12%, determinare pe 1000g
uscare 13 % produs pulverizat, prin uscare 2h la
1050C
Cenuşa totală 11 % maxim 13 %
Cenuşa
insolubilă în 3% nu mai mult de 4 %
HCl 100g/l

3
 Parametru
FR X Ph.Eur a 6-a
urmărit
Reziduuri de - - valorile maxime reziduale pentru
pesticide aldrin şi dieldrin nu trebuie să fie mai
mari de 0,05 mg/kg. În general ele se
stabilesc în funcţie de reglementările
naţionale.
Dozare:
Determinarea
uleiului volatil 0,4 % V/m minimum 0,4 % V/m

Determinare
apigenol-7-glu
prin cromatografie de lichide
minim 0.25% (drog uscat)
Alte analize - - C.S.S. ulei volatil
chimice
Conservare - în recipiente bine închise, ferite de - în recipiente bine închise, ferite de
lumină lumină

Tabel 2. Probele de muşeţel comercial incluse în studiu şi provenienţa acestora

Proba Producător Condiţionare Aspect Origine

C1

C2

C3

C4

4
 1. Analiza farmacognostică macro- şi microscopică
a probelor de muşeţel

1.1. Analiza farmacognostică macroscopică

În cadrul acesteia, se vor urmări, în conformitate cu prevederile studiului macroscopic

pentru florile de muşeţel prezenţa următoarelor elemente:

 antodii late de 1.5-2 cm, cu involucru format din trei rânduri de foliole involucrale
verzi, lanceolate,
 peduncul de cel mult 2 cm,
 receptacul emisferic sau conic gol în interior,
 flori marginale femele, cu o ligulă albă tridinţată la vârf şi cu trei nervuri,
 flori hermafrodite galbene, tubuloase, cu o corolă cu cinci dinţi şi cinci nervuri,
 miros aromat caracteristic,
 gust uşor aromat.

În ceea ce priveşte condiţiile de puritate se vor avea în vedere prezenţa/absenţa:

➢ părţilor din aceeaşi plantă, altele decât cele provenite din inflorescenţă,
➢ părţilor din alte plante, care conform prevederilor nu trebuie să depăşescă 2%,
➢ produselor minerale, care trebuie să fie sub 0.25%.

Analiza macroscopică a materialului vegetal va urmări evidenţierea totodată a unor

impurităţi constând din: puf şi păr, reziduuri organice animale, insecte şi gândaci, etc.

Tabelul 3. Caracteristici de aspect ale probelor de muşeţel

Cod Provenienţa Ambalaj Aspect macroscopic

C1

C2

C3

C4

5
 1.2. Analiza farmacognostică microscopică

Principiul metodei: se apelează la tehnica de examinare a pulberii de muşeţel, după

clarificare cu soluţie de cloralhidrat, după care preparatul va fi analizat la microscop.

Mod de lucru
Materialul vegetal pulverizat se aduce pe o lamă de microscop, peste care se adăugă apoi
3-4 picături soluţie cloralhidrat 80%. Se încălzește cu grijă până la evaporare completă
repetându-se operaţia încă de 3 ori, pentru a se realiza o clarificare cât mai bună.
Se adăugă apoi din nou 3 -4 picături de cloralhidrat, se aplică cu grijă lamela pentru a nu
avea incluziuni de aer, se şterge lama de jur împrejurul lamelei, se lăsă până la răcire completă,
după care preparatul se examinează la microscop, observând elementele caracteristice.

Tabelul 4. Cerinţe ale Ph.Eur. privind elementele microscopice

din produsul Chamomillae flos
Organ Caracteristici microscopice
Bractee
suprafaţă peri glandulari;
margine celule cu pereţi subţiri;
zona centrală sclereide alungite, ocazional stomate;
Flori ligulate
epiderma superioară celule poligonale cu pereţi subţiri, uşor papiloase;
peri glandulari;
epiderma inferioară celule sinuoase şi cuticulă pliată;
Flori tubuloase
epiderma celule alungite;
peri glandulari;
zona terminală tridentată (lobi) grupuri mici de papile;
Ovare
baza inel cu celule cu pereţi îngroşaţi şi pori;
pereţi celule cu pereţi subţiri, alungite vertical;
numeroşi peri glandulari;
grupuri mici de celule alungite radiar care conţin
mucilag;
druze de oxalat de calciu de mici dimensiuni;
Stigmate celule alungite prelungite în papile;
antere (lobi) druze de oxalat de calciu de mici dimensiuni;
peri glandulari;
Celule specializate Caracteristici microscopice
Grăuncioare de polen sferice, cu suprafaţa verucoasă (ţepoasă), 3 pori,
diametru aprox. 30 m;
triunghiulare, când exina este crăpată; mugurii
adânciţi;
Peri glandulari tetra sau hexacelulari, biseriaţi,
cu picior scurt;

6
 Elemente microscopice identificate în probele de Chamomillae flos analizate

Epidermă cu stomate

Epidermă cu cuticulă pliată

Peri glandulari, pluricelulari biseriaţi

Peri tectori unicelulari

7
Papile

Polen

Ţesut cu druze de oxalat

Ovar: inel bazal cu celule cu pereţi îngroşaţi

Observații

8
 2. Studiul chimic calitativ şi cantitativ al probelor de muşeţel

Studiul chimic calitativ şi cantitativ se realizează pe diverse fracţiuni separate prin

extracţie sau distilare cu vapori de apă din florile de muşeţel.

2.1. Metode de extracţie

2.1.1. Obţinerea epuizatelor metanolice

0.5 g produs vegetal se extrag cu 30 mL metanol, pe baia de apă, la reflux, timp de 30

minute. Extractul se filtrează printr-un filtru mic de vată, într-un balon cotat de 100 ml, iar filtrul
se reintroduce în balonul cu reziduul vegetal şi se extrage, din nou, pentru 30 de minute cu 30
mL metanol, procedeul repetându-se încă o a treia oară. Extractele reunite se lăsă să se răcească,
iar reziduul vegetal se spălă cu mici porţiuni de metanol care se filtrează în balonul cotat până la
completarea la semn.

2.1.2. Obţinerea infuziilor

Infuziile se prepară luând în lucru 3 g produs vegetal Chamomillae flos (fiind una dintre
excepţiiile indicaţiilor FR X). Produsul mărunţit se umectează cu 3 g alcool diluat şi se menţine
în repaus 5 minute, apoi se tratează cu 100 mL apă încălzită la fierbere. După lăsarea amestecului
timp de 30 minute în repaus, se amestecă şi se filtrează prin vată, după care se completează la
100 mL prin spălarea filtrului cu apă distilată uşor încălzită.

2.1.3. Obţinerea fracţiunilor volatile

Principiul metodei: separarea uleiului volatil din materialul vegetal se bazează pe

proprietatea componentelor ce constituie această fracţiune de a fi antrenabile cu vapori de apă.

Uleiul volatil se separă conform metodei indicate în FRX, prin distilare cu vapori de apă
în aparatul Neo-Clevenger a produsului vegetal Chamomillae flos.

Reactivi:
- apă distilată,
- glicerină,
- acid ascorbic.

Mod de lucru

Masa de produs vegetal (70 g) mărunţit se tratează cu 600 mL apă bidistilată, 200 mL
glicerină şi 2 g acid ascorbic. Glicerina adăugată peste produsul vegetal are rolul de a favoriza
hidratarea acestuia precum şi de a creşte temperatura de fierbere a amestecului de reacţie, fapt
care va avea ca rezultat antrenarea tuturor componentelor volatile, chiar şi a celor cu punct de
fierbere ridicat; acidul ascorbic reduce intensitatea proceselor de oxidare ce au loc în timpul
încălzirii amestecului, reducându-se astfel la minim oxidarea unor componente chimic labile
(ex.: α-bisabolol).

9
 După introducerea apei în tubul gradat destinat culegerii uleiului volatil se pornește
încălzirea şi se supune distilării timp de 4 ore conform prevederilor farmacopeei. După
terminarea distilării, se oprește circuitul apei din refrigerent şi se lasă să circule vaporii câteva
minute pentru a spăla refrigerentul de urmele de ulei aderent. Când refrigerentul s-a încălzit pe
toată lungimea sa, se lasă să circule din nou apa de răcire şi se oprește sursa de căldură.

După 30 de minute se adaugă în tubul de culegere 0.4 mL hexan, se coboară foarte încet
stratul de ulei în tubul gradat, se citește volumul de ulei (mL) şi se raportează la 100 g produs
vegetal.

OCOCH3

HO
O

Matricina (incoloră) Camazulena (albastră)

(Matricariae flos) (Matricariae aetheroleum)

2.2. Analiza chimică calitativă

Studiul chimic calitativ presupune cromatografia pe strat subţire pentru trei grupe de
principii active, importante din punct de vedere farmacologic:
• flavonoide,
• acizi polifenolcarboxilici,
• componente volatile.

2.2.1. Cromatografia pe strat subţire pentru derivaţi flavonoidici

Suport: Kiesegel 60 F 254 Fertigplatten (Merck)

Solvent: acetat de etil-acid formic-acid actic-apă (100:11:11:27)
Revelare: pulverizare cu esterul acidului 2-aminoetil-difenilboric (RSN) (Sigma-Aldrich
Elveţia) şi examinare în UV, =365 nm.
Probe: epuizate metanolice și infuzii preparate din materialul vegetal.
Etaloane: apigenol, rutozida, apigenol-7-glucozida, luteolina, luteolin-7-glucozida.
Aplicare: atât din probe, cât şi din etaloane s-au aplicat pe cromatoplacă câte 10 l
soluţie sub formă de bandă.

10
 2.2.2. Analiza cromatografică a acizilor polifenolici

Suport: Kiesegel 60 F 254 Fertigplatten (Merck).

Solvent: toluen-acetat de etil-acid formic (50:40:10).
Revelare: pulverizare cu esterul acidului 2-aminoetil-difenilboric (NEU) (Sigma-Aldrich
Elveţia) şi examinare în lumina Wood, =365nm.
Probe: epuizate metanolice și infuzii preparate din materialul vegetal.
Etaloane: acid cafeic, acid ferulic, acid clorogenic (soluții metanolice).
Aplicare: atât din probe, cât şi din etaloane s-au aplicat pe cromatoplacă câte 10 l
soluţie sub formă de bandă.

2.2.3. Analiza cromatografică pe strat subţire pentru compuşi volatili

Suport: Kiesegel 60 (Merck).

Solvent: toluen-acetat de etil (95:5).
Revelare: pulverizare cu vanilina (R), încălzire 5 minute la 1050C şi examinare în VIS.
Probe: 50 l ulei volatil separat din materialul vegetal diluat în 1 mL xilen.
Etaloane: 5 l -bisabolol, 10 mg bornilacetat s-au reluat în 5 mL toluen; 50 l ulei
volatil pentru aromaterapie (provenienţă CE) diluat în 1 mL xilen.
Aplicare: din probe şi din etaloane s-au aplicat 10 l soluţie sub formă de bandă.

11