BACTERIE PRODUS CULTIVARE TESTE BIOCHIMICE METODE IMUNOLOGICE

PATOLOGIC
/RECOLTARE
EXAMEN
MICROSCOPIC
2.Identificare stafilococi Coci G+, dispuşi izolat,
în perechi, scurte lanţuri,
da frecvent bacteriemii predominant în grămezi,
imobili, nesporulaţi.
Caractere de cultivare: colonii
S depistarea:
rotunde,
bombate,
pigmentate diferit
capsula(portocaliu, galben, alb).
- pe geloză sânge pot forma
colonii hemolitice,
1.Testul catalazei
Catalaza( hemoproteină)
descompune H2O2🡪h2o+o2
 pozitiv: apariţia bulelor de
gaz până la efervescenţă la
contactul dintre cultura bacteriana
si H2O2
 negativ: absenţa bulelor
3.Test de latex aglutinare pentru identificarea S. aureus prin
-
clumping factor (coagulaza legată),
proteina A,
polizaharide capsulare.
Control pozitiv: Staphylococcus aureus
Control negativ: Staphylococcus epidermidis

- cresc pe medii cu sare (ex.

agar Chapman), 🡪izolarea din
PP contaminate (exsudat nazal, Principiu: peste 96% din tulpinile
materii fecale)
2.Testul coagulazei
de S aureus coagulează plasma
prin:
-activarea unui factor plasmatic
similar trombinei🡪 coagulaza
liberă
-acţiunea directă asupra
fibrinogenului: coagulaza
 legată

Interpretare:
 pentru testul pe lamă pentru
coagulaza legată :
pozitiv: aparitia de mici coaguli în
15-20 sec.
negativ: absenţa reactiei în 2-3
minute (necesită confirmare)

 pentru testul în tub pentru

coagulaza liberă:

pozitiv: coagulare , indiferent de

gradul ei ( în masă, văl de fibrină)
negativ: absenţa cheagului
3.Angina Materiale necesare: tampon 1.Caractere microscopice 2. Caractere de cultură Testul catalazei – diferențiază streptococii (catalaza
faringiana🡪ex steril, ● Coci gram-pozitivi, sferici negativ) de stafilococi (catalaza pozitiv).
• pretențioși nutritiv, facultativ anaerobi
sudat
apăsător de limbă, ● dispuşi predominant în lanțuri
faringian
sursă de lumină, mască. lungi (in frotiu din cultura in • colonii mici + zonă larga de β-hemoliză
aparțin streptococilor de grup A, C, G
mediu lichid), izolat sau în
Etiologia perechi (in frotiuri din
Indicaţii: • tulpinile de S. pyogenes care NU produc
anginelor: produse patologice) streptolizină S formează colonii
• Virală în 70% Diagnosticul faringitelor ● unele specii- capsula α-hemolitice în aerobioză
din cazuri: streptococice, Diagnosticul β-hemolitice în anaerobioză (microaerofile).
altor angine bacteriene,
virus Epstein-Barr,
rinovirus, confirmarea suspiciunii de NU aduce informații utile pentru
adenovirus, difterie, diagnosticul anginelor streptococice,
Se descarcă tamponul pe geloză sânge
virusuri gripale, depistarea portajului S. pyogenes, deoarece aspectul microscopic
virus herpes sau C. diphtheriae. pentru streptococii viridans (care nu epuizare cu ansa în cele 4 cadrane,
simplex, determină niciodată angine) este înțepare mediului pentru a crea condiţii
enterovirusuri identic cu cel al S. pyogenes. microaerofile.
-Transport şi conservare:
prelucrare🡪 în max.3h de la
Bacteriană (30%): prelevare. Este util  : Incubare: peste noapte, la 37 °C

S.pyogenes
Dacă se temporizează 🡪folosirea ● in cazul difteriei Citirea culturilor: se urmăresc coloniile β
unui mediu de transport. (evidențierea bacilului difteric, hemolitice (colonii mici înconjurate de o zonă
(streptococ de
care se diferențiază de largă de hemoliză clară).
grup A), difterimorfii comensali).
Testul CAMP- pentru identificarea prezumtiva a S.
Streptococi
agalacitae
grup C si G, ● in anginei ulcero-
membranoase (Vincent). Principiu - majoritatea streptococilor de grup B produc o proteină
Mycoplasma difuzibilă (factorul CAMP) care acționează sinergic cu beta-lizina
pneumoniae, stafilococică și determină liza completă a hematiilor din mediul de
cultură, determinând un aspect particular (sub formă de săgeată) a
Chlamydophila
zonei de hemoliză
pneumoniae,,
Neisseria
gonorrhoeae . Identificarea definitivă, antigenică (depistarea
(frecvent polizaharidului C parietal prin latexaglutinare
asimptomatica),
C. Metode rapide
Asociația fuso-
spirochetozică - depistarea Ag parietal de grup A (conform clasificării
(Fusobacterium Lancefield) direct în tamponul faringian, prin latexaglutinare,
nucleatum+ coaglutinare, sau ELISA.
Treponema - daca rezultatul testului de depistare antigenica este negativ, se
vincenti) continua obligatoriu cu cultura

Corynebacterium
diphtheriae
(determină o
formă severă, cu
depozite cenușii –
anigina ʺcu false
membraneʺ).
4.Infectii Produse patologice: 1.Caractere microscopice: Caractere de cultivare : Caractere antigenice:
facultativi anaerobi, antigenele capsulare
aletractului a) Probe contaminate pe traiectul de eliminare: cocobacili gram-negativi polimorfi (lunigimi variabile) carboxifili
respirator sputa; aspirat hipofaringian; permit diferenţierea
inferior imobili, nesporulaţi. H. influenzae în 6
LCR-pleomorfi sputa bacili,bancuri de pesti tipuri antigenice,
b) Probe necontaminate (şuntează contaminarea Unele tulpini pot fi capsulate.
Streptococcus orofaringiană): H. influenzae - dependent de dintre care tipul b
pneumoniae factorii X (hemina) şi V este invaziv
aspirat bronho-alveolar pe cateter protejat (prin (NAD)
Haemophilus bronhoscopie); 2. Examen microscopic al frotiului colorat Gram.
influenzae - cultivă pe agar chocolat
aspirat transtraheal. I. cu mărire 100 X – triaj citologic de calitate :
Moraxella (sange incalzit la 85 pentru
Scorul de calitate Q = suma algebrică a calificativelor pentru
catarrhalis Alte PP: aspirat pleural, sânge (hemoculturi), urină eliberarea factorului V)
CI şi CES la care se adaugă calificativul + 1 pentru prezenţa
(detecţia antigenului capsular al pneumococului). prezinta ambii factori)
BaciliG- fibrinei
(Klebsiella spp., ♣ Q ≥ 1→ produs corespunzător (permite diagnosticul
E.coli, SPUTA🡪recoltată după toaleta cavităţii bucale, prin prezumtiv rapid) agar sânge(sange incalzit la
tuse spontană, profundă şi supravegheată, prelevate ♣Q<1→produse.necorespunzător 85 pentru eliberarea
Pseudomonas
într-un recipient steril,gura largă şi capac factorului V) cu striu de S.
spp.)
ermetic🡪laboratorului 🡪examinate în cel mult o oră de aureus (fenomen de
la prelevare. Este interzisă refrigerarea probelor. satelitism🡪fact. V)

- formează colonii S, mici,

- probele cu aspect spumos, apoase🡪 calitativ
rotunde, convexe, translucide
necorespunzatoare🡪respinse de la examinarea
microbiologică (contaminate cu saliva🡪bacterii din
microbiota orofaringelui). H. parainfluenzae - dependent
b. Decontaminarea probei de spută: - fragmente doar de factorul V (NAD)
mucopurulente - decontaminare mecanică prin
spălare în 3 băi succesive de ser fiziologic steril

II. cu mărire 1000X - numai produse Q ≥ 1 :

i. se examineză câmpuri la distanţă de cel puţin 3
diametre de CES,
►criteriul asociaţiei semnificative
ii. ≥ 10 bacterii din aceeaşi categorie microscopică
asociate cu ≥ 3 CI /câmp a bacteriilor cu celulele
inflamatorii;
)► criteriul cantitativ.
iii. ≥ 10 bacterii din aceeaşi categorie microscopică / câmp
semnifică ≥ 106 bacterii/ml probă (corespunzător
concentraţiei de bacterii infectante din focarul de infecţie
 Streptococcus pneumoniae (pneumococ)
5.Identificarea A. Caractere microscopice: C. Testul de sensibilitate la optochin
pneumococilor diplococi gram pozitivi ovali/lanceolaţi, sensibili = pneumococii;
şi enterococilor rezistenţi = streptococii viridans, streptococii
axul longitudinal în prelungire, capsulaţi
de grup D, enterococii)
B. Caractere de cultivare:
Examenul D. Testul de bilioliză
pretenţioşi nutritiv,
bacteriologic al (cultura de pneumococ este lizata)
facultativ anaerobi, carboxifili,
LCR E. Evidenţierea Ag capsular prin latexaglutinare
α-hemolitici, cu autoliză centrală (colonii crateriforme)

Identificarea enterococilor
A. Caractere microscopice:
C. Rezistenţi la optochin
coci sferici/ovali, gram pozitivi, asezati în perechi/scurte
D. Aparţin grupului antigen D Lancefield
lanţuri
B. Caractere de cultivare: -
nepretentiosi nutritiv, facultativ anaerobi,
Mediu CHROMID VRE
faecalis->albastru
- α/ β/nehemolitici,
faecium->purpuriu
- cresc la pH alcalin, temperaturi între 10-45°C,
- cresc în bulion cu 6,5% NaCl, Mediu EVA
- cresc pe medii suplimentate cu saruri biliare şi hidrolizează
esculina (test bilă esculină). Faecium🡪 maro inchis
E. faecalis -gamma hemoliza
Examenul bacteriologic al
LCR

Indicaţii:
- meningite purulente –
cauzate cel mai frecvent de
bacterii, ocazional de
protozoare

-meningite cu lichid clar =

virale (meningite
“aseptice”),
tuberculoase,
fungice,
meningite “decapitate”

Virusuri: enterovirusuri non-poliomielitice,

virusul West Nile virusul urlian, virusul rujeolic, virusul
herpes simplex, virusul varicela zoster, virusul meningitei
choriolimfocitare
 Fungi (rar, la gazda imunocompromisă):
Cryptococcus neoformans, Candida albicans
  Protozoare: Naegleria fowleri, Acantamoeba-Hartmanella

A. Prelevarea B. Examenul macroscopic:

şi transportul transparenţa; culoarea; fluiditatea. E. Detectarea antigenelor capsulare prezente G. Cultivarea - din sediment LCR –
probelor însămânțare „în picătura”, fără
in supernatant LCR prin latexaglutinare
- LCR - puncţie etalare
C. Examenul microscopic: metodă rapidă şi specifică identificarea: E coli K1, N.
lombară - pe agar-sânge şi agar-chocolat →
meningitidis, H. influenzae tip b, K. pneumoniae, S.
- volum 5 – 10 - examenul citologic cantitativ: din LCR necentrifugat, în agalactiae, S. pneumoniae). Avantaj la pacientii sub urmărire 3 zile NU pentr
ml camera de numarat Fuchs–Rosenthal antibioticoterapie.
- 3 tuburi de ▪ determinarea numărului de ECN/mmc.
- pe medii lichide → urmărire 5 zile
centrifugă 10 4 🡪 meningite bacteriana F. Detectarea acizilor nucleici – - pe medii adecvate, în suspiciune de
sterile și cu 50-1000🡪virala, 50-500🡪tuberculoasa
capac înşurubat (PCR, secvențiere) - rezultat rapid, înaintea culturii; meningită tuberculoasă (Löwenstein-
utile🡪 meningitelor “decapitate”; Jensen) leptospirotică (mediul
- transport Korthof)
imediat şi fără -examenul citologic calitativ: frotiu din sediment LCR, detectarea genelor de rezistență🡪 info. despre
refrigerare colorat cu albastru de metilen sensibilitatea la antibiotice -fungi🡪 panta cu geloza Sabouraud cu
▪ aprecierea reacţiei inflamatorii: predominant cloramfenico🡪exclude etiologia
-nu se face
bacteriana
punctie in caz neutrofile = meningită bacteriană; Examenul bacterioscopic, detectarea antigenelor
de presiune limfocite = meningită virală, tuberculoasă sau fungică solubile şi detectarea acizilor nucleici sunt examene
intracraniala rapide, care pot orienta rapid iniţierea
crescuta antibioticoterapiei.
 - examenul bacterioscopic: frotiu din sediment LCR, colorat Rezultate negative nu exclud diagnosticul.
Gram, albastru de metilen, +/- Ziehl–Neelsen
▪ identificarea preliminara a bacteriei
▪ cea mai accesibilă metodă rapidă (utilitatea pentru antibioterapia de
primă intenție)

Identificarea II. Examenul citobacteriologic al urinii I. Identificarea bacililor gram- 3. Caractere biochimice:
bacililor gram- Condiţia microbiologicǎ a tractului urinar: negativi fermentativi (E. coli) ● catalazo-pozitivi,
negativi - rinichii + ureterele + vezica urinară si uretra proximala = ● oxidazo-negativi,
fermentativi (E. normal sterile; 1. Caractere microscopice:
coli). - uretra distală = normal colonizată (stafilococi coagulazo- • bacili gram-negativi cu extremităţi E.coli
Examenul negativi, enterococi, difterimorfi, enterobacteriacee). ● lactozo-pozitivi, fermenteaza
rotunjite;
citobacteriologic glucoza cu producere de gaz,
al urinii • E.coli -mobil.
Etiologia bacteriană a infecţiilor tractusului urinar (ITU): ● nu produc H2S (TSI)
1) bacterii condiţionat patogene ● mobil, indol-pozitivi, ureaza-
2. Caractere de cultivare:
Bacili gram negativi: Coci gram pozitivi negativi (MIU)
• nepretenţioşi nutritiv;
● Escherichia coli
• aerobi, facultativ anaerobi;
● Proteus mirabilis Enterococcus faecalis ● citrat negativi (Simmons)
• colonii de tip S;
● Enterobacter cloacae S. saphrophyticus ● lizin decarboxilaza pozitiv
• E.coli formeaza colonii lactozo-pozitive
● Klebsiella pneumoniae S. agalactie ● fenilalanin-dezaminaza negativ
pe medii diferenţiale lactozate
● Pseudomonas aeruginosa S. aureus
● Acinetobacter baumannii 4. Caractere antigenice – utile de
Bacili gram pozitivi: studiat pentru tulpinile de E. coli care
● Corynebacterium urealyticum produc boala diareica acuta
 2) bacterii primar patogene:
● Mycobacterium tuberculosis
Prelevate utile diagnosticului de ITU:
- urină (examen citobacteriologic);
-sânge (hemoculturǎ) la pacienţii cu
pielonefritǎ.
Prelevarea urinii:
- Prelevǎri uzuale: proba curatǎ, prinsǎ
în zbor din jetul mijlociu;
- Prelevǎri speciale: aspiraţia
suprapubianǎ, prelevǎri prin cateter.
- Proba curatǎ prinsǎ în zbor din jetul
mijlociu:
● Toaleta localǎ cu apǎ şi sǎpun,
urmatǎ de uscarea zonei
decontaminate;
● Momentul -prima urinǎ de dimineaţǎ
sau dupǎ cel puţin 3 ore de la
micţiunea anterioarǎ;
● V prelevat: 20 ml pentru izolarea
cantitativǎ a microorganismelor
condiţionat patogene.
● 50ml patogen specifici
● Jetul mijlociu, fara a intrerupe
mictiunea
Transportul probelor la laborator pentru
2) Examen microscopic 3) Urocultura cantitativă = însǎmânţarea pe gelozǎ sânge agar MacConkey( inhiba
cresterea invaziva Proteus si favorizeaza cresterea bacililor G-) a câte 0,1 ml din
A. aprecierea calităţii probei diluţia 10-2 a urinii omogenizate, urmată de incubare la 37ºC şi numărarea coloniilor
• prezenţa leucocitelor pledeazǎ pentru dezvoltate.
prezenta inflamatiei,
• celule epiteliale scuamoase sunt Calculăm bacteriuria după formula:
markerii contaminǎrii (cel mai frecvent Nr. UFC/mL = N×D×1/volumul însămânţat
vaginale) N = nr. colonii dezvoltate pe mediu
D = inversul diluţiei
B. aprecierea leucocituriei
- preparat umed - camera Fuchs Interpretarea rezultatelor :
Rosenthal a. O singură specie de bacili gram-negativi izolată în concentraţie de 10 5 UFC/ml,
● ≥ 10 leucocite / mm3 = ≥ 5x104 UFC/ml stafilococi
leucociturie prezenta ≥ 104 UFC/mL levuri:
● ≤ 3 leucocite / mm3 = leucociturie • în prezenţa piuriei = ITU;
absentă • în absenţa piuriei = colonizare abortivă / probă examinată tardiv fără refrigerare
● 4 – 9 leucocite / mm3 – proba Addis imediată.
stabileşte numarul exact al
leucocitelor eliminate in urina b. Două tipuri de izolate care depăşesc fiecare 105 UFC/mL:
- pe o singură probă = cel mai frecvent contaminare
- frotiu de urină colorat Gram, din - acelasi rezultat în 2 probe succesive = infecţie mixtă
urina omogenizata: > 1 leucocit /
câmp microscopic = leucociturie c. Mai multe tipuri de bacterii care depăşesc fiecare 10 5 UFC/mL = contaminare/
probă examinată tardiv fără refrigerare imediată.
examinare în maxim 1-2 orǎ de la C. aprecierea bacteriuriei (frotiu Indiferent de cantitate nu trebui ignorata Listeria monocytogenes
prelevare. colorat Gram din urina omogenizata):
Refrigerarea urinii dacă se temporizează ≥ 1 – 2 bacterii/câmp microscopic =
examinarea BACTERIURIE SEMNIFICATIVǍ 🡪 ≥
105 UFC/ml urina
Lp 21. Identificarea 1. Caractere microscopice: 2. Caractere de cultivare: 3. Caractere biochimice: pot fi testate pe medii de identificare multitest
Enterobacteriaceae-lor. sau pe galerii comerciale de teste biochimice miniaturizate.
- Bacili G- - nepretențioși nutritiv (cultivă pe
Coprocultura - fără așezare particulară geloză nutritivă sau în bulion Exemple:
Yersinia- colorate bipolar, frecvent nutritiv)
cocobacilare - facultativ anaerobi
- cultură S; pe medii agarizate Genul Shigella: Genul Salmonella:
- izolarea Enterobacteriaceae-lor din - lactozo – negativi - lactozo-negativi
Proteus-polimorf - fermentează glucoza
produse patologice pluribacteriene - fermentează glucoza fără
🡪medii diferențiale și selective (cu producere de gaz - produc H2S
Klebsiella + E.coli rar🡪capsula in frotiul lactoză și indicator de pH): - nu produc H2S - mobili
- imobil
Gram din PP
(agar MacConkey) pe medii cu
- nu produc urează
selectivitate redusă
- nu produc lizin-
bacteriile gram-pozitive sunt decarboxlilază nu produce ureaza
inhibate; - nu folosește citratul Na ca
sursă de carbon - nu produce indol
enterobacteriile🡪 lactozo-pozitive și - nu produce fenilalanin- - produc lizin-decarboxlilază
lactozo-negative. dezaminază - folosește citratul Na ca sursă de
carbon
- nu produce fenilalanin-dezaminază
(agar Hektoen), pe medii cu
selectivitate medie
4. Caractere antigenice
inhibate bacteriile Gram+ și,
parțial, bacilii coliformi (lactozo-
pozitivi);
enterobacteriile lactozo-negative
 diferențiate🡪producere H2S:tulpinile
care produc H2S🡪 colonii cu
centrul de culoare neagră.

E.coli 🡪cultiva pe Eozin metilen

blue
II. Etiologia sindromului diareic III. Diagnostic de laborator BDA, D. Examen microscopic A doua zi A treia zi
infecţios sindromul dizenteriform direct
● pe repicajul din mediul de îmbogăţire urmărim
● Frotiu colorat cu albastru de
mediul de îmbogăţire 🡪 mediu prezența coloniilor lactozo negative ±
metilen
Definiţie BDA: peste 3 scaune / zi, Prima zi: cu selectivitate medie hidrogen sulfurat;
semiconsistente sau apoase (scaunul ia A. Prelevare - Celule inflamatorii, hematii,
● citirea testelor de triaj biochimic (medi
forma vasului în care este depus), enterocite
● cât mai aproape de debut şi multitest) TSI , MIU → colonii lactozo
🡪pierderi lichidiene, 🡪dezechilibre
înaintea antibioticoterapiei negative suspecte (pentru care testele de tria
hidroelectrolitice. PMN > 50 /câmp alături de din minim 3 colonii lactozo- sugerează Salmonella, Shigella, Yersinia);
● scaun emis spontan
macrofage şi hematii în shigeloze negative cu/fără H2S de pe
● fragmente de mucus, sânge,
Agenţi etiologici bacterieni: primocultura pe mediu selectiv
puroi sau din 4-5 locuri diferite, ● identificare biochimică pt.coloniil
se efectuează:
Sindrom holeriform: aproximativ 1 g PMN < 20 / câmp în salmoneloze
lactozo-negative suspecte;
triaj biochimic TSI (triple
scaune apoase, ● transport coprocultor cu
sugar iron),
mediu de transport Cary- Campilobacterioze🡪 PMN + hematii
abundente,
Blair MIU (mobilitate-indol- ● identificare antigenică pentru coloniil
febră absentă, lactozo-negative suspecte;
Tampon rectal🡪shigeloza urează)
 absenţa tenesmelor rectale a durerilor B.Transport în 1-2 ore; eventual (Campylobacter: BGN spiralat,
abdominale, absenţa leucocitelor în refrigerare (max 24-48 ore) formă de ʺpescăruș în zborʺ)
● antibiogramă, doar pentru Shigella sau
scaun. Yersinia.
Repicaj🡪mediu diferenţial
o Vibrio cholerae C. Examen macroscopic: lactozat, pentru verificarea
o Vibrioni NAG (non- Miros E. Coprocultura purităţii culturii
● Tratamentul cu antibiotice în diareea cu
aglutinabili cu seruri anti- O:1 Culoare- verde vibrio Scop: Izolarea şi identificarea Salmonella NU scurtează durata
și O:139) Salmonella, Shigella, Yersinia
Aspect-ca apa de orez- vibrio (lactozo negativi)
manifestărilor clinice și, în plus, prelungește
o ECET, ECAD, ECEAg Pentru E.coli🡪 mediu starea de portaj).
MacConkey🡪repicam coloniile
● Se însămânţează proba de materii L+🡪 identificarea subculturii
Sindrom dizenteriform: fecale pe pure🡪identificare Ag a
A patra zi:
colită acută cu scaune - medii cu selectivitate joasă patotipurilor
mucosanguinolent-purulente, (agar MacConkey) formularea rezultatului final
- medii cu selectivitate medie
febră, tenesme dureri abdominale
(agar Hektoen)
reacţie inflamatorie acută intensă în
- mediu de îmbogăţire pentru
scaun.
Salmonella (bulion selenit acid
o Shigella spp. de sodiu).
o ECEI ,ECEH , ECEP
o Campylobacter spp.

Gastroenterite febrile🡪salmonele
netifoidice+Y.enterocolitica
 Febre enterice🡪 Salmonella
Typhi si Paratyphi

Virusuri:

rotavirus,

adenovirus,

norovirus

Protozoare:
Entamoeba histolytica,
Giardia intestinalis,
Cryptosporidium
 Control de calitate:
Testarea 1. Categorii de sensibilitate la 2. Metoda difuzimetrică
sensibilităţii antibiotice ale tulpinilor bacteriene:
- în paralel procedăm asemănător cu o tulpină de referinţă (ATCC –
bacteriilor la
American Type Culture Collection) cu sensibilitate cunoscuta la
antibiotice. Principiu: pe suprafaţa mediului Mueller-Hinton însămânţat
 S – Sensibil la doze standard antibioticele testate, cu ajutorul căreia verificăm respectarea
Metoda uniform cu tulpina de testat depunem microcomprimate cu condiţiilor standardizate de lucru (tehnica de lucru si calitatea
(expunere normala) – exista o probabilitate diferite antibiotice;
difuzimetrică. materialelor).
mare de succes terapeutic la administrarea
Tehnici cantitative; de antibiotic in doze standard
fenotipuri de
rezistență si  I – Sensibil la expunere crescuta – antibioticul difuzează circular în mediu🡪 concentraţii Citire şi interpretare:
importanța în probabilitate mare de succes terapeutic cand descrescătoare;
- diametrul zonei de inhibiţie a creşterii (mm), se compară
practica medicală expunerea la antibiotic este crescuta, cultura este inhibată în zona în care antibioticul realizează cu cele două diametre critice superior (D) si inferior (d)
ajustarea regimului de administrare a concentraţii ≥ concentratia minimă inhibitorie (CMI) pentru definirea tulpinii ca “S”, “I” sau “R”.
antibioticului,  Daca “D” si “d” au aceeasi valoare, categoria “I” nu se aplica in acel
fie prin concentrarea antibioticului la locul CMI = concentratia minimă de antibiotic care inhibă caz
infectiei. cresterea vizibila a unei tulpini bacteriene.

Avantaje: posibilitatea testării simultane a sensibilităţii faţă de mai

 R – Rezistent – Indicaţii: testarea uzuală a sensibilităţii la antibiotice multe antibiotice
a tulpinilor cu creştere rapidă
exista o probabilitate mare de esec
terapeutic chiar si in cazul expunerii crescute Dezavantaje: concordanţa redusa a rezultatelor obţinute prin
la antibiotic.
Necesar şi procedură: metoda difuzimetrica cu rezultatele testarii cantitative
ca
Expunerea defineste influenta pe care - suspensie a tulpinii de testat (cultura pură) cu
 modul de administrare, densitatea de 10la a 8 UFC/ml, apreciată cu standardul de 0,5
doza, intervalul dintre doze, McFarland;

distributia si - impregnarea cu această suspensie a unui tampon de vată

steril 🡪 însămânţare uniform suprafaţa mediului
eliminarea antibioticului din organism o au Mueller-Hinton;
asupra agentului etiologic la locul infectiei. - depunerea microcomprimatelor cu antibiotice;
- incubare la 35º ± 1° C, timp de 18 ± 2 ore;
- antibioticul difuzează circular în mediu,🡪 concentraţii
descrescătoare în raport cu distanţa faţă de microcomprimat;

Cultura este inhibată în zona în care antibioticul

realizează concentraţii ≥ CMI.
Control de calitate:
3. Metode cantitative A. Metoda microdiluţiilor în mediu lichid -în paralel procedăm asemănător cu o tulpină de referinţă
(ATCC), 🡪verificăm respectarea condiţiilor standardizate de
lucru
Principiu: un inocul standardizat al tulpinii testate Necesar şi procedură:
🡪însămânţat într-un gradient discontinuu de concentraţii de - realizarea de diluţii duble succesive de antibiotic în
antibiotic; după incubare este urmărită CMI. bulion Mueller-Hinton; Citire şi interpretare:

- volum fix din suspensia de 5x105UFC/ml a tulpinii de

Indicaţii: testat;  CMI corespunde celei mai mici concentraţii de antibiotic
- precizarea categoriei de sensibilitate a unei tulpini - martor cultivare + martor sterilitate mediu; (μg/mL), care determină inhibarea vizibilă a creşterii, comparativ
clasificate in categoria “I” prin antibiograma cu martorii pentru cultivarea tulpinii şi sterilitatea mediului;
difuzimetrică;
- determinarea sensibilităţii bacteriilor fastidioase;
- testarea sensibilitatii S. aureus faţă de vancomicină si
teicoplanina
- testarea sensibilitatii bacililor Gram-negativi la colistin
- incubarea mediilor la 35 ± 1° C, timp de 18 ± 2 ore.  raportăm această valoare la cele două concentraţii
critice, maximă (C) şi minimă (c) pentru definirea tulpinii ca
S, I sau R
!!!! Rezultatul este formulat după ce am verificat
dacă, CMI a tulpinii de referinţă se încadrează
între valorile recunoscute de standard. Avantaje: determinarea cu exactitate a CMI.
Dezavantaje: realizarea testării faţă de un singur antibiotic, cu un
consum mai mare de materiale.

B. Testul E

 acuratețea testării cantitative + simplitatea testării

difuzimetrice cu mare economie de timp;
 pe o suprafață a unei benzi inguste din plastic inert este
fixat un gradient exponențial de antibiotic, cu marcarea
scalei de lectură corespunzătoare CMI (în μg/ml);

benzile cu antibiotic sunt depuse radiar pe suprafața unei

plăci cu mediu agar Mueller Hinton, preînsămânțată cu
tulpina testată în condiții standardizate.

După incubare🡪, CMI 🡪intersecția dintre zona elipitică de

inhibiție a culturii și scala de gradiente a benzii;
 testul este fiabil, reproductibil și permite determinarea
 concomitentă, a CMI pentru mai multe antibiotice.
Hemocultura = însămânţarea şi
incubarea într-un mediu de
cultură adecvat a unei probe de
sânge, în scopul izolării şi
identificării bacteriilor pe care
le conţine.
Specii bacteriene izolate frecvent şi cu
semnificaţie clinică din hemocultură:
Staphylococcus aureus
Streptococi α hemolitici
(streptococi viridans)
Streptococi β-hemolitici de grup
A, B, C, G
Pneumococi
Enterococi
Haemophilus influenzae tip b
Particularităţile hemoculturii:
- numărul mic de bacterii prezente în sânge (efectul
bactericid al sângelui) → ce volum de sânge trebuie să
recoltăm?
- descărcările bacteriene în sânge sunt intermitente →
câte probe trebuie să recoltăm? când şi cum ?
Indicaţiile hemoculturii:
- bacteriemii cu mai multe posibile etiologii
- endocardită infecţioasă
- sindrom sugestiv 🡪infecţie sistemică cu bacterii strict
patogene: salmonele tifoidice, Leptospira, Brucella
- sindrom febril de origine neprecizată
- stări febrile<-- cateterism venos prelungit, dializă
peritoneală, etc.
A.Tehnica prelevarii: 3. volumul prelevărilor
A.Tehnica prelevării
▪cele 2-3 prelevări 🡪vene diferite, de fiecare dată în cel puţin 2 flacoane
diferite
▪ decontaminarea zonei de puncţie, prin stergerea prin miscari circulare,
folosind tampoane cu alcool 70°, ulterior tampoane cu betadina sau
clorhexidina si, la final, uscare timp de 30 secunde.
▪ pregătirea flacoanelor cu medii de cultură – medii preîncălzite la 37ºC ;
dezinfecţia membranei de cauciuc
▪ recoltăm 10 ml de sange/flacon, minimum 5 ml.
▪ agitarea blândă a flaconului
▪ transportul cât mai rapid la laborator
NU se folosesc anticoagulante clasice ( oxalate, EDTA) din cauza
efectului toxic asupra bacteriilor🡪 se foloseste LIQUOID –polianetol
sulfonat de Na care e toxic numai pentru gonococ si meningococ
B. Incubarea hemoculturilor şi urmărirea lor
Bacili gram-negativi fermentativi a. prelevarea hemoculturii:
(Escherichia coli, Klebsiella spp., 1. medii de cultură:
Enterobacter spp.)
- medii lichide cu valoare
Pseudomonas aeruginosa
nutritivă mare 🡪 creşterea unei
Bacterii anaerobe game largi de bacterii si fungi
o pentru anaerobi: flacoane cu
atmosferă anaerobă
o medii pentru sistemele automate
de urmărire a hemoculturilor
2.numărul prelevărilor
o în bacteriemii continue (ex.
endocardita) – 2 prelevări
o în bacteriemii intermitente – 3
prelevări în 24 ore, în caz de
urgenţă la interval de 30-60
minute
o la adult - 20 ml per
prelevare
o nou-născuţi, sugari şi
copii mici – 1-3 ml
(concentraţia bacteriilor în
sânge este mai mare decât la
adult
4. momentul
prelevării
o înaintea instituirii
antibioticoterapiei
o cât mai aproape de
debutul bolii
o în momentul apariţiei
frisoanelor sau în cursul
evoluţiei ascendente a
curbei febrile
o în bacteriemii continue
(endocardita infecţioasă)
o urmărire 7 zile 🡪examinare macroscopică, microscopică şi prin subcultivare
o endocardite infecţioase,
pacienţi trataţi cu antibiotice,
suspectarea unor microorganisme pretenţioase nutritiv urmărire timp de 14-21 de zile
1.examenul macroscopic –
de 2 ori pe zi în primele 3 zile, apoi zilnic, cu aprecierea semnelor creşterii:
o prezenţa coloniilor sau a unui depozit pe stratul de hematii
o tulburarea mediului
o hemoliza
o coagularea mediului
o prezenţa bulelor de gaz
2. examenul microscopic - frotiuri Gram efectuate din flacoane.
3. subcultivarea
▪ hemocultură cu creştere evidentă – subcultivare pe medii adecvate bacteriei
observate la examenul microscopic, în atmosferă adecvată în funcţie de flaconul în care
a apărut creşterea.
 – oricând în cursul zilei
C. Interpretarea rezultatelor → argumentarea semnificaţiei clinice ▪ se pot efectua teste de identificare pe cultură primară şi antibiogramă pe
a bacteriei izolate cultură primară, ce va trebui confirmată prin antibiograma standardizată a
subculturii.
argumentele bacteriologului:
▪ izolarea aceleiaşi bacterii în mai multe flacoane ale unui set de 4.identificarea bacteriei izolate
hemocultură sau în hemoculturi repetate din sedii venoase diferite
5.testarea sensibilităţii la antibiotice
semnificaţie clinică
▪ izolarea unor bacterii diferite din flacoanele hemoculturilor de la acelaşi
pacient ⇨ contaminare
▪ izolarea a ≥ 2 specii bacteriene din aceeaşi hemocultură de cel puţin 2
ori în 24 ore ⇨ bacteriemie polimicrobiană

argumentele clinicianului
▪ vârsta şi statusul imun al pacientului
▪ particularităţile focarului septic primar
 I. Examenul bacteriologic al puroiului. Prelevarea puroiului: A. Examenul macroscopic (pentru puroiul C. Cultivarea probelor
Prelevarea din colecţii purulente. prelevat în seringă): Izolarea calitativă din puroi
Puroi = exsudat fibrinos care conţine leucocite şi - se recoltează prin puncţie aspiraţie cu un ac suficient - consistenţa: Medii utilizate:
microorganismul implicat. de gros adaptat unei seringi etanşe; cremos – infecţii stafilococice, ● geloză-sânge
- puroiul se transportă la laborator în maximum 1-2 ore; lichid – infecţii streptococice; ● mediu cu selectivitate joasă pentru bacili
Gram-negativi (MacConkey)
- in suspiciunea de infectie determinată de anaerobi cazeos->tuberculosis
● bulion tioglicolat (în cazul probelor
Supuraţie = formarea puroiului. puroiul se transferă în flacoane cu atmosferă anaerobă - culoare: galben, roşu-brun (e.g. Serratia), necontaminate)
sau în tuburi cu bulion tioglicolat; ● haemophilus->agat chocolat
O supuraţie este cauzată de evoluţia spontană a -verzui pnemococ
● Thayer martin ->neisseria
unei infecţii cu germeni piogeni (care provoacă - “seringa anaerobă”- asigură supravieţuirea bacteriilor -albastru-verzui (e.g. Pseudomonas);
anaerobe maximum 30 minute; este folosita doar în Incubare:
apariţia puroiului).
absența flacoanelor cu atmosferă anaerobă. - miros: fetid, fecaloid - anaerobi. ● temperatură 37 °C,
Ea poate proveni dintr-o colecţie purulentă
● atmosferă cu 5-10% CO2,
(abces, cu localizare superficială sau profundă), ● timp de 24-48 ore.
putând fi localizat într-un organ (ex. ficat,
plămân, creier, rinichi). Prelevarea cantitativă cu tamponul
B. Examenul microscopic: Izolarea cantitativă din plăgi şi arsuri
O supuraţie se elimină dintr-un abces fie - se face toaleta plăgii: se îndepărtează ţesutul necrotic În cazul prelevării cu tamponul - efectuarea
- se obţine suspensia mamă prin rotirea şi
spontan, prin intermeidul unei fistule (canal şi se spală cu ser fiziologic pentru îndepărtarea frotiului se face de către persoana care a
exsudatului stagnant sau a eventualelor urme de stoarcerea insistentă a tamponului în bulion
patologic), fie prin incizie chirurgicală. recoltat proba: pe o lamă de microscop se
antibiotic; tioglicolat pentru descărcarea conţinutului, apoi îl
rulează tamponul pentru a obţine un frotiu stoarcem prin presare insistentă pe peretele
- învârtim tamponul umezit cu soluţie Ringer pe o arie subţire şi uniform. Frotiurile şi tamponul tubului;
Etiologie bacteriana (mai frecvent):
de 1 cm2, până la sângerare uşoară (pentru a avea introdus în mediul de transport vor fi trimise
Staphylococcus aureus certitudinea că prelevăm din ţesutul viabil; se poate împreună la laborator. - se realizează diluţii zecimale în bulion tioglicolat şi
preleva din mai multe puncte ale leziunii); etalăm câte 0,1 ml pe câte o placă cu geloză sânge
Streptococcus pyogenes
pentru incubare in aerobioza şi una pentru
Escherichia coli - se introduce tamponul într-un mL de bulion tioglicolat - coloraţie Gram şi/sau Ziehl Neelsen incubare in anaerobioza (in cazul probelor recoltate
Klebsiella spp. şi se transportă imediat la laborator. Examenul citologic: din plagi profunde);

Enterobacter spp.
Pseudomonas aeruginosa
Acinetobacter baumannii
Mycobacterium tuberculosis
Anaerobi: Clostridium,
Prevotella, Fusobacterium
- prezenţa şi tipul leucocitelor
Examnul bacterioscopic :
-se apreciază semicantitativ
bacteriilor
Prelevări biopsice ● foarte rare : 1/50-100 câmpuri
Porphyromonas,
- indicate când conduita terapeutică impune ● rare 1/10-20 câmpuri
cunoaşterea concentraţiei bacteriene în ţesuturile
viabile afectate prin arsuri sau traumatism şi ● numeroase 1-10/câmp
extinderea leziunilor; - categoria microscopică a bacteriilor
- se face toaleta plăgii; observate
- prelevarea se face cu perforatorul dermic;
- facem citirea la 24-48 de ore pentru placa
incubată in aerobioza şi la 48-72 ore, pentru cea
incubată in anaerobioza;
prezenţa - se calculează concentraţia bacteriilor de pe
tampon după formula:
Nr UFC/tampon=NxDx10, unde
N= nr coloniilor de pe placă
D = inversul diluţiei
10 - pentru că am însămânţat 0,1 mL

Interpretarea rezultatelor:
a) izolatele în cantitate >106 UFC/tampon au
- proba se expediază la laborator într-un tub închis semnificaţie clinică;
ermetic. b) streptococii beta hemolitici au semnificaţie
clinică indiferent de cantitatea în care sunt
izolaţi;
c) izolatele în cantităţi de 103-4 UFC/ g ţesut au
semnificaţie clinică dacă examenul
histopatologic confirmă prezenţa infiltratului
inflamator, a leziunilor de vasculită şi
 tromboză.

D. Identificarea agentului etiologic pe baza

caracterelor: microscopice, de cultură, biochimcie
și antigenice.
E. Testarea sensibilitatii la antibiotice, în funcție de
categoria microscopică observată, dar și de alte
criterii (lozalizarea supurației, starea
fiziologică/patologică a pacientului, etc.)
Caractere microscopice: 1. a. Pseudomonas aeruginosa 1. b. Genul Acinetobacter
● bacili Gram negativi Caractere microscopice:
Caractere microscopice: bacili gram-negativi, drepţi
- lungi, fini (Pseudomonas spp)
sau uşor încurbaţi, fini, dispuşi izolat, în perechi sau ● bacili gram-negativi, scurţi şi groşi,
- scurti, groși până la cocoizi
scurte lanţuri. chiar cocoizi, cu dispoziție neregulată
(Acinetobacter spp, Flavobacterium
sau în diplo.
spp)
● unele specii sunt mobile
● pot fi capsulați ● frecvent capsulaţi,
Caractere de cultivare: ● imobili
● cresc la temperaturi între 5-42ºC,
Caractere de cultura:
● colonii cu tendinţă de invadare a mediului, cu Caractere de cultivare:
● aerobi, miros caracteristic (flori de tei sau iasomie),
● nepigmentogeni
● nepretențioși nutritiv ● produc pigmenţi fluorescenţi difuzibili în mediu
● unele specii produc pigment (piocianină, pioverdină, piorubrină, piomelanină),
(Pseudomonas aeruginosa, ● tulpini nepigmentate (frecevent mucoide), in Caractere biochimice
Flavobacterium spp) cazul celor izolate de la pacienti cu fibroză chistică
(mucoviscidoză).
Sensibilitate naturală la antibiotice:
imipenem, meropenem, aztreonam,
Caractere biochimice: ● culturile au luciu metalic şi plaje de liză, ciprofloxacină, levofloxacină, amikacină,
● nu fermentează glucoza ● pe geloză-sânge, coloniile sunt hemolitice. gentamicină, netilmicină, tobramicină,
● unele specii sunt oxidazo-pozitive colistin, trimetoprim-sulfametoxazol.

Testul oxidazei:
- se depun 2 - 3 picături de reactiv pentru
oxidază pe o banda de hârtie de filtru; cu Caractere biochimice
o ansă de plastic se etalează un fragment
din colonia selectată;
- reacţie negativă: absenţa schimbării
culorii reactivului după 10 secunde.
- reacţie pozitivă: schimbarea culorii
reactivului în violet sau albastru închis.
Sensibilitate naturala la antibiotice: piperacilina,
ticarcilina, penicilinele cu inhibitori de beta-lactamaza,
cefepim, ceftazidim, imipenem, meropenem,
aztreonam, ciprofloxacina, levofloxacina, amikacina,
gentamicina, netilmicina, tobramicina, colistin
LP 23. Diagnosticul infecției Prelevare - 1-2 ml de scaun a. Teste screening – b. Teste de confirmare: Algoritm de diagnostic etiologic
determinate de Clostridioides diareic, din cel putin 3 zone DOAR la pacienții cu 1. Detectarea toxinelor A și B
difficile Se recomandă un diagnostic în 1-3 etape, aplicabil doar în laboratoarele care au posibilitatea efectuării atât a testelor de detecție rapidă cât și a cultivării :
distincte ale prelevatului manifestări clinice prin metode imunoenzimatice:
(fost Clostridium difficile).
evocatorii de ICD
- dacă detecția toxinelor
nu se poate efectua în a. Efectuarea unui test de detecție a prezenței toxinelor/genelor care le codifică:
- prezent în microbiota 1. Cultivare - metodă cu - direct din materii fecale sau
primele 2 ore după ∙ rezultatul pozitiv confirma diagnosticul de ICD;
intestinală (1-4% adult, 30- sensibilitate crescută, dar din supernatantul culturilor în
recoltare, proba se poate ∙ daca rezultatul este negativ se trece la a doua etapă.
40% copii < 1 an) lenta bulion.
păstra timp de cel mult 2 b. Cultivarea probei de scaun pentru izolarea de anaerobi:
-produce - bacterie nepretențioasă
zile la 4°C (la ∙ absența culturilor face improbabil diagnosticul de ICD;
nutritiv; proba prelucrată
temperatura camerei - Metodele tip ELISA, ELFA și ∙ în cazul izolării de colonii identificate drept C. difficile se trece la a treia etapă.
se însămânțează pe
toxina se degradează imunocromatografice au c. Efectuarea unui test de detecție a toxinelor/genelor care le codifică din cultura bacteriană :
medii de cultură
după 2 ore) performanțe similare, mai ∙ dacă este pozitiv se confirmă ICD
(selective și neselective)
reduse decât ale testelor de ∙ dacă este negativ este foarte probabilă colonizarea cu C. difficile iar boala actuală are o altă etiologie.
– toxina A (enterotoxină) – - strict anaerob
citotoxicitate, variind între 25-
alterează permeabilitatea - incubare 48-72 ore,
89%. Justificarea algoritmului:
epiteliului intestinal 37°C
- identificarea coloniilor ∙ testele imunoenzimatice/PCR au specificitate foarte bună și identifică tulpinile toxigene – diagnostic confirmat
- toxina B (citotoxină) –
suspecte - Se recomandă folosirea ∙ în special testele imunoenzimatice, dar și PCR pot furniza rezultate fals negative, de aceea se trece la cultivare pentru a crește șansa identificării unei tulpini toxigene de C. difficile.
lezează mucoasa colică
- ex. microscopic (bacili testelor care urmăresc
- prezintă rezistență naturală Pentru pacienții cu teste negative sau la care s-au izolat tulpini netoxigene decizia de tratament adecvat a ICD este la latitudinea medicului curant.
gram pozitivi, sporulați, concomitent prezența toxinelor
la numeroase antibiotice. spor oval, deformant, A și B.
central/subterminal) și
test de aglutinare C.
C. difficile (tulpini toxigene) 2. Detectarea genelor care
Difficile
determină colita codifică toxinele C. difficile prin
pseudomembranoasă post
2. Detectarea enzimei metode moleculare:
antibiotico-terapie
GDH (glutamat - este în prezent tehnica
(cefalosporine,
dehidrogenaza) prin
optimă pentru stabilirea
fluorochinolone,
metode imunoenzimatice
diagnosticului etiologic.
clindamicină,
 - se recomandă folosirea
truselor comerciale de
real-time PCR pentru
detectarea genelor ce

amoxicilina&acid codifică toxinele de C.

clavulanic). difficile (A, B sau toxină

binară).
Indicații de testare:
- sensibilitatea și
∙ toți pacienții la care specificitatea metodelor
diareea apare după 48 de ore moleculare este ridicată și
de la internare oferă un diagnostic rapid.
- metoda are sensibilitate
- Limite: necesită
∙ diaree sau alte tablouri ridicată, însă
infrastructura adecvată
clinice sugestive la pacienți specificitate redusă (nu
.
care au avut spitalizări face diferența între
3. Teste de citotoxicitate pe
recente sau tratament la tulpinile toxigene și
culturi celulare
domiciliu cu antibiotice netoxigene).
(cefalosporine, - au sensibilitatea cea mai
fluorochinolone, ridicată și sunt considerate
clindamicină, ”gold standard”.
amoxicilina&acid
- Limite: durata detectării din
clavulanic), antisecretorii
proba de scaun este de
gastrice, imunosupresoare.
aproximativ 2 zile, necesită
echipament de laborator adecvat
pentru culturi celulare și
personal instruit în acest
domeniu.
Diagnosticul infecției A) Diagnostic direct Metode neinvazive
determinate de Prelevare A. Testul respirator cu uree marcată – metodă neinvazivă care depistează dioxidul de carbon marcat radioactiv eliminat în aerul expirat după ce se
administrează uree marcată cu izotop 13C sau 14C. Util mai ales pentru demonstrarea eradicării infecției (la o lună post-terapie).
Helicobacter pylori.
I) fragment biopsie gastrică (metodă invazivă)
II) materii fecale
B. Diagnostic indirect – diagnostic serologic (ELISA, IF, WB)
I) fragment biopsie gastrică
- anticorpii persistă mulți ani
a) Ex. microscopic - bacili gram negativi spiralați sau
- titrul anticorpilor nu se corelează cu gravitatea infecției sau cu răspunsul la terapie
încurbați, nesporulați
- util în studii epidemiologice și în evaluarea inițială a unui pacient simptomatic
b) Izolare
– pretențios nutritiv
– medii îmbogățite (suplimentate cu sânge, hemină
și cărbune) și selective (antibiotice)
- microaerofil
- cultivă lent (3-6 zile), la 30°- 37°C
- catalază pozitiv, oxidază pozitiv,
urează pozitiv
c) Testul ureazei
– fragment de biopsie + soluție uree și indicator de
pH => reacție pozitivă = culoare roșie WB- Ac anti-cagA (pentru identificare)

WB- utilizata pentru a detecta prezenta anticorpilor specifici H. Pylori

d) Teste de biologie moleculară
-antigene diferite fixate pe benzi de nitroceluloza prin migrare in camp electroforetic, la distante diferite in functie de greutatea moleculara
Interpretare :
Infecția poate evolua atât la pacienții cu cancer gastric
cât și la cei fără această neoplazie => este indicată
Pozitiv : colorarea benzii corespunzatoare antigenului de 120 kDa CagA (citotoxina) si a cel putin doua benzi corespunzatoare antigenelor cu greutate
biopsia gastrică deoarece evidențiază și transformarea
moleculara de 95 kDa VacA (toxina vacuolizanta), 33 kDa, 29 kDa UreA, 26 kDa, 19 kDa si 17 kDa.
malignă a celulelor.

Negativ : absenta colorarii benzilor

II) materii fecale – detecție antigenică în materii fecale
Indicatii : gastrita, ulcer gastric, ulcer duodenal.
(ELISA sau imuncromatografie).
Prezenta benzilor VacA si/ sau CagA- frecventa mai mare la pacienti cu ulcer duodenal, gastrita atrofica si carcinom gastric.
 LP. 24 Identificarea
micobacteriilor
Diagnosticul de laborator al
tuberculozei pulmonare
1. Identificarea micobacteriilor:
Mycobacterium tuberculosis
● Identificare preliminară
- Caractere microscopice: bacili
fini, granulaţi, uneori ramificaţi, 2. Diferenţierea:
aşezaţi în litere unghiulare, acido-
alcoolo-rezistenţi (BAAR), imobili,
nesporulaţi, necapsulaţi.
Pe frotiul de cultură în mediul
lichid pot fi dispuşi paralel sau în
corzi flexuoase.
2. Coloraţia Ziehl Neelsen
● Etape:
1. Colorarea
- fucsină fenicată Ziehl; se încălzeşte
lama până colorantul emite vapori.
-se repetă încălzirea cu intermitenţă
timp de 3-5 minute; după răcire se
spală cu apă.
-soluţie alcool etilic - acid clorhidric;
-se decolorează până când frotiul
rămâne alburiu după spălare cu apă.
3. Etapele diagnosticului de laborator al D. Izolarea pe medii de cultură: mediu 5. Testele de eliberare de interferon
tuberculozei pulmonare Lőwenstein Jensen, agar Middlebrook -
gama (Interferon-Gamma Release Assays -
incubare la 37ºC şi urmărire săptămânal timp
A. Prelevarea şi transportul produselor de 3 luni. IGRA):
patologice.
- măsoară reactivitatea imună a gazdei la
- sistemele automate de cultivare, care prezenta M. tuberculosis.
Se prelevă, de regulă, spută realizeaza detecţia fluorescentă a consumului - sunt efectuate pe sange venos integral
- 3 probe consecutive, recoltate la 8-24 ore de O2 sau detecţia colorimetrică a CO2, proaspăt
interval, cel puţin una fiind prima proba scurtează timpul de detecţie a culturii.
matinală Principiu. Limfocitele T din sangele unei
persoane infectate cu M. tuberculosis vor fi
Interpretare
activate si vor elibera interferon gama
-aspirat traheo-bronşic, lichid de spălătură
atunci când sunt puse in contact cu
bronşică sau spălătură gastrică, lichid
pleural (pleurezie tuberculoasă). Prezenţa culturii - confirmă diagnosticul. antigene ale M. tuberculosis.
Absenţa culturii - nu exclude diagnosticul, Interpretare:
deoarece pot exista leziuni închise care - test pozitiv: prezenta infectiei cu M.
- Se transportă la laborator în mai puţin de elimină intermitent cantităţi mici de bacili (de tuberculosis, dar fara a putea face
o oră. diferenta intre infecția latentă si boala
aceea se fac culturi repetate) sau tulpinile
tuberculoasă
- Refrigerarea probelor care nu sunt sunt mai pretenţioase nutritiv
- test negativ: absenta infectiei cu M.
examinate într-o oră.
tuberculosis

- Caractere de cultură: sunt
bacterii pretenţioase nutritiv
(cultivă pe mediul Lőwenstein
Jensen, mediul Middlebrook), cu
creştere lentă (primocultura
apare după 2-4 săptămâni),
aerobi sau microaerofili. Forma
de cultură R: coloniile sunt
conopidiforme, rugoase, uscate,
grunjoase, de culoare crem bej.
● Identificare de certitudine:
- Identificare biochimică
- Identificare antigenică:
- detecţie de antigene specifice
M. tuberculosis prin
imuncromatografie
- Identificarea acizilor graşi din
peretele bacterian prin gaz
cromatografie
- Identificare genotipică prin
3. Recolorare: Avantaje
-albastru de metilen, 30 secunde, B. Decontaminarea chimică a sputei se 4. Particularităţile testării sensibilităţii la ● testul nu este pozitiv la persoane
apoi se spală. face cu o soluţie de NaOH 4% . vaccinate BCG;
antituberculoase
● rezultatele pot fi disponibile în 24 de
- antibiograma – metoda dilutiilor putin ore.
● Rezultate: BAAR sunt roşii iar C. Examenul microscopic: modificata
bacteriile neacido-alcoolo- Dezavantaje
● Examinarea unui frotiu de spută colorat - mediul Lőwenstein Jensen suplimentat
rezistente şi leucocitele sunt
Ziehl Neelsen (se examinează 100 cu antituberculoase
albastre.
câmpuri, obiectiv 100X) ● Datele limitate privind utilizarea IGRA
● Controlul de calitate: se colorează pentru a aprecia evolutia către boala TB
Ziehl Neelsen şi se examinează - antituberculoase de linia I: izoniazidă,
două frotiuri: Rolul examenului microscopic: pirazinamida, etambutol, rifampicină ● Datele limitate privind utilizarea IGRA la:
copii mai mici de 5 ani; persoane recent
- identifică genul bacteriilor, dar nu şi streptomicina, expuse la M. tuberculosis; persoanele
specia; - antituberculoase de linia a-II-a: etionamida,
-unul dintr-o suspensie de bacili imunocompromise
cicloserina, capreomicina, fluorochinolone
neacido-alcoolo-rezistenţi
(ofloxacina), aminoglicozide (kanamicina),
- depistează rapid bacilii tuberculozei; ● Cost ridicat.
rifabutin, viomicina, acid para-aminosalicilic
(PAS).
-celălalt dintr-o suspensie de bacili
acido-alcoolo-rezistenţi. - depistează BAAR care nu cultivă în - metode moleculare – evidenţierea genelor
condiţiile oferite. de rezistenţă:
Pe primul frotiu vedem numai bacili
albaştri iar pe al doilea numai bacili Interpretare: -gena rpoB (rezistenta la RIF),
roşii.
- Bacterioscopia pozitivă are întotdeauna - gena inhA (rezistenta la HIN)-izoniazida
tehnici de biologie moleculară semnificaţie clinică de infectant;
(sonde de acizi nucleici/PCR) Tulpina MDR (multidrog rezistentă) –
- Bacterioscopia negativă nu exclude rezistenţă simultană la RIF şi HIN cu/fără
diagnosticul de tuberculoză dată fiind rezistenţă la alte antituberculoase de linia I.
sensibilitatea redusă a microscopiei.

Număr de Rezultat
bacili/câmp
0/100 câmpuri Absenţi BAAR
1-3/100 câmpuri Se examinează 300
4-9/100 câmpuri câmpuri

10-99/100 câmpuri Se comunică

numărul
1-9/câmp
Slab pozitiv (+)
>10 câmp
Moderat pozitiv (+
+)
Intens pozitiv(+++)

Lp 25: Identificarea spirochetelor. Diagnosticul de
laborator al sifilisului.
Diagnosticul de laborator al leptospirozei
2. Diagnosticul de laborator în
suspiciunea de sifilis
Diagnostic direct
Diagnostic indirect (util pentru screening și stadiul III)
Teste serologice nespecifice / non-treponemice:
testele pozitive se confirmă prin teste specifice
o Western blot (alternativă, ca test de
confirmare în loc de FTA-Abs și
MHA-TP)
Folosește antigene recombinante din
membrana lipidică. Este mai specific.

\\\\\\\\\\\\\\\\\\ Produse patologice:

o VDRL (Venereal Disease Research Laboratory)
– serozitate exprimată prin
comprimarea bazei şancrului
(stadiul I) o RPR (Rapid Plasma Reagin)
– aspirat din puncţia ganglionilor - depisteaza Ac tip reagine faţă de Ag cardiolipinic
afectaţi (stadiul I) - sunt rapide şi ieftine
– raclat din elemente eruptive - utilizate pentru urmărirea eficienţei terapiei
cutanate sau mucoase (stadiul II)
- reacţii fals pozitive: boli acute febrile, vaccinare recentă,
sarcină, boli autoimune sau de colagen, infecţii hepatice cu
Microscopie optică pe fond distrucţie tisulară, etc. WB – diagnostic sifilis (sursa: Hagedorn
întunecat (preparat umed lamă – H-J et all, Evaluation of INNO-LIA
lamelă) Syphilis Assay as a confirmatory test for
- numai VDRL poate fi utilizat pentru testarea LCR la syphilis, 2002).
- treponeme strălucitoare, subţiri, pacienţi suspectaţi de neurosifilis
spiralate, cu capete efilate, VDRL Principiu-Ag lipic ramane dispersat cu serul normal, dar
mobile formeaza aglutinate vizibile cand se se combina cu reaginele Diagnosticul sifilisului congenital
- titrarea în dinamică la interval de 6 luni a

■ S-au descris 3 tipuri de antigene:
- o haptena lipidică, cardiolipinul, comun tuturor
treponemelor, dar si altor ţesuturi;
- antigenul proteic de grup, comun pentru
treponemele patogene și cultivabile (tulpina
Reitter);
- Ag poliozidice şi proteice proprii trepone-melor
patogene (tulpina Nichols de T. pallidum,
întreţinută prin inocularea intratesticulară a iepu-
relui).
. - rămân pozitive cand cele nespecifice sunt negative (sifilis
Ac
- poate da reacţii fals pozitive - depistarea Ac tip IgM
(treponeme orale) /fals negative
(sensibilitatea redusă)
IFD – metodă sensibilă şi
specifică
Impregnare argentică- pe
secţiuni histologice
Teste serologice specifice / treponemice:
- evidenţiază anticorpi specifici (specificitate 97-99%)
- se pozitivează înaintea celor nespecifice
tertiar)
- sunt mai puţin influenţate de terapie
o FTA-ABS (Fluorescent treponemal antibody absorption)
- IF indirectă cu seruri adsorbite cu suspensii de T. Reitter;
- departajează Ac IgM de cei IgG (util pentru diagnosticul
infecției la nou-născut)
o TPHA (Treponema pallidum hemagglutation)
- hemaglutinare pasivă
- reacţie calitativă
- testele pozitive persistă după vindecare

Variante ale TPHA:

TPPA (Treponema pallidum particle agglutination) -
foloseşte particule inerte în locul hematiilor
MHA-TP (test de microhemaglutinare)

Altele: EIA și WB
TPHA, FTA-Abs și EIA – utilizate, de regulă, ca teste de
confirmare
3. Diagnosticul de Examen Tehnici de Teste alternative:
laborator al microscopic: biologie - hemaglutinarea indirectă
leptospirozei a. Microscopia pe moleculară - aglutinarea pe lamă
fond întunecat: - PCR - ELISA
Diagnosticul → indicată pentru - Metode de → mai puţin sensibile sau specifice
direct in sedimentul urinar hibridizare directă → folosesc antigene preparate din
leptospiroza: şi LCR tulpini saprofite
→ în sânge Diagnosticul
Clasificarea expansiunile serologic in
leptospirelor: fibrilare ale leptospiroza

- tulpinile patogene hematiilor pot fi Reacţia de

sunt reunite în confundate cu aglutinare
specia Leptospira leptospirele microscopică =
interrogans (e.g. metoda de referinţă
serovaruri → metodă lipsită
Icterohaemorrhagi de sensibilitate şi - măsoară
ae,) nespecifică capacitatea serului
pacientului de a
- tulpinile b. aglutina leptospire
nepatogene au fost Imunofluorescenţ vii;
încadrate în specia a directă = metodă
Leptospira biflexa specifică - utilizează
Cultivarea: antigene specifice
Produse de tip preparate din
patologice: → Izolare din tulpini patogene;
- sânge sânge sau LCR în
- LCR primele 10 zile de - practicată doar în
- urină boală laboratoarele de
- postmortem: referinţă.
microfragmente → Izolare din urină
de ficat, corticală după prima Aglutininele apar
renală, plămâni, săptămână de în a doua
suprarenale. boală, timp de 3 săptămână de
luni boală.
→ Sunt necesare Titrul la pacienţii
mai multe probe infectaţi este
deoarece > 100 (în cazul
concentraţia seroconversiei) și
leptospirelor poate > 400 pe probă
fi scăzută; unică.(dinamica
semnificativa-
→ Cultivă optim la cresterea titrului de
28-30 ºC, în cel putin 4 ori)
aerobioză, pe
mediu de cultură Se mai utilizează în
lichid Korthof studii de
îmbogăţit cu ser de supraveghere,
iepure; pentru depistarea
→ Culturile se unor infecții latente
urmăresc până la (pentru grupe
30 de zile prin profesionale cu risc
microscopie pe crescut – lucrătorii
fond întunecat la în salubritate).
intervale de 5 zile.

LP26 Identificarea
neisseriilor 2. Condiţia microbiologică a tractusului I Uretrita gonococică d)
Diagnosticul de uretrită non-gonococică se
genital
pune prin excluderea celei gonococice. Identificare:
Bolile cu transmitere a. masculin: ▪ biochimică: -
oxidază-pozitiv, catalază-
sexuala - uretra distală - normal colonizată cu bacterii a) Prelevare şi transport: pozitiv
de pe tegument şi colon - spectrul de fermentare a

1. Identificarea neisseriilor b. feminin:
Minidefiniție:
- nesseriile sunt diplococi cu
fețele adiacente aplatizate
(aspectul boabelor de cafea)
- imobili, gram negativi, au
tendința de a rezista la
decolorare
- strict aerobe, cultivă optim
la 35 - 37⁰ C
- sunt oxidazo- și catalazo-
pozitivi.
Specii cu habitat uman strict
patogene:
- Neisseria meningitidis
(meningococul)
- Neisseria gonorrhoeae
(gonococul) ->
- uretra proximală - necolonizată, ocazional
contaminată
- prostata, canalele ejaculatoare, veziculele
seminale, canalele deferente, epididim -
normal sterile.
- vulva, vagin, exocol- normal colonizate
• primele saptămâni de viaţă: lactobacili
• prepubertar: bacterii de pe tegumentul
perineal
• de la pubertate şi până la menopauză:
lactobacili predominant, anaerobi,
Gardnerella vaginalis, Candida
• postmenopauza: bacterii de pe tegumentul
perineal
- uter, trompe – sterile
3. Infecţii cu transmitere sexuală
▪ secreţie uretrală zaharurilor
▪ dimineaţa sau la minimum 4 ore de la
ultima micţiune
▪ după toaleta locală ▪ antigenică
▪ 3 tampoane (din dacron sau vată atoxică) e) Antibiogramă (în caz de
▪ primul tampon: 2 frotiuri realizate eşec terapeutic)
extemporaneu f) Metode de biologie
▪ al 2-lea tampon: însămânţare imediată moleculară: fără amplificare
sau includere în mediu de transport Amies sau (sonde de acizi nucleici) sau
Stuart şi transport în atmosfera cu CO2. cu amplificare (PCR)
▪ al 3-lea tampon (facultativ): pentru
izolarea agenţilor etiologici non-gonococici
II. Endocervicita
gonococică
a) Prelevare şi transport
3 tampoane de
b) Examen microscopic: frotiuri exsudatul cervical din
colorate cu albastru de metilen şi Gram endocol după ştergerea
▪ ≥ 5 PMN /câmp = uretrită acută exocolului cu tampoane
▪ diplococi gram negativi „în boabă de cafea” sterile
asezaţi predominant intracelular = aspect • primul tampon:
caracteristic pentru uretrita acută gonococică la examen microscopic
bărbat – valoare diagnostică la bărbaţii • al 2-lea tampon:
simptomatici (specificitate >99% , sensibilitate însămânţare imediată sau
>95%) includere în mediu de
▪ în infecţia cronică dispoziţia este transport Amies sau Stuart
extracelulară, situaţie în care nu-i putem
• al 3-lea tampon
diferenţia de neisseriile nepretenţioase
(facultativ): pentru
c) Cultivarea: diagnosticul infecţiei cu C.
▪ se realizează în caz de eşec terapeutic şi în trachomatis, VHS
infecţia cronică

▪ mediul agar chocolat (neselectiv) sau agar

Thayer-Martin (agar Mueller-Hinton b) Examen microscopic:
În prelevatele patologice nespecific (nu poate
chocolat cu antibiotice, deci mediu selectiv)
speciile patogene apar diferenţia neisseriile
predominant intracelular, în patogene de neisseriile
nepatogene)
citoplasma fagocitelor
c) Cultivare obligatorie –
 pe medii selective şi
neselective
d) Identificare
e) Antibiograma
f) Metode de biologie
moleculară (sonde de acizi
nucleici, PCR)
Notă: La fetiţe (înainte de
pubertate) N.gonorrhoeae
poate produce vaginite.
Pentru diagnostic se
recoltează exsudat vaginal.

LP 27. Identificarea bacililor gram pozitivi

Bacili gram pozitivi:
- sporulaţi: Bacillus spp., Clostridium spp.
- nesporulaţi: Corynebacterium spp., Listeria spp., Erysipelothrix spp.

Genul Bacillus Caractere de cultivare:

- aerobi, facultativ anaerobi
Reprezentanţi: - specie înalt patogenă: Bacillus anthracis - nepretenţioşi nutritiv,
- specii oportuniste B. cereus - se dezvoltă la temperaturi între 12°- 40ºC
 - alte specii ex. B. subtilis, B. licheniformis - formă de cultură R
- B. anthracis:
Caractere microscopice:
→ în bulion nutritiv cresc sub aspectul unui depozit floconos, fără a tulbura mediul;
- bacili gram-pozitivi mari cu extremităţile tăiate drept
→ pe medii agarizate – colonii R cenuşii, aplatizate, rugoase, cu aspect de sticlă pisată şi contur
neregulat, nehemolitice pe geloză sânge
A) în frotiuri din cultură incubată în aerobioza (nu pot fi diferenţiate speciile de Bacillus): - B. cereus:
▪ sunt aşezaţi în lanţuri lungi → colonii R, hemolitice pe geloză sânge
▪ prezintă spori ovali, centrali/subterminali, cu dimensiuni mai mici sau egale cu diametrul → produce lecitinază - formează colonii înconjurate de precipitat alb pe mediul Nagler (mediu
bacilului (nu deformează corpul bacilului) suplimentat cu gălbenuş de ou)

B) în frotiuri din produs patologic:

▪ sunt aşezaţi în perechi sau scurte lanţuri

▪ B. anthracis prezintă capsulă
◊ în coloraţia Gram apare ca un halou incolor în jurul bacteriilor
◊ în coloraţia cu albastru de metilen policrom, capsula se colorează metacromatic în roz Cultură B. cereus pe mediul Nagler

Caractere de diferenţiere B. anthracis / bacili antracoizi

 Caractereistici Bacillus anthracis Bacili antracoizi
(B. cereus)
Mobilitate - +
Hemoliza - + (β)
Hidroliza gelatinei - +
Fermentarea salicinei - +
Penicilină S R
Genul Clostridium Caractere de cultură
- bacterii strict anaerobe (atmosferă de hidrogen sau azot cu 10% CO2)
Reprezentanţi: Clostridium botulinum, C. perfringens, C. tetani - nepretenţioşi nutritiv
Caractere microscopice - pe geloză-sânge majoritatea clostridiilor produc colonii hemolitice
- bacili gram-pozitivi sporulaţi - cele mai multe clostridii sunt mobile
- sporii au diametrul mai mare decât corpul bacilului, pe care il deformează
● C. tetani – spor sferic terminal, cu aspect de „băţ de tobă” C. perfringens
● C. perfringens – nu sporulează în cultură – îi observăm pe frotiuri din cultură ca → pe geloză-sânge: detemină o dublă hemoliză – o zonă internă, îngustă, β-hemoliză şi o zonă
bacili gram-pozitivi mari, nesporulaţi externă, largă, α-hemoliză
● Clostridium spp. – spori ovalari, centrali, paracentrali sau subterminali, cu aspect
de „suveică”, „rachetă de tenis”
 → pe mediu cu gălbenuş de ou: cultura este înconjurată de o arie albă de precipitare = producerea de
lecitinază
→ testul de neutralizare a lecitinazei evidenţiază absenţa precipitatului alb in jumătatea de mediu
Nagler inundată cu ser ce conţine anticorpi anti-lecitinază

Identificarea Corynebacterium diphtheriae Diagnosticul de laborator al anginei difterice

● Caractere microscopice: bacilli gram pozitivi, fini, granulari, mǎciucaţi (în frotiul din I. Prelevare:
produs patologic sau din cultură pe mediul Löeffler), aşezaţi izolat/ perechi/ litere - 3 tampoane cu exsudat faringian (TF);
unghiulare/ litere chinezeşti/ palisade
- un tampon cu exsudat nasofaringian.
II. Examen microscopic
▪ TF – 1:
-frotiu colorat Gram sau cu albastru de metilen alcalin Löeffler
III. Cultivare:
● TF – 2: însămânţare pe:

Mediu Tinsdale - după 24 ore coloniile negre se repică pe mediul Löeffler (mediu electiv pentru bacil
difteric) pentru a obtine cultura pură
● Caractere de cultivare:
Geloză sânge:
- pretenţios nutritiv - izolare din produsul patologic pe medii suplimentate cu sânge sau
ser - evidenţiază calitatea prelevării (colonii α-hemolitice ale streptococilor orali)
- mediul Tinsdale (mediu selectiv prin adaos de telurit de potasiu): colonii negre - prezenţa de colonii β-hemolitice de S. pyogenes (uneori angina streptococică poate evolua cu false
înconjurate de un halou brun; membrane mimând angina difterică sau poate fi asociată acesteia).
- mediul Löeffler (mediu electiv pentru bacilul difteric): creştere caracteristică în 10 – 18 ● TF – 3: însămânţare pe:
ore de la însǎmânţare - colonii albe, lucioase, bombate (“picǎturi de spermanţet”). Mediul Löeffler (mediu neselectiv care favorizează cultivarea bacilului difteric cu morfologia
caracteristică),
● Identificarea biochimicǎ: - diferenţierea C. diphtheriae de alte specii Corynebacterium; Mediul de îmbogăţire O.S.T. (ou – ser – telurit);
● Demonstrarea toxigenezei: Tamponul nasofaringian
1. in vitro testul Elek
2. in vivo: testul de neutralizare - se descarcă pe O.S.T.
3. toxicitatea pe culturi de celule; - dupa 24 ore, coloniile se repică pe mediul Tinsdale iar după alte 24 de ore, coloniile negre se vor
repica pe mediul Löeffler
4. PCR pentru gena tox.

IV. Identificarea bacteriei izolată în cultură pură pe mediul Löeffler (frotiu colorat Gram şi identificare
biochimică)
V. Demonstrarea toxigenezei