SPECIFICITATEA SI SENSIBILITATEA

TESTELOR DE LABORATOR

S.L. Dr. Popa Delia Codruta

 Introducere in biochimia clinica

• Laboratoarele de biochimie clinica au inregistrat un progres semnificativ (au fost introduse

noi tehnici analitice, cu un important impact asupra practicii chimiei clinice).

• Se pune un accent sporit pe imbunatatirea calitatii actului medical, tinand cont de anumiti
parametrii financiari

• Biochimia clinica evolueaza inspre utilizarea testelor de tip point – of- care (POCT)

• Acum, mai mult ca oricand trebuie sa fim preocupati de stabilirea corecta a corelatiei intre
simptomatologie si parametrii paraclinici (biochimici) ceruti - ce?, de ce?, cand?
 Proba biologica

SPECIMEN = proba biologica

- obtinuta cu scopul determinarii unui

ANALIT (compus care urmeaza a fi
identificat/masurat)
 De ce recoltam probe biologice?
• Pentru stabilirea diagnosticului – ce are pacientul?

• In scop terapeutic – farmacocinetica anumitor

medicamente?

• Monitorizarea pacientului – dupa terapie, are o

evolutie favorabila?
Tip vacutainer - teste Centrifugare Transport/
Stocare

Hemoleucograma Nu Mediu
ambiental
EDTA 3ml

Biochimie Da Transport la
4000 rpm/6min rece (probe
Vacutainer refrigerat)
simplu, cu gel
separator, 5ml

Teste de coagulare Da Transport la

2500 rpm/15min rece (probe
Citrate 2.7ml
refrigerat)
Urina Nu Transport la
Tub steril. 9ml rece (probe
refrigerat)
• VACUTAINER CU CAPAC ROSU
Fara aditivi/accelerator de coagulare (volum 6 ml)
Folosita pentru: Biochimie, serologie

• VACUTAINER CU CAPAC MOV/ROZ

Aditiv: EDTA (EDTA K3/K2), 3 ml
Folosita pentru Hematologie: Ht, Hb, HLG, serologie, biologie
moleculara- virusologie

• VACUTAINER CU CAPAC NEGRU

Aditiv: 3,8% Citrat de sodiu, proportie sange:anticoagulant 4:1
(volum 2,9 ml)
Folosita pentru: VSH (ESR, Erythrocyte Sedimentation Rate in
engleza)

• VACUTAINER CU CAPAC ALBASTRU

Aditiv: 3,2% Citrat de sodiu, proportie sange:anticoagulant de
9:1 (volum 5 mL)
Folosita pentru Coagulare: timp Quick, aPTT
 ORDINEA DE RECOLTARE

1.tub pentru hemocultura

2.tub pentru ser cu/fara activator de coagulare, cu/fara gel
(dop rosu)
3.tub pentru coagulare (dop albastru)
4.tub cu heparina cu sau fara gel separator de plasma (dop
verde)
5.tub cu EDTA (dop mov)
6.tub cu inhibitor glicolitic (dop cenusiu)
7.tub cu citrat pentru VSH (dop negru)
VARIABILE PRE-ANALITICE

1)Factori care tin de pacient

1.1. intra-individuali
- dieta,
- fumatul (leucocitoza cu neutrofile, acidoza respir.),
- exercitiul fizic (cresterea CK-MM, daca exista transpiratii profunde se vor pierde substante
minerale),
- medicamente (salicilatii cresc valoarea creatininei, tratamentul cu steroizi, scad valoarea
creatininei),
- pozitionarea pacientului in momentul recoltarii (clinostatismul reduce volumul total de
sange cu cca 700 ml, pot apare scaderi de aprox. 5-15% ale concentratiilor urmatorilor
compusi: proteine totale, albumina, lipide, fier, calciu, enzime),
- timpul de aplicare al garoului- daca este prelungit, apare staza venoasa cu cresterea presiunii
hidrostatice intravenoase si extravazarea moleculelor mici (ioni, apa) si concentrarea
moleculelor mari (Bi, fier, proteine).
1.2. inter-individuali
- varsta, sex, sarcina, rasa
 VARIABILE PRE-ANALITICE

2) Factori care tin de colectarea si pregatirea probelor pentru

analiza

- Tipul de vacutainer,
- Etichetarea corecta,
- Transport,
- Timp de centrifugare,
- Conditii de depozitare.
Data de valabilitate

DATA DE EXPIRARE
 Centrifugarea
Acțiunea de a centrifuga=operație de separare prin sedimentare sau
prin filtrare, sub acțiunea forței centrifuge, a componenților cu densități
diferite dintr-un lichid heterogen

Se poate obtine atat ser (contine 2 tipuri de proteine..?); cat si plasma

(cu urmatoarele proteine……?)
Sange integral

Cu anticoagulant Fara anticoagulant

Centrifugare imediata Stocare 30-45 min la RT si

(2000-3000g/15-20 min) intuneric (daca este posibil)

Centrifugare (3000g/5-10 min)

PLASMA

SER
 Tipuri de specimene utilizate in
laborator

• Sange integral recoltata pe simplu

– Venos

– Arterial

– Capilar

• Lichide biologice (LCR, LA, LP)

 Plasma
Culoare: galben deschis

Reprezinta aprox. 55% din intregul volum sanguin

Contine:
- >90% apa
- 6%-8% proteine plasmatice (albumina, globuline, fibrinogen)
- glucoza
- factori ai coagularii
- electroliti (Na+, Ca2+, Mg2+, HCO3-, Cl-)
- hormoni
- dioxid de carbon
 Serul
• Plasma fara factori de coagulare
• Mod de prelucrare?
• A se evita vacutainerele cu gel separator pentru
monitorizarea si dozarea drogurilor (in toxicologie)

• !!!!!!vacutainer care contine ca si anticoagulant

flourul – NaF –AGENT ANTIGLICOLITIC
 Conservarea serului/plasmei sanguine

Se recomanda ca :

- analizele biochimice sa se efectueze pe ser proaspat recoltat

- serul si plasma se pot conserva la 4°C timp de 24-36 ore,

fara a se produce modificari semnificative

- pentru o conservare mai prelungita, serul/plasma se ingheata

la -20°C sau -80°C
VARIABILE ANALITICE

- Modificarea aspectului normal al serului/plasmei

- Turbiditatea serului/plasmei (transparenta serului/plasmei scade – tulbure – alb laptos, din cauza
hiperTGL postprandiale),

- Culoarea galben intens – brun cu reflexe verzui – direct proportionala cu bilirubinemia (in c%mari
interfera cu toate determinarile colorimetrice in domeniu albastru al spectrului),

- Ser/plasma de culoare rosie cu nuante si intensitati diferite – determinat de prezenta in c% diferite a

hemoglobinei rezultata in urma hemolizei (in cazul dozarii sideremiei - hemoliza tb exclusa)

- Hipoalbuminemia (proteina transportoare pt majoritatea subst din organism, astfel

incat determina scadearea valorii serice a acestor compusi – calciu, magneziu,
hormoni etc),
- Erori intamplatoare (gresirea unui anumit reactiv),
- Erori sistematice (controlul calitatii deficitar).
VARIABILE POST-ANALITICE

- Erori de transcriere (introducerea gresita a datelor in

calculator),
- Rezultate gresite raportate catre un pacient,
- Intrepretarea gresita a rezultatelor de catre un clinician.
 Tipul metodelor utilizate in
laboratorul clinic

• Metode calitative

• Metode cantitative

• Metode semi-cantitative
 Caracteristici operative ale testelor de
laborator
• Testele de laborator pot fi pozitive (anormale)
si negative (normale).

• Un test pozitiv este adevarat pozitiv (AP) sau

fals pozitiv (FP).

• Un test negativ poate fi adevarat negativ (AN)

sau fals negativ (FN).
Caracteristici operative ale testelor
de laborator
 Sensibilitate si Specificitate testelor de
laborator

• SENSIBILITATEA (Sb) unui test de laborator

reprezinta procentul de bolnavi care au testul
pozitiv

• SPECIFICITATEA (Sp) unui test de laborator

reprezinta procentul de sanatosi care au testul
negativ

• Un test de laborator trebuie sa aiba o Sb si o Sp

cat mai mare!!!!
 Sensibilitatea testelor de laborator

• Sb mare a unui test de laborator ne indica faptul ca exista o

probabilitate redusa de rezultate fals negative

• Sb de 100% inseamna ca NU exista bolnav care sa aiba

test negativ

• Un test screening trebuie sa aiba o Sb cat mai mare, care

ajuta la EXCLUDEREA bolii, daca avem T (-), pacientul
fiind SIGUR SANATOS!!!
 Specificitatea testelor de laborator
• Sp mare a unui test de laborator ne indica faptul ca exista
o probabilitate redusa de teste fals pozitive (risc redus ca
subiectul sa fie sanatos, iar rezultatul sa fie anormal).

• Un test diagnostic trebuie sa aiba o specificitate cat mai

mare. Ajuta CONFIRMAREA bolii, daca avem T(+),
pacientul este SIGUR E BOLNAV!!!
 Sensibilitate si Specificitate testelor de
laborator

Test pozitiv (T+) Test negativ (T-)

Bolnav (B+) a AP b
FN
Control (B-) c FP d
AN

Sb=(a/a+b)x100
Sp=(d/c+d)x100
Valoarea predictiva

• Valoarea predictiva pozitiva = % de bolnavi

din totalul testelor pozitive
• Valoarea predictiva negativa = % de sanatosi
din totalul testelor negative
Valoarea predictiva

Test pozitiv (T+) Test negativ (T-)

Bolnav (B+) a AP b
FN
Control (B-) c FP d
AN

• VPP=(a/a+c)x100
• VPN=(d/b+d)x100
 Etapa analitica – criterii de validare
a rezultatelor
• Etapa analitica?

• Controlul de calitate constituie ansamblul masurilor luate pentru a

asigura corectitudinea investigatiilor de laborator, astfel incat
rezultatele finale sa reflecte cat mai corect starea prelevatului
investigat

• Controlul de calitate:
– Control intern
– Control extern
 Controlul intern de calitate

• Ofera informatii clare, rapide, usor de inteles, pe care se bazeaza

deciziile de validare a rezultatelor pentru pacienti.

• Asigura monitorizarea tuturor activitatilor de laborator in:

– faza preanalitica,
– faza analitica
– faza postanalitica.
 Controlul intern de calitate in
faza analitica

• Alegerea metodei de lucru potrivite ca: specificitate, acuratete,

limita de detectie, interval analitic si raport eficienta/cost.

• Fiecare laborator trebuie sa verifice intevalul de referinta si sa-si

stabileasca intervalul propriu de referinta, in functie de variabile
demografice, geografice sau socio-economice.
 Controlul intern de calitate in
faza analitica
IFCC recomanda un numar minim
de 40 de subiecti sanatosi si 120 de
determinari – rezultatele obtinute se
reprezinta grafic si ele trebuie sa
aiba o distributie gaussiana.

Intervalul de referinta este

intervalul central in care se
situeaza 95% din rezultatele unui
lot de referinta.
 Controlul intern de calitate in
faza analitica
• Alegerea echipamentului de analiza – verificare metrologica

• Alegerea reactivilor – certificat de calitate de la producator (sa fie

gata de utilizare, sa aiba stabilitate prelungita si sa fie folositi numai in
perioada de valabilitate)

• Calibrarea metodei - FACTOR MAJOR DE CARE DEPINDE

ACURATETEA REZULTATELOR
(se stabileste relatia dintre valorile indicate de echipamentul analitic si
valorile corespondente cunoscute ale unui analit)
 Controlul intern de calitate in faza
analitica
• Verificarea corectitudinii calibrarii – testarea
serurilor control, pe doua sau trei nivele de
concentratie, cu valori predeterminate ale analitilor

• Serurile control - certificat de calitate

• Rezultatele obtinute se reprezinta zilnic pe harta de

control Levey-Jennings
Grafic pentru controlul intern
 Controlul intern de calitate in
faza analitica
• Acuratetea (exactitatea) = gradul de apropiere dintre rezultatul
masurat si valoarea adevarata/tinta si se exprima prin IDS si Bias
analitic.

• IDS = valoarea masurata-valoarea “adevarata”(tinta)/deviatia

standard a valorii tinta

• Bias analitic = diferenta dintre media valorilor masurate si

valoarea adevarata(tinta)
 Controlul intern de calitate in faza
analitica

• Precizia = dispersia rezultatelor independente ale

masurarii obtinute in conditii specifice.

• - se apreciaza prin calculul impreciziei (DS, CV)

 Controlul intern de calitate in faza
analitica

• Deviatia standard a unui set de date permite estimarea

uniformitatii valorilor acestuia, mai precis, cu cat
valoarea acesteia este mai mica cu atat valorile setului sunt
grupate in jurul valorii medii.

• Invers, cu cat deviatia standard este mai mare, cu atat

valorile setului sunt mai departate fata de valoarea medie.
Controlul intern de calitate in faza
analitica
• Coeficient de variatie (CV) a unui set de
date (D), ce conţine N înregistrări se defineşte ca
fiind raportul dintre valoarea deviaţiei standard –
SD şi valoarea medie – MD.

• Un coeficient de variaţie mai mic indică o grupare

mai bună în jurul valorii medii.
 Controlul intern de calitate in faza
analitica

• In absenta materialelor de control cu valori

predeterminate, se poate estima doar precizia
masuratorilor, data de DS si CV obtinute pe
rezultatele testarilor serurilor de la pacient in
duplicat

• INSA metoda de testare a controlului este de a

utiliza graficul Levey-Jennings si apoi a regulilor
WESTGARD
 REGULI WESTGARD

• 1:3s – daca o valoare este +/- 3DS comparativ cu media valorilor (random) in afara
intervalului

• 2:2s – daca 2 valori consecutive sunt >2 DS de aceeasi parte a mediei (sistemic) in
afara intervalului

• R:4s – daca 2 valori in cadrul aceluiasi ciclu de lucru >4DS una fata de cealalta

• 4:1s – daca 4 valori consecutive sunt >1 DS de aceeasi parte a mediei in afara
intervalului

• 10 masuratori consecutive se situeaza de aceiasi parte a mediei( cinci masuratori

pe cate un material de control in cazul folosirii a 2 seruri de control).
 Out of control results – la
controlul intern

• Se intrerupe elaborarea buletinelor de analiza

• Se identifica cauzele

• Se remediaza sursa erorilor

• Se reia controlul
Control intern – faza postanalitica
• Exprimarea clara, concisa a rezultatelor

• Validarea prin semnatura si parafare

• Pastrarea de esantioane din probele biologice

in vederea unor testari ulterioare
 Control exetrn de calitate
Evaluarea performantelor laboratorului prin
compararea cu performantele obtinute in alte
laboratoare care utilizeaza:

– Aceeasi metoda si/sau acelasi echipament

– Metode si echipamente diferite
– Reactivi furnizati de acelasi producator sau de
producatori diferiti
 Responsabilitatea oricarui laborator
consta in furnizarea de rezultate credibile,
reproductibile si relevante

70% din informatiile utilizate pentru

deciziile medicale vin din testele de laborator!
GESTIONAREA DATELOR

• Sistemul Informatic al Laboratorului – SIL (informatica

medicală, prelucrarea datelor şi telecomunicaţii); alegerea
unităților de măsură ale analizelor din laboratorul medical;
înregistrări de laborator;
• Formular raportare rezultate;
• Formular cerere de analize medicale.
BIBLIOGRAFIE
• SR EN ISO 9000 Sisteme de management al calităţii. Principii de bază şi vocabular;
• SR EN ISO / CEI 17000 Evaluarea conformității. Vocabular și principii generale;
• ISO/IEC Guide 99 International vocabulary of metrology — Basic and general concepts and
associated terms (VIM)
• International Vocabulary of Metrology – Concepte de bază și generale și termeni asociați (Basic
and General Concepts and Associated Terms);VIM, ediția 3, JCGM 200:2012 (JCGM
200:20008 cu mici corecții) disponibil pe pagina de web a BIPM - www.bipm.org
• SR EN ISO 9001 Sisteme de management al calității. Cerințe;
• SR EN ISO 15189 Laboratoare medicale Cerinţe pentru calitate și competență
• SR EN ISO 17025 Cerinţe generale pentru competenţa laboratoarelor de încercări şi etalonari
• Constanța Popa, Georgeta Sorescu, Marcel Vânan, Dorina Popa, Elvira Borcan, Otilia Banu,
Adina Elena Stanciu, Patricia Mihăilescu, Coralia Bleotu, Note de curs CALILAB – Estimarea
incertitudinii de măsurare și validarea metodelor de testare conform SR EN ISO 15189.
Aplicații practice în biochimie, hematologie, hemostază, bacteriologie, parazitologie,
imunologie, serologie, virusologie, București 2012, www.calilab.ro
• Constanța Popa, Georgeta Sorescu, Marcel Vânan, Note de curs CALILAB – Managementul
calității în laboratoarele medicale, București 2008,
• www.calilab.ro; www.renar.ro; www.westgard.com, www.iso.org, www.bipm.org