REACTIA DE FIXARE A COMPLEMENTULUIDESCRIERE

Reactia de fixare a complementului este un test imunologic care poate fi

folosit pentru a detecta prezența de anticorpi specifici sau antigeni specifici în
serul unui pacient, prin fixarea complementului.

A fost utilizata pe scară largă pentru a diagnostica infecțiile, în special cu

microbi care nusunt ușor de detectat prin metode de cultură, cât și în bolile
reumatice.

Cu toate acestea metoda a fost în mare parte înlocuita de alte metode serologice,
cum ar fi ELISA și prin metode de ADN bazate pe detectarea agentului patogen,
în special PCR.COMPLEMENTUL

Complementul (alexina) reprezintă un sistem de apărare alcătuit din proteine

serice careparticipă la liza celulelor străine, reacţiile inflamatorii şi fagocitoză.

Este formată dintr-un ansamblu de cel puţin 20 proteine, motiv pentru care a fost
denumit sistemul complement

Alexina se mai găseşte în concentraţie redusă în exudatele normale ale

pleurelor,pericardului, peritoneului şi în limfă

Conservarea alexinei se realizează prin congelare (-200 C), cu ajutorul unor

substanţe chimice sau prin liofilizare.

PROCEDURA
Serul e pus in contact cu antigen viral si complement in cantitate cunoscuta. In
cazulprezentei anticorpilor specifici in serul de cercetat, formarea complexelor
antigen- anticorpva determina activarea si fixarea complementului. Prin
adaugarea de eritrocite marcate cuanticorpi anti-eritrocitari se determina
prezenta de complement liber (nefixat).

Rezultat negativ
–prezenta de complement liber (nefixat) tradusa prin hemoliza.

Rezultat pozitiv
–absenta complementului liber, datorita fixarii sale in complexele antigenviral-
anticorp specific, tradusa prin absenta hemolizePROCEDURA
Materiale necesare reactiei (Reactivi):
-Serul de cercetat inactivat termic,
-Antigenul (suspensii corpusculare microbiene, solutii coloidale,
Ag standardizat, titrat, gatade utilizat),
-Complementul (alexina):
reprezentat de ser de cobai (cantitatea cea mai mare decomplement). In
momentul utilizarii,C` este titrat, pentru determinarea unei unitati alexicesau
cantitatea minima de complement care determina hemoliza totala a 1 mL de sistemhemolitic
la 37°C.
Titrarea C` se face punand in contact dilutii crescande de ser de cobai cu
cantitate fixa de sistem hemolitic (termostatare 30 min, la 37°C),
-Sistemul hemolitic: amestec de hematii de berbec (Ag) 5% in ser fiziologic si ser
hemoliticantioaie (Ac)

Tehnica de lucru:
RFC se realizeaza in doua faze:
Faza I:
Se pun in contact: ser de bolnav (inactivat termic, care poate contine Ac
suspectati) +Ag (suspensia microbiana, coloidala cunoscuta) + alexina de cobai
titrata,
- daca in ser sunt Ac suspectati, sistemul imun Ag/ Ac fixeaza alexina,
- daca in ser nu sunt Ac cautati, complexul imun nu se formeaza si alexina
ramane libera.
Faza a II-a:
La elementele din faza I se adauga sistemul hemoltic
–indicator: hematii berbec- Ac anti- hematii.
In situatia mentionata, in care alexina poate fi libera (absenta Ac specifici
inserul de bolnav), complexul imun hemolittic reactioneaza cu aceasta si
produce hemolizahematiilor (lichid rosu, clar).
-Cand in faza I se produce reactia Ag/ Ac (datorita prezentei Ac specifici),
alexina sefixeaza pe aceste complexe si nu mai produce liza sistemului
hemolytic.
-Daca serul provine de la persoana sanatoasa, se produce hemoliza, lichidul
se limpezeste(complement liber in faza I)
-Daca serul provine de la bolnav, nu se mai produce hemoliza, deoarece
complementul afost fixat de complexul Ag/ Ac prezent in serul bolnavului

INTEPRETAREA REZULTATELOR:

Reactie intens pozitiva (++++) nehemolizat

Reactie pozitiva (++, +++) partial hemolizat
Reactie slab (+) hemolizat
Reactie negativa (-) hemolizat