Orientare în neurobiologie

• Neuroştiinţele sun un domeniu dedicat studierii

sistemului nervos
• Aceste studii includ
– structura, funcţia, dezvoltarea, genetica, biochimia,
fiziologia, farmacologia, si and patologia sistemului
nervos.
– Ştiinţele aliate includ including psihologia, informatica,
statistica, fizica, şi ştiinţele medicale în general
– Scopurile neuroţtiinţei au evoluat până la a include orice
investigare sistematică teoretică sau experimentală a
sistemului nervos
• Neuroştiinţele se află la frontiera investigării creierului
şi minţii
• Studiul creierului devine din ce în ce mai mult piatra
unghiulară a înţelegerii percepţiei şi interacţiunii cu
lumea exterioară.
• “Sarcina neuroştiinţelor este de a explica
comportamentul în termenii activităţilor cerebrale.
Cum reuşeşte creierul să-şi coordoneze milioanele de
celule individuale pentru a realiza comportamentul şi
cum sunt influenţate aceste celule de către mediu...?
Ultima frontieră a ştiinţelor biologice – ultima lor
provocare – este de a înţelege bazele biologice ale
conţtienţei şi procesele mentale cu ajutorul cărora
percepem, învăţăm şi memorizăm”.

• — Eric Kandel, Principles of Neural science,

fourth edition
 Întrebările
ESENȚIALE ALE
neuroștiințeLOR
• Cum învățăm și cum ne
amintim?
• Ce sunt emoțiile?
• Cum și de ce
funcționează defectuos
sistemul nervos?
• Ce se poate face pentru
a inversa, opri și/sau
trata simptomele • Care sunt implicațiile neurologiei asupra legii și a
fiziologice sau
psihologice nefavorabile moralității?
care rezultă din aceste • Ce este conștiința ?
disfuncții? • Se poate îmbunătăți nivelul de inteligență?
• De unde vin limbajele?
• De unde vine sentimentul de sine - self?
• Există așa ceva precum ”liberul arbitru”?
 CREIERUL ȘI SISTEMUL NERVOS
• Creierul uman - o masă de țesut spongioasă, de
trei kilograme - este cea mai complexă structură
vie din universul cunoscut.
• Are capacitatea de a stoca mai multe informații
decât un supercomputer și de a crea o rețea de
conexiuni care depășesc cu mult orice rețea
socială.
• Creierul a permis oamenilor să realizeze repere
uluitoare - mersul pe lună, cartografierea
genomului uman și compunerea capodoperelor
artei, literaturii și muzicii.
• Un singur organ care controlează corpul
• Oamenii de știință încă nu au descoperit întreaga
dimensiune a ceea ce poate face creierul.
• Acest singur organ controlează fiecare aspect al
corpului, variind de la ritmul cardiac și apetitul la
emoție și memorie.
• Creierul controlează răspunsul sistemului imun la
boală și determină, în parte, cât de bine răspund
oamenii la tratamentele medicale.
Subdomenii ale neuroȘTIINȚELOR
• Moleculare: Neurochimie, Neuroștiințe celulare,
Neuroștiințe moleculare, Neurobiologie
• Cognitive: Neuroștiințe computaționale, Științe
cognitive, Neuropsihologie, Neuroștiințe afective
• Neuroștiințe comportamentale: psihologie biologică,
genetică / epigenetică comportamentală, psihologie
experimentală, învățare și comportament
• Medicale: Neuroimunologie, Neuropatologie,
Neurofarmacologie, Neuroprotetică, Neurotoxicologie,
Psihofarmacologie, Neuroimagistică
• Altele: Neurolingvistică, Neuroștiințe culturale,
Neuroantropologie, Neuroștiințe evolutive,
Neuroștiințe ale dezvoltării, Neuroinformatică,
Neuroștiințe Sociale
 Nivele de lucru – nivelul molecular
• La nivel molecular, chestiunile fundamentale sunt:
– Mecanismele prin care neuronii exprimă şi răspund la
semnale moleculare
– Cum formează axonii modele complexe de conectivitate
– Cum se dezvoltă şi cum mor neuronii
– Identitatea moleculară şi caracteristicile fiziologice ale
neuronilor
– Care este legătura între caracteristicile neuronale şi
diversele tipuri de comportament?
– Modul în care neuronii şi conexiunile lor sunt modificate
de către experienţe la nivel fiziologic şi cognitiv
 Nivel celular şi sistemic
• La nivel celular, problemele fundamentale adresate sunt:
– mecanismele prin care neuronii procesează fiziologic şi lecetrochimic
semnalul
– Modul de procesare al semnalelor de către dendrite, corpuri neuronale şi
axoni
– Cum sunt folosiţi neurotransmiţătorii şi semnalele electrice pentru a
procesa semnalele la nivel neuronal
• La nivel sistemic, neuroştiinţa sistemelor adresează
– Cum se formează anatomic şi cum se folosesc fiziologic circuitele
neuronale
– Cum realizează circuitele neuronale funcţiile fiziologice precum reflexele,
integrarea senzorială, coorodonarea motorie, răspunsurile emoţionale,
învăţarea şi memoria, etc
– Analiza la nivel de sisteme încearcă să răspundă la întrebări specifice de
tipul:
• Cum funcţionează vederea?
• Cum învaţă păsările noi cântece şi cum localizează liliecii folosind ultrasunete
– Neuroetologia este domeniul care studiază modul în care substratele
neurale stau la baza comportamentelor animale specifice
 Nivel cognitiv şi social
• Neuroştiinţele cogniţiei adresează probleme de tipul:
• Cumse produc funcţiile psihologice-cognitive de către circuitele
neuronale
• Apariţia tehnicilor de neuroimagistică, electrofiziologie şi analizaă
genetică permit adresarea de întrebări abstracte de tipul:
– În ce fel cunoaşterea umană şi emoţiile sunt descrise la nivelula riilor şi
circuitelor neurale specifice
– Multe procese mentale care se credea că nu vor fi înţelese niciodată s-
au dovedit a avea corelaţii neurale clare
• Neuroştiinţele încep să se alieze din ce în ce mai mult cu ştiinţele
sociale, apărând noi domenii interdisciplinare, precum
– Neuroeconomica
– Teoria deciziei
– Neuroştiinţele sociale
– Neuroinformatica
• Neuroanatomie
• Sistemul nervos periferic
– Sistemul nervos vegetativ
• Sistemul nervos simpatic
• Sistemul nervos parasimpatic
• Sistemul nervos somatic
– Nervii motori
• aferenti
• Eferenti
• Sistemul nervos central(CNS)
– creier
• cerebel
• Sistem limbic
• Nuclei subcorticali
• Regiunile creierului uman
• Integrarea funcţională
• Neuroanatomie celulară
• neurochimie
– agonisti
– antagonisti
– catecolamine
– NT monoaminici
• Neurotransmiţăori
• neuron
– Potenţiale de acţiune
– Canale ionice
– depolarizare
– sinapse
– Semnalizare retrogradă
• Celule gliale
– mielină
• Neurofarmacologia
– narcoticelor
– amfetaminelor
– antipsihoticelor
– lithiului
– anestezice
– sedative
– Cocaina
– antidepresive
– Opiacee
• Domenii conexe
– Neurobiologia
– Neurofiziologia
– Neurochimia
– Neuroendocrinologia
– Neurogenetică
• Modelarea computaţională neurogenetică (CNGM)
• Neuroproteomica
• Neuroştiinţele cognitive
• Reţele neurale
 Metode de studiu a creierului
• Metode de investigare a SNC
• Non-invazive vs. invazive
• Structură vs. Structură + Funcţie
• Rezoluţie spaţială
• Rezoluţie temporală - funcţionale
 Frenologia
• Probabil prima metodă
neinvazivă
• Ideea de bază: creierul e ca
un mușchi, bosele de pe
exteriorul craniului ar trebui
să reflecte capacitățile
cerebrale
• Problemă: interiorul
craniului este neted, totuși,
conceptul de localizare a
funcțiilor a fost corect
• Înainte de tehnicile de
mapping non-invaziv:
– studiile lezionale
– analogii din studii
invazive la animale
• Monsieur Leborgne –
“Monsieur Tan”
• Pacient al lui Paul Broca
– postmortem a descoperit
o leziune a lobului frontal
inferior stâng.
 Paul Broca și ariile
sale
In 1861, Broca a auzit de un
pacient, numit Leborgne, la spitalul
Bicetre, care avea o pierdere
progresivă a vorbirii și paralizie,
fără pierderi cognitive sau de
funcție mentală. Era numit "Tan„
pentru că era unicul cuvant pe
care-l putea spune.
• La moartea pacientului, Broca i-a făcut autopsia, și a descoperit o
leziune a lobului frontal a emisferei stângi, la nivelul circumferinței a
treia, lângă șanțul lateral. In următorii 2 ani, Broca a mai găsit încă
12 cazuri in sprijinul teoriei sale. Afazia de expresie (afazia Broca)
reprezintă incapacitatea de a asocia noțiuni cu cuvinte.
• Afazia de recepție, (afazia Wernicke), este caracterizată prin leziuni
ale zonelor mai posterioare ale lobului temporal, implicate în
percepția limbajului.
 CAT (denumită și “CT”)
• CAT scan = Computed Axial
Tomography
• Similar cu radiografiile, dar multiple
• Felii planare de 1 mm, reconstruite
de computer
• Prezintă structura, nu și funcția,
deși unele modificări funcționale
pot fi identificate datorită unor
leziuni sau malformații
Tomografie computerizata
• PET scan
–imagistica clasica
–imagistica moleculara

• RMN funcţional (RMNf)

• MagnetoEncefaloGrafia (MEG)
MRI = Magnetic Resonance Imaging (RMN)
• Subiectul este plasat într-un
câmp magnetic puternic,
pentru alinierea moleculelor
polarizate
• Un câmp magnetic
perpendicular slab este pulsat
pentru a produce rezonanța
moleculelor aliniate
• La incetarea câmpului
puternic, moleculele revin in
poziția inițială, eliberând o
cuantă de energie, captată de
o antenă toroidală
• Computerul realiniază
semnalele și produce o hartă
pe secțiuni
• Rezoluția spațială este
excelentă 10 microni
Rezonanța Magnetică Nucleară
• REZONANŢA MAGNETICĂ
NUCLEARĂ FUNCŢIONALĂ
(fMRI)
• PET şi RMNf nu apreciază în mod direct activitatea
neuronală,
– modificările metabolice şi vasculare
determinate de activarea neuronală în
anumite regiuni.
– exploatează creşterea consumului de energie
– creşterea afluxului de sânge în zona
respectivă (fenomen denumit cuplare
neurovasculară).
• RMN funcţională foloseşte proprietăţile
paramagnetice ale deoxihemoglobinei
(distorsionează câmpul magnetic).
– Aceste distorsiuni sunt măsurabile şi indică proporţia locală
între oxi/deoxi hemoglobină.
– Tehnica se numeşte BOLD (Blood-Oxygenation-Level-
Dependent).
– Rezoluţia spaţială a RMNf este mai bună decât a PET
(<1mm) dar cea temporală este foarte redusă (2-4 sec).
fMRI = Functional MRI
(RMNf)
• Măsoară
modificările
oxigenării
cerebrale
datorită
activității locale
a creierului
• Permite
măsurarea
funcției
• Rezoluție
spațială
 Diffusion-weighted magnetic resonance
(Diffusion Tensor Imaging-DTI)
• Permite trasarea
proceselor de
difuziune a apei în
țesuturi, ceea ce
reflectă interacțiunile
acesteia cu
macromolecule, fibre
și membrane. Aceasta
permite identificarea
de detalii
microscopice, precum
tractografia RMN, ce
permite identificarea
fasciculelor de
mielină.
RMN 3D si alte tehnici (FLAIR, DWI)
Reconstrucţie dinamică a activării creierului uman asciată cu
o sarcină ce presupune procese motorii, vizuale şi de
planificare (şofat).
Stânga – procese corticale
Dreapta - procese cerebrale profunde (motorii)
• Imagine combinată
PET/ RMN
– În imaginile de mai
sus, pacienţii suferă
durere
– În imaginile de mai
jos, pacienţii cred
că primesc o
injecţie cu un
analgezic, ce era de
fapt un placebo
– University of Michigan.
 Evolutia
consumului de
oxigen la nivelul
substantei cenuşii
corticale
cuantificat prin
scăderea raportului
OHb/dOHb
Rezoluţia
temporala – 4
secunde
 Tomografia cu emisie de pozitroni – PET
• PET foloseşte trasori radioactivi (15O,
17F) cuplaţi cu radiofarmaceutice şi

injectaţi în sânge.
– Acestea traversează BHE, iar concentraţia
lor creşte în zonele activate.
– În tot acest timp, ei se dezintegrează cu o
rată constantă prin emiterea unui pozitron
(e+), care se anihilează cu un electron (e-)
producând 2 cuante g (fotoni sau radiaţie
EM).
– Aceste cuante sunt detectate folosind
detectori circulari, iar originea lor este
apoi calculată.
– Rezoluţia spaţială este ≈ 4 mm iar cea
temporală de 10 – 15 minute.
 PET = Positron Emission
Tomography
• Se folosește
un izotop
emițător de
pozitroni (17 F,
11 C, etc)
• Izotopii sunt
cuplați de
glucoza
preluată activ
de celulele
cerebrale
• Prezintă detalii
imagistice și
funcționale
20 ani
80 ani
• Consumul de glucoza marcata cu 18 F (FDG) la o persoana
obisnuita
• Acelasi aspect la o persoana sub influenta cocainei
 Imaginea anului în neurostiinţele anului 2007 – oferite de Brookhaven National
genele ce codează pentru MAO A; imagine de PET molecular ce demonstrează activitatea MAO;
tulburări comportamentale
EEG = Electroencefalografia
 Electroencefalografia (EEG)
• tehnica de inregistrare si interpretare
a activitatii electrice a creierului.
• Electroencefalograma (EEG)
reprezinta inregistrarea, in timp, a
activitatii electrice cerebrale.
Captarea se face prin intermediul
unor electrozi asezati pe scalp, cuplati
la un aparat numit
electroencefalograf.
• Focare iritative
Status epilepticus
• MAGNETOENCEFALOGRAFIE

• MEG se bazează
• neuronii, când se activează, produc curenţi
electrici, care, la rândul lor, generează câmpuri
magnetice.

• Un sistem MEG foloseşte detectori

superconductori (SQUID) pentru a detecta cele
mai mici variaţii ale câmpului magnetic la
suprafaţa creierului.

• Rezoluţia spaţială (2-3 mm) şi temporală sunt

foarte bune, cu limitarea fundamentală a
faptului că NUMAI PROCESELE CORTICALE pot fi
detectate, coroborată cu preţul foarte mare al
aparatului.
Magneto-encefalo-
grafie
Mapping cortical prin MEG al cortexului vizual
MEG = Magnetoencefalografia
• Activare
corticală de
către cuvinte
legate de
atribute
corporale la
pacienţi
sănătoşi
• Vedere axială a câmpului
magnetic generat
cortical de către o
persoană supusă unui
stimul acustic
– Contururile izocâmpurilor
sunt colorate în roşu
(câmp extern) şi albastru
(câmp intern)
– Suprafaţa digitizată a
scalpului în gri
– Generatorii de câmp
magnetic sunt situaţi bi-
temporal (lobii auditivi)
– Punctele de maxim
răspuns sunt desemnate
prin cercuri galbene
– Stimulul acustic este un
ton pur de 1 kHz
Stimulare Magnetică Transcraniană

Stimularea Electrică Transcraniană

fRMN
DTI
 SEEG = Stereotaxic Electroencephalography
• Măsurarea potențialelor
electrice folosind electrozi
fini implantați în creier
• Poate include stimularea
cerebrală selectivă
– Măsurătorile pot fi realizate
cronic
– Arată atât structura cât și
funcția
– Rezoluție temporală
excelentă (< 1 ms)
– Rezoluție spațială foarte
bună (10 µm; depinde doar
de dimensiunile
electrodului)
 Analiza traumelor cerebrale
• Pune în legătură
leziunile
structurale cu
pierderile
funcționale
• Sunt
”experimente
naturale”, nu
prea precise
• Este dificil de a
pune în legătură
deficitele cu
funcția normală
Înregistrari electromagnetice - single-cell
Înregistrari electrice - patch-clamp
 Histologie
• Studii macro și microscopice
post-mortem sau din biopsii
• Tehnici de colorare:
• Colorația Nissl: corpii
celulari
• Colorația pentru mielină:
prelungiri
• Tehnici de trasare:
• HRP (Horse Radish
Peroxidase): transportul
retrograd către corpii
celulari
• Autoradiografie: transportul
de substanțe radioactive în
terminațiile celulare
 Halstead-Reitan
Neuropsychological Battery
• Bateria de teste include:
– Traseele A și B (care evaluează cât de repede poate pacientul conecta
o secvență de numere (traseu A) sau numere și litere (traseu B).
– Controlled Oral Word Association Test (COWAT, sau testul de Fluență
Verbală) – măsurarea capacității unei persoane de a face asocieri
verbale cu litere specifice
– Halstead Category Test (include șapte subteste care alcătuiesc trei
factori: Numărare, Raționament Spațial Pozițional și factorul de
Raționament proporțional
– Testul de performanță tactil
– Testul ritmului
– Testul de percepție a sunetelor de limbaj
– Testul de oscilație digitală – frecvența de tact
 Bateria neuropsihologică Luria-Nebraska
• Există 14 scale:
– Funcții motorii
• Folosită de clinicieni pentru – ritm
screeningul leziunilor cerebrale – Funcții tactile
• Evaluează sarcinile care pot fi – Funcții vizuale
efectuate de pacienți în legătură cu – Limbaj receptiv
funcționarea neuropsihică
– Limbaj expresiv
• LNNB este folosită pentru
distingerea între leziunile cerebrale – scriere
și tulburările mentale funcționale – citire
de tip schizofrenie precum și în – aritmetică
aprecierea deficitelor – memorie
– Procese intelectuale
– Semne patognomonice
– Emisfera stângă
– Emisfera dreaptă
testele de inteligență Wechsler
– indicele de
comprehensiune
verbala,
– indicele cortical
perceptual,
– indicele memoriei de
lucru,
– indicele de viteza de
procesare si altele
 Metode comportamentale - la animal
• câmp deschis (open
field)
• Dezvoltat de Calvin S. Hall pentru testarea
stării emoționale la rozătoare
• Măsură calitativă și cantitativă a activității
locomotorii și a disponibilității de explorare
• Câmpul deschis este o arenă cu pereți
marcat cu o grilă și traversări pătrate.
• Se evaluează distanța parcursă și timpul
petrecut în mișcare
• Poate fi folosit și pentru evaluarea anxietății
incluzând măsurători anexe precum
defecație, timpul petrecut în centru
câmpului, primele minute de activitate
• Aceste măsurători sunt folosite pentru
evaluarea efectului stimulant sau sedativ al
agenților farmacologici
 Hole-board
• Model de testare a activității de
investigare, legate de nivelele de
anxietate.
• Aparatul este alcătuit dintr-un spațiu
închis al cărui planșeu are 16 găuri în
model de grilă
• Rozătorul când este plasat în aparat este
liber să investigheze orificiile prin
introducerea capului, fenomen cunoscut
sub denumirea de ”head-dipping”, care
măsoară nivelele de neofilie
• Experimentele sunt folosite în
farmacologia comportamentală
Labirintul ”elevated plus”,
 Y-Maze
• Comportamentul de alternare spontană
este definit ca intrarea succesivă în cele
trei braţe
• Procentul de alternare spontană este
definit ca raportul dintre numărul de
alternări efectuate şi cele posibile.
• Testul este bazat pe tendinţa rozătoarelor
de a explora braţul aparatului Y-maze care
a fost mai puţin vizitat.
• Prin intermediul acestui test se obţin date
despre memoria de scurtă durată.
 Morris water-maze (labirintul acvatic)
• Labirintul acvatic Morris, este o
procedură comportamentală folosită
pe larg în neuroștiințele
comportamentale pentru a studia
învățarea spațială și memoria.
• Studiu foarte precis al învățării,
memoriei și evaluării spațiale și poate
evalua, de asemenea, deteriorarea
regiunilor corticale ale creierului.
• Este folosit pentru a măsura efectul
tulburărilor neurocognitive asupra
învățării spațiale, pentru a testa
efectul leziunilor asupra creierului în
zonele axate pe memorie și pentru a
studia modul în care influența vârstei
influențează funcția cognitivă și
învățarea spațială.
Recunoașterea obiectelor

• Printre cele mai frecvent

teste comportamentale la
șoareci.
• Unui șoarece îi sunt
prezentate două obiecte
similare, in prima sesiune.
Se măsoară timpul de
identificare.
• La a doua ședință unul
dintre obiecte este
schimbat și noul timp este
înregistrat – indice al
memoriei de
recunoaștere.
• Protocoalele variază
 Labirintul Barnes
• Un labirint uscat, in care
animalul este eliberat pe o
platformă luminată, expusă, cu
o singură cameră întunecată
situată sub una din cele 18
găuri de pe perimetru
• Pentru optimizarea performanței
se folosesc indicii vizuale.
• Sarcina are o natură spațială și
este folosită pentru evaluarea
farmacologică și a memoriei
 Testul comportamentului de evitare pasivă prin antrenamente
multiple (the multi-trial passive avoidance test)
• Acest test se bazează pe inhibarea
reflexului înnăscut de evitare a
luminii, printr-un şoc electric
prealabil.
• Aparatul care este folosit pentru
efectuarea testului de evitare pasivă
constă din două compartimente,
primul fiind iluminat iar cel de-al
doilea fiind întunecat.
• De asemenea, fiecare compartiment
este prevăzut cu un grilaj metalic pe
podea, prin care poate fi transmis
curent electric.
• Cele două compartimente comunică
între ele printr-o deschidere centrală,
prevăzută cu o uşă de tip ghilotină.
 Elevated plus maze
• Test c. ce studiază stările de
anxietate ca şi componentă a
proceselor cognitive.
• Se bazează pe conflictul care
apare între tendinţa
şobolanului de a explora
labirintul şi tendinţa de a evita
un stimul nou, ce poate fi
aversiv
– Numărul de intrări în braţele
deschise;
– Numărul de intrări în braţele
închise;
– Timpul petrecut în braţele deschise;
– Timpul petrecut în braţele închise;
– Timpul petrecut în zona centrală a
labirintului.ou ce poate fi aversiv
 Testul labirintului cu braţe radiale (radial
arm-maze test)
• Prin acest test se investighează atât memoria de scurtă
durată, cât și memoria de lungă durată.
• Mai exact, indicii determinați sunt numărul de erori ale
memoriei de lucru și numărul de erori ale memoriei de
referință.
• Numărul de erori ale memoriei de lucru (o eroare a
memoriei de lucru este definită ca reintrarea într-un
braț din care hrana a fost consumată anterior)
reprezintă un indice al memoriei de scurtă durată,
deoarece în timpul testului, șobolanul va trebui să
memoreze care braț a fost deja vizitat, și care nu a fost
vizitat.
• Numărul de erori ale memoriei de referință (o eroare a
memoriei de referinţă este definită ca intrarea într-un
braţ care nu a conținut niciodată hrană) oferă informații
despre memoria de lungă durată, referindu-se la
informația care va rămâne constantă de-a lungul
experimentului, având în vedere că şobolanul trebuie să
memoreze poziţia fiecărui braţ ce conţine hrană.
 Rotarod
• Rotarod – test de
performanță bazat pe o tijă
rotativă.
• Testul măsoară parametri
precum timpul de anduranță
(secunde), echilibrul, puterea
de apucare și coordonarea
motorie, mai ales pentru
testarea efectelor drogurilor
experimentale sau după
leziuni cerebrale localizate
 Administrări intranevraxiale
• Stereotaxie
Administrare intra-tecală
Administrare ICV
 Testari algeziologice
• Hot-
plate
Tail-flick
Writhing test
Plantar test (Hargraves’ test)
Von Frey
Analgezimetrie
Pletismometrie