Terapia genică.

Terapia genică în bolile

neurodegenerative
David Adrian-Bogdan Moldovanu Mirela
 Terapia Genică
??
• Introducerea unor gene în celulele existente pentru cu anumit scop
curativ sau profilactic

• Tehnică de corecție a genelor defecte

• Prima utilizare: 14 septembrie 1990, USA, ASHANTI de SILVA a fost

tratat de ADA-SCID (Adenosine desaminase deficiency)
 Tipuri de terapie genică

Somatică Germinativă

Probleme
etice
Terapia Genică Somatică

• Genele terapeutice sunt transferate în celulele somatice

ex.: măduva osoasă, celulele sângelui, epitelocite etc

• Nu vor fi transmise caracterele modificate

• Mai puține probleme etice

Terapia Genică Germinativă
• Gene Introduse în celule germinative

• Genotipul nou poate fi moștenit

• *probleme etice* nu se practică (încă)

 Tehnici de inginerie genică

•In vivo

•Ex vivo
Pașii tehnicii Ex-vivo
1. Izolarea celulelor

2. Creșterea celulelor+ asigurare mediu optim

3. Introducerea genelor terapeutice

4. Selecția artificială a celulelor dorite modificate

5. Retransplantul celulelor
In Vivo
• Introducerea directă a genei în celulele țintă

• Folosirea vectorilor virali/non virali

• Folosită pentru celulele care nu se pot reproduce

• Folosită pentru celulele care nu pot fi reimplantate

• Tema noastră partea 2  ->>>neuronii>>>bolile neurodegenerative

 Vectori
• Virali • Non Virali
• Retrovirus • ADN pur

• Adenovirus • Lipoplex( ADN+ lipide)

• Adeno Asociat Virus • AND conjugat cu L-lisina

• Herpex Simplex Virus • Cromozom Artificial

• Etc. • Etc.
Metode de inserție

• Directe • Chimice

• Gene Gun • Detergenți (mix)

• Microinjecția • Lipozomi
Alte tipuri de tehnici
• Augumentarea • Inhibiția

• Cea mai cunoscută • Inactivarea anumitor gene

• Înlocuirea defectului(cu o
genă funcțională) • Ex: genele responsabile de
• Ex: p53 cancer la ficat boli autoimune
Probleme etice
• Cine va avea acces la terapie

• Poate avea conflicte cu anumite

religii

• Prelucrarea caracterelor ca: IQ, nr

de membre, alte idei etc??

• Este ok utilizarea tehnicilor

prenatal??
 Bolile neurodegenerative
?

• afecțiuni incurabile ale SNC care duc la degenerarea

progresivă sau moartea celulelor nervoase

• Acestea cauzează probleme de deplasare (numite

ataxii) sau de funcționare mentală (numite demențe).
 Exemple
• Boala Alzheimer (AD) și alte tipuri de demență
• Boala Parkinson (PD) și alte afecțiuni aferente PD

• Boala Prion
• Boli neuronului motor (MND)
• Boala Huntington (HD)
• Ataxie spinocerebelară (SCA)
• Atrofie musculară spinală (SMA)
Alzheimers`s. Generalități
• Cea mai cunoscută cauză a demenței
• Pierdere a memoriei
• Pierdere a funcțiilor cognitive
• Pierdere a funcțiilor motore
• Apare mai des post 65 ani
• 200 000 Americani sub 65 ani (conform alz.org din 09.09.19)
• Boală progresivă
• Speranța de viață 4-8 ani (conform alz.org din 09.09.19)
• Lipsa tratamentului medicamentos---preponderent paleativ/simptomatic
Tehnici genice neuroreparative pe modelul
Alzheimer
Alzheimer`s. Cauze. (Presupuneri ale
cauzelor molecular genetice )
• Formarea depunelor proteice de amyloid (proteină) în jurul somei
axonale. Similar plăcilor aterosclerotice din vase

• Proteina ”tau” nu funcționează>>>>microtubulii nu lucrează= nu se

transportă nutrienți= foame= moarte a neuronilor

• Se formează agregați tau (tau tangles)

Morfopatologia

Sursa:
https://thebrain.mcgill.ca/flash/i/i_08/i_08_cl/i_08_cl_alz/i_08_cl_alz.html
 Tau neurofibrilary
tangle
Neuroni
piramidali,
corticali

https://m.tau.ac.il/medicine/tau-only/webpath/tutorial/cns/cnsdg006.htm
https://massivesci.com/articles/crispr-cas9-alzeimers-disease-therapy-gene
-editing/
 Cauze biomolecular-genice
•Factorul de risc apolipoproteina E4 (APOE4)
*duce la disfuncții ale microgliei ( origine monocitară)
•Mutații hipermorfe APP ..amiloid precursor…

!!MUTAȚII!!

APP, PSEN1, or PSEN2 
Direcții de studii pentru tratament
Inactivare APOE4
• CRISPR clustered regularly interspaced short palindromic repeats)
(utilizare ARN procariotic, bacteriofag)
• Mecanism
CRISPR CAS previne infecțiile bacteriilor prin scindare AND
(ribonuclează)
CRISPR+CAS9 pentru a pătrunde în celulă
• Clivare +editare (complex ribonucleaza, reverstranscriptaza)
Schema acțiunii clivare+editare
CRISPR

https://www.researchgate.net/figure/CRISPR-Cas9-knock-out-working-principle-To-knock-out-a-specific-gene-a-complementary_fig9_2860
92505
Parkinson`s Disease
• Afectare termen lung SNC
• Afectare SN motor
• Tremur
• Rigiditate
• Încetinire

• Demenția la stadiul tardiv al bolii

 Cauze moleculare
•  LRRK2
• PARK7
• PINK1 MUTAȚII
• PRKN
• SNCA

Rezultat:
!Neuronii din substantia nigra mor
!nu se produce dopamina
!dopamina-neurotransmițător
Corpi Lewy, neroni inactivi
https://www.google.com/search?
q=tau+tangles+microscope&sxsrf=ACYBGNRjK692Lhl24C2jk1o_ycODBS9Uzw:1571244013324&source=
Morfopatologia

https://ghr.nlm.nih.gov/condition/parkinson-disease#genes
De ce terapia genică pentru PARKINSON
• Farmacologia tratează doar simptomatic
• Terapia genică ar putea teoretic reface neuronii dopaminergici
• Ar putea (încă teoretic)trata complet

Neuroblaste în
imagine
 Vectori asociați terapiei genice Parkinsons
• Mutații induse hipermorfe GDNF mediat de vector lentiviral
* Protecție împotriva șocurilor toxice*

• Ad-GNDF protejează neuronii (studii pe șobolani)

• AAV-2 administrat local în globul palid și sb nigra

Direcții de studiu ulterior PD terapia genică

• La nivel de sinteză a DOPAMINEI

• Modularea activității nucleilor bazali

• Modificarea consecințelor prin protecție a neuronilor ???

https://wiki.epfl.ch/gene-therapy/lentivecteurs
Concluzii
• Eficiența dovedită
• Metodele practice, inovative
• Implementarea la nivel de studii
• Nr. tratamente în desfășurare în creștere
• Direcții noi de studiu
• Medicii vor avea cu ce să se ocupe 
• Rezultate în viitorul apropiat
Referințe
• https://www.nhs.uk/conditions/alzheimers-disease/causes/ din 07.09.19
• https://www.kelseygroup.com/genetic-inheritance/ din 17.09.19
• https://thebrain.mcgill.ca/flash/i/i_08/i_08_cl/i_08_cl_alz/i_08_cl_alz.html
• https://ghr.nlm.nih.gov/condition/parkinson-disease#resources 07.08.19
• Wong LF, Goodhead L, Prat C, Mitrophanous KA, Kingsman SM, Mazarakis
ND.
Lentivirus-mediated gene transfer to the central nervous system:
therapeutic and research applications.
https://www.slideshare.net/damarisb/gene-therapy-27039196 10.10.19
•  < http://www.oxfordbiomedica.co.uk/ProSavin.asp >. Consultat la 08.10.10
Mulțumim pentru atenție!!