Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
CARACTERISTICILE
STRIPURILOR
Laboratorul Central de Analize al Spitalului Clinic de Urgenţă
Judeţean Timişoara
Compartimentul Analiza Urinei
Examenul biochimic al urinei
Hârtie absorbantă
Suport de plastic
Indicaţiile utilizării stripurilor urinare:
Boli renale şi de tract urogenital. În acest caz, se
urmăresc modificările de culoare la nivelul
bandeleltelor reactive în special a următorilor
parametrii: pH, leucocite, nitriţi, proteine, hematii,
densitate urinară. Importanţa efectuării unui examen
sumar de urină de rutină reiese din faptul că bolile
renale şi de tract urogenital rămân adesea
asimptomatice o perioadă lungă de timp conducând
adesea la alterări ireversibile. De exemplu, I.R.C
reprezintă stadiul terminal al diverselor nefropatii
primare şi secundare iar singura posibilitate de
tratament a acesteia este reprezentată de dializă sau
de transplantul renal. În plus, are repercursiuni
negative asupra sistemului cardiovascular.
- boli metabolice (în special diabetul zaharat). Se
urmăresc glucoza şi corpii cetonici urinari şi nu
numai acestea deoarece, în timp, diabetul zaharat se
complică cu diverse forme de nefropatie.
- boli hepatice şi anemii hemolitice. În acest caz
importantă este determinarea urobilinogenului şi a
bilirubinei. În multe boli hepatice simptomatologia
apare doar în stadii avansate iar un diagnostic
precoce conduce la instituirea imediată a
tratamentului, evitând complicaţiile ce pot apărea
ulterior.
- monitorizarea unor tratamente cu shimbarea, la
nevoie, a strategiei terapeutice.
- medicina generală cu scopul efectuării de
screening-uri pentru depistarea bolilor aflate într-un
stadiu incipient asimptomatic.
Mod de lucru: Se utilizează urina proaspătă
necentrifugată, de obicei prima urină de
dimineaţă. Urina se colectează într-un vas de
preferinţă steril (dacă recipientul nu este steril,
nu se interpretează nitriţii). Bandeleta se
imersează timp de două secunde în urină în aşa
fel încât toată suprafaţa să fie acoperită. Se
îndepărtează excesul de lichid lipind marginea
benzii de marginea vasului cu urină, apoi se
pune banda în poziţie orizontală. Se compară
zonele reactive de pe bandă cu cele
corespunzătoare de pe scala etalon într-un
interval de 60 de secunde (pentru leucocite
intervalul de 60-120 de secunde). Nu se vor
depăşi două minute
a) Nu există o concordanţă cu privire la numărul de
parametrii pe care să-i includă examenul de urină.
Noi considerăm potrivit ca examenul de urină să conţină
următorii parametrii:
Densitate
pH
proteine
glucoză
urobilinogen
pigmenţi biliari
corpi cetonici*
nitriţi*
leucocite**,hematii**
cilindrii
celule epiteliale plate (scuamoase),celule tranziţionale
(rotunde şi fusiforme),celule renale
Cristale,floră microbiană,altele (levuri, paraziţi, mucus,
filamente şi secreţii urerale şi vaginale, spermatozoizi)
Unii autori susţin că sedimentul urinar trebuie efectuat doar după o prealabilă
triere a probelor de urină prin asa numitul TEST SITĂ
a)Densitatea urinară
Principiu: Testul determină concentraţia ionică a
urinei bazându-se pe eliberarea protonilor care, în
prezenţa cationilor formează un complex. Reacţia
produce schimbarea culorii indicatorului (albastru
de brom-timol). Constituenţii neionici ai urinii, cum
ar fi glucoza sau ureea nu sunt determinaţi. De
aceea, o creştere a densităţii datorită concentraţiei
glucozei > 1000 mg/dl (> 56 mmol/L) nu este
determinată prin acest test.
EGTAH4* + K+ → EGTAH3K + H+
Anionul albastru de brom-timol + H+ → albastru de brom timol
(colorat în albastru) (colorat în galben)
(* = Etilenglicol – bis (β-aminoetileter) – N,N’-tetraacetic
acid)
Surse de eroare:
- prezenţa proteinelor (100-500 mg/dl) conduce la
rezultate fals crescute. Acelaşi fenomen are loc şi în
cazul urinei cetoacidozice.
- la un pH de 7 sau mai mare, valorile sunt mai mari
cu 0,005 g/ml
Densitatea urinei se determină cu urodensimetrul
folosind un eşantion din urina colectată în 24 de ore.
Urodensimetrul este un densimetru etalonat pentru
determinarea densităţii de lichide cuprinse între
1,000-1,060 g/cm3 la 15°C. De aceea, în cazul în care
determinarea densităţii urinei se face la altă
temperatură şi urina conţine glucoză este necesară
corectarea ei. Corectarea se face folosind tabelul
Buchardat.
Mod de lucru
Într-un cilindru gradat de 50 ml se aduc aproximativ
40 ml urină evitând formarea spumei; daca spuma
totuşi s-a format ea se îndepărtează cu o hârtie de
filtru. Se cufundă apoi urodensimetrul în cilindrul cu
urină, iar când acesta nu mai oscilează se citeşte
densitatea corespunzătoare diviziunii de pe tija
aflată la suprafaţa urinei, având grijă ca
urodensimetrul să nu fie lipit de pereţii cilindrului
Urodensimetru
Semnificaţii clinice:
Densitatea urinei normale, numită normostenurie,
variază între 1,015-1,025 g/cm3. În condiţii de hidratare
sau de deshidratare a organismului, limitele sunt mai
largi, variind între 1,000-1,030 g/cm3. În condiţii
fiziologice densitatea urinei variază invers proporţional
cu cantitatea emisă şi direct proporţional cu cantitatea
de substanţe pe care le conţine şi cu intensitatea
culorii.Valorile mai mici de 1,010 g/ml au o semnificaţie
analitică deoarece în acest caz leucocitele şi hematiile
suferă o liză rapidă. Aşa se explică rezultatele negative
obţinute la citirea sedimentului urinar dar cu rezultate
pozitive pe strip.
În cazul alterării funcţiei de concentrare a rinichiului, sau
a eliminării anormale a unor metaboliţi, corelaţia dintre
densitate şi diureză se pierde. Patologic se remarcă
următoarele situaţii:
- Hiperstenurie, densitate peste 1,025, apare în
diabet, proteinurie, urini concentrate
survenite în urma unui regim de sete,
transpiraţii abundente, stări febrile etc.
- Hipostenurie, densitate sub 1,015, apare în
diabet insipid, aport excesiv de apa sau
alimente bogate în apă (fructe).
- lzostenurie, densităţile tuturor emisiunilor
din 24 de ore sunt egale şi cuprinse în jurul
valorii de 1,002 (densitatea ultrafiltratului
plasmatic glomerular). Apare în caz de
insuficientă renală gravă dovedind
incapacitatea de diluare sau concentrare a
rinichiului.
b) pH-ul.
Principiu:
Zona reactivă conţine un amestec de tri indicatori:
roşu metil, albastru de brom-timol şi fenolftaleină. În
limita de pH de 5-9 se obţine o culoare care variază
gradat de la portocaliu-galben-verde până la
albastru.
Determinarea pH-ului cu hârtie indicator
Reactivi:pachete cu benzi de hârtie şi o scala de
culori corespunzătoare.
Mod de lucru
Se introduce în urina proaspăt emisă, timp de 1-2
secunde o bandă de hârtie indicator universal. După
30 de secunde se stabileşte valoarea pH-ului
comparând culoarea hârtiei cu cea a scalei de culori
care însoţeşte pachetul.
Br Br Br Br
OH O O-
O +
-H
+H+
SO3- SO3-
O O-Na+
OH O
+2NaOH O
O
-H2O
R R
R R
OH - +
O Na
incolor Fenolftaleina rosu
COOH COOH
-H+
N+ N N(CH3)2 N N N(CH3)2
+H+
H
OH OH
+
+ N N R1-
N N N N
R2
H H
Sare de diazoniu R1
Indoxil Derivat azo (violet) R2
În urină pot fi prezente şi celulele
tranziţionale atipice datorate unui cancer al
vezicii urinare, ureterului sau bazinetului.
Ocazional, aceste celule pot fi identificate
în contrast de fază pe preparate nefixate şi
necolorate.
Un simplu sediment urinar de rutină poate
juca un rol important în detectarea timpurie
a cancerului cu celule tranziţionale.
Deşi aceste modificări nu sunt întotdeauna
asociate cu o patologie clară, celulele atipice
trebuie urmărite şi identificate cu atenţie.
Surse de eroare:
- dacă urina este intens colorată, această
coloraţie poate masca culoarea obţinută în
urma reacţiei de pe strip
- excreţia de proteine peste 500 mg/dl şi a
glucozei peste 2 g/dl poate bloca colorarea
zonei reactive zonei reactive. Aceleaşi efecte
le au şi unele medicamente administrate în
doze mari (gentamicina, cefalexinul).
- unele medicamente pot da reacţii fals
pozitive: meropenemul, imipenemul, acidul
clavulanic.
Semnificaţii clinice: Leucocituria reprezintă un
indicator important al proceselor imflamatorii renale
şi ale tractului urinar: infecţii bacteriene (cistite,
uretrite, pielonefrite acute şi cronice), infecţii
abacteriene cauzate de virusuri şi levuri, infecţii
parazitare, glomerulopatii, intoxicaţii. De asemenea,
prezenţa leucocitelor în urină poate fi cauzată şi de o
contaminare cu secreţii din căile genitale, dar în
marea majoritate a cazurilor, pozitivarea testului
pentru leucocite semnifică prezenţa unei infecţii
bacterieie de tract urinar.
Uneori, în cazul inflamaţiilor cronice, se observă o
puternică reacţie leucocitară în absenţa bacteriilor,
cunoscută sub numele de „leucociturie
abacteriană”. Această situaţie este observată adesea
ca simptom unic în pielonefritele cronice.
d) Nitriţii
Principiu:
Nitriţii sunt detectaţi pe baza principiului testului
Griess: orice nitrat prezent în urină e transformat
prin reducere de către bacterii într-un nitrit:
Nitrat → reducere bacteriană → Nitrit
Amina aromatică a sulfanilamidei reacţionează cu
nitritul în prezenţa unui tampon acid formând o sare
de diazoniu care se cuplează cu 3-hidroxi-1,2,3,4-
tetrahidrobenzo-(h)-chinolină formând un derivat azo
de culoare roşie. Intensitatea culorii este direct
proporţională cu cu concentraţia nitriţilor dar fără
nici o legătură cu severitatea infecţiei.
NH3++ NO2- H+ H N SO
H2N SO2 2 2 N+ N+2H2O
OH H
H2N SO2 N+ N+ H2N SO2 N+ N OH
N
Sare de diazoniu H N
Component de cuplare H
Cl Cl Proteine Cl Cl
Br SO3- -H+ Br SO3-
Br Br Br Br
Br Br
galben verde
3'3",5'5"tetraclorofenol- Anionul acestui compus
3,4,5,6-tetrabromsulfonftaleina
(forma neutra)
H2N POD
NH2 + H2O2 H2O +Derivat colorat verde-albastru
3,3',5,5'-tetrametilbenzidina
Semnificaţii clinice:
Urina normală conţine o cantitate foarte mică de
glucide (350-500 mg/24 ore sau 15 mg/dl în urina de
dimineaţă), cantitate neidentificabilă prin metodele
uzuale.Determinarea glucozei în urină are o valoare
diagnostică mare pentru depistarea diabetului
zaharat cât şi pentru posibilitatea de autocontrol a
acesteia de către pacienţi. Pe de altă parte, absenţa
glicozuriei nu exclude o alterare a metabolismului
glucidic, în particular, nu exclude un diabet zaharat.
De asemenea, glicozuria poate fi cauzată şi de alţi
factori.
Glicozuria apare atunci când reabsorbţia tubulară
(tubul proximal) la nivel renal a glucozei este
depăşită, la o valoare a glicemiei de peste150-180
mg/dl (prag renal de eliminare a glucozei).
Glicozuria din diabetul zaharat. Majoritatea
pacienţălor diabetici prezintă glicozurie, dependent
de severitatea bolii şi de integritatea funcţiei renale.
Determinarea glicozuriei postprandial este mai
eficientă pentru depistarea diabetului decât cea
efectuată folosind prima urină de dimineaţă.
Glicozuria renală (diabetul renal) reprezintă o
tulburare congenitală benignă caracterizată prin
prezenţa unei glicozurii, constante sau intermitente,
în timp ce glicemia are valori normale sau scăzute.
În acestă situaţie, reabsorbţia tubulară a glucozei
este limitată, fapt care duce la pierderea de glucoză
prin urină.
Recunoaşterea glucidelor reducătoare
Toate glucidele eliminate au proprietăţi reducătoare
faţă de anumiţi reactivi care conţin săruri de cupru,
argint sau bismut, datorită prezenţei în molecula lor
a unei funcţiuni carbonilice libere. Excepţie face
zaharoza, care are funcţiunile carbonilice blocate,
dar prin hidroliză eliberează produşi cu acţiune
reducătoare. Reducerea reactivilor poate fi dată şi de
alte substanţe cu caracter reducător conţinute în
urina, motiv pentru care este normal să se indice
existenţa corpilor reducători.
Metoda Botger-Nylander
Principiu. Azotatul bazic de bismut, în mediu alcalin,
la cald este redus de către un glucid reducător la
bismut metalic de culoare neagră:
100°C
Bi(OH)2NO3 + NaOH Bi(OH)3 + NaNO3
2Bi(OH)3 + 3 H C O 2Bi + 3 COOH + 3H2O
(H C OH )4 (H C OH )4
CH2 OH CH2 OH
Reactiv Nylander:
-Hidroxid de sodiu 100 g;- Sare Seignette (tartrat
dublu de sodiu şi potasiu) 40 g;
- Azotat bazic de bismut 20 g,
- Apă distilată ad. 1000 ml.
Mod de lucru
Se măsoară într-o eprubetă un ml urină şi o picătură
de reactiv Nylander. Se menţine eprubeta, în baia de
apă la fierbere, timp 5 minute. Apariţia unui
precipitat negru indică un rezultat pozitiv. Pot apărea
rezultate fals pozitive datorită apariţiei unui
precipitat negru de sulfură de bismut produs de
aminoacizi cu sulf din albuminele urinare. În aceste
cazuri se repetă proba cu un reactiv cu sulfat de
cupru (Benedict). Reacţia este sensibilă şi are
valoare diagnostică deosebită când rezultatul este
negativ.
Metoda Benedict (semicantitativă)
Principiu
Monozaharidele, în mediu alcalin, la cald, reduc
sărurile cuprice complexate la oxidul cupros roşu-
cărămiziu. Complexarea ionilor de cupru în mediu
alcalin (pentru a împiedica formarea hidroxidului
cupric) se face cu citrat de sodiu.
Reactivi
Reactiv Benedict:
Citrat de sodiu 173 g
Carbonat de sodiu anhidru 100 g
Sulfat de cupru 17,3 g
Apă distilată ad 1000 ml
Mod de lucruÎntr-o eprubetă se măsoară: un ml reactiv
Benedict şi o picătură urină. Se menţine eprubeta în baia de
apă la fierbere, timp de 5 minute.
Rezultat
Culoarea Citirea reacţiei Concentraţia glucidului (g/1000 ml)
Neschimbată negativ 0
+ Mediu acid
H3C O N N -
BF4 + Urobilinogen Compus azo (rosu)
Sare de diazoniu
Supraîncărcarea capacităţii funcţionale hepatice
Când sunt prezente cantităţi mari de bilirubină, şi de
asemenea şi urobilinogen, ca rezultat al degradării excesive a
hemoglobinei, capacitatea funcţională hepatică poate fi
depăşită, chiar dacă ficatul prelucrează de 2-3 ori mai mult
urobilinogen decât în mod normal. Urobilinogenul
neprelucrat ajunge în torentul sangvin şi în final este excretat
renal. Cauzele supraîncărcării capacităţii funcţionale hepatice
sunt: anemii hemolitice, anemie pernicioasă, hemoliză
intravasculară ca şi consecinţă a unor intoxicaţii, boli
infecţioare sau accidente transfuzionale, policitemie.
Alterarea capacităţii funcţionale hepatice. Bolile
hepatice au drept consecinţă alterarea capacităţii funcţionale
a ficatului. Urobilinogenul ce intră prin vena portă nu este
complet metabolizat şi se elimină ca atare la nivel renal.
Această alterare se întâlneşte în următoarele situaţii: hepatite
virale, hepatite cronice, ciroză hepatică, intoxicaţii cu lezarea
parenchimului hepatic, tumori hepatice.
Scurtcircuitul hepatic. În unele situaţii patologice (de
exemplu, în ciroza hepatică cu hipertensiune portală,
tromboză de venă portă, ocluzia venei hepatice) fluxul
sangvin la nivelul venei porte este redus iar o parte din
urobilinogen trece direct în sânge fiind excretat
renal.Urobilinogenul este absent în urină în situaţia
producţiei insuficientă de bilă de către celulele hepatice,
alterarea capacităţii de secreţie a bilei în intestin şi
absenţa reducerii bilirubinei la nivel intestinal. Cauze:
obstrucţia completă a ductului biliar comul în absenţa
infecţiei de tract biliar, stoparea completă a producţiei
de bilă de către ficat (hepatite virale severe, intoxicaţii cu
afectare hepatică severă), absenţa florei intestinale
(fiziologică la nou-născuţi şi întâlnită rar după un
tratament antibioterapic intensiv). În urina normală,
urobilinogenul se află în cantităţi mici dar decelabile;
lipseşte sau apare crescut în stări patologice.
Recunoaşterea urobilinogenului cu reactiv Ehrlich
Principiu:Urobilinogenul se condensează cu
paradimetilaminobenzaldehida în mediu acid dând naştere
unui produs de culoare roşie.
Reactiv Ehrlich.Se dizolvă 2 g p-dimetilaminobenzaldehida în
100 ml acid clorhidric 20 %.
Mod de lucru
Într-o eprubetă se aduc aproximativ 2 ml urină proaspătă (dar
rece) şi 1-2 picături de reactiv Ehrlich; dacă nu apare imediat
o coloraţie roşie se încălzeşte la flacără sau în baia de apă.
Rezultate:
Urobilinogenul normal: coloraţia roşie nu apare decât prin
încălzire.Urobilinogenul crescut: coloraţia roşie apare chiar la
rece (temperatura camerei).Urobilinogen absent: coloraţia
roşie nu apare nici la cald.Urobilinogenul are valori crescute
în icterul hemolitic şi parenchimatos (hepatic), tumori
maligne hepatice, steatoza hepatică, abces hepatic şi lipseşte
în icterele mecanice (prin obstrucţie).
Bilirubina
Principiu:
Reacţia se bazează pe cuplarea bilirubinei cu o sare stabilă
de diazoniu (2,6-diclorobenzendiazoniu difluoroborat) în
mediu acid cu formarea unui derivat azo de culoare violet.
Cl
+ Mediu acid
N N BF4- + Bilirubina Compus azo (violet)
Cl
Sare de diazoniu
Surse de eroare:
- sensibilitatea este alterată de cantităţi mari de acid ascorbic sau
nitriţii din urină.
- rezultate fals negative se întâlnesc în următoarele condiţii: timpul
îndelungat scurs de la recoltare până la efectuarea testului şi
expunerea probei la lumină determină oxidarea bilirubinei.
- rezultatele fals pozitive se pot datora medicaţiei care colorează
urina în roşu sau prezintă o culoare roşie în mediu acid .
Semnificaţii clinice:
Ca rezultat al conjugării (esterificării) cu acid
glucuronic, bilirubia devine hidrosolubilă şi astfel
susceptibilă de a fi excretată renal. Bilirubina
prezentă în urină este întotdeauna bilirubină
conjugată (directă).
În toate procesele patologice în care avem o
creştere a concentraţiei bilirubinei conjugate în
plasmă, avem şi nivele considerabile ale bilirubinei
urinare. Bilirubina conjugată este prezentă în
cantităţi mari în plasmă în următoarele situaţii:
creşterea presiunii intracanaliculare datorită
obstrucţiei intra- sau extrahepatice, inflamaţie sau
fibroză periportală, necroză hepatică.
Hematiile (eritrocitele)
Principiu:
Testul se bazează pe activitatea de tip
peroxidazic al hemoglobinei şi mioglobinei care
catalizează oxidarea unei substanţe indicator
(3,3’,5,5’-tetrametilbenzidină) de către un
hidroperoxid organic (2,5-dimetilhexan-2,5-
hidroperoxid) conducând la un compus verde-
albastru.
Există două scale pentru determinarea
hemoglobinei şi a eritrocitelor libere. Sensibilitatea
testului este de 5 eritrocite/µl ceea ce corespunde la
0,015 mg hemoglobină/dl urină. Această sensibilitate
mare este dată de adăugarea unui activator în
amestecul de reacţie
+ H2N NH2 + Hemoglobina
OOH OOH
3,3',5,5'-tetrametilbenzidina
2,5-dimetilhexan
2,5-dihidroperoxid
+ Compus verde-albastru
OH OH
Nitriţi* – interpretare
Absenţi Prezenţi