Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Indrumator Lucrari Practice Biologie Celulara - MEDICINA SIBIU
Indrumator Lucrari Practice Biologie Celulara - MEDICINA SIBIU
Confereniar Dr. Med. Alexandra Criu Bota Asistent univ. Dr. Cezar Bologa
BIOLOGIE CELULAR
NDRUMTOR DE LUCRRI PRACTICE
2010
CUPRINS
MIJLOACELE TEHNICE DE STUDIERE A MATERIEI VII .................................................................. 5 TIPURI DE MICROSCOAPE ........................................................................................................................ 5 MICROSCOPUL OPTIC ....................................................................................................................................... 5 MICROSCOPUL CU CONTRAST DE FAZ ............................................................................................................ 8 MICROSCOPUL CU LUMIN FLUORESCENT ..................................................................................................... 9 MICROSCOPUL CU LUMIN POLARIZAT .......................................................................................................... 9 MICROSCOPUL ELECTRONIC .......................................................................................................................... 10 PLASMALEMA- MICROSCOPIE ELECTRONIC: .............................................................................. 12 MODELUL N MOZAIC FLUID AL LUI SINGER I NICOLSON AL MEMBRANEI CELULARE .................................... 12 ETAPELE DE OBINERE ALE UNUI PREPARAT MICROSCOPIC .................................................. 14 OBINEREA UNUI PREPARAT MICROSCOPIC PERMANENT ............................................................................... 14 OBINEREA UNUI PREPARAT MICROSCOPIC NATIV ......................................................................................... 17 FROTIU CU CELULE DIN EPITELIUL MUCOASEI BUCALE- PREPARAT PROASPT, NEFIXAT ................................ 17 FORME CELULARE .................................................................................................................................... 18 CELULA POLIEDRIC -FICATUL - CELULA HEPATIC- COLORAIE H E ............................................................ 18 CELULA CUBIC-RINICHIUL -TUBI URINIFERI-EPITELIUL - COL. H.E. .............................................................. 20 CELULA ROTUND- OVAR-FOLICUL OVARIAN- OVOCITUL- COL.H.E. ............................................................ 23 CELULA PAVIMENTOAS- MEZENTERUL - IMPREGNAIE ARGENTIC ............................................................. 25 CELULA STELAT-MADUVA SPINRII- NEURONUL MULTIPOLAR - COL. H.E................................................... 26 CELULA PRISMATIC- EPITELIUL VEZICII BILIARE- COL.H.E........................................................................... 28 CITOSCHELETUL - MICROSCOPIE ELECTRONIC: ........................................................................ 29 PRELUNGIRI PERMANENTE ALE CELULELOR................................................................................. 30 BORDURA STRIAT (CUTICULA-BORDURA N PERIE-MARGINEA N PERIE)......................... 30 CELULA PRISMATIC- EPITELIUL VEZICII BILIARE- COL.H.E........................................................................... 30 INTESTINUL SUBIRE- VILOZITI INTESTINALE- COL. H.E. ............................................................................ 31 INTESTINUL GROS - EPITELIUL MUCOASEI- COLORAIE ALBASTRU ALCIAN PENTRU MUCOPOLIZAHARIDE (MPZ) ........................................................................................................................................................... 32 ULTRASTRUCTURA BORDURII STRIATE- MICROSCOPIE ELECTRONIC: ............................ 34 MICROVILOZITTILE- MICROSCOPIE ELECTRONIC: ................................................................ 35 PRELUNGIRI PERMANENTE ALE CELULELOR................................................................................. 37 CILII ................................................................................................................................................................ 37 TRAHEE- EPITELIUL MUCOASEI -CILI VIBRATILI (MOBILI)- COL H.E. ............................................................... 38 MADUVA SPINRII- CANALUL EPENDIMAR- STEREOCILI- COL. H.E. ............................................................... 41 FROTIU CU SPERMATOZOIZI-CELULE FLAGELATE-COL. MAY-GRUNWALD GIEMSA (MGG) ........................... 43 CELULE EUCARIOTE UNICELULARE CU CILI SAU FLAGELI ............................................................................... 44 PREPARAT NATIV CU CELULE CILIATE SAU FLAGELATE .................................................................................. 44 ULTRASTRUCTURA CILULUI - MICROSCOPIE ELECTRONIC : ................................................. 48 JONCIUNILE INTERCELULARE- MICROSCOPIE ELECTRONIC: ............................................ 51 ULTRAFAGOCITOZA ................................................................................................................................. 54
MACROFAGUL DIN PLMN- COL H.E. I GRANULE DE PIGMENT ANTRACOTIC FAGOCITATE .......................... 54 MACROFAGUL DIN PIELE - HISTIOCITUL -COL KERNECHTROT (ROU NUCLEAR) I GRANULE DE ALBASTRU DE TRIPAN FAGOCITATE ...................................................................................................................................... 56 MACROFAGUL DIN FICAT( CELULA KUPFER)- COL H.E.I GRANULE DE TU DE CHINA FAGOCITATE .............. 58 FENOMENE DE TRANSPORT - TRANSPORTUL PRIN VEZICULE - MICROSCOPIE ELECTRONIC: ........................................................................................................................................... 60 FORME NUCLEARE .................................................................................................................................... 63 NUCLEUL ROTUND - NEURONUL - MADUVA SPINRII COL. H.E. ..................................................................... 63 NUCLEUL ROTUND - OVOCITUL - OVAR - COL.H.E. ...................................................................................... 64 CELULA BINUCLEAT - FICATUL,CELULA HEPATIC,COLORAIE H. E. ........................................................... 65 NUCLEUL TURTIT - FIBRA MUSCULAR STRIAT - CELULA MULTINUCLEAT - COL HEMATOXILIN FERIC ... 66 NUCLEUL OVALAR- EPITELIUL PRISMATIC AL VEZICII BILIARE COL.H.E. ........................................................ 69 NUCLEUL N PECETE-ESUTUL ADIPOS-ADIPOCITUL-COLORATIE HE.............................................................. 70 FROTIUL SANGUIN - COLORAIE MAY GRUNWALD GIEMSA (MGG) .............................................................. 71 FROTIU DE SNGE COL. ALBASTRU BRILLANT CREZIL .................................................................................... 75 FICAT - HEPATOCITE -COLORAIE VERDE METIL PIRONIN ............................................................................. 76 NUCLEUL -MICROSCOPIE ELECTRONIC:........................................................................................ 77 NUCLEOLUL .................................................................................................................................................. 80 FUSUL DE DIVIZUNE-MICROSCOPIE ELECTRONIC ..................................................................... 82 MITOZA ......................................................................................................................................................... 83 CELULE VEGETALE DE CEAP - COLORAIE HEMATOXILIN FERIC .............................................................. 83 CELULE N MITOZ DIN MERISTEMUL RADICULAR DE CEAP ......................................................................... 86 ETAPELE MITOZEI -MICROSCOPIE ELECTRONIC ....................................................................... 89 CARIOTIPUL UMAN ................................................................................................................................... 92 FENOMENUL DE BANDARE ..................................................................................................................... 93 RIBOZOMII I RETICULUL ENDOPLASMATIC RUGOS ................................................................... 97 HEPATOCITE -CORPUSCULII BERG - FICATUL - COLORAIE H. E. ................................................................... 97 NEURONUL - CORPUSCULII NISSL -MADUVA SPINRII- COL. H.E. ................................................................... 98 NEURONUL - CORPUSCULII NISSL -MADUVA SPINRII- COL. ALBASTRU DE TOLUIDIN................................... 99 PANCREASUL - ACINI PANCREATICI - COL. H.E. ........................................................................................... 100 RETICULUL ENDOPLASMATIC: RUGOS I NETED- MICROSCOPIE ELECTRONIC:.......... 102 RIBOZOMII-MICROSCOPIE ELECTRONIC..................................................................................... 103 COMPLEXUL GOLGI ................................................................................................................................ 104 TIROIDA - FOLICULI TIROIDIENI - COL H.E. .................................................................................................. 104 GANGLION VEGETATIV - NEURON VEGETATIV - IMPREGNAIE ARGENTIC CAJAL........................................ 106 COMPLEXUL GOLGI - MICROSCOPIE ELECTRONIC: ................................................................ 108 FENOMENUL DE SECREIE CELULAR- MICROSCOPIE ELECTRONIC: ............................. 111 LIZOZOMII.................................................................................................................................................. 112 MIOCARD DE PERSOANE N VRST - LIZOZOMI LLL (CORPI REZIDUALI) - COL. H.E. .................................... 112 MIOCARD ISCHEMIC - COL. L.I.E. ................................................................................................................ 113 LIZOZOMII - MICROSCOPIE ELECTRONIC: .................................................................................. 115 MITOCONDRIA .......................................................................................................................................... 117
RINICHI - TUBI URINIFERI - MITOCONDRII - COL. HEMATOXILIN FERIC ...................................................... 117 MITOCONDRIA - MICROSCOPIE ELECTRONIC: .......................................................................... 119 PEROXIZOMII-MICROSCOPIE ELECTRONIC ............................................................................... 120 IMAGINE DE ANSAMBLU A CELULEI ................................................................................................. 121 BIBLIOGRAFIE .......................................................................................................................................... 122
Biologia celular i molecular studiaz unitatea morfofuncional a lumii vii -celula- cu toate aspectele ei, utiliznd o multitudine de mijloace tehnice caracteristice fie nivelului morfologic (metodele de microscopizare) fie nivelului funcional al acesteia,ajungnd pn la cele mai intime procese biochimice moleculare . .Metodele de microscopizare variaz funcie de scopul urmrit i nlesnesc cunoaterea celulei att ca o structur morfologic unitar ct i ca un adevrat microcosmos al ultrastructurilor ei .
Tipuri de microscoape
Microscoape fotonice Microscoape electronice Difracia cu raze X
Microscoape fotonice
1. 2. 3. 4. Microscopul optic obinuit Microcopul cu contrast de faz Microscopul cu lumin fluorescent microscopul cu lumin polarizat
Microscopul optic
a fost primul instrument studiat pentru studierea detaliilor celulelor. este constituit din 2 pri : 1. Partea mecanic se compune din : -picior sau talp- partea de sprijin pe mas -coloan susine tubul i sistemele de vize. -platina sau msua pe care se aeaz lama care se fixeaz cu ajutorul clreilor sau clemelor
-urub msuei
-inferior pentru micri laterale -macrovizele care apropie sau ndeprteaz obiectivele de msu -tubul microscopului susine sistemul obiectiv i ocular la partea inferioar prezint revolverul, iar la partea superioar tuburile oculare -revolverul are un disc mobil de care se fixeav obiectivele i un disc fix cu un pinten care oprete fiecare obiectiv n dreptul axului optic. 2. Partea optic -sistemul ocular cu lentila nferioar, de cmp, colimatoare i lentila superoar. -sistemul obiectiv compus dintr-un sistem de lentile, cu puteri de mrire de 6X, 10X, 20X, 40X, pentru obiectivele uscate i 90X.pentru obiectivul de imersie (obiectiv umed -sau citologic). -sistemul de transmis lumina, alctuit din condensor, oglind i sursa de lumin.
Puterea rezolutiv sau de separare Puterea rezolutiv sau de separare este distana minim la care mai pot fi vzute distinct 2 puncte alturate. Ochiul emetrop are puterea rezolutiv de 0,1-0,2 mm, iar microscopul fotonic ajunge pn la 0,2 microni. Calculul puterii rezolutive se face cu ajutorul formulei lui Abbe.
d= ---------------n sin = lungimea de und a luminii fotonice n=indicele de refracie al mediului, pentru aer=1 =jumtate din unghiul de deschidere ale celor mai laterale raze dintrun punct care mai ptrund n sistemul obiectiv. Pentru obiectivul de 90X , apertura unghiular maxim este 180 grade, deci este 90 grade., iar sin=0,95 aprox =1
Reguli de microscopizare 1. Preparatele se aeaz cu lamela n sus i se prinde cu jutorul clemelor. Se pornete sursa de lumin, i se ridic condensorul la maxim pentru a obine un punct luminos pe lam. 2. Se deplaseaz msua prin rotirea uruburilor msuei pentru a aduce preparatul n axul optic (se suprapune preparatul pe punctul luminous de pe lam obinndu-se lumin colorat). 3. Se aduce n axulul optic cel mai mic obiectiv 10X i se coboar condensorul pentru a avea mai puin lumin pe lam . Se regleaz distana pupilar a ocularelor pentru a putea privi simultan cu ambii ochi fiind microscoape binoculare. 4. Se coboar tubul microscopului la maxim apoi se ridic prin rotirea cu ambele mini a macrovizei, privindu-se pentru prima dat n oculare pn se obine o imagine clar de esut i structure celulare. Se deplaseaz preparatul prin rotirea uruburilor msuei pn este recunoscut. 5. Numai cnd imaginea este clar i preparatul a fost recunoscut se trece la obiective mai mari. 6. Pe msur ce se trece la obiective mai mari se ridic condensorul pentru a adduce mai mult lumin pe lam. 7. Dac se pierde imaginea la un obiectiv mai puternic se revine la un obiectiv mai slab respectiv ob 10X, cnd se poate folosi i macroviza. 8. La obiectivele mai mari de 10X se folosete numai microviza pentru a obine o imagine mai clar, altfel se sparge lama port obiect. 9. Uleiul de imersie nu are voie s ating alte obiective dect cel de 90X. Pentru aceasta dup obinerea imaginii clare la obiectivul de 40X, se aplic pictura de ulei de imersie, dup ce a fost scos obiectivul 40X din axul optic, n dreptul luminii maxime pe frotiu, dup care se trece la obiectivul de 90X. 10.La examinarea n imersie condensorul este ridicat la maxim.
Mreste contrastul, dintre structurile preparatului microscopic, oferind posibilitatea examinrii n condiiile unei bune vizibiliti a celulelor vii.
Microscopul cu contrast de faz prezint un dispozitiv c are transform diferenele de faz la trecerea prin diverse structuri, n diferene de amplitudine, perceptibile vederii.
Lumina polarizat este folosit n scopul urmririi fenomenului de birefringen. Se folosesc 2 prisme nicol una n portdiafragmul irisului, a 2-a n ocular. Birefringena se studiaz n poziia de dipoli ncruciai .Cnd cmpul cu preparatul rmne ntunecat, atunci obiectul examinat este monorefringent, izotrop. Dac n cmpul preparatului apar structuri intens luminate, obiectul examinat este anizogrup sau birefringent. Cu ajutorul microcopului polarizant se pot studia structuri macromoleculare de aspect liniar, fibre de colagen, mielina, fibre musculare striate,membrane plasmatice, granule proteice, lipidice, sau de colsterol.
Microscopul electronic
Folosete n locul fascicolului de lumin un fascicol de electroni i n locul lentilelor de sticl, lentile cu cmpuri electromagnetice. Se ajunge la rezoluii de 1,2 A i putere maxim de mrire de 800.000X , permind cercettorului s observe structura cea mai intim a materiei, ajungnd pn la atomul de hidrogen de 1 A, evideniind ultrastructura diferitelor tipuri de celule i a componentelor acestora n stare normal i patologic.
Microscoapele electronice sunt de transmisie, TEM (Transmition electron microscope) -imaginea fiind obinut prin traversarea electronilor prin preparat, i de baleiaj SEM ( Scanning electron microscope )- imaginea fiind obinut prin reflectarea electronilor de pe suprafaa preparatului pe un ecran fluorescent. In
10
ambele cazuri imaginile sunt nregistrate pe fotografii. Microscopul de baleiaj ofer o imagine tridimensiunal a structurilor studiate. Prin microscopia de baleiaj se obin date privind aspectul suprafeei unei structuri sau formei ei tridimensionale i date privind proprietile fizice i chimice ale preparatului. n hematologie se obin date privind proliferrile limfocitare de tip T sau B, diferenierii histiocitelor macrofage precum i a altor categorii de celule din seria mielomonocitar.
11
Se observ un strat dublu lipidic (fosfolipide sau glicolipide) n care lipidele privesc fa n fa cu prile hidrofobe sau nepolare, iar prile polare sau hidrofile stau n afar. Din loc n loc apar integrate molecule uriae proteice- proteine foarte complexe- deseori mucopolizaharide n proporie de aproximativ o protein la 50 de lipide n acest mozaic. Intregul mozaic este extrem de fluid datorit mobilitii crescute a componentelor sale, modelul fiind comparat cu o mare n continu micare, valurile sunt reprezentate de fosfolipide sau glicolipide iar proteinele sunt iceberg-urile care ies din aceste valuri.
12
Analog lui din membrane artificiale se obtin lipozomii - structuri extrem de utile n terapia modern gelurile cu aplicare extern.
13
Fixarea Poate fi prin mijloace fizice, nclzire sau ngheare cu zpad carbonic, sau prin procese chimice, cu ajutorul soluiilor de fixatori. Rolul fixatorilor este de a opri brusc procesele biochimice intracelulare cu meninerea structurilior celulare. Tipuri de fixatori: Cel mai utilizat este formolul in diluie de 4-15%, dar se mai folosesc i metanolul, etanolul sau amestecuri de fixatori. Exist fixatori specifici care au o anumit electivitate pentru diverse structuri: Bouin pentru acizi nucleici, Regand pentu mitocondrii, Carnoz pentru cercetri biochimice sau Herovici utilizat n strinatate n locul formolului. Timpul de fixare difer funcie de fixator de exemplu pentru formol peste 48 ore. Fixatorul trebuie s fie n cantitate de 50 de ori mai mare dect piesa. Splarea Oprete procsul de fixare prin metode chimice i se realizeaz sub jet de ap timp de mai multe ore.
14
Includerea Are mai multe subetape: 1. Deshidratarea const n trecerea prin mai multe recipiente cu alcool etilic ce concentraii crescnde 70%, 90%, alcool absolut. 2. Clarificarea const n plonjarea piesei n solveni organici, xilen sau toluen. 3. Impregnarea propriuzis se realizeaz prin includerea piesei n parafin sau paraplast care se gsesc n stare lichid la 57 grade Celsius n forme de cuburi cu latura de 2 cm apoi se las la temperatura camerei solidificndu-se. Secionarea Cubul de parafin obtinut se fixeaz ntr-un aparat numit microtom care prin micri de culisare i naintare n faa unei lame foarte ascuite, realizeaz seciuni de 4-6 microni. Exist diferite tipuri de microtom: microtomul pentru preparate incluse (rotativ , cu mecanism de sanie ) i pentru preparate proaspete i ngheate (criotomul-utilizat n diagnosticul anatomopatologic extemporaneu ). Seciunile astfel obtinute se aplic pe o lam de sticl pe care s -a aplicat n prealabil albumin Meier. Se ntind ct mai bine pentru deplia seciunea apoi lama se nclzete pentru a se topi parafina dup care se las la termostat 24 ore pentru buna lipire a preparatului de lam.
15
Colorarea Se realizeaz cu colorani naturali sau sintetici care sunt cromofori cu predilecie acidofil, bazofil sau neutr de ex. Col.May Grunwald Giemsa( MGG), sau colorani indifereni Sudan lll pentru trigliceride sau Sudan lV pentru fosfolipide. Hematoxilina coloreaz componentele bazice ale celulelor nucleul, nucleolul n mov, iar eozina coloreaz componentele acide ale celulelor respectiv citoplasma i unele organite n roz. Coloraia Hematoxilin Eozin prescurtat HE este cea mai des folosit i prezint urmtoarele subetape: Clarificarea const n trecerea prin mai multe bi de benzen sau xilen. Hidratarea prin trecerea succesiv prin mai multe recipiente cu concentraii descrescnde de alcool etilic absolut, 90%, 70% apoi ap distilat. Colorarea cu hematoxilin prin introducerea n recipientul cu colorant ntre 1 i 4 minute n funcie de tipul de esut i prospeimea preparatului prin tatonare. Cltirea cu ap ce conine sruri de Litiu. Tamponare Colorarea cu eozin prin introducerea n recipientul cu colorant Cltirea cu ap distilat
Deshidratarea const n trecerea prin mai multe recipiente cu alcool etilic ce concentraii crescnde 70%, 90%, alcool absolut. Clarificarea Cu benzen, toluen sau xilen dup care se las s se usuce cteva minute
16
Montarea Se face cu rini sintetice sau naturale de ex. Balsam de Canada cu rol n creterea transluciditii i protecia preparatului. Se pune o picrur pe preparat dup care se aplic lamela i se pune la termostat la 37 grade 24 ore pentru uscare. Etichetarea Este ultima etap a obtinerii unui preparat permanent.
17
Forme celulare
Celula poliedric -Ficatul - celula hepatic- coloraie H E
Se caut vena centrolobular pe seciune transversal i numai pe aceste seciuni se vede c pornesc de la ea ca nite raze trabeculele, cordoanele hepatice ale lui Remack, care prezint un traiect sinuos i cu celulele destul de apropiate ntre ele, nct nu se observ bine spaiul dintre ele .Cordoanele sunt formate din niruiri de celule hepatice , de form poliedric iar spaiile dintre cordoane numesc capilare sinusoide i n ele se afl din loc n loc macrofagele ficatului, care se vor studia la alt lucrare. Coloraia hepatocitelor: citoplasma n roz, cu eozin iar nucleul n mov, cu hematoxilin. Nucleul este rotund situat central i prezint unul sau mai muli nucleoli. Pot exista celule cu doi nuclei din loc n loc , pentru c este organul cu cea mai mare putere de regenerare . Vena centolobular prezint hematii n lumen care au culoarea ocrului i ajut la recunoaterea ei.
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
Intestinul gros - epiteliul mucoasei- coloraie albastru alcian pentru mucopolizaharide (MPZ)
Coloraia albastru alcian este specific pentru mucopolizaharide pe care le coloreaz n albastru. Epiteliul este format tot dintr-un strat de celule cilindrice, dar se observ i formaiuni glandulare, criptele sau glandele Lieberkuhn care secret mucus colorat n albastru. Glandele Lieberkuhn sunt cptuite cu celule rotunde cu rol de rezervor care secret mucusul, celule ca nite calice, se numesc celule caliciforme. Mucusul este bobat n mucopolizaharide i de aceea se vor colora n albastru, i care se acumuleaz in gland i apoi este trimis la suprafaa intestinal. De asemenea la suprafaa intestinului se gsete i glicocalixul ( component a bordurii striate),bogat n mucopolizaharide, care se coloreaz i el in albastru. Seciunile transversale prin glandele Lieberkuhn apar ca formaiuni circulare care sunt i ele cptuite de celule caliciforme,i ntre ele se pot gsi celule epiteliale obinuite cu rol de susinere.
32
33
34
Prelungiri permanente ale membranei celulare ca i cilii care se observ doar la microscopul electronic ca nite degete de mnu la polul apical al celulelor epiteliale din mucoasa tubului digestiv, dar i la alte organe. n aceste microviloziti (microvili- a nu se confunda cu noiunea de viloziti intestinale) ptrunde citoplasma i ectoplasma (stratul superior al citoplasmei), deci vor conine i din citoschelet filamentele de actin, acoperite de plasmalem i glicocalix (inveliul dulce sau paltonaul celular). Toate la un loc se observ ca bordur striat la microscopul fotonic. Se observ o sectiune transversal i o seciune longitudinal prin microviloziti.
Sectiune longitudinala
Sectiune transversala
35
36
37
38
39
40
41
42
43
Celule eucariote unicelulare cu cili sau flageli Preparat nativ cu celule ciliate sau flagelate -Se obine din ap de balt inut la temperatura camerei. Dup 2
sptmni se dezvolt eucariotele . unicelulare prevzute cu cili sau flageli cu deplaseze n diferite zone unde i caut verzi sau brune. Organitele celulare sunt excepia nucleului sau diferitelor vacuole. Acestea sunt organisme rol n micare i pot s s e hrana care const n alge mai dificil de observat, cu
Clasa ciliate : Parameciul i Vorticela Parameciul Cel mai des se ntlnete parameciul care prezint cili vibratili de jur mprejur cu ajutorul crora se mic extrem de rapid. Se observ adevrate colonii de parameci aduli i mai ales tineri.
44
Vorticela este mai rar, eman un peduncul pe care i-l poate contracta i are rol de prindere n plajele de alge. Are cili doar n jurul stomei numii cili peritrihi cu ajutorul crora dirijeaz prin curenii de ap creai microorganismele ce urmeaz a fi digerate.
Clasa flagelatelor : Euglena i Clamidomonas Euglena prezint un flagel cu care se mobilizeaz, i organite greu de observat, cloroplaste, stigm, vacuole pulsatile i digestive.
45
Amoeba Se deplaseaza ca i leucocitele prin micri lente ameboidale prin emiterea de pseudopode care sunt trimise n spaiu i cu care se fixeaz de structurile nvecinate.
46
Alge Apar n colonii mici, verzi , multe, sau alge brune care au striaiuni aproape geometrice.
47
48
49
50
Sunt dispozitive speciale care menin aderena celular necesar pentru a realiza o barier de separare a 2 medii structuralizate diferit. Se clasific n : 1) Dispozitive joncionale de adezivitate -desmozomii- care asigur aderarea mecanic i solidaritatea necesar tesuturilor supuse solicitrilor mecanice intense: epitelii, miocard, mucoasa colului uterin . Desmozomii n band sau centur (belt) - zonula adherens- sunt alctuii din mnunchiuri de filamente de actin care nconjur celulele epiteliale la polul lor apical i un material fibrilar care ocup spaiul de 10-15 nm dintre celule. Desmozomii n pat (spot) -macula adherens- menine coeziunea n puncte de contact ca nite nituri. Citoplasma prezint condensri numite discuri citoplasmatice, precum i filamente de keratin. Hemidesmozomii au structur asemntoare cu desmozomii n spot care leag celula de membrana bazal subiacent. Structur format jumtate din desmozom n pat i jumtate din membrana bazal.
51
2) Jonciunile impermeabile (tight junctions) -zonula occludensSe gsesc n epiteliul tubilor contori, epiteliul vezicii urinare i biliare i la nivelul barierei hematoencefalice. Sunt alctuite din iruri de proteine integrale gemene care se ntreptrund ca dinii unui fermoar. Permeabilitatea lor este modificat de nivelul calcemiei, presiunea osmotic i inflamaie.
3) Jonciuni de comunicare
Gap junctions - macula comunicans permit traversarea moleculelor mici solubile n ap (ioni, glucide, aminoacizi, hormoni, vitamine, medicamente) prin canale formate din 6 proteine care trec de la o celul la alta i care n funcie de structura spaial pot fi nchise sau deschise. Se gsesc ntre celulele endocrine, nervoase, musculare, hepatice care sunt cuplate metabolic i electrochimic- legate n cultur-. La nivelul unei celule se gsesc multiple gap jonctions, acestea fiind alctuite din mii de conexoni. Conexonii sunt prevzui cu mecanisme de nchidere n cazul apariiei unui agresor, substan toxic sau virus, izolndu-se cele afectate de cele neafectate.
52
Complexele joncionale apar la nivelul celulelor epiteliale cu rol de transport i de absorbie i sunt alctuite din jonciuni strnse, jonctiuni n band i jonctiuni n spot.
53
Ultrafagocitoza
Ultrafagocitoza const n fagocitarea unor pulberi foarte fine de ctre celule numite macrofage. Macrofagele (fagocitele) din esuturi poart de obicei numele esutului respectiv: macrofagul din ficat, macrofagul din plmn, macrofagul esutului osos etc..
54
55
Macrofagul din piele - histiocitul -col Kernechtrot (rou nuclear) i granule de albastru de tripan fagocitate
Pielea este format din 3 straturi, epiderm, derm i hipoderm. La obolan s-a injectat un colorant numit albastru de tripan care a fost fagocitat de macrofage . Histiocitul are o form alungit, nucleu situat excentric colorat cu alt colorant rou nuclear. Exist posibilitatea de a vedea numai nucleele precum i fibre de colagen i elastin care formeaz o reea de esut conjuctiv. Macrofagele care au fagocitat albastru de tripan vor prezenta granulaii albastre n jurul nucleului colorat n rou.
56
57
Macrofagul din ficat( celula Kupfer)- col H.E.i granule de tu de China fagocitate
Se caut vena centrolobular pe seciune transversal i numai pe aceste seciuni se vede c pornesc de la ea ca nite raze trabeculele, cordoanele hepatice ale lui Remack, care prezint un traiect sinuos i au celulele destul de apropiate ntre ele, nct nu se observ bine spaiul dintre ele . Intre cordoanele hepatice spaiile se numesc capilare sinusoide i n ele se afl din loc n loc macrofagele ficatului - celulele Kupfer. In cazul injectrii de tu de China la animalul de experien n vena port, acesta va fi fagocitat de celulele Kupfer punndu-le mai bine n eviden sub form de celule negre mult hipertrofiate.. La obiective mari se pot observa granulaile negre de tu de China. Celula Kupfer prezint un nucleu excentric care n cazul fagocitrii de tu de China poate s nu se vad fiind acoperit de granulaii negre.
58
59
60
61
Exocitoza
Este fenomenul prin care sunt transportate prin vezicule la exterior substanele secretate de celul- de exemplu substane hormonale. Mai nti plasmalema ncepe s nmugureasc i n aceast zon se acumuleaz substanele care trebuie exocitate, zona se subiaz treptat i apoi se va rupe. Vezicula va conine n membrana ei fragmente din structura plasmalemei. Sute de astfel de vezicule se rup de pe suprafaa celulei n fiecare secund -de exemplu veziculele ncrcate cu material de secreie provenite din aparatul Golgi. n cazul mastocitului veziculele formate sunt eliberate prin degranularea mastocitului la contactul cu alergenul, provocnd astfel eliberarea de substane histaminice responsabile de strile alergice.
62
Forme nucleare
Nucleul rotund - neuronul - maduva spinrii col. H.E.
Macroscopic se poate observa substana cenuie dispus in co arnele anterioare i posterioare sub forma literei H. La microscop apar zone mai intens eozinofile unde se gsete substana cenuie i zone mai deschise la culoare i mai laxe corespunztoaresubstanei albe. Se caut n substana cenuie motoneuronii din coarnele anterioarecelule multipolare dispuse n grupuri . Neuronii au form stelat i dup cum trece sectiunea aceasta poate s taie prelungirile lor sau poate s treac deasupra nucleului i acesta se va observa, rezultnd cele mai diferite forme. Nucleul este rotund globulos situat de cele mai multe ori central bogat n eucromatin dar prezint i heterocromatin i prezint un nucleol situat central i ntunecat la culoare fa de restul nucleului. Citoplasma este eozinofil i in ea se gsesc corpusculii Nissl (la care se reveni la alt lucrare). In jurul neuronilor apar punctiforme, o multitudine de nuclee ale celulelor gliale la care nu se observ bine citoplasma. Celulele gliale sunt n numr foarte mare i sunt reprezentate de diferite categorii de astrocite.
63
64
65
Nucleul turtit - fibra muscular striat - celula multinucleat - col hematoxilin feric
Fibra muscular striat sau celula muscular prezint striaiuni longitudinale care sunt miofibrilele i striaiunile transversale mai fine, vizibile doar la obiectivele mari care dau alternana de ntunecat sau deschis,- discuri clare sau ntunecate. Fibra muscular striat prezint muli nuclei ( zeci de nuclei ) situai sub plasmalem care se numete sarcolem i care sunt alungii, uneori chiar turtii. Celulele sunt situate ntr-un sinciiu, sau reea, imtotdeauna alungite, continundu-se una cu cealalt. Cu ajutorul srurilor de fier se coloreaz n negru toate structurile celulare .
66
67
68
69
70
71
Eozinofilele care dei se gsesc n cantitate redus de 1-6%au un rol important n reaciile imune de tip alergic la diferii alergeni : polenuri (febra de fn pn la astm alergic), la persoanele care prezint parazitoze (oxiuri sau helmini ) .Dac ptrund n organism duc la creterea numrului acestor eozinofile. Granulele lor specifice rou crmizii, ca icrele de Manciuria, pot s acopere nucleul care este bilobat, cu form de desag.Eozinofilele conin i: enzime cu ajutorul crora diger complexele antigen - anticorp, precum i histaminaze ( substane care inactiveaz histamina) i alte substane vasoactive secretate de bazofile . De aceea la alergici unde histamina se elibereaz n cantitate mare trebuie s creasc i numrul de eozinofile. La microscopie electronic spre deosebire de neutrofile unde se gseste un bogat echipament lizozomal la eozinofile se observ un bogat echipament granular, cu granulele mbrcate n membrane proprii, cu un centru cristaloid, bogate n histaminaze. i mai puin n alte tipuri de organite.
Bazofilele au nucleul n desag iar granulele lor se coloreaz cu coloranii bazici ntr-un albastru mov nchis acoperind uneori cei 2 lobi
72
ai nucleului. Granulele lor mari, bogate n histamin, mpreun cu alte tipuri de amine cum ar fi slow reactive substances of anafilaxy (SRSA) i heparina se elibereaz n sngele alergicilor cnd acetia vin n contact cu alergenii. Aminele cresc permeabilitatea capilar i dau fenomenele de exudat la nivelul bronhiilor, cavitii nazale, sau eriteme la nivel tegumentar datorit congestiei vasculare i toate reaciile caracteristice alergicilor . Se gsesc n sngele circulant n cantitate mic,normal sub 1%.
Mononuclearele- a 2-a clas de leucocite se submpart n limfocite i monocite i prezint un singur nucleu nelobat . Limfocitele se gsesc ntr-un numr de 20-40% n sngele circulant i dup dimensiunea lor se clasific n mici, mijlocii sau mari. Limfocitele mici se aseamn ca dimensiuni cu hematia, ntreaga celul este ocupat de nucleu i rar se observ la periferie puin citoplasm. Limfocitele mijlocii i mari prezint mai mult citoplasm care ia o nuan azurofil, un cenuiu albstrui, ca fumul de igar. Ele nu au echipament bogat lizozomal dar au rol de a secreta substanele implicate n reaciile imune de tip l, ll, lll, inclusiv reacile de tip anafilactic. Limfocitele de tip T secret limfokine, interleukine, iar limfocitele de tip B, (care la microscopul electronic prezint periori limfocite proase,) dup transformarea lor n plasmocite (prin diviziune de ntinerire), secret imunoglobulinele, anticorpii ,IgA, IgG, IgM, IgE, care intervin n toate reacile imune. In microscopia electronic se descrie un nucleu foarte puin lobat , mitocondrii, aparat Golgi i alte tipuri de organite mai puin lizozomi.
73
Monocitul a doua categorie de mononucleare, este un macrofag. Dup ce neutrofilele merg primele la focarul de invazie, se apropie prin micri ameboidale lente se apropie monocitele care vor digera resturile celulare mari rmase n zona de agresiune inclusiv corpurile neutrofilelor, i microbiene care se gsesc n acea zon. Monocitele sunt prevzute cu un bogat echipament enzimatic lizozomal, pe care l elibereaz n momentul atacului i eman pseudopode. Nucleul lor este uor incizat reniform, asemnat i cu o boab de fasole se gseste uor excentric i e inconjurat de citoplasm azurofil bazofil. Se gsesc n cantitate de 2-10% i pe msur ce migreaz n esuturi se transform n macrofagele din respectivele esuturi cunoscute, celule Kupffer, histiocite, sau alte tipuri de macrofage. Monocitele din snge mpreun cu macrofagele din esuturi formeaz marele sistem monocito - macrofagic de aprare n invaziile microbiene. Tot n sngele circulant se pot observa mici fragmente, plachetele sangvine, trombocitele care se gsesc ntre 150.000 - 400.000/ mm cub, care provin dintr-o celul mare numit megacariocit din mduva hematogen, din care se desprind. Prin aglomerare formeaz trombul alb, i realizeaz coagularea sngelui.
74
75
76
Cromatin- Se clasific n : Eucromatin, metabolic activ, slab colorat, care poate fi trascris. Ea formeaz o reea foarte fin n interiorul nucleului. Heterocromatin, metabolic inactiv, condensat, mai nchis la culoare .Din ea se formeaz la sexul feminin corpusculul Barr. Se dispune frecvent periferic, sau n jurul nucleolului sau poate forma grunji mari (cariozomi) .
77
* -Porii nucleari- formai din 8 proteine dispuse octogonal care delimiteaz un spaiu liber sau opturat de un diafragm fin.Strbat nveliul nuclear n vederea transportului transmambranar.
78
Forme de nuclee :
79
Nucleolul
Nucleolul este cea mai dens structur corpuscular din interiorul nucleului, prezent n interfaz. Prezint mai multe zone:
80
81
-sectiune longitudinal
-seciune transversal
82
Mitoza
Mitoza este tipul de diviziune caracteristic celulelor somatice spre deosebire de meioz(diviziune reducional) care se ntlnete doar la celulele sexuale .
83
3. Metafaza Are loc clivarea longitudinal a fiecrui cromozom n 2 cromatide, fiecare prevzut cu cinetocorul ei, i din cei 46 cromozomi se ajunge la 92 cromozomi i deci dedublarea genomul. Toi cromozomii stau n aceast etap la mijlocul fusului de diviziune la ecuatorul su, motiv pentru care formaiunea se numete plac ecuatorial sau plac metafazic. Pe preparat se poate observa placa ecuatorial dar nu se poate distinge fiecare cromozom n parte.
4. Anafaza Cromatidele formate n metafaz se ndeprteaz ntre ele cnd 46 pornesc spre un pol al celulei iar 46 vor porni spre cellalt pol al celulei. Cromatidele se vor numi de acum cromozomi care se vor deplasa datorit scurtrii i alungirii microtubulilor. Exist o anafaz A cnd se scurteaz microtubulii cinetocorici, i o anafaz B cnd se alungesc microtubulii polari, asigurndu-se naintarea cromozomilor n drumul lor spre poli. Pe preparat cromozomii se observ la diferite distane . 5. Telofaza In aceast faz cromozomii au ajuns la cei 2 poli ai celulei i se grupeaz n mase ordonate n jurul acelui centrozom. Microtubulii continu s se alungeasc ndeprtnd i mai mult cei doi poli celulari. La sfritul telofazei se formeaz nucleolul i reapare nveliul nuclear, dispar cromozomii pentru a remodela cromatina sub form de eucromatin.
84
6. Citodiereza sau citochineza const n clivarea citoplasmei mpreun cu nucleul corespunztor ei, astfel nct dintr-o celul mam s apar 2 celule fiice care vor avea acelai material genetic cu celula mam, i vor semna mai mult sau mai puin cu aceasta. n citochinez se formeaz la mijlocul celulei sub plasmalem un inel contractil n care apar filamente de actin care se scurteaz, trag i astfel ngusteaz inelul de la mijlocul celulei i n final citoplasma se va fragmenta n 2 celule fiice.
85
86
87
88
89
90
91
Cariotipul uman
Se stabileste la cromozomii n metafaz i se ordoneaz n funcie de mrime i morfologie, n ordine descrescnd pe perechi. Se formeaz 7 grupe notate de la A la G n ordine descresctoare a dimensiunilor lor i cromozomul Y separat. Grupa A B C D E F G Numrul cromozomului 1,2,3 4,5 6,7,8,9,10,11 12,13,14 16,17,18 19,20 21,22
92
Fenomenul de bandare
Ansele de cromatin sunt alctuite din molecule de A.D.N. i proteine cromozomiale, predominant histone. Nucleozomul este unitatea de mpachetare a genomului,fiind alctuit din filamente de cromatin nfurate ca pe un mosor format din 8 histone.Nucleozomul const din 200 de perechi de baze din care 140 sunt dispuse n jurul unui octamer de histone numit i miez, iar 60 perechi formeaz partea liber sau linker(A.D.N. de legtur). Repetarea ordonat a acestor uniti de mpachetare a cromozomului a fost comparat cu niruirea mrgelelor pe a.
93
Solenoidul este unitatea urmtoare de mpachetare a cromatinei fiind alctuit din 6 nucleozomi i avnd o grosime de 30 nm. n continuare filamentul prezint bucle care contribuie i ele la condensarea cromatinei care la rndul lor se rsucesc ducnd la dispoziia n benzi clare i ntunecate vizibile la nivelul cromozomilor.
94
95
Fenomenul de bandare ajut la cartografierea genelor. Se poate studia pe cromozomii uriai de Drosophila melanogaster.
96
97
98
99
100
101
Reticulul endoplasmatic neted este o alt form funcional a aceluia organit ,implicat n sinteza substanelor lipidice i se prezint ca o reea de canalicule cu membrane netede, lipsite de ribozomi. Se observ zone de trecere de la un tip de reticul la al alta.
102
Ribozomii-Microscopie electronic
Ribozomii - corpusculii lui Palade sunt organitele in care se realizeaz sinteza proteic propriuzis . Ei sunt alctuii din 2 corpusculi (subuniti) notai dup gradientul la care centrifugheaz : corpusculul mare (subunitatea 50S) i corpusculul mic (subunitatea 30S). Acetia sunt unii prim intermediul filamentului de m ARN ( aspect de mrgele nirate pe o a) alctuind uniti morfofuncionale numite ergozomi sau poliribozomi.Se observ poliribozomii existeni n citoplasm n 2 forme : fie ataai memebranelor RER, fie liberi.
103
Complexul Golgi
Tiroida - Foliculi tiroidieni - col H.E.
Diferitele tipuri de glande secret proteine-hormoni numai dup ce au fost preluate de la RE i prelucrate prin multiple transformri biochimice n aparatul Golgi. Acest organit este bine dezvoltat i la nivelul tiroidei. Ea face parte din glandele cu secreie endocrin, se recunoate foarte uor dup multitudinea de foliculi care sunt unitile morfofuncionale ale tiroidei. n lumenul prezint o substan eozinofil, numit substan coloidal, sau coloid, un amestec de proteine n care se gsete i complexul de hormoni tiroidieni. Epiteliul simplu care nconjur coloidul este format din celule cubice care secret hormonul care se va acumula n substana coloidal. Dac foliculii sunt mici, ei sunt hiperfuncionali (fenomen abundent de secreie) i au epiteliul format din celule cubice, bine vizibile, cu nucleul situat central i citoplasma eozinofil. Foliculii normofuncionali ceva mai mari, la care nc se mai observ celulele cubice. Foliculi hipofuncionali, de dimensiuni foarte mari, ce se transform n adevrate camere de rezerv pentru coloid, care turtete epiteliul .
104
105
106
107
108
109
110
Schema unei celule din acinul pancreatic. Nucleul este la periferie i n jurul nucleului se gsete RER unde sunt sintetizate proteinele care ajung la aparatul Golgi, de unde pleac sub form de vezicule mature prevzute cu membrane, coninnd materilul concentrat i mult mbogit prin diversele modificri biochimice La pancreas aceste vezicule de secreie se numesc granule de zimogen, care prin exocitoz prsesc celula.
111
Lizozomii
Miocard de persoane n vrst - lizozomi lll (corpi reziduali) - col. H.E.
Fibra miocardic se aseamn cu fibra muscular scheletic pentru c are striaiuni transversale, dar este prevzut cu un singur nucleu i desprirea n celule se vede mult mai bine. n aceste fibre miocardice (eozinofil colorate), se observ n jurul nucleului, (colorat cu hematoxilin) granule glbui cu nuan crmizie, granulele de lipofuscin sau pigmentul de mbtrnire care pe msur ce omul nainteaz n vrst se depoziteaz n lizozomii teriari(vezi M.E. lizozomii). Acelai fenomen se petrece i n neuroni, la vrstnici, accentund fenomenul de mbtrnire a celulelor nervoase din creer. ntre aceste celule se observ vase de snge cu hematii.
112
113
114
Lizozomii se mpart n : * lizozomi primari, omogeni, bogai n echipament enzimatic dar nc nedigernd particule. a * lizozomi secundari, n care ncepe fagocitoza propriuzis, n momentul n care nglobeaz particule, i atunci se transform n fagolizozomi: heterofagolizozomi- care inglobeaz particule strine celulei pentru a le digera cu enzimele cu care sunt echipai. c autofagolizozomi- care fagociteaz organite proprii celulei, de exemplu mitocondrii, sau ntregi zone din citoplasma propriei celule, care sunt digerate de aceti autofagolizozomi. e * lizozomii teriari(telolizozomii), conin resturile care nu au fost digerate sub form de corpi reziduali. f Heterofagolizozom Autofagolizozom
115
116
Mitocondria
Rinichi - tubi uriniferi - mitocondrii - col. Hematoxilin feric
Organul se recunoate dup glomerulii renali, (corpusculi ai lui Bowman), care apar ca nite formaiuni rotunde capsulate, care apar ici i colo pe preparat, ca nite mici gheme. In jurul lor se gsesc tubii uriniferi n diverse incidene, transversale, oblice sau longitudinale colorai n negru. Se studiaz pe seciunile transversale ale tubilor uriniferi care prezint n zona central lumenul tubului urinifer, n jurul lui gsindu-se celulele aezate n cerc. Detaliile tubilor uriniferi sunt mai evidente doar la obiectivul 20 i 40. In mod normal un tub urinifer este alctuit din 5-7 celule . La obiective mai mari se vd nuclei rotunzi chiar i cu nucleoli, situai n cerc. nspre polul bazal al acestor celule i n jurul nucleului lor se vd ca nite bastonae paralele, des niruite, mitocondriile, care fiind organite mari pot fi demonstrate i n microscopia obinuit. Hematoxilina feric coloreaz conturul nuclelor, nucleolii i mitocondriile n negru .
117
118
119
Peroxizomii-Microscopie electronic
Sunt organite delimitate de o membran proprie cu diametrul de 0,15-1,5 microni bogai n echipamente enzimatice. Caracteristic e activitatea peroxidazelor cu rol de degradare a oxigenului activat i a agenilor oxidani, extrem de corozivi. Membrana peroxizomilor are o structur trilaminar. Ei prezint o matrice fin granular, uor opac la fluxul electronic care poate s conin n funcie de specie un miez - nucleoid n centru, sau o plac marginal.
120
121
BIBLIOGRAFIE
122