Igienizarea autovehiculelor
directia dominanta a vntului, care trebuie sa fie dinspre centrele populate vecine;
o linie pentru gararea vagoanelor pe timpul tratarii sanitare, n lungime de cca. 16-20
de vagoane normale;
un grup social;
lampa de spirt, cutii Petri sterilizate, pipete gradate de 1,2 si 5ml sterilizate, o pensa
chirurgicala si o rigla de30 de cm;
Recoltarea probei de pe suprafata de cercetat se poate face cu tamponul fara tija (luat n mod
aseptic cu o pensa) sau cu tija. n primul caz, tamponul cu proba se introduce imediat n eprubeta cu ser
fiziologic, iar n al doilea caz, n eprubeta din care a fost scos si care nu contine ser fiziologic. Dupa
delimitarea cu sablonul a suprafetei de 100cm2, cu tamponul (putin umectat n ser fiziologic, cnd proba
se ia de pe suprafete uscate) trecnd de 3 ori pe acelasi loc n directii diferite (a doua trecere
perpendiculara pe prima, iar a treia oblica pe primele doua) se face recoltarea. Tamponul se introduce
imediat n eprubeta cu ser fiziologic sau, n cazul controlului pentru salmonele sau stafilococi, n
eprubete cu mediul de mbogatire (selenit, Mller-Kauffmann, respectiv bulion hipersalin). n cazul
examenelor pentru salmonele si stafilococi, unde se urmareste prezenta si numarul acestor germeni,
recoltarea cu acelasi tampon se poate face de mai multe ori pe obiectivul controlat, fara a lua n
considerare suprafata.
De pe instrumente (cutite, fierastraie), de pe partile din utilaje cu suprafete neplane (melc), la
care suprafata nu se poate delimita cu sablonul, proba se recolteaza de pe ntreaga lor suprafata (ex.
cutite, ambele fete ale lamei) sau de pe o parte din acesta (ex. fierastraul, melcul) astfel nct sa se
poata calcula suprafata de pe care s-a facut recoltarea.
Ajunse la laborator, probele se introduc imediat n lucru.
Pentru stabilirea NTGMA si a bacteriilor coliforme, eprubetele cu ser fiziologic si cu tampoane
(cele cu tija se desprind aseptic eliminndu-se tija) se agita bine, dupa care, cte 1ml din lichidul din
eprubeta, se nsamnteaza n 2 cutii Petri si ntr-oeprubeta cu mediul BBLV si tub de fermentatie. Cnd
se suspicioneaza prezenta unei ncarcaturi bacteriene foarte mari se fac dilutii zecimale din care se nsamnteaza n acelasi mod cutiile si eprubetele cu BBLV.
n fiecare cutie nsamntata se toarna 14-16 ml agar Frazier sau agar nutritiv, se omogenizeaza
si se lasa sa se solidifice. Att cutiile ct si eprubetele se incubeaza la 371C, timp de 48 de ore. Se
citesc cutiile Petri si se calculeaza numarul de germeni. Dezvoltarea bacteriilor Gram negative cu
producere de gaze n eprubeta cu BBLV indica prezenta bacteriilor coliforme/10 cm2.
Pentru decelarea salmonelelor si a stafilococilor, eprubetele cu probe recoltate n medii de
mbogatire se incubeaza la 371C, timp de 24 de ore. n eprubetele cu tampoane uscate (fara medii) se
introduc cte 8-10ml din mediile de mbogatire si se incubeaza ca mai sus.
Dupa incubare, din fiecare eprubeta se striaza cte o ansa pe suprafata mediilor selective de
izolare corespunzatoare, turnate n cutii.
Cutiile Petri se incubeaza la 37lC, timp de 24 de ore, dupa care se controleaza, izolndu-se
coloniile cu aspect caracteristic pentru Salmonella, respectiv Stafilococcus. n continuare se executa
testele specifice pentru identificare.
6.4.3. Controlul bacteriologic al recipientelor (de sticla, metal sau material plastic)
Controlul bacteriologic al recipientelor se executa determinnd NTGMA/ml capacitate si a
bacteriilor coliforme/500ml capacitate. Pentru determinare se folosesc urmatoarele materiale:
-
agar Frazier sau agar nutritiv, BBLV dublu concentrat, cte 5-6ml n eprubete cu tub
de fermentatie.
recipiente de sticla de 10, 50 si 100ml cu ser fiziologic sau apa de robinet sterilizate;
capacitatea conductei. Se agita bine prin miscari n sensuri diferite astfel nct lichidul de spalare sa
treaca prin acelasi loc de cel putin 10 ori; se scoate unul din dopuri si se recolteaza lichidul de spalare n
recipientul din care a provenit si se introduce ct mai repede n lucru n laborator.
Toate operatiile se executa n conditii aseptice.
Prelucrarea probelor si citirea rezultatelor se face ca n cazul controlului recipientelor. Pentru
NTGMA/ml, numarul coloniilor gasite pe cele 2 cutii Petri se mparte la 2 si nu la 200, deoarece rezultatele se exprima la 1ml lichid de spalare si nu la1ml capacitate.
6.4.5. Controlul microbiologic al unor materiale de ambalaje (folii de material plastic, hrtie
pergaminata)
Controlul microbiologic al unor materiale de ambalaj se refera la determinarea NTGMA/cm 2 si al
bacteriilor coliforme/18cm2.
Petru determinare se folosesc urmatoarele materiale:
-
agar Frazier sau agar nutritiv, BBLV n eprubete cu tub de fermentatie, agar cu cartof
sau agar cu malt.
Din proba de material de ambalaj de controlat, se taie n mod aseptic mai multe bucati de forma
patrata cu latura de 3cm si se pun ntr-o cutie Petri sterila.
Se pregateste o cutie Petri cu agar Frazier sau agar nutritiv si una cu agar cu cartof sau agar cu
malt, pH 3,5.
Pentru determinarea NTGMA/cm2 si a drojdiilor si mucegaiurilor/cm2, se ia cu pensa, din cutia
Petri o bucata de material cu latura de 3cm, care se aseaza cu una din fete pe suprafata agarului turnat
n placa. Apoi se ia o bucata, care se aseaza cu cealalta fata pe suprafata agarului din placa, ntr-o alta
zona. n acest mod sunt expuse controlului ambele fete ale foliei. Bucatile de folie se lasa n
contact 5 minute, dupa care se ndeparteaza. Alte doua bucati de folie (hrtie) se aseaza pe suprafata
agarului cu cartof (sau malt), dupa tehnica mentionata mai sus. Cutiile Petri pentru NTGMA se
incubeaza la 371C, timp de 48 de ore, iar cele pentru drojdii si mucegaiuri la temperatura camerei (1825C) si loc ntunecos, timp de 4-5 zile. Se controleaza cutiile si se citesc rezultatele, care se raporteaza
la 1 cm2. Numarul de colonii gasite se mparte la 18 (n control au intrat 18cm2, adica 2x32) si se obtine
NTGMA/cm2.
Pentru decelarea bacteriilor coliforme/18cm2, o bucata de folie (hrtie) cu latura de 3cm se taie
marunt, n mod aseptic, si se introduce ntr-o eprubeta cu BBLV si tub de fermentatie, care se incubeaza
la 371C, timp de 48 de ore. Dezvoltarea bacteriilor Gram negative cu producerea de gaze n eprubeta
cu BBLV se considera prezenta de bacterii coliforme/18 cm2suprafata de ambalaj controlata.
6.4.6. Controlul bacteriologic al minilor persoanelor care lucreaza si manipuleaza
produse alimentare
Acest control se executa nainte de nceperea lucrului si consta n determinarea bacteriilor
coliforme/ml lichid de spalare, a salmonelelor /5ml lichid de spalare si a stafilococilor coagulazapozitivi/4 ml lichid de spalare.
Pentru determinare se folosesc urmatoarele materiale:
medii de cultura: BBLV n eprubete cu tub de fermentatie; mediu cu selenit, MllerKauffmann, cte 20ml n eprubete, medii selective de izolare pentru salmonele (IstratiMeitert, Leifson etc.) si pentru stafilococi (agar Chapmann, Baird-Parker etc.).
Recoltarea probelor se face, cu tamponul usor umectat n ser fiziologic, prin stergerea fetei
palmare si a spatiilor interdigitale de la o mna, frecndu-se cu tamponul de 3 ori pe acelasi loc. Se
spala apoi bine tamponul n serul fiziologic din eprubeta si se stoarce prin presarea lui pe peretii
acesteia. Cu acelasi tampon se executa n acelasi mod stergerea celeilalte mini. Tamponul se introduce
n eprubeta cu ser fiziologic si se prelucreaza n laborator.
Dupa destramarea tamponului de vata, prin agitarea eprubetei, se nsamnteaza cte 1ml ntr-o
eprubeta cu BBLV, 4ml ntr-o eprubeta cu bulion hipersalin si 5ml (restul lichidului plus tamponul) ntr-un
recipient cu 20ml selenit sau Mller-Kauffmann. Incubarea eprubetei cu BBLV se face la 371C, timp
de 48 de ore, iar a celorlalte doua eprubete la aceeasi temperatura nsa timp de 24 de ore. Dupa
aceasta, se deruleaza tehnica de izolare si identificare, stabilindu-se prezenta sau absenta bacteriilor
coliforme/ml, a salmonelelor/5ml si a stafilococilor/4ml lichid de spalare.