Diagnosticul de laborator n infecia cu HIV

I. Diagnosticul virusologic
1. Recoltarea produselor patologice: snge, secreie vaginal, sperm
2. Evidenierea direct a unor componente ale virionului n produsul patologic
- Antigene virale: p24
- RNA-HIV
- DNA proviral
- Reverstranscriptaza
3. Inocularea pe sisteme biologice i izolarea tulpinii virale
Izolarea HIV n urma cultivrii celulelor mononucleare din sngele periferic
4. Identificarea HIV
n cultura de celule infectate cu HIV, ECP de tip sinciial sau apar celule balonizate.
Detectarea: antigenului p24 si DNA proviral
II. Diagnosticul indirect - Serodiagnostic
Teste screening: ELISApt. anticorpii anti-HIV
Teste de confirmare: Western Blot

Diagnosticul de laborator n infeciile cu virusul hepatitic B

I. Diagnosticul virusologic
1. Recoltarea produselor patologice: snge/plasm/ser etc.
2. Examenul direct al produsului patologic
Virion: microscopie electronica
Antigenele virale: agHBs si agHBe, n ser, prin ELISA; agHBc n nucleul hepatocitelor
DNA-polimeraza HBV
DNA-HBV
II. Diagnosticul serologic
ELISA: Anticorpii anti-HBs, anti-HBc (IgM) , anti-HBe
ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) se bazeaz pe faptul c elementul cunoscut este
imobilizat pe suportul solid, iar elementul necunoscut este depistat cu ajutorul reactantul marcat
enzimatic (conjugatul), reacia fiind vizualizat prin adugarea substratului corespunztor enzimei
folosite, prin dezvoltarea unei reacii de culoare.

Tehnica de lucru in cazul serodiagnosticului prin ELISA indirecta:

Etapa I:
- Se introduce serul de testat in godeul ce contine Ag. cunoscut (acesta este fixat pe godeu).
- Incubare
- Spalare
Etapa II:
- Se adauga conjugatul (anticorpi anti-anticorpi umani marcati cu enzima)
- Incubare
- Spalare
Etapa III:
- Se adauga substratul pt. enzima respectiva
- Incubare
- Stoparea reactiei.
Martorul + (realizat cu un ser ce sigur contine elementul pe care il cautam) trebuie sa fie colorat.
Martorul - (realizat cu un ser ce sigur nu contine elementul pe care il cautam) trebuie sa fie incolor.
Daca martorii sunt buni, se citeste si se interpreteaza proba propriu-zisa (serul de cercetat).
Citire: Aspect macroscopic: lichid colorat (galben), proba este + si deci, in serul de cercetat exista
~E ~E ~E
elementul cautat (ex. Ac. anti-HBs, daca s-au folosit placi cu AgHBs fixat pe godeu).
Aspect macroscopic: incolor, proba este si in serul de cercetat nu exista elementul cautat.

Figura 14. ELISA de tip indirect pentru serodiagnosticul

infeciei cu HIV
2
Colorarea = TEST REACTIV Absena
colorrii = TEST NEREACTIV