U.M.

F Iai
Facultatea de Medicin
Disciplina Parazitologie-Micologie
Prof. Dr. Mariana Luca

An Universitar 2004-2005

LP rezideni
Medicin de laborator
Diagnosticul parazitologic n leishmanioz

Leishmanioza este o parazitoz cauzat de protozoare flagelate din genul

Leishmania.
n funcie de specie se disting: leishmanioza cutanat, cutaneo-mucoas i visceral.
Leishmaniile sub form de amastigot* habiteaz n celulele sistemului mononuclear
fagocitar n piele i viscere.
Uneori pot fi decelate n mononuclearele din sngele periferic.
Diagnostic clinic
febr
adenohepatosplenomegalie
pancitopenie
Simptomatologia clinic nu permite diferenierea leishmaniozei viscerale de alte
cauze de splenomegalie febril.
Produse patologice:
- puncia mduvii osoase: 54-86 % pozitivitate
- puncie ganglioni limfatici: 64 % pozitivitate
- puncie splenic: 98 % pozitivitate
Diagnostic de laborator
Diagnostic de orientare (n formele viscerale)
Hemograma (pancitopenie)
- anemie normocrom, hemolitic,
medular)
- neutropenie important
- trombocitopenie
VSH-ul crescut

fr

eritroblastoz

(insuficien

Puncia splenic este o tehnic cu risc crescut. Nu exist consens asupra utilizrii acestei tehnici.
Dezavantaje: risc hemoragic
Avantaje: - sensibilitate diagnostic crescut
- nu necesit materiale speciale
- este mai puin dureroas dect puncia medular
- este relativ facil pentru un medic experimentat
n leishmanioza visceral acut, cnd splina este mic i dificil de palpat se recomand puncia
medular sau ganglionar.
Precauii:- determinarea TQ
- determinarea nr. plachete (>40.000/mm3)

Imunoelectroforeza
- creterea IgG
Diagnostic parazitologic (forma cutanat i visceral)
Examen direct- coloraia MGG *
Cultura- mediul NNN **(Novy-McNeal-Nicolle), incubare la 27C timp de 1
sptmn; se obine forma promastigot.
Inocularea la hamsterul auriu- dezvolt o infecie mortal n 3-6 luni.

* Leishmaniile apar sub form de amastigot, intracelular (uneori n numr mic sau
nedecelabile n forma visceral).
Examenul microscopic: celule rotunde
sau ovalare de 3-5 m, ce prezint
dou mase colorate n rou:
- una rotunjit: nucleul,
- cealalt baciliform:kinetoplastul.

**Mediul NNN
Material
Snge agar baz Difco8 g
Ap distilat .200 ml
Snge de iepure defibrinat...0,6 ml pentru 5 ml mediu
Prepararea sngelui de iepure defibrinat
Recoltai 20 ml snge de iepure ntr-un recipient steril coninnd circa 100 bile de
sticl de 4mm diametru. Defibrinai sngele cu ajutorul unui agitator rotativ timp de 5
minute. Adugai 200 UI Penicilin, 200 mg Gentamicin i 2 mg Streptomicin la ml
de snge defibrinat.
Preparare
1. Punei 200 ml ap distilat ntr-un recipient, adugai geloz, amestecai i
nclzii pn fierbe apa aa nct geloza s fie complet dizolvat.
2. mprii mediul n fraciuni de 5 ml n recipiente de prob cu dop nfiletat
(capacitate 20 ml). Se sterilizeaz la autoclav (dopurile desfiletate uor) la
121C timp de 15 minute i se las geloza s se rceasc pn la 45-50C.
3. Se adaug 0,6 ml snge de iepure defibrinat steril n fiecare recipient i se
amestec uor. Lsai mediul s se solidifice n recipiente n poziie nclinat.
4. Se las recipientele la temperatura camerei timp de 24 ore, pentru a se putea
face condensarea. Recipientele trebuiesc apoi conservate la 4-6C pn cnd
vor fi folosite.
Not: Acest mediu trebuie preparat n condiii riguroase de asepsie.
Utilizare

Se poate procura de la Laboratoarele Difco, PO Box 10587, Detroit, Michigan 482333, Statele Unite
ale Americii

1. Inoculai aseptic circa 0,1 ml de eantion n lichidul de condensare a dou

recipiente la temperatura camerei.
2. Se incubeaz culturile la 24(2C) la ntuneric.
3. Se examineaz la fiecare 4 zile. Pentru aceasta se recolteaz o pictur de
cultur cu ajutorul unei anse sterile de platin i aceasta se depune pe o lam
pentru a cuta promastigoii.
Not: Culturile negative trebuie rensmnate dup 8 zile pe un mediu proaspt, apoi
examinate la fiecare 4 zile timp de nc 20 de zile.
Examinarea lam-lamel a lichidului de condensare evideniaz forma promastigot:
corpusculi alungii de 14-20 m cu un
nucleu central vizibil i un flagel liber.
Promastigoii sunt grupai n rozete (cu
flagelii orientai central).

Forma promastigot:

Diagnosticul serologic: cercetarea anticorpilor serici are valoare diagnostic i

terapeutic n leishmanioza visceral.
Se utilizeaz: IF.
Pentru confirmare: IEP.
Limite: la persoanele HIV pozitive.