Biotehnologii de obinere a proteinei furajere Producerea i utilizarea drojdiilor furajere

Producerea de protein microbian se ncadreaz n sursele neconvenionale i este cunoscut n literatura de specialitate sub denumirea de single cell - protein, termen care arat c proteina respectiv provine n general de la microorganismele unicelulare cum sunt drojdiile sau bacteriile. eoarece produsele obinute conin alturi de proteine i !"-!#$ substane neproteice, se consider ca %iind mai corect s %ie utilizat termenul de single- cell- biomass. Drojdiile reprezint cele mai vec&i i cele mai studiate microorganisme %olosite n biote&nologii, reprezent'nd un grup %ormat din peste #"" de specii, aparintoare a trei clase( )scom*cetes, +asidiom*cetes i euterom*cetes. ,unt organisme de tip eucariot cu diviziune de tip mitotic i meiotic, la care numrul de cromozomi reprezint o caracteristic de specie.

Caracteristicile nutritive ale drojdiilor furajere Drojdiile furajere reprezint un nutre valoros pentru animale -mai ales pentru porci i psri. av'nd o digestibilitate de circa /#$ i o valoare energetic bun -0.!"" 1cal 2 metab3 1g., un coninut ridicat n protein cuprins ntre 4! i #5$, -drojdiile cultivate pe n-para%ine i metanol pot s depasc 5#$ protein brut.. Proteina coninut de drojdii are o valoare biologic ridicat, o digestibilitate de 6!- 6#$ la psri, 7!- 77$ la porci i 7!- 74$ la rumegtoare. 8ai conin vitamine din comple9ele + i , ergosterol, enzime i microelemente -:e, ;n, ,e, <u.. )u un coninut ridicat n lizin -depind rotul de soia. dar mai sczut n aminoacizii cu sul% -metionin, cistin. ceea ce micoreaz valoarea biologic a acesteia. )cest neajuns se poate remedia prin adaosul de aminoacizi sintetici sau prin selectarea unor genuri i specii de drojdii cu randament nalt de utilizare a sul%ului anorganic. <ompoziia n aminoacizi a drojdiilor depinde n mare msur de specie i de mediul respectiv substratul de cultur.

Principalul neajuns al utilizrii drojdiilor n &rana animalelor este %aptul c drojdiile au un coninut ridicat n acizi nucleici cuprins ntre #-7$ -de #-6 ori mai mare dec't n carne. care produc n organism acid uric ca produs al catabolismului purinic. Avantajele utilizrii drojdiilor Producerea de biomas proteic cu ajutorul drojdiilor prezint o serie de avantaje dintre care amintim( - se obin cantiti mari de protein cu valoare biologic ridicat, care poate nlocui parial proteinele vegetale i animale= - au o rat %oarte mare de multiplicare, valori%ic'nd substratul cu un randament ridicat= - se obin cantiti mari de biomas proteic pe supra%ee mici, pe parcursul ntregului an cu c&eltuieli relativ reduse= utilizeaz ca substrat materii prime disponibile n cantiti mari -subproduse sau deeuri i reziduri industriale.= contribuie la economisirea mediului prin utilizarea ca substrat a rezidurilor cu di%erite proveniene=

rojdiile i dubleaz biomasa ntre !" min i ! ore n %uncie de specie. <ultiv'nd >" 1g drojdii ntr-o cuv cu un volum de >"" m0, n !4 & se poate obine > ton de protein -cantitate pentru care trebuie s se cultive 05" &a de mazre sau s %ie mulse >#""- >5"" vaci cu o producie ridicat de lapte..

?a baza producerii de biomas proteic de ctre drojdii st %enomenul cunoscut ca %enomenul Pasteur care const n in&ibarea proceselor de %ermentaie, menin'nd n mediul de cultur o concentraie sczut de glucide n timp ce se %ace o aerare intens a drojdiilor. ,e evit n acest %el %ormarea de alcool i este stimulat producerea de biomas proteic. 8ai %recvent pentru producerea de biomas proteic sunt utilizate drojdii din genurile( <andida, 8onillia, @ansenula, Aorulopsis i Pic&ia.

Materiile prime utilizate n producerea drojdiilor

Principalele materii prime %olosite pentru producerea drojdiilor %urajere sunt( rezidurile de la %abricile de za&r= produsele secundare de la &idroliza celulozei= leiile bisul%itice de la %abricile de &'rtie i stu%= bor&oturile de la %abricile de spirt i bere= produsele secundare din agricultur -coceni, ciocli, paie.= lemn &idrolizat= s%ecl= dejeciile din zoote&nie i n- para%ine de la puri%icarea petrolului. Bandamentul de convertire n drojdii %urajere se e9prim n 1g3 ton materie prim i variaz cum ar %i( !6- !7 1g deeuri de lemn= 4"-45 1g - leii bisul%itice, !"" !0# 1g - grosiere i !57 1g melas. Prima %abric pentru producerea drojdiilor pe n- para%ine- :rana >/54. Cn Daponia, <&ina i :rana s-a dezvoltat te&nologia cultivrii unor genuri de drojdii direct pe petrol, iar n )nglia se produc drojdii din alcool metilic, metan sau metanol. ?a noi n ar se obin drojdii pe para%ine la <urtea de )rge= leii bisul%itice la ;rneti, +acu, grosiere- celulozice la Piteti= melas i bor&oturi la )rad i <orabia.

Biotehnologia obinerii drojdiilor furajere actorii de mediu care infueneaz cultivarea drojdiilor Producerea industrial a drojdiilor depinde de caracteristicile mediului de cultur, n special( temperatur, p@ i e%ectul activitii apei. Temperatura- este unul dintre cei mai importani %actori n reglarea proceselor industriale de biosintez a drojdiilor. 8odi%icarea temperaturii %a de cea speci%ic speciei respective in%lueneaz ritmul de multiplicare a microorganismelor, randamentul trans%ormrii substratului n mas proprie, cerinele culturii de drojdie precum i compoziia c&imic a biomasei obinute. Cn %uncie de cerinele %a de temperatura mediului de cultur, drojdiile se clasi%ic n 0 grupe( criofile - care se dezvolt n intervalul de temperatur >#- !#"<= mezofile au cea mai bun dezvoltare la 0" - 0#"<= termofile au cea mai bun dezvoltare la 4# ##"<.

Aemperatura optim pentru viteza de cretere a drojdiilor nu este identic cu cea la care ele au cel mai bun randament de trans%ormare a substratului -obinut la o temp. mai sczut.. Aemperatura de cultur a drojdiilor se obine n urma obtimizrii celor dou variabile n %uncie i de costurile de producie.

E dat cu variaia temperaturii au loc modi%icri ale proceselor metabolice din celulele de drojdii, modi%ic'ndu-se totodat compoziia lor n proteine, lipide i acizi nucleici. Falorile medii ale temperaturii de cultur ale drojdiilor de interes biote&nologic sunt cuprinse ntre !# i 0# <. Ph-ul )lturi de temperatur, valoarea p@-ului reprezint un parametru important n cultura celulelor de drojdie, respectiv n in%luenarea biosintezei acestora. P&-ul in%lueneaz at't viteza de cretere a drojdiilor c't i randamentul de trans%ormare a substratului n biomas proteic sau n produsul dorit.
"

8ajoritetea drojdiilor au p@-ul optim de dezvoltare cuprins ntre 4 i #. e9ist i drojdii crora le este %avorabil un p@ puternic acid -G !. sau p@ bazic -G 7.. ?a un p@ sub 4 scade pericolul contaminrii mediului. Cntre valorile optime ale p@-ului i temperatur e9ist o corelaie direct n sensul c o temperatur mai mare implic o cretere a p@-ului. Cn timpul multiplicrii celulelor, apar deviaii ale p@-ului de la valorile optime datorit consumrii unor nutrieni sau datorit concentrrii n mediul de cultur a unor produi de sintez -e9emplul acizi organici.. <'nd p@-ul este prea acid se adaug n mediu soluii alcaline -HE@= IaE@= I@0., iar c'nd este prea ridicat se %olosesc acizii -@<l= @!,E4.. Efectul activiitii apei )pa ndeplinete n celulele vii c'teva %uncii de baz( reactant c&imic -particip la reaciile de &idroliz. este solvent pentru metaboliii intracelulari are rol mecanic n meninerea %ormei i dimensiunilor celulelor are %uncie structural n &idratarea proteinelor i a altor componente celulare

)ctivitatea apei ntr-o soluie se e9prim prin raportul dintre presiunea de vapori a apei n soluie i cea a apei pure la aceeai temperatur. Aermenul se %olosete n cazul in%uenei mediilor concentrate asupra dezvoltrii organismelor. Cn cazul mediilor diluate se %olosete termenul de osmolaritate sau presiune osmotic. rojdiile sunt mult mai rezistente la acest %actor comparativ cu bacteriile. )cest %apt poate deveni o medot de prevenire a contaminrii culturilor de drojdii cu bacterii -la o activitate a apei de sub "./# bacteriile nu mai pot crete.. ,ub ",6 sunt in&ibate mucegaiurile, iar sub ",5 este in&ibat dezvotarea drojdiilor. )adar activitatea apei nu trebuie s scad sub aceast valoare.

Cerinele nutritive ale mediilor de cultur a drojdiilor rojdiile pentru cretere i multiplicare necesit prezena n mediul de cultur a unor substane care s conin toate elementele nutritive necesare pentru sinteza constitueniilor celulari precum i sursa de energie pentru des%urarea proceselor metabolice. Cn vederea determinrii randamentului de utilizare a cabonului din mediu de cultur pentru sinteza biomasei, se poate %olosi metoda carbonului marcat.

,-a stabilit n cazul drojdiei de bere ,ac&arom*ces <erevisiae c procentul de carbon asimilat din glucoz pentru biosintez a %ost de !$ n condiii anaerobe i de >"$ n condiii aerobe.

<ele mai importante surse de carbon utilizate n procesele de biosintez a drojdiilor sunt glucidele (monoglucidele, poliglucidele sau amestecuri de su stane care conin glucide!" #lucoza se obine prin &idroliza acid sau enzimatic a amidonului i este utilizat pentru sinteza produilor de mare puritate. $elasele reprezint cea mai important surs de carbon pentru industria %ermentativ, %iind %olosite pentru obinerea drojdiei de pani%icaie, drojdiei %urajere, a acetonei, a butanolului i a aminoacizilor. ;a&aroza are ponderea cea mai mare dintre glucide -G #"$., apoi glucoza i %ructoza, iar acidul glutamic este cea mai important surs de azot asimilabil din melas.

%erul reprezint un subprodus de la %abricarea br'nzeturilor al crui component glucidic principal este lactoza. )vantajul utilizrii lactozei ca surs de glucide este c se poate introduce n concentraii mai mari %r a avea e%ect in&ibitor asupra dezvoltrii drojdiilor. Celuloza intr n structura pereiilor celulelor vegetale alturi de &emiceluloz i lignina. Pentru separarea ei se aplic tratamente mecanice i %olosind vapori de ap. ,ubstratul pe care se cultiv drojdiile %urajere se obine n urma &idrolizei deeurilor celulozice.

8arele avantaj al acestor surse este c au un pre de cost sczut, sunt disponibile n cantiti mari, iar prin utilizarea lor se diminueaz e%ectul poluant al mediului. ezavantajul const n %aptul c au o compoziie c&imic variabil conin'nd o serie de substane in&ibitoare -,E! i %ur%urol.. ,ursele de carbon sintetice sunt( metanolul, etanolul i n-parafinele care sunt materii prime mai scumpe mrind preul de cost al produselor %inite.

&ursele de azot cele mai utilizate sunt( amoniacul, srurile de amoniu, ureea i aminoacizii" rojdiile cresc cu vitez mare n medii cu concentraii moderate sau mici de azot, concentraii mari de peste 0g3l mediu pot provoca in&ibiia dezvoltrii drojdiilor. &ursele organice de azot( e'tractul de porum , hidrolizatele de drojdie, e'tractul de soia, conin o serie de substane neasimilabile sau in&ibitoare= au preuri de cost destul de ridicate i sunt mai puin utilizate. Pentru creterea i multiplicarea drojdiilor, mediul de cultur trebuie s mai conin( macroelemente -P, ,, H, i 8g., microelemente i %actori de cretere -cum sunt vitaminele.. <ompoziia mediului de cultur di%er n %uncie de microorganismul cultivat, aceste medii %iind rezultatul unor cercetri laborioase care pot constitui secrete ale proceselor de biosintez microbian.

Clasificarea sistemelor de cultur! a drojdiilor up modul de operare, respectiv tipul de bioreactor utilizat, e9ist( Cultivarea (n )arj se %ace prin utilizarea bioreactorului discontinuu, n care drojdiile sunt crescute n sisteme nc&ise. Cntr-un volum de mediu %i9 se inoculeaz dorjdia i ncepe multiplicarea acestora. 8ediul de cultur i modi%ic compoziia at't datorit cosumrii nutrienilor c't i dotorit %ormrii unor produi secundari care se acumuleaz n sistem. atorit timpilor mori necesari ncrcrii, descrcrii i sterilozrii bioreactorului, precum i perioada de laten a culturiilor micoreaz gradul de utilizare a %ermentatorului i cantitatea de biomas obinut. variant mbuntit a acestui sistem nc&is o reprezint cultivarea n arj cu alimentare caz n care bioreactorul este alimentat n timpul dezvotrii microorganismelor cu nutrienii care n primul caz limitau %ormarea de biomas. )cest sistem permite creterea cantitii de drojdii obinute pe unitatea de volum.

Cultivarea (n sistem continuu presupune adugarea permanent n bioreactor a unei soluii de mediu proaspt i eliminarea continu a aceluiai volum de biomas, ast%el nc't volum biomasei din %ermentator s rm'n constant. )cest sistem de cultivare permite prelungirea %azei de cretere e9ponenial a numrului de microorganisme un timp nede%init. 2%iciena acestui sistem este mult mai ridicat dec't n cazul cultivrii n arj productivitatea %iind mai ridicat. Cultivarea (n sistem chemostat const n reglarea concentraiei substratului limitativ. ac volumul de substrat introdus n bioreactor este mic se realizeaz diluii mici ale mediului de cultur i timpii de staionare a microorganismelor n bioreactor sunt mari. Cn acest caz trans%ormarea substratului se realizeaz cu randamente mari. ac volumul de substrat introdus n bioreactor este mare se obin diluii mari ale mediului de cultur i timpii de staionare a microorganismelor n bioreactor sunt mici. Cn aceast situaie celulele se multiplic mai puin i doar o parte din substrat este trans%ormat n biomas.

Cultivarea (n sistem tur idistat const n utilizarea unor medii de cultur cu e9ces de nutrieni, iar creterea drojdiilor nu mai este limitat de un anumit nutrient ca n cazul c&emostatului. <oncentraia masei celulare se msoar prin intermediul densitii optice -a turbiditii.. <'nd concentraia microorganismelor din bioreactor crete se mresc debitele de alimentare, pentru a crete cantitatea de biomas eliminat. eoarece nutrienii din mediul de cultur nu sunt consumai n aceeai proporie de microorganisme, poate s apar mrirea concentraiei unor substane cu rol limitativ sau in&ibitor asupra dezvoltrii populaiei. Pentru a nltura acest neajuns se poate aciona prin utilizarea a dou ci de alimentare a bioreactorului( una dintre aceste ci servete la introducerea soluiei ce conine toi nutrienii cu e9cepia celor limitativi, iar cealalt cale se %olosete pentru introducerea n cantiti mici a soluiei cu nutrienii limitativi. )legerea unui anumit sistem de cultivare a drojdiilor depinde de specia de drojdie aleas i are n vedere obinerea unei cantiti c't mai mari de produs dorit cu un randament c't mai bun de utilizare a substratului i la preul de cost c't mai sczute pe unitatea de produs.